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Caria Sofia Rodrigues Leal

CARACTERIZACcedilAtildeO GENEacuteTICA DA RACcedilA BOVINA BARROSAtilde

Estudos de geneacutetica bioquiacutemica familiar e populacional

Dissertaccedilatildeo de Mestrado em Ecologia

Aplicada apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias

da Universidade do Porto

Porto

1998

Agradecimentos

Quero aqui apresentar o meu agradecimento agrave ajuda prestada por certas pessoas sem a qual

natildeo era possiacutevel a realizaccedilatildeo do presente trabalho

Ao Prof Doutor Nuno Ferrand de Almeida agradeccedilo a oportunidade e o apoio constante que

demonstrou durante a realizaccedilatildeo deste trabalho as indicaccedilotildees que forneceu na estruturaccedilatildeo e

elaboraccedilatildeo do mesmo pela cedecircncia de bibliografia bem como as criacuteticas e sucessivas revisotildees do

manuscrito

Ao Prof Doutor Paulo Alexandrino quero agradecer o apoio na realizaccedilatildeo deste mesmo

trabalho assim como todas as indicaccedilotildees que forneceu para a sua realizaccedilatildeo praacutetica

Ao Prof Doutor Jorge Eiras pelas facilidades concedidas na utilizaccedilatildeo do laboratoacuterio de

Bioquiacutemica do Departamento de Zoologia e Antropologia e ao ICETA pelas facilidades concedidas na

utilizaccedilatildeo dos laboratoacuterios de Geneacutetica Animal

Agrave comissatildeo do Mestrado na figura da Prof Dra Leonor Fidalgo e ao respectivo corpo docente

os importantes conhecimentos transmitidos durante o ano curricular deste mestrado

Agrave AMIBA (Associaccedilatildeo do Minho dos Criadores de Bovinos de Raccedila Barrosatilde) principalmente

ao Sr Miguel Machado e Dr Joseacute Leite pelo apoio dado pela ajuda na recolha de amostras de sangue

e pelo simpaacutetico acolhimento que demonstraram na sua associaccedilatildeo estando sempre prontos a dispensar

os seus serviccedilos

Agrave DRAEDM (Direcccedilatildeo Regional de Agricultura de Entre Douro e Minho) em especial ao

Sr Engdeg Corte Real Santos (Estaccedilatildeo de Produccedilatildeo Animal da Zona Agraacuteria do Vale do Ave) agradeccedilo

todo o apoio e encorajamento que demonstrou

Quero tambeacutem agradecer a colaboraccedilatildeo e o tempo despendido nas vaacuterias saiacutedas de campo aos

funcionaacuterios do Livro Genealoacutegico (ao Sr Guilherme em especial) e aos funcionaacuterios das brigadas de

Sanidade Animal de Vieira do Minho e Poacutevoa de Lanhoso

A todos os colegas de mestrado e de laboratoacuterio pela amizade pelo apoio e pelo ambiente de

camaradagem existente entre todos em especial agrave Madalena Branco ao Joatildeo Alexandrino ao

Agostinho Antunes agrave Graccedila Lopes ao Filipe Castro e agrave Rita Campos

Agrave Junta Nacional de Investigaccedilatildeo Cientiacutefica e Tecnoloacutegica (JNICT) agradeccedilo a Bolsa de

Mestrado (PRAXIS XXIBM879996) que me foi concedida o que possibilitou a minha

disponibilidade para a realizaccedilatildeo da parte praacutetica de investigaccedilatildeo deste trabalho

Aos meus amigos em especial agrave Dra Graccedila Loureiro ao Dr Armando Loureiro e agrave Dra Filipa

Carvalho pela paciecircncia pelo apoio constante que revelaram ao longo deste trabalho e pelas suas

criacuteticas ao manuscrito

Agrave minha matildee e ao meu marido que tornaram possiacutevel este percurso que me conduziu ateacute aqui

A eles dedico todo este trabalho

INDICE

1 - INTRODUCcedilAtildeO 1 11 - A DOMESTICACcedilAtildeO 3

111- Evidecircncia histoacuterica da domesticaccedilatildeo do gado bovino 3

112- Paleontologia arqueozoologia 4

113- Anaacutelise geneacutetica 7

12 - A DIVERSIDADE DAS RACcedilAS BOVINAS 10

121-Asraccedilas ibeacutericas 10

122 - A raccedila Barrosatilde 11

Aspectos histoacutericos da dispersatildeo e evoluccedilatildeo do efectivo populacional 11

Aspectos morfoloacutegicos 15

Origem 15

2 - MATERIAL E MEacuteTODOS 17

21- AMOSTRAGEM E CONSERVACcedilAtildeO DAS AMOSTRAS 17

211-Amostragem 17

212 - Obtenccedilatildeo e conservaccedilatildeo das amostras de sangue 17

22- BATERIA DE MARCADORES GENEacuteTICOS SELECCIONADOS 18

23 - TRATAMENTO DAS AMOSTRAS 24

24 - MEacuteTODOS DE SEPARACcedilAtildeO 26

25 - MEacuteTODOS DE DETECCcedilAtildeO 34

26 - MEacuteTODOS DE CAacuteLCULO 38

3 - RESULTADOS E DISCUSSAtildeO 39

31- ANAacuteLISE DOS MEacuteTODOS DE SEPARACcedilAtildeO 39

32 - ANAacuteLISE FAMILIAR 51

33 - ANAacuteLISE POPULACIONAL LOCUS A LOCUS 54

34 - ANAacuteLISE POPULACIONAL CONJUNTA 72

341 - Diversidade geneacutetica na raccedila Barrosatilde 72

342 - Comparaccedilatildeo com outra raccedilas Ibeacutericas 74

343 - Diferenciaccedilatildeo geneacutetica 77

4 - CONDIDERACcedilOtildeES FINAIS 86

5 - CONCLUSOtildeES 88

6 - REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 90

ANEXO

Introduccedilatildeo

1 - INTRODUCcedilAtildeO

O crescente interesse demonstrado pelas raccedilas bovinas autoacutectones permitiu o

aparecimento nos uacuteltimos anos de uma conjuntura poliacutetica e econoacutemica claramente favoraacutevel

agrave sua conservaccedilatildeo Este interesse reflecte-se por exemplo na criaccedilatildeo de incentivos agrave produccedilatildeo

(ajudas comunitaacuterias e medidas agroambientais) ou no apelo ao consumo de produtos de

qualidade certificada Estas circunstacircncias implicam contudo a necessidade de uma maior

capacidade de produccedilatildeo que em sistemas agriacutecolas tecnicamente pouco desenvolvidos poderaacute

estar associada a programas de melhoramento geneacutetico e consequentemente a eventuais

perdas de diversidade geneacutetica (FAO 1994 LoFTUS et ai1994 FERNANDES 1996)

Em Portugal existe um nuacutemero consideraacutevel de raccedilas bovinas autoacutectones que se

encontram ainda pouco estudadas Na verdade a maior parte dos trabalhos sobre elas

realizados envolve anaacutelises fenotiacutepicas estando ainda por investigar a estrutura geneacutetica das

suas populaccedilotildees o seu grau de proximidade a sua origem e evoluccedilatildeo recente

No seio das raccedilas nacionais a raccedila Barrosatilde apresenta um conjunto de caracteriacutesticas

morfoloacutegicas muito peculiares que incluem um perfil cocircncavo da cabeccedila uma saliecircncia das

arcadas orbitarias e cornos em forma de lira alta Este conjunto de particularidades tem

suscitado opiniotildees controversas sobre a sua origem (GONCcedilALVES GARCIA 1964 GARCIA et ai 1981 LEAL 1995) Por outro lado eacute claramente uma raccedila emblemaacutetica da regiatildeo noroeste

de Portugal associada a uma agricultura de subsistecircncia e a um patrimoacutenio cultural que se

torna necessaacuterio conservar (GONCcedilALVES GARCIA 1964 GARCIA et ai 1981 LEAL 1995)

