Especificaciones Para Su Medicin Por Laboratorio Y Estudio De Las Dislipidemias

Predicen enfermedad cardiovascular (colesterol)

Clasificacin de Fredrickson (electroforesis en gel)

National Cholesterol Education Program: Deteccin, evaluacin y tratamiento de la hiperlipidemia

Transportan esencialmente todo el colesterol y lpidos esterificados de la sangre.

Su parte proteica esta compuesta por protenas especificas denominadas apolipoprotenas, que desempean papeles importantes en el transporte de los lpidos, activando o inhibiendo enzimas y/o fijando lipoprotenas a los receptores de la superficie celular.

Existen 4 clases de lipoprotenas principales:

Quilomicrones (QM).

Lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL).

Lipoprotenas de baja densidad (LDL).

Lipoprotenas de alta densidad (HDL).

Partculas grandes, producidas por el intestino, ricas en triglicridos exgenos, pobres en colesterol libre y fosfolpidos.

Elevada proporcin lpido/protena son menos densos en agua.

Su acumulacin genera una capa cremosa flotante cuando se deja en reposo.

Quilomicrones:

apoB-48, apoA-I y apoA-IV.

apoC-I, apoC-II, apoC-III, apoE.

Apoliprotenas:

Pequeas, ricas en triglicridos de origen endgeno (heptico).

Proporcin lpido/protena ms baja.

Colesterol y fosfolpidos 40%.

Protenas 10%.

apoB-100, apoC, apoE.

Amplio margen de tamao con variacin concomitante de la composicin qumica.

Su acumulacin genera un plasma turbio.

Lipoprotenas de muy Baja Densidad (VLDL):

50% de la masa total de lipoprotenas plasmticas en humanos.

Partculas ms pequeas.

No dispersan la luz o enturbian el plasma.

Colesterol estratificado representa casi la mitad de su masa.

25% son protenas:

apoB-100, poca apoC.

Lipoprotenas de Baja Densidad: (LDL)

Se han identificado sub-clasificaciones de LDL que difieren en tamao y composicin qumica.

Partcula pequea que consta de un 50% de protena.

apoA-I, apoA-II, aldo de apoC y apoE.

20% colesterol estratificado.

30% fosfolpidos.

Indicios de triglicridos.

Lipoprotenas de Alta Densidad: (HDL)

HDL2, HDL3. varan en cuanto a densidad, tamao, composicin.

2 subclases principales:

Intervalo de densidad: 1,055 1,085 kg/L.

27% protena [apoB, apo(a)], 65% lpido, 8% carbohidratos.

Movilidad electrofortica: pre-.

Protena pleomrfica (350-700 KDa).

Alto grado de homologa con el plasmingeno.

Concentracin de 90% de su peso.

Protenas

Apolipoprotena A (ApoA):

Componente proteico principal de la HDL.

ApoA-I 75% de la apoA de la HDL. 243-245aa, peso mol 29,000 Se sintetiza en hgado e intestino. Activador de la enzima lecitin:colesterol-aciltransferasa (LCAT), la cual

esterifica el colesterol en el plasma.

ApoA-II 20% de la ApoA de la HDL. 154aa,peso 17,400. Consta de dos pptidos idnticos unidos por puentes disulfuro.

Principal constituyente de la LDL (95%), la VLDL y QM (40%). Grupo heterogneo de protenas, de las cuales la principal es la

ApoB-100. Sintetizada por el hgado.

Cadena nica de 4536aa, peso 513,000.

Seal de reconocimiento que dirige al receptor de LDL.

ApoB-48, con peso de 241,000, es de origen intestinal y se haya en

los QM.

La sntesis de ambas protenas est dirigida por el mismo gen: ApoB.

Apolipoprotena B (ApoB):

Enzimas Lipolticas:

Lipoproteinasa, lipasa heptica de triglicridos.

Lipoprotenlipasa

Derivada del tejido adiposo, hidroliza TGC de los QM y VLDL.

