cultura de células de theobroma cacao. cultura de células planta matriz meio de cultura adequado...
TRANSCRIPT
Cultura de células de
Theobroma cacao
Cultura de Células
Planta Matriz
Meio de cultura adequado
Formação de calos
Cultura de células vegetais
Células vegetais podem se desenvolver in vitro com as condições adequadas: Sais Vitaminas pH/Temperatura/Luminosidade Hormônios, Auxinas/Citocininas
As células dos calos apresentam uma série de peculiaridades: Não possuem cloroplastos e elementos da via da
fotossíntese Vacúolo muito reduzido Parede celular delgada Poucos metabólitos secundários Se assemelham com as células meristemáticas
Cultura de células vegetais
Embriogênese Somática
Flor
CalosEmbrião somático
Plântula
Porque usar cultura de células? Modelo para os tecidos in
vivo Pode-se produzir em
grande quantidade Manipulação genética Geração de vários
indivíduos isogênicos
Cultura de células e M. perniciosa
Muse, R. B. et al. (1996) Effects of the fungus Crinipellis perniciosa, casual agent of witches’ broom disease, on cell and tissue culture of cocoa (Theobroma cacao L.) Plant Pathology 45, 145-154
Objetivos
Estabelecer um protocolo confiável de cultura de células de Theobroma cacao.
Material e Métodos
Meio de cultura Sais MS Vitaminas MS:
Ác. Nicotínico, Tiamina, mio-inusitol, pirodoxina, glicina Sacarose pH 5,8 Hormônios
Meios de cultura
Hormônio HC JC ARG PCG
2,4 D 2,0 2,0
IAA 2,0
IBA 2,0 1,0
Zeatina 0,05
Cinetina 0,1 0,25
Concentração em mg/L
Meios de cultura
Hormônio HC JC ARG PCG
2,4 D 2,0 2,0
IAA 2,0
IBA 2,0 1,0
Zeatina
Cinetina 0,1 0,05 0,25
Concentração em mg/L
Resultados
Material vegetal utilizado: Folhas jovens de variedade resistente e normal
Hormônios:
Resultado: MS1 Eficiente na indução de calos MS2 Não formou calos Variedade normal não formou calos
Meio 2,4 D IAA Cinetina
MS1 2,0 0,25
MS2 2,0 0,1
Resultados Material vegetal utilizado: Cotilédones das duas
variedades e os calos formados anteriormente Hormônios:
Meio 2,4 D Cinetina
MS1a 2,0 0,25
MS1b 2,0 0,0
MS1c 1,5 0,25
MS1d 2,5 0,25Concentração em mg/L
Resultados
MS1a: Pouco eficiente na indução de calos em cotilédones
MS1b: Muito eficiente, mas induziu a formação de muitas raizes e apresentou alto nível de oxidação
MS1c: Induziu a formação de calos, mais discreta que MS1d: Quase não formou calos Não foi possível identificar diferenças entre os meios
dos calos já formados com folhas
Resultados
Resultados
Resultados
Resultados
Resultados
Resultados
Próximos testes
Meios usados para cotilédones:
Utilizar caule para a indução de calos
Meio 2,4 D Cinetina
MS1c 1,5 0,25
MS1e 1,5 0,0
MS1f 1,5 0,15
Concentração em mg/L
Perspectivas
Com o protocolo de cultura de células estabelecido: Transformação de calos Produção de protoplastos