A sua aacuterea de distribuiccedilatildeo abrange apenas 17 concelhos pertencentes a 4 distritos Vila

Real Viana do Castelo Braga e Porto Actualmente a existecircncia de problemas de produccedilatildeo eacute

responsaacutevel pela progressiva diminuiccedilatildeo de alguns nuacutecleos populacionais apesar dos esforccedilos

de certas entidades para o evitar (MARTINS 1982 LEAL 1995)

i


Em face do exposto torna-se necessaacuterio alargar a investigaccedilatildeo sobre esta raccedila bovina

nomeadamente atraveacutes da sua caracterizaccedilatildeo geneacutetica Espera-se assim poder contribuir para

o estabelecimento de um plano de conservaccedilatildeo da Barrosatilde e simultaneamente aprofundar o

estado actual do conhecimento sobre a geneacutetica das suas populaccedilotildees

2


11 - A DOMESTICACcedilAtildeO

111 - Evidecircncia histoacuterica da domesticaccedilatildeo do gado bovino

Haacute cerca de 15000 anos verificavam-se profundas mudanccedilas climaacuteticas na Terra Os

glaciares recuaram para Norte a temperatura tornou-se mais amena uma maior aacuterea

geograacutefica tornou-se habitaacutevel O Homem teve entatildeo de vencer dificuldades impostas pela

Natureza inventando a agricultura e a criaccedilatildeo de gado passando de caccedilador noacutemada a

agricultor e a pastor (SARAIVA 1993)

O iniacutecio da agricultura e a primeira domesticaccedilatildeo de animais por parte do Homem estaacute

datada de 10000 anos aC (final do Paleoliacutetico) numa regiatildeo conhecida por Crescente Feacutertil

no Proacuteximo Oriente O primeiro animal domesticado teraacute sido o catildeo seguindo-se a ovelha a

cabra e o gado bovino jaacute no Neoliacutetico (8000 anos aC) (HEMMER 1990 CLUTTON-BROCK

1992)

A domesticaccedilatildeo do gado bovino foi provavelmente um processo gradual Eacute natural

que no princiacutepio apenas alguns animais (essencialmente fecircmeas) fossem retirados das manadas

de auroques selvagens e criados isoladamente natildeo levando de imediato ao aparecimento de

diferenccedilas morfoloacutegicas claras Esta hipoacutetese eacute apoiada por registos arqueozooloacutegicos onde a

forma proto-domesticada natildeo se distingue da forma selvagem (LOFTUS et ai 1994)

A expansatildeo neoliacutetica em direcccedilatildeo agrave Europa teraacute levado milhares de anos seguindo uma

via mariacutetima (mar Mediterracircneo) e uma via continental (atraveacutes dos Balcatildes e pelo curso do

Danuacutebio) Da Siciacutelia a revoluccedilatildeo neoliacutetica espalhou-se por toda a bacia mediterracircnea

ocidental atingindo a Peniacutensula Ibeacuterica e a costa atlacircntica e trazendo consigo a arte a

agricultura e a criaccedilatildeo de gado Desta forma soacute no 5 deg mileacutenio aC chegaram agrave Peniacutensula

Ibeacuterica as praacuteticas agriacutecolas e a pastoriacutecia (SARAIVA 1993)

Desde o Neoliacutetico que o gado bovino domesticado (Bos taurus) tem um papel muito

importante para o Homem As grandes civilizaccedilotildees da Antiguidade datildeo-nos testemunhos

escritos e trabalhos artiacutesticos indicando a sua importacircncia na alimentaccedilatildeo (carne leite) nos

trabalhos agriacutecolas na guerra na arquitectura e mesmo na religiatildeo

3


Durante o periacuteodo compreendido entre o iniacutecio do Neoliacutetico ateacute agraves idades do Cobre e

do Bronze a domesticaccedilatildeo dos bovinos levou a uma contiacutenua diminuiccedilatildeo do tamanho corporal

dos animais na Europa Posteriormente este processo teraacute sido interrompido com a introduccedilatildeo

de gado bovino trazido de Roma e muitas raccedilas extinguiram-se apoacutes a queda do Impeacuterio

Romano (EPSTEIN amp MASON 1984)

Esta tendecircncia continuou a observar-se durante a Idade Meacutedia e soacute com a Revoluccedilatildeo

Industrial e a necessidade de abastecer as grandes cidades se produziu um incremento na

criaccedilatildeo de gado (EPSTEIN amp MASON 1984)

Neste domiacutenio a modernizaccedilatildeo da agricultura e a produccedilatildeo intensiva de alimentos teraacute

originado uma contiacutenua diminuiccedilatildeo dos efectivos populacionais de muitas raccedilas autoacutectones

evidente sobretudo durante a uacuteltima metade deste seacuteculo Estas circunstacircncias determinaram

assim a sensibilizaccedilatildeo da sociedade para as consequecircncias do empobrecimento de diversidade

geneacutetica do gado bovino permitindo o estabelecimento de linhas de investigaccedilatildeo destinadas agrave

sua gestatildeo e conservaccedilatildeo (BROWN et ai 1993 FAO 1996)

112 - Paleontologia arqueozoologia

De acordo com os actuais dados paleontoloacutegicos o mais antigo ruminante do Velho

Mundo teraacute aparecido no Mioceno (Gelocus) caracterizando-se pela ausecircncia de incisivos na

mandiacutebula superior e possuindo jaacute uma conformaccedilatildeo do esqueleto idecircntica agrave dos bovinos

actuais (IGLESIAS 1989 e GARCIA et ai 1992) Esta forma viria a originar posteriormente os

quatro geacuteneros actuais de ruminantes Ovis Capra Antilope e Bos (IGLESIAS 1989)

A evidecircncia paleontoloacutegica indica tambeacutem que teratildeo existido na Europa diferentes

espeacutecies de boviacutedeos actualmente extintas Destas apenas o auroque sobreviveu ateacute agrave Idade

Meacutedia havendo documentos escritos que se referem ao local e data da morte do uacuteltimo

exemplar (Poloacutenia 1627) (LOFTUS et ai 1994)

As primeiras representaccedilotildees de bovinos feitas pelo Homem devem precisamente

referir-se a auroques sendo um dos exemplos mais conhecidos constituiacutedo pelas pinturas

rupestres das grutas de Lascaux (Franccedila) (figura 111)

4


Figura 111 Pintura rupestre nas paredes de grutas em Lascaux Franccedila Datando de haacute cerca de 15000 anos Reproduzido de FORBES (1986)

Soacute mais tarde surge a evidecircncia de que o processo de domesticaccedilatildeo se poderaacute ter

iniciado De facto alguns achados neoliacuteticos (8000 a 5500 anos aC) provenientes da

Anatoacutelia parecem indicar a presenccedila de animais jaacute domesticados Esta regiatildeo do Sudoeste

Asiaacutetico poderaacute assim constituir o centro de domesticaccedilatildeo do gado bovino a partir de

populaccedilotildees selvagens da subespeacutecie asiaacutetica do auroque (Bos primigenius namadicus)

(EPSTEIN amp MASON 1984)

Outra evidecircncia adicional eacute fornecida pela descoberta de ossos e dentes de um animal

sensivelmente mais pequeno do que o auroque (Iraque 5000 anos aC) bem como por um

primeiro testemunho escrito onde se descreve em placas de argila uma cabeccedila de vaca

(Mesopotacircmia 5000 anos aC) (ROGERSON 1991)

Muitos outros achados arqueoloacutegicos e paleontoloacutegicos foram encontrados na