Localizada en las superficies de clulas endoteliales de los capilares de tejido adiposo, esqueltico y cardiaco.

Lipasa heptica de triglicridos:

(HTGL) secretada por los hepatocitos.

Capacidad limitada para hidrolizar TGC en QM intactos y VLDL.

Conversin de VLDL e IDL a LDL.

Hidrlisis de fosfolpidos y TGC en las HDL.

Lecitn:colesterol-aciltransferasa:

Cataliza la esterificacin del colesterol, promoviendo la transferencia de c. grasos desde la lecitina al col, dando lugar a la formacin de lisolecitina y ster de colesterol.

Sintetizada en el hgado, viaja asociada a HDL.

Digestin de las grasas:

Lipasa lingual.

Intestino delgado emulsin de grasa por cidos biliares.

Lipasa pancretica digestin de triglicridos.

Absorcin:

Penetran la superficie de los enterocitos, pasando a la linfa y de ah a la circulacin general.

El anlisis de las lipoprotenas del plasma requiere primero la

separacin de las distintas clases de lipoprotenas y

segundo, la medicin de la lipoprotena o del componente

lipoproteico de inters.

Coeficiente de variacin fisiolgica intraindividual para colesterol es de 6.5%.

La variacin fisiolgica es, por lo tanto, mayor que el error analtico.

Las concentraciones de lipoprotenas plasmticas

pueden cambiar como resultado de una

variacin fisiolgica normal.

Ayuno de 12hrs a 14 hrs antes de la puncin.

Posicin sentada.

Torniquete por no ms de 1 min.

Suero o Plasma (EDTA).

Refrigerar 4C, Congelacin -20C.

Ayuno de 12- 14 Hs. (Es por los quilomicrones, es anormal su presencia despus de este tiempo)

El ayuno menor no afecta los valores de colesterol. Suero o Plasma (EDTA, NO Heparina) Refrigerar 4 c , Congelacin -20c No ingesta de drogas, medicamentos, Enf. Febriles. Post-Infarto, etc.

No esterificados (30%), esterificados (70%).

Mtodos Qumicos: Abell-Kendall;

KOH + Alcohol + ter de petrleo + Ac. Sulfrico Anhidro.

Reactivo de Lieberman-Buechard

(Acetico anhidro + ac. Sulfurico cloruro ferrico + ac. Sulfurico Ac. p-Tuoleno Sulfonico ) en OH puro.

Mtodos Enzimticos:

Reacciones donde se hidrolizan los steres de colesterol.

El grupo 3-OH del col es oxidado.

Absorbancia 500 nm (560 nm en el Synchron)

Menor interferencia.

Bilirrubina, turbidez de la muestra, genera interferencias.

CV 1-2%. Calibradores sricos.

Hidrlisis de TG con la medicin del glicerol liberado.

Mtodo qumico:

Extraccin de cloroformo, seguido por cromatografa con cido silcico para aislar TG.

Glicerol separado mediante saponificacin y oxidado con peryodato de sodio.

El peryodato producido se mide mediante reaccin con una solucin de c cromotrpico con c sulfrico cromforo rosa.

Mtodo enzimtico:

Directo en plasma o suero.

Hidrlisis de TG. Glicerol formado se convierte en glicerofosfato, que se mide con una reaccin.

El NADH formado se mide con espectrofotometra.

Ictericia obstructiva, abeta o hipolipoproteinemia, enfermedad de Tangier.

Determinacin mediante la medicin de fosforo de los fosfolpidos.

Se extraen lo lpidos de la muestra y se oxidan hasta convertir el fsforo en fosfato inorgnico, que se determina por colorimetra.

Etanol-dietilter, cloroformo-metanol.

Esfingomielina

Fosfatidilcolina

Mtodo enzimtico:

WAKO Pure Chenmical Industries: la lecitina, esfingomielina y lisolecitina son hidrolisadas usando fosfolipasa D, y la colina liberada se oxida.

