Colheita, tratamento e

armazenamento de amostras

biológicas

Introdução

• A medição de biomarcadores em amostras de sangue tornou-se um componente integrante de muitos estudos epidemiológicos.

•Nós vamos falar brevemente sobre modelo colheita, processamento e armazenamento de sangue de quatro biomarcadores.

• Hormonas Sexuais

• Carotenóides

•Marcadores inflamatórios

•Marcadores proteicos

Hormonas sexuais

Volume de sangue a ser recolhido

• 0,3 – 0,5 mL por cada hormona a ser analisada

Testosterona e Estradiol podem ser recolhidos em:

Sangue com Heparina

Sangue com Citrato

Sangue com EDTA

Soro

Resultados dos vários métodos de recolha

• Testosterona

Sangue com EDTA: •Resultados obtidos foram bons •Níveis hormona presente aceitáveis

Soro: •Níveis da hormona presentes em quantidades mais baixas do que com sangue com EDTA ou Heparina.

Sangue com citrato: •Piores resultados devido a uma diluição do anticoagulante

Sangue com Heparina: •Bons resultados •Níveis da hormona presente aceitáveis

Continuação

• Estradiol

Sangue com EDTA: •Resultados obtidos foram bons •Níveis hormona presente aceitáveis

Soro: •Níveis da hormona presentes em quantidades mais baixas do que com sangue com EDTA ou Heparina.

Sangue com Heparina: •Bons resultados •Níveis da hormona presente aceitáveis

Sangue com citrato: •Piores resultados devido a uma diluição do anticoagulante

Continuação

• Progesterona •Estrogénio

Podem ser recolhidos tal como as anteriores : •Sangue com EDTA •Sangue com Heparina •Sangue com citrato •Soro

Existem procedimentos que permitem contornar este problema •As mulheres fazem a colheita em qualquer fase do seu ciclo menstrual, mas fornecem aos profissionais de saúde um calendário exacto dos seus ciclos •Análises que pedem datas específicas para a colheita •Kits que permitem recolher amostras em diferentes alturas do ciclo

Mas tem variações devido ao ciclo menstrual

Processamento

Temperatura

• Ambiente

• refrigerada

Tempo • Até 72 horas após a

colheita

Horário

Não altera os resultados

Não há alterações nos resultados

•A hora do dia não afecta a recolha

Congelação e temperatura de armazenamento a longo prazo

• Temperaturas de - 20˚ C

•Temperaturas < - 70˚ C

Ácido Ascórbico Carotenóides

Ácido ascórbico = Vitamina C

Em que alimentos pode ser encontrada? Frutas cítricas, morango, tomate, brócolos, nabo,batatas e melão. A maioria das outras frutas e verduras contém alguma quantidade de vitamina C; peixes e leite fornecem pouca quantidade.

Metabolismo de absorção do ferro Formação de hemoglobina , bom funcionameto

dos leucócitos Acção desintoxicante Integridade dos vasos sanguíneos Crescimento e regeneração celular, ossos, dentes,

gengivas Cicatrização Evita a formação de nitrosaminas Produção de colágeno e manutenção de tecido

conjuntivo

Função da vitamina C

Processamento da amostra

Após 24 os seus níveis começam a degradar-se.

Dano oxidativo ou isomerização

Oxigênio, luz ou calor .

Armazenamento da amostra

Antes de se proceder ao seu congelamento deve ser adicionado um estabilizador ácido, como por exemplo, o ácido metafosfórico.

Carotenóides

Os carotenóides são um grande grupo de pigmentos solúveis em gordura

Somente os animais são capazes de sintetizar carotenóides.

A estrutura química determina praticamente a função biológica.