Mesopotacircmia (4000 anos aC) e no vale do rio Nilo (4000 anos aC) mostrando um bovino

totalmente domesticado e de longos cornos (EPSTEIN amp MASON 1984)

A consolidaccedilatildeo do processo de domesticaccedilatildeo eacute a partir desta altura inquestionaacutevel

tornando-se abundantes os registos de bovinos domesticados na Mesopotacircmia e vale do Nilo

A este respeito devem referir-se especialmente as numerosas esculturas relevos pinturas e

textos em papiro que relatam pormenores da vida quotidiana do povo egiacutepcio e onde aparecem

diversas cenas que mostram a importacircncia do gado bovino na agricultura e na alimentaccedilatildeo

(figura 112)

5


Figura 112 Desenho ilustrativo de uma ordenha 5a dinastia Reproduzido de BAINES

amp MEacuteLEK (1980)

A partir desta altura as descobertas arqueozooloacutegicas satildeo testemunho de uma

expansatildeo do gado bovino Assim existem registos datados de haacute cerca de 2000 e 3000 anos

aC que sugerem a ocorrecircncia no Norte de Aacutefrica de animais de enormes cornos em forma de

lira (EPSTEIN amp MASON 1984)

Tal expansatildeo daacute-se tambeacutem pela Turquia indo ateacute ao Caacuteucaso e agrave Ruacutessia e chega

tambeacutem agrave Europa onde nas regiotildees do Norte foram encontrados objectos de arte da idade do

Cobre e do Bronze que representam bovinos e datam do iniacutecio do Cristianismo (EPSTEIN amp

MASON 1984)

A migraccedilatildeo para oriente estaacute tambeacutem bem documentada atraveacutes de numerosos restos

arqueozooloacutegicos descobertos em toda a Aacutesia Eacute contudo nesta regiatildeo geograacutefica que se

pode observar a transiccedilatildeo de gado bovino sem bossa (Bos taurus) para outro com bossa (Bos

indicus) Segundo alguns autores as raccedilas de Bos indiens ou gado zebu derivariam das raccedilas

de Bos taurus ou gado taurino atraveacutes de um processo de selecccedilatildeo (EPSTEIN amp MASON

1984) Alternativamente estes dados podem tambeacutem ser interpretados como a ocorrecircncia de

dois processos de domesticaccedilatildeo independentes seguidos do contacto entre as duas populaccedilotildees

domeacutesticas de gado bovino

Adicionalmente deve salientar-se que a evidecircncia descrita eacute ainda muito incompleta

pelo que a interpretaccedilatildeo dos dados deve ser feita com bastante precauccedilatildeo A tiacutetulo de

exemplo refiram-se os achados arqueozooloacutegicos efectuados na Peniacutensula dos Balcatildes e na

6


Macedoacutenia Grega (6200 anos aC) Segundo EPSTEIN amp MASON (1984) estes achados

sugerem que o Sul da Europa poderia constituir o primeiro centro de domesticaccedilatildeo do gado

bovino a partir de onde se teria iniciado a sua expansatildeo em direcccedilatildeo ao resto do continente

europeu Ruacutessia e Sudoeste Asiaacutetico

113 - Anaacutelise geneacutetica

A investigaccedilatildeo sobre a geneacutetica das diferentes raccedilas de gado bovino tem contribuiacutedo de

forma muito significativa para a compreensatildeo da sua histoacuteria dos padrotildees de diversidade que

actualmente as caracterizam e do seu grau de parentesco Os resultados actualmente

disponiacuteveis reportam-se a trecircs domiacutenios principais grupos sanguiacuteneos variaccedilatildeo geneacutetica de

proteiacutenas e polimorfismos do DNA (DNA mitocondrial e microssateacutelites)

Grupos sanguiacuteneos

A primeira tentativa para avaliar o grau de diferenciaccedilatildeo geneacutetica entre raccedilas bovinas e

caracterizar a sua diversidade data do iniacutecio de deacutecada de 70 e envolveu precisamente o

estudo dos diferentes grupos sanguiacuteneos que iam sendo descritos (RUSSELL 1996 USHA

1996) Contudo a maior parte dos resultados natildeo permitiu a obtenccedilatildeo de conclusotildees

definitivas pelo facto de se trabalhar com um nuacutemero relativamente reduzido de loci que

adicionalmente era pouco polimoacuterfico Deve poreacutem referir-se que se dispotildee actualmente de

uma consideraacutevel quantidade de informaccedilatildeo no que se refere agrave distribuiccedilatildeo da variabilidade dos

grupos sanguiacuteneos nas diferentes raccedilas bovinas conferindo a este conjunto de dados uma

importacircncia natildeo despreziacutevel no estudo de eventuais alteraccedilotildees da estrutura geneacutetica de

populaccedilotildees de gado bovino nos uacuteltimos vinte anos (RUSSELL 1996 USHA 1996)

Proteiacutenas

A introduccedilatildeo de teacutecnicas electroforeacuteticas de separaccedilatildeo de proteiacutenas permitiu aumentar

de forma muito consideraacutevel o nuacutemero de sistemas geneacuteticos polimoacuterficos conhecidos nas

raccedilas bovinas em especial no que se refere a proteiacutenas do sangue e do leite (USHA 1996)

A anaacutelise da sua distribuiccedilatildeo populacional veio demonstrar a ocorrecircncia de dois grupos

principais de bovinos ou duas subespeacutecies (Bos primigenius taurus e Bos primigenius

7


indiens) cada um deles caracterizado pela presenccedila de diversos alelos privativos em vaacuterios loci

(BRAEND 1971)

Estes resultados estatildeo de uma maneira geral de acordo com dados morfoloacutegicos

histoacutericos e ainda com a distribuiccedilatildeo geograacutefica conhecida dos principais grupos (EPSTEIN amp

MASON 1984) No entanto o acreacutescimo de informaccedilatildeo fornecido por este tipo de marcadores

foi ainda insuficiente para resolver muitas das interpretaccedilotildees contraditoacuterias publicadas sobre o

tema

Polimorfismo do DNA

A introduccedilatildeo das teacutecnicas de anaacutelise genoacutemica directa e em especial a descoberta do

polimorfismo do DNA-mitocondrial (mtDNA) e dos microssateacutelites forneceram os

instrumentos necessaacuterios a uma detalhada caracterizaccedilatildeo geneacutetica das raccedilas bovinas

A anaacutelise da variaccedilatildeo da moleacutecula de mtDNA permitiu verificar que Bos primigenius

taurus e Bos primigenius indicus teratildeo divergido haacute cerca de 210000 anos uma data muito

anterior agrave indicada pelos dados arqueoloacutegicos para o iniacutecio do processo de domesticaccedilatildeo Eacute

assim muito provaacutevel que tenham ocorrido duas domesticaccedilotildees independentes a partir de duas

subespeacutecies diferentes do auroque Bos primigenius namadicus teraacute dado origem ao gado

zebu na Aacutesia (Vale do Indu) e Bos primigenius primigenius ao gado europeu vindo do

Proacuteximo Oriente (LOFTUS et ai 1994a 1994b)

Muito recentemente BRADLEY et ai (1996) e MACHUGH et ai (1997) sugerem ainda

uma terceira domesticaccedilatildeo independente ocorrida em Aacutefrica Esta evidecircncia resulta tambeacutem

de anaacutelise do polimorfismo do mtDNA indicando uma separaccedilatildeo entre os ancestrais do gado

europeu e africano anterior agrave domesticaccedilatildeo (22000 - 26000 anos) Este terceiro processo de

domesticaccedilatildeo ter-se-ia assim efectuado a partir da subespeacutecie africana do auroque (Bos

primigenius opisthonomus)