Mt

od

os

actu

ales

: Ultracentrifugacin analtica (mtodo de referencia). Adsorcin.

Filtracin en gel.

Afinidad cromatogrfica.

Electroforesis.

Precipitacin de polianines.

Inmunoqumica.

Combinacin de diversos mtodos.

Problema principal es la separacin de

las diversas clases de

lipoprotenas.

Se sirve de las diferentes densidades de las lipoprotenas.

1,006kg/l QM, VLDL flotan, LDL, HDL sedimentan.

1,063kg/l VLDL y LDL flotan.

1,21kg/l VLDL, LDL Y HDL flotan.

Mtodos de Ultracentrifugacin

Las lipoprotenas

pueden ser separadas de

otras protenas

plasmticas y a la vez entre

s

1. Se aslan las lipoprotenas del plasma por UC preparatoria.

2. Centrifugacin analtica a diferentes

densidades.

3. Las Lp migran (dependiendo de su densidad).

4. Su movimiento y concentracin se mide

utilizando la ptica de Schlieren (concentracin segn los cambios de refraccin).

5. Las concentraciones se expresan en trminos de

masa total.

Mtodos Electroforticos

Medio usado: gel de agarosa.

Velocidad, sensibilidad, resolucin.

QM permanecen en el origen. Las dems migran a velocidades que aumentan en orden de HDL > VLDL > LDL, y se denominan de acuerdo a su movilidad:

HDL: -lipoprotenas.

LDL: -lipoprotena.

VLDL: lipoprotena pre-.

Colorantes para lpidos: rojo-O al aceite, grasa roja 7B, negro sudn B.

Se basa en la precipitacin polianinica con cationes divalentes de los Quilimicrones, VLDL y LDL. Se agrega al suero Ac. fosfotnsgtico, Cloruro de Magnesio

Manganeso, Heparina.

Del sobrenadante se determina el colesterol, el cual corresponde al HDL-colesterol.

DETERMINACIN DE HDL-COLESTEROL:

Los procedimientos actuales se basan en: Inmunoseparacin.

Enzima modificada con polietilenglicol.

Polmero sinttico.

LDL-C = Col Total HDL-c TGC/5

Mtodos para las mediciones de LDL-colesterol:

Ultracentrifugacin.

Frmula de Friedewald.

No requiere ultracentrifugacin.

Mtodos directos: Precipitacin qumica.

Inmunoprecipitacin.

Reactivo que inhibe las otras Lp.

Analizadores qumicos automatizados. LDL-C = Col Total HDL-c TGC/2.175

Las enfermedades cardiovasculares constituyen la primera causa de muerte en Mxico

Entre los factores de riesgo se encuentra la hipercolesterolemia, cuya incidencia ha ido en aumento por el consumo de grasas saturadas, el sedentarismo y otros factores de riesgo mayores como el tabaquismo, la diabetes y la hipertensin arterial

Conjunto de enfermedades asintomticas causadas por concentraciones anormales de las lipoprotenas sanguneas

El riesgo cardiovascular es directamente proporcional a la concentracin de colesterol.

Los individuos situados por encima del intervalo de normalidad, tienen riesgo mayor.

El Adult Treatment Panel of the National Cholesterol Education Program public las pautas para el reconocimiento y tratamiento de la hipercolesterolemia en adultos, que incluyen una redefinicin de los niveles de colesterol, LDL-c y HDL-c, en trminos de riesgo cardiovascular.

Clculo del ndice Aterognico:

COLESTEROL TOTAL / HDL-C

LDL-COLESTEROL / HDL-C

Col/HDL LDL/HDL

M F M F

Promedio normal

5.0 4.4 3.5 3.2

riesgo 3.4 3.3 1.0 1.4

Riesgo >2 9.6 7.1 6.2 5.0

Riesgo >3 13.5 11.0 7.9 6.1