Fertilidade da mulher

Acção anti – oxidante

Retinol

Pro – vitamina A

Proliferação celular

Crescimento ósseo

Manutenção de uma boa visão

Pele saudável

Melhora as capacidades do sistema imunitário

Luteína e Zeaxantina

antimutagênicas e anticarcinogênicas

Nos humanos, todos os carotenóides exercem uma ação anti-oxidante, porém apenas alguns são

convertidos pelo organismo em retinol, uma forma ativa da vitamina

A. Por isso são denominados pró-vitamina A.

Tipo de amostra e tipo de recolha

não são afectados pelo anticoagulante utilizado

níveis de retinol e caroteno têm variações sazonais durante todo o ano

Carotenóides

Soro Plasma

Processamento da amostra

São estavéis durante uma semana se forem mantidos à temperatura ambiente.

dano oxidativo ou isomerização

oxigênio, luz ou calor

Armazenamento da amostra

Deve-se proceder ao seu congelamento a uma temperatura inferior a – 70º C .

Marcadores Inflamatórios

Tipo de colheita

• Sangue

- com EDTA

- Soro

•Sendo o primeiro o que obteve melhores resultados

Geralmente, as amostras devem ser mantidas refrigeradas durante o tratamento, pois alguns marcadores inflamatórios podem degradar-se, quando a temperatura ambiente aumenta.

Tanto a interleucina-6 e o factor de necrose tumoral parecem degradar-se após 4 a 6 horas à temperatura ambiente, por isso devem ser

analisadas imediatamente

Processamento da amostra

Interleucina-6

A IL-6 é produzida por monócitos, macrófagos, linfócitos e fibroblastos e estimula a produção de células de imunoglobulina B, a proliferação de células T, a activação do mecanismo natural de morte celular .

Temperatura de armazenamento a longo prazo

Poucos estudos têm examinado o efeito do armazenamento a longo prazo. Assim, normalmente recomenda-se, manter as amostras armazenadas a menos

de -70° C para garantir resultados validos.

Ciclos de congelamento/ descongelamento

devem ser evitados

Marcadores Proteicos

Marcadores proteicos

São proteínas que estão presentes à superficie de todas as células.

São chamados de antigénios.

Antigénios presentes na célula

Recolha

Sangue

Anticoagulante

Citrato

Heparina

Citrato

Soro Não

recomendado

Recomendado

Estes marcadores são úteis no diagnóstico de várias doenças, uma delas é o cancro.

São produzidos primariamente pelo tumor ou secundariamente pelo paciente, como

resposta à presença do tumor.

Estas substâncias são importantes para diferenciar tecidos normais de tecidos

neoplásicos.

É também importante que possam ser caracterizadas e/ou quantificadas.

Marcadores tumorais são aqui encontrados

Fluidos biológicos

Sangue

Tecido tumoral

Elevações significativas da atividade total ou variações no padrão habitual destas isoenzimas podem ser indicativas da presença de processo neoplásico. Deve ser ressaltada a baixa especificidade deste tipo de marcador.

Marcadores

utilizados

Enzimas

Fosfatase alcalina

ossos Fígado Testículos

Desidrogenase láctica

Sangue

Fosfatase ácida

Próstata

Isoenzimas

Cuidados a ter em conta

•As amostras deverão ser utilizadas de imediato, à temperatura ambiente.

•Deve também adicionar-se um inibidor de proteases para que seja reduzida a clivagem de proteínas.

O armazenamento destas amostras

A longo prazo recomenda-se a congelação à temperatura baixa (– 70ºC) , para

minimizar a degradação das amostras.

Ciclos de congelação e descongelação devem ser evitados.

Conclusões

• Com este trabalho podemos concluir que existem muitos processos comuns na recolha de amostras sanguíneas.

• Contudo cada um dos exemplos referidos por nós mostrava que haviam algumas variáveis que iriam depender do tipo de substancia que se ia analisar.

• Assim podemos dizer que é necessária atenção a quando da recolha das amostras, no seu processamento e posterior armazenamento.

• Todas os exemplos aqui referidos possuem características que se forem descurados podem levar a uma má análise e a um resultado não válido.