A descoberta dos microssateacutelites e do seu elevado grau de polimorfismo data do fim da

deacutecada de 80 (Lm amp LUTY 1989 WEBER amp MAY 1989) e constitui provavelmente a

metodologia mais adequada para estudar a histoacuteria recente da diversificaccedilatildeo das raccedilas bovinas

(MACHUGH et ai 1994 ARRANZ et ai 1996) Os primeiros resultados que envolvem uma

caracterizaccedilatildeo em larga escala de diferentes populaccedilotildees permitiram distinguir mais claramente

a estrutura geneacutetica dos dois grandes grupos de gado bovino (Bos taurus e Bos indicus) e

constituem a base para futuros estudos mais especiacuteficos

8


Por outro lado os microssateacutelites permitiram tambeacutem o iniacutecio do projecto de

cartografia do genoma bovino que no fim de 1994 contabilizava 202 marcadores geneacuteticos

(dos quais 144 eram microssateacutelites) regularmente espaccedilados em 90 do seu comprimento

Cerca de um ano depois existiam jaacute mais de 400 microssateacutelites (USHA et ai 1995) levando

EGGEN et ai (1995) a apresentar um trabalho de revisatildeo e consolidaccedilatildeo de informaccedilatildeo jaacute

existente para evitar a ocorrecircncia de possiacuteveis redundacircncias

A aplicaccedilatildeo deste tipo de marcadores natildeo se restringe apenas agrave anaacutelise da diversidade

geneacutetica populacional e agrave construccedilatildeo de mapas geneacuteticos De facto satildeo actualmente escolhidos

para a realizaccedilatildeo de testes de paternidade (GLOWATZKI-MULLIS et ai 1995 USHA et ai 1995

ARRANZ et ai 1996) detecccedilatildeo de loci que determinam a expressatildeo de caracteriacutesticas

quantitativas (QTL) (RON et ai 1994) determinaccedilatildeo do sexo em embriotildees selecccedilatildeo animal

assistida entre outros

No seu conjunto estes resultados tecircm permitido um avanccedilo notaacutevel na compreensatildeo da

evoluccedilatildeo das actuais raccedilas bovinas A prossecuccedilatildeo desta via de investigaccedilatildeo poderaacute levar ao

esclarecimento definitivo do nuacutemero de domesticaccedilotildees independentes que teraacute ocorrido

(EPSTEIN amp MASON 1984 LOFTUS et al 1994a 1994b BRADLEY et al 1996 MACHUGH et

al 1997) a partir das populaccedilotildees selvagens de auroque Seguidamente eacute legiacutetimo esperar que

venha a ser possiacutevel analisar a uma escala mais fina o grau de parentesco geneacutetico entre raccedilas

que ocupem aacutereas geograacuteficas mais reduzidas Neste particular seraacute extremamente interessante

incluir as populaccedilotildees ibeacutericas e em especial a raccedila Barrosatilde

9


12 - A DIVERSIDADE DAS RACcedilAS BOVINAS

A domesticaccedilatildeo resultou na criaccedilatildeo de milhares de raccedilas de animais domeacutesticos

geneticamente diferentes e adaptadas agraves necessidades humanas e a uma grande variedade de

condiccedilotildees ambientais (FAO 1993)

121 - As raccedilas ibeacutericas

A grande diversidade de raccedilas bovinas da Peniacutensula Ibeacuterica poderaacute dever-se em parte

agrave introduccedilatildeo de outras raccedilas domeacutesticas que se cruzaram entre si e com bovinos jaacute existentes

na Peniacutensula A introduccedilatildeo de outras raccedilas teraacute sido feita de duas formas distintas

1 - atraveacutes dos movimentos migratoacuterios acompanhando as vaacuterias invasotildees de povos

vindos do oriente como eacute o caso dos Feniacutecios ( seacutec X aC) Gregos (seacutec VII aC) e

Romanos (seacutec III aC) Estes uacuteltimos dominaram completamente a Peniacutensula durante

7 seacuteculos e teratildeo contribuiacutedo para a diversificaccedilatildeo do gado bovino pelo facto de

introduzirem animais de caracteriacutesticas diferentes Supotildee-se que do seu cruzamento

com os bovinos ibeacutericos se teratildeo originado os troncos aquitacircnico e ibeacuterico (MIRANDA

do VALE 1949)

2 - atraveacutes da introduccedilatildeo de animais do Norte de Aacutefrica na sequecircncia da invasatildeo de

povos como os Cartagineses (seacutec V aC) e jaacute na era cristatilde os Mouros (711 dC)

Estes teratildeo introduzido descendentes de Bos primigenius opisthonomus que poderaacute

ter influenciado a formaccedilatildeo de vaacuterias raccedilas ibeacutericas nomeadamente as raccedilas Barrosatilde e

Cachena (APARIacuteCIO 1960 in IGLESIAS 1989 EPSTEIN amp MASON 1984) Estas

poderatildeo assim constituir uma linha que descende do tronco mauritaacutenico (MIRANDA

do VALE 1949)

10


Adicionalmente eacute provaacutevel que povos oriundos do Norte da Europa nomeadamente

os Visigodos possam ter introduzido gado bovino dessa regiatildeo Contudo a sua eventual

contribuiccedilatildeo para a diversidade de raccedilas bovinas da Peniacutensula Ibeacuterica estaacute por esclarecer

122 - A raccedila Barrosatilde

Aspectos histoacutericos da dispersatildeo e evoluccedilatildeo do efectivo populacional

O centro de criaccedilatildeo da raccedila Barrosatilde situa-se actualmente na zona do planalto da Serra

do Barroso abrangendo os actuais concelhos de Montalegre Boticas Vieira do Minho

(freguesias de Campos e Ruivatildees) e Cabeceiras de Basto (freguesia de Gondiatildees) Esta regiatildeo

natildeo possui condiccedilotildees agro-climateacutericas que permitam grandes exploraccedilotildees agriacutecolas pelo que

uma parte importante da populaccedilatildeo se dedica agrave criaccedilatildeo de gado (GARCIA et ai 1981

FERNANDES 1996)

Vivendo sobretudo em zonas montanhosas a Barrosatilde eacute utilizada essencialmente como

forccedila de trabalho e na produccedilatildeo de carne de excelente qualidade motivo pelo qual a Uniatildeo

Europeia a reconhece com denominaccedilatildeo de Origem Protegida (FERNANDES 1996)

No seacuteculo passado e iniacutecio do seacuteculo XX existia um grande incentivo para a criaccedilatildeo

desta raccedila devido agrave procura da sua carne muito apreciada em Inglaterra Este incentivo

contribuiu indirectamente para que a estatura dos animais se elevasse (GARCIA et ai 1981) e

para que a zona de criaccedilatildeo se dispersasse pelas aacutereas submontanhosas e pelas planiacutecies do

Entre Douro e Minho ateacute agrave orla mariacutetima chegando mesmo ao concelho de Vila Nova de Gaia

(figura 121) Nestas zonas fazia-se a criaccedilatildeo de novilhos para exploraccedilatildeo como bois de

trabalho e para produccedilatildeo de carne Tal exploraccedilatildeo estaacute bem patente nos paineacuteis de azulejos da

estaccedilatildeo de caminhos de ferro de S Bento no Porto e mesmo nos desenhos das calccediladas nas

principais avenidas desta cidade

li


B

bull bull bull _ bull bull bull - bull bull

Figura 121 A) Junta de bois de trabalho de raccedila Barrosatilde B) Fecircmea adulta Barrosatilde C) Macho adulto Barrosatilde Fotografias datadas de 1949 gentilmente cedidas pela Direcccedilatildeo Regional de Agricultura de Entre Douro e Minho - Centro de Produccedilatildeo Animal (DRAEDM)

12


Poreacutem a necessidade de maiores produccedilotildees de carne foi conduzindo durante a

segunda metade deste seacuteculo a um progressivo decliacutenio no efectivo populacional da raccedila

Barrosatilde tornando-se mesmo raro poder observar uma junta de bois Recentemente as

alteraccedilotildees verificadas na poliacutetica agraacuteria e ambiental da Uniatildeo Europeia teratildeo permitido

alguma recuperaccedilatildeo Nesse contexto a criaccedilatildeo em 1981 do Livro Genealoacutegico da raccedila

Barrosatilde constitui um passo importante para a certificaccedilatildeo dos animais e o aumento do seu

valor Actualmente o seu efectivo populacional tem crescido continuamente e essa tendecircncia

parece estaacutevel

Segundo dados fornecidos pelo Registo Zooteacutecnico e pela Associaccedilatildeo do Minho dos

Criadores de Bovinos de Raccedila Barrosatilde (AMTOA) existiam em 1996 38002 fecircmeas

reprodutoras inscritas e 375 touros de cobriccedilatildeo (tabela 1221) distribuiacutedos por vaacuterios

concelhos dos distritos de Viana do Castelo Braga Vila Real e Porto (figura 122)

Tabela 1221 Movimento do Registo Zooteacutecnico relativo agrave raccedila Barrosatilde

Vacas Inscritas Postos de Cobriccedilatildeo Vitelos Anos Abatidas Registadas Inscritas Encerrados Recenseados Existecircncias Inscritos 1981 0 4884 4882 1 25 24 0 1982 19 6169 11032 6 42 60 532 1983 31 4436 15437 14 35 81 1593 1984 72 866 16231 13 14 82 2151 1985 47 604 16788 15 15 82 1767 1986 106 1027 17709 18 13 77 2414 1987 72 1186 18823 2 14 89 2632 1988 122 1192 19877 5 7 91 2574 1989 138 718 20506 14 26 103 2532 1990 89 1017 21440 8 7 102 2404 1991 159 1309 22590 14 26 114 2531 1992 52 1902 24440 6 17 125 3203 1993 0 4205 28645 37 87 175 4077 1994 0 6248 34893 58 111 228 4679 1995 340 2447 37000 0 112 340 5759 1996 120 1122 38002 26 61 375 5901

Fonte Registo Zooteacutecnico (cedido pela AM1BA)

Apesar desta situaccedilatildeo favoraacutevel natildeo se pode considerar que a raccedila Barrosatilde natildeo corra

ainda perigo de extinccedilatildeo Na verdade satildeo vaacuterios os factores que tecircm contribuiacutedo para a

diminuiccedilatildeo da sua aacuterea de criaccedilatildeo ou mesmo para a alteraccedilatildeo das caracteriacutesticas destes

animais De entre esses factores deve salientar-se i) a substituiccedilatildeo de Barrosatilde por outras raccedilas

autoacutectones (Minhota Mirandesa Maronesa) ou importadas (Friacutesia Gelbvieh e Parda Suiacuteccedila)

13


que fornecem ao agricultor um rendimento superior ii) a progressiva mecanizaccedilatildeo da

agricultura e a diminuiccedilatildeo das aacutereas de pastagem iii) o pequeno nuacutemero de machos

reprodutores associado a um efectivo idoso iv) uma baixa fertilidade meacutedia grandes

intervalos entre partos e elevado nuacutemero de abortos e v) desmotivaccedilatildeo dos produtores mesmo

em face das actuais condiccedilotildees de comercializaccedilatildeo

LEGENDA

| j - -Concelhos de Entre Douro e Minho S Concelhos de Traacutes-os-Montes

ESCALA 11380000

Figura 122 Mapa de distribuiccedilatildeo do actual efectivo Barrosatilde

14


Aspectos morfoloacutegicos

O bovino Barrosatilde apresenta uma estatura mediana com 121-130 cm de altura agrave

cernelha e pelagem de cor castanha (variando entre a cor de palha ateacute a cor acerejada) (LEAL

1995) A cabeccedila eacute curta e larga encimada por uma cornamenta em forma de lira alta os

cornos satildeo muito compridos e espessos de cor branca suja com pontas escuras o conjunto

ocular eacute saliente dando-lhe o aspecto de olhos de sapo as orelhas satildeo de tamanho meacutedio os

membros satildeo curtos e pouco ossudos e o pescoccedilo eacute curto bem ligado agrave cabeccedila e com garrote

largo (MARTINS 1982)

Eacute uma raccedila com caracteres sexuais secundaacuterios bem diferenciados Os touros satildeo

normalmente mais escuros particularmente no terccedilo anterior com maior corpulecircncia do que as

fecircmeas mais robustos com barbela mais desenvolvida cabeccedila mais curta e mais larga cornos

mais grossos e ligeiramente mais curtos (GARCIA et ai 1981 MARTINS 1982)

Esta raccedila apresenta duas particularidades morfoloacutegicas que a distinguem de todas as

outras raccedilas grande desenvolvimento coacuterneo e perfil cocircncavo da cabeccedila com acentuado

prognatismo mandibular O elevado crescimento coacuterneo poderaacute estar relacionado com a

selecccedilatildeo dos animais De facto nas populares chegas de touros o animal que sai vencedor seraacute

o touro cobridor das vacas da aldeia Este processo teraacute permitido a primazia de touros de

maior ossatura capital mais potente musculatura ceacutefalo-cervical maior forccedila no acircngulo taacutersico

e consequentemente grande desenvolvimento dos cornos (MIRANDA do VALE in GONCcedilALVES GARCIA 1964 ARAUacuteJO 1986) No que se refere ao acentuado prognatismo

mandibular eacute possiacutevel que em parte esteja relacionado com o grande desenvolvimento

coacuterneo Este teraacute exigido um desenvolvimento correlativo de certos ossos cranianos e o

atrofiamento dos ossos da face (GONCcedilALVES GARCIA 1964)

Origem

A origem da raccedila Barrosatilde e o seu enquadramento com as outras raccedilas da Peniacutensula

Ibeacuterica estaacute ainda por explicar constatando-se uma grande heterogeneidade na opiniatildeo de

diversos autores a este respeito (MARTINS 1982)

Alguns autores referem a existecircncia no Norte de Aacutefrica (vale do Nilo) de um gado

com caracteriacutesticas morfoloacutegicas semelhantes agrave actual raccedila Barrosatilde em especial no que se

refere agrave forma tamanho e espessura dos cornos Este gado eacute normalmente associado agrave

15


designaccedilatildeo subespeciacutefica Bos primigenius opisthonomus (embora tambeacutem se refira como Bos

primigenius mauritaniens e como Bos taurus desertorum) e teraacute chegado agrave Peniacutensula Ibeacuterica

atraveacutes de vaacuterias rotas migratoacuterias dos povos norte-africanos A raccedila Barrosatilde poderia assim

ser incluiacuteda no tronco mauritaacutenico tendo como ancestral Bos primigenius mauritanicus

(GARCIA et ai 1981)

Neste contexto poderaacute admitir-se que o gado que corresponde a este grupo se tenha

instalado na Peniacutensula Ibeacuterica provavelmente durante a longa ocupaccedilatildeo Moura (GONCcedilALVES

GARCIA 1964) Posteriormente a raccedila Barrosatilde teraacute sido desalojada pelos troncos ibeacuterico e

aquitacircnico restando apenas um nuacutecleo populacional confinado agraves zonas planaacutelticas do

Barroso onde permaneceu ateacute hoje (GONCcedilALVES GARCIA 1964)

Esta hipoacutetese natildeo eacute contudo partilhada por outros autores que lhe criticam a escassa

evidecircncia (forma e tamanho dos cornos) e portanto uma clara ausecircncia de base cientiacutefica

(IGLESIAS 1989)

Perante o exposto pode verificar-se que a raccedila Barrosatilde apresenta aspectos

morfoloacutegicos e histoacuterico-evolutivos muito peculiares sendo ainda hoje difiacutecil proceder ao seu

enquadramento no seio das restantes raccedilas bovinas ibeacutericas O aprofundamento da investigaccedilatildeo

sobre a estrutura geneacutetica das suas populaccedilotildees poderaacute ser assim uma via para o

esclarecimento das muitas questotildees que permanecem por responder Nestas condiccedilotildees este

trabalho pretende ser uma contribuiccedilatildeo para o conhecimento da geneacutetica das populaccedilotildees da

raccedila bovina Barrosatilde atraveacutes da consecuccedilatildeo dos seguintes objectivos

1 estudo da variabilidade geneacutetica da raccedila Barrosatilde ao niacutevel das proteiacutenas eritrocitaacuterias

e plasmaacuteticas

2 desenvolvimento e afinaccedilatildeo de teacutecnicas de separaccedilatildeo de proteiacutenas por electroforese

e focagem isoeleacutectrica e sua detecccedilatildeo especiacutefica (histoquiacutemica e imunoloacutegica)

3 anaacutelise familiar dos polimorfismos encontrados

4 avaliaccedilatildeo do grau de diferenciaccedilatildeo geneacutetica existente entre a raccedila Barrosatilde e outras

raccedilas bovinas

16

Material e Meacutetodos

2 - MATERIAL E MEacuteTODOS

21 - AMOSTRAGEM E CONSERVACcedilAtildeO DAS AMOSTRAS

211 - Amostragem

Foram recolhidas 356 amostras de sangue correspondente a 294 indiviacuteduos de raccedila

Barrosatilde (dos quais 141 estavam inscritos no Livro Genealoacutegico) e 62 indiviacuteduos de raccedila

Minhota As colheitas efectuaram-se em zonas de intensa criaccedilatildeo da Barrosatilde designadamente

nos concelhos de Arcos de Valdevez Cabeceiras de Basto Fafe Poacutevoa de Lanhoso e

Monccedilatildeo em finais de 1993 durante o ano de 1994 e ainda no periacuteodo de 1996 1997 em

Vieira do Minho

A recolha de sangue em indiviacuteduos de raccedila Minhota foi efectuada com a finalidade de

servir como termo de comparaccedilatildeo geneacutetica uma vez que se realizam cruzamentos entre esta

raccedila e a Barrosatilde

212 - Obtenccedilatildeo e conservaccedilatildeo das amostras de sangue

O sangue foi colhido da veia jugular em tubos contendo 01 ml de EDTA (aacutecido

etilnodiaminotetraceacutetico) dissoacutedico a 10 ou em tubos heparinados

As amostras de sangue foram centrifugadas (10 minutos a 13000 rpm) separando-se

em seguida o plasma dos eritroacutecitos Aos eritroacutecitos foi adicionado meio de glicerol (seis

partes de uma soluccedilatildeo 5 de citrato trissoacutedico 2H20 adicionados a quatro partes de glicerol)

numa proporccedilatildeo aproximada de 21 as amostras foram conservadas a -20degC

17


22 - BATERIA DE MARCADORES GENEacuteTICOS SELECCIONADOS

No presente trabalho foi escolhida uma bateria de 12 marcadores geneacuteticos dispersos

no genoma do bovino (figura 5) HB (Hemoglobina) CAII (Anidrase carboacutenica) PEPB

(Peptidase B) DIA (Diaforase) NP (Fosforilase nucleosiacutedica) MDH (Desidrogenase do

malato) PGD (Desidrogenase do aacutecido fosfoglucoacutenico) GPI (Isomerase da fosfoglucose)

MPI (Isomerase da manose-6-fosfato) ALB (Albumina) TF (Transferrina) e GC

(Componente especiacutefico de grupo)

CP SODl TF

PEPC IDH1

AMY1 AMY1A PGM1

4

LDHB PEPB

ADH2 PGM2 ALB GC SOD3

6

IADA

ALDH1

CAII

ME1 PGM3 SOD2

NP

10

CAT HBBq22-q27

PGD IALDH2 DIA4

HP GPIq22-q24

MPI iBF GLOl

LDHA MDH2

Figura 221 Localizaccedilatildeo de vaacuterios loci proteicos no genoma de Bos taurus Com um tom mais carregado indicam-se os marcadores estudados neste trabalho Adaptado de FRIES et ai (1993)

18


bull HB

A hemoglobina eacute responsaacutevel pelo transporte do oxigeacutenio dos pulmotildees para os tecidos

A sua estrutura eacute tetrameacuterica tendo cada uma das quatro subunidades um grupo prosteacutetico -

- heme - com um aacutetomo de ferro no centro A fracccedilatildeo principal da hemoglobina de mamiacuteferos

adultos eacute composta por duas cadeias a e duas cadeias P (BRAEND 1971 CECCHINI amp Nus

1986)

O locus da HB foi um dos primeiros a ser estudado apresentando polimorfismo em

vaacuterios mamiacuteferos (CECCHJM amp Nus 1986 BRAEND et ai 1988 CLARKE et ai 1989 WANG

et ai 1990 SELVARAJ et ai 1991) Em 1955 CABANNE amp SERAIN (in BRAEND 1988)

descrevem pela primeira vez o polimorfismo da HB em bovinos do Norte da Aacutefrica

Posteriormente muitos estudos foram efectuados descrevendo-se 13 variantes (raros na sua

maioria) com diferenccedilas apenas nas cadeias beta (CECCHINI amp Nus 1986 BRAEND 1988)

bull CAII-EC4211

A CAII eacute uma metaloenzima com grande distribuiccedilatildeo nos animais e nas plantas

(TASHIAN 1989) Catalisa de forma reversiacutevel a hidrataccedilatildeo do C02 em H2C03 (CECCHINI amp

Nus 1986 TASHIAN 1989) O seu papel fisioloacutegico ainda natildeo eacute bem conhecido mas eacute

possiacutevel que tenha participaccedilatildeo na manutenccedilatildeo do balanccedilo osmoacutetico (TASHIAN 1989)

A ocorrecircncia de variaccedilatildeo geneacutetica na CAII estaacute descrita em muitas espeacutecies de

mamiacuteferos tendo sido descritos dois loci polimoacuterficos (CAI e CAII) (TASHIAN amp CARTER

1976 CLARICE et ai 1989 SELVARAJ et ai 1991)

SARTORE et ai (1969) foram os primeiros a detectar polimorfismo electroforeacutetico da

anidrase carboacutenica em bovinos domeacutesticos e buacutefalos americanos Nos eritroacutecitos de bovinos

apenas se exprime a anidrase carboacutenica II que apresenta geralmente 2 alelos codominantes

autossoacutemicos (CAIPF e CAIPS) (SARTORE et ai 1969 TASHIAN amp CARTER 1976) Mais

tarde foram encontrados 3 novos alelos (C Z e X) (CECCHINI amp Nus 1986)

19


bull PEPB-EC3412

As peptidases formam um conjunto de enzimas capazes de hidrolisar di- e tripeacuteptidos

caracterizando-se pela sua especificidade em relaccedilatildeo a diversos substratos bem como atraveacutes

da sua distribuiccedilatildeo tecidular

A PEPB apresenta uma estrutura monomeacuterica tendo sido descrita como polimoacuterfica

em algumas raccedilas brasileiras de bovinos de origem europeia e indiana (DEL LAMA et ai

1992)

bull DIA-EC1643

A enzima monomeacuterica DIA (NADH - Methemoglobina redutase) tambeacutem conhecida

por citocromo bs redutase faz parte de um grupo de enzimas que catalisam a reduccedilatildeo da

methemoglobina (IGLESIAS 1989 VIEIRA 1993 kRAHhetal 1986)

O seu polimorfismo geneacutetico foi detectado em vaacuterias espeacutecies de Ungulados incluindo

os bovinos (CLARKE et ai 1989 IGLESIAS 1989 SELVARAJ et ai 1991 TATE amp McEWAN

1992)

bull NP-EC2421

A enzima NP encontra-se distribuiacuteda por vaacuterios tecidos e oacutergatildeos e catalisa

reversivelmente a fosforoacutelise dos nucleosiacutedeos puriacutenicos levando agrave formaccedilatildeo das respectivas

bases e ribose-1-fosfato (IGLESIAS 1989)

O polimorfismo geneacutetico desta enzima foi detectado em vaacuterias espeacutecies de mamiacuteferos

incluindo os bovinos (ANSAY 1973 HARRIS amp HOPKINSON 1978 TUKER amp YOUNG 1988

CLARKE eacutetal 1989 IGLESIAS 1989 FERRAND 1995)

20


bull MDH-ECl 1137

A MDH eacute uma oxirredutase dimeacuterica na maioria dos mamiacuteferos responsaacutevel pela

oxidaccedilatildeo do L-malato em oxoglutarato com NAD como aceitador A reacccedilatildeo eacute reversiacutevel em

presenccedila de NADH e oxaloacetato A enzima diz-se NAD especiacutefica pelo facto da reacccedilatildeo soacute

ocorrer na presenccedila deste cofactor (MORAIS 1992 PEREIRA 1997)

A ocorrecircncia de variaccedilatildeo geneacutetica neste locus foi descrita para vaacuterios mamiacuteferos

(HARRIS amp HOPKINSON 1978 TUNOacuteN et ai 1989 SELVARAJ et ai 1991) Contudo

relativamente aos bovinos natildeo foi possiacutevel encontrar referecircncias quanto ao seu polimorfismo

bull PGD-EC11144

A PGD eacute uma enzima dimeacuterica envolvida na via das pentoses-fosfato catalisando a

conversatildeo de 6-fosfogluconato em ribose-5-fosfato

O polimorfismo geneacutetico do locus PGD estaacute descrito em diversas espeacutecies de

Ungulados (HERZOG 1988 PENEDO et ai 1988 BEKENEV amp ORLO VA 1991 KUROSAWA amp

TANAKA 1991 JANZEN amp COTHRAN 1991 FERNDALE et al 1992) Contudo relativamente

aos bovinos natildeo foi possiacutevel encontrar referecircncias quanto ao seu polimorfismo

bull GPI-EC5319

A isomerase da fosfoglucose cataliza a reacccedilatildeo reversiacutevel de conversatildeo de glucose-

-6-fosfato em frutose-6-fosfato (HARRIS amp HOPKINSON 1978 PRETSCHei ai 1990)

Eacute uma enzima dimeacuterica com polimorfismo geneacutetico em vaacuterias espeacutecies de mamiacuteferos

nomeadamente no catildeo (ARNOLD amp Bouw 1989) no porco (VAN DE WEGHE et ai 1988

BEKENEV amp ORLO VA 1991) na ovelha (RASERO et ai 1993) em lamas e alpacas (PENEDO et

ai 1988) e no Homem (HARRIS amp HOPKINSON 1978)

21


bull MPI-EC5318

A MPI eacute uma enzima monomeacuterica de acccedilatildeo cataliacutetica que permite a isomerizaccedilatildeo de D-

-manose-6-fosfato em D-frutose-6-fosfato

Em diversas espeacutecies de mamiacuteferos nomeadamente no Homem (RlTTER et ai 1974)

em babuiacutenos (RITTER amp SCHMITT 1973) e ratos (NICHOLS et ai 1973 VANDEBERG amp

AIVALIOTIS 1990) esta enzima natildeo apresenta actividade em eritroacutecitos sendo poreacutem

detectada em diversos tecidos como rim fiacutegado e o muacutesculo Mais tarde demonstrou-se a

possibilidade de proceder a esta detecccedilatildeo em hemolisados de cavalos coelhos e lebres (HALL

et ai 1991 VIEIRA amp FERRAND 1995 SANTOS 1995)

O polimorfismo geneacutetico de MPI em bovinos foi descrito por ANSAY (1973)

apresentando trecircs alelos autossoacutemicos codominantes (MPPA MPIB e MPIC)

bull ALB

A albumina eacute a proteiacutena mais abundante no plasma dos mamiacuteferos e apresenta uma

estrutura monomeacuterica A sua funccedilatildeo estaacute relacionada com processos de transporte e de

regulaccedilatildeo do balanccedilo osmoacutetico (CECCHTNI amp Nus 1986 CARTER et al 1989)

O polimorfismo geneacutetico da albumina estaacute descrito em vaacuterias espeacutecies de Ungulados

(STORMONT et ai 1963 BOWLING amp CLARK 1988 PENEDO et ai 1988 ERHARDT 1991

SELVARAJeacutetfa 1991CRISTOFALOpounda 1992 ERHARDT amp SlMIANER 1993)

EFREMOV e ASHTON em 1965 (in CECCHTNI amp Nus 1986) descrevem pela primeira vez

polimorfismo geneacutetico em raccedilas bovinas inglesas Inicialmente encontraram-se dois alelos

(ALBA ou ALBF e ALBB ou ALBS) por electroforese aacutecida Mais tarde descreveram-

-se outros alelos em raccedilas britacircnicas (ALBH e ALBG) e em raccedilas africanas (ALBD

ALBE e ALBF) (CECCHINI amp Nus 1986) ABE et ai em 1971 descrevem o alelo ALBX

(in CECCHTNI amp Nus 1986)

22


bull TF

A transferrina eacute uma 3-globulina seacuterica responsaacutevel pelo transporte do ferro Possui

uma estrutura monomeacuterica glicosilada (CECCHINI amp Nus 1986 WELCHS 1990 PENHALLOW

et ai 1991 CUNHA 1994)

O polimorfismo geneacutetico desta proteiacutena foi detectado em vaacuterias espeacutecies de Ungulados

(KRISTJANSSON 1963 STORMONT et ai 1963 ASHTON 1965 GAHNE et ai 1977 CECCHJNI

amp Nus 1986 ERHARD 1986 KUROSAWA amp TANAKA 1988 PENEDO et ai 1988 CLARKE et

ai 1989 HERZOG 1989 JUNEJA et ai 1989 TSUJI et ai 1989 SCHNEIDER et ai 1990

STRATIL et ai 1990 WANG et ai 1990 SELVARAJ et ai 1991 DRATCH et ai 1992

VANKAN amp BELL 1992a CIacuteZovket ai 1993 ERHARD et ai 1993)

ASHTON em 1965 descreveu pela primeira vez o polimorfismo geneacutetico de TF em

bovinos estando actualmente descritos sete alelos TFA TFB TFD1 TFD2 TFE

TFF e TFG (CECCHTNI amp Nus 1986) A subdivisatildeo do alelo TFD em TFD1 e TFD2 foi

descrita por KRISTJANSSON amp HICKMAN (1965)

Nos bovinos os loci TF e CP encontram-se ligados como tem sido descrito para vaacuterias

espeacutecies de mamiacuteferos (JUNEJA et ai 1989)

bull GC

A GC apresenta uma estrutura monomeacuterica e o seu polimorfismo geneacutetico estaacute descrito

em vaacuterias espeacutecies de Ungulados (GAHNE 1963 KRISTJANSSON 1963 JUNEJA et ai 1987

PENEDO et ai 1988 PENEDO amp JUNEJA 1989 KALAacuteB et ai 1990 ERHARDT 1991 VANKAN

amp BELL 1992b STERN et ai 1992 ERHARDT amp SIMIANER 1993 STRATIL et ai 1995)

Nos bovinos o polimorfismo geneacutetico da GC foi inicialmente descrito por GAHNE

(1963) e ASHTON (1963) in GAHNE et ai 1977) mas soacute mais tarde foi possiacutevel obter

frequecircncias geacutenicas para este locus (alelos GCA e GCB) em diferentes raccedilas europeias

(GAHNE et ai 1977) A utilizaccedilatildeo de novas teacutecnicas de separaccedilatildeo permitiu distinguir um

terceiro alelo GCC (VAN DE WEGHE 1982)

23


A existecircncia de ligaccedilatildeo factorial entre os loci ALB e GC foi demostrada no Homem

em primeiro lugar e depois nos cavalos nos bovinos e na ovelha (VAN DE WEGHE 1982

ERHARDT amp SlMIANER 1993)

23 - TRATAMENTO DAS AMOSTRAS

bull HB

A separaccedilatildeo da moleacutecula HB por focagem isoeleacutectrica foi feita mediante a utilizaccedilatildeo de

hemolisados diluiacutedos 18 em aacutegua bidestilada

bull CAII

A separaccedilatildeo electroforeacutetica de CAII foi realizada em gel de amido e em focagem

isoeleacutectrica No primeiro caso as amostras foram simplesmente tratadas com tolueno

enquanto no segundo se procedeu ainda agrave sua reduccedilatildeo com uma soluccedilatildeo de ditiotreitol

(DTT) 120 mM (100 uacute de amostra natildeo diluiacuteda e 20 pi de DTT 120 mM) durante 1 h a 37degC

Quando se utilizou focagem isoeleacutectrica aleacutem do tratamento jaacute referido foi necessaacuterio

realizar uma diluiccedilatildeo final de 110 com aacutegua bidestilada

bull PEPB DIA NP MDH PGP GPI e MPI

As separaccedilotildees electroforeacuteticas de PEPB DIA NP MDH PGD GPI e MPI em gel de

amido foram efectuadas com hemolisados natildeo diluiacutedos submetidos ao mesmo tratamento

descrito para CAII quando separada por electroforese convencional

24


bull ALB

Na separaccedilatildeo de ALB por focagem isoeleacutectrica utilizaram-se amostras de plasma

diluiacutedas com aacutegua bidestilada na proporccedilatildeo de 170

bull TF

Na separaccedilatildeo de TF efectuada por focagem isoeleacutectrica utilizaram-se amostras de

plasma submetidas a vaacuterios tipos de tratamento para comparaccedilatildeo dos padrotildees de bandas

obtidos

1 Remoccedilatildeo dos resiacuteduos de aacutecido siaacutelico da moleacutecula de TF

diluiccedilatildeo 13 com neuraminidase durante 1 h a 37 degC

2 Remoccedilatildeo do Fe da moleacutecula de TF

diluiccedilatildeo 13 com EDTA-dissoacutedico (20) 2 h antes da aplicaccedilatildeo para remoccedilatildeo dos

aacutetomos de Fe da moleacutecula de TF

3 Saturaccedilatildeo em Fe da moleacutecula de TF

31 - diluiccedilatildeo 13 com soluccedilatildeo de sulfato de amoacutenio feacuterrico 015 (pv) em aacutecido

ciacutetrico 60 mM seguida de incubaccedilatildeo agrave temperatura ambiente 18 h A utilizaccedilatildeo

de uma razatildeo ligante Fe de 201 permite uma raacutepida saturaccedilatildeo da moleacutecula de

TF (FERRAND 1995)

32 - diluiccedilatildeo 13 com soluccedilatildeo de sulfato de amoacutenio ferroso 015 (pv) em aacutecido

ciacutetrico 60 mM seguida de incubaccedilatildeo agrave temperatura ambiente 18 h

33 - diluiccedilatildeo 13 com soluccedilatildeo de citrato de amoacutenio feacuterrico 015 (pv) em aacutecido


34 - diluiccedilatildeo 13 com soluccedilatildeo de citrato feacuterrico 015 (pv) em aacutecido ciacutetrico

60 mM seguida de incubaccedilatildeo agrave temperatura ambiente 18 h

35 - diluiccedilatildeo 13 com soluccedilatildeo de cloreto de ferro 015 (pv) em aacutecido ciacutetrico


25


Antes da inserccedilatildeo as amostras foram parcialmente purificadas atraveacutes da adiccedilatildeo de 5

volumes de uma soluccedilatildeo de rivanol 06 (pv) em tampatildeo Tris HC1 005 M (ajusta-se o pH

para valores de 91 com Tris 1 M) seguida de centrifugaccedilatildeo

bull GCcedil

A fim de proceder agrave remoccedilatildeo dos resiacuteduos de aacutecido siaacutelico existente nas cadeias de

hidratos de carbono ligadas agrave moleacutecula GC as amostras de plasma foram submetidas a uma

incubaccedilatildeo com uma soluccedilatildeo de neuraminidase Clostridium perfringens SIGMA type V 18

Uml) na proporccedilatildeo de 13 durante 18 h a 37degC acrescentando-se posteriormente aacutegua

bidestilada ateacute agrave obtenccedilatildeo de uma diluiccedilatildeo final de 14 Paralelamente procedeu-se a uma

diluiccedilatildeo das amostras com aacutegua bidestilada (19) para comparaccedilatildeo dos padrotildees de bandas

obtidos

24 - MEacuteTODOS DE SEPARACcedilAtildeO

Electroforese convencional

Nas teacutecnicas de electroforese convencional foram utilizados vaacuterios sistemas de tampatildeo

para os geacuteis e para as pontes conforme a proteiacutena em estudo

Focagem isoeleacutectrica

Os sistemas de focagem isoeleacutectrica utilizados na separaccedilatildeo de proteiacutenas foram

realizados em matrizes de poliacrilamida (T = 5 C = 3) com dimensotildees 230xl00x03mm

Os geacuteis foram aplicados sobre uma peliacutecula de suporte GELFIX (SERVA) permitindo o seu

manuseamento adequado

A adiccedilatildeo de soluccedilotildees de TEMED 10 (pv) e persulfato de amoacutenio (PSA) 10 (pv)

permitiu a polimerizaccedilatildeo do gel agrave temperatura ambiente (24 horas) ou a 37 degC durante 1 h

As separaccedilotildees por focagem isoeleacutectrica decorreram sobre placa de arrefecimento a

aproximadamente 10degC (8 - 12degC)

26


HB

A separaccedilatildeo da moleacutecula de HB foi realizada por focagem isoeleacutectrica em gradiente de

pH livre segundo a teacutecnica descrita por FERRAND (1995) com algumas modificaccedilotildees

A composiccedilatildeo da soluccedilatildeo de polimerizaccedilatildeo e os paracircmetros eleacutectricos utilizados estatildeo

indicados nas tabelas 241 e 242 respectivamente

Tabela 241 Soluccedilatildeo de polimerizaccedilatildeo utilizada para a separaccedilatildeo da moleacutecula nativa de HB por focagem isoeleacutectrica

Componentes da soluccedilatildeo Quantidades

Acrilamida 28 (pv)

Bisacrilamida 2 (pv)

Sacarose

Anfoacutelitos 5-8 (SIGMA)

7-9 (PHARMACIA)

Aacutegua bidestilada TEMED 10 (vv)

PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

300 p1

300 ul

ateacute 10 ml volume final

10 ul

70 ul

Tabela 242 Paracircmetros eleacutectricos utilizados na focagem isoeleacutectrica de HB

Voltagem (V) Corrente (mA) Potecircncia (W) Tempo (T)

Preacute focagem 1500 25 1

2

3

30 min

15 min

15 min

Focagem 1500 25 15 2h 30 min

As soluccedilotildees para os eleacutectrodos foram aacutecido aspaacutertico 004 M (acircnodo) e NaOH 01 M

(caacutetodo) As amostras foram aplicadas a 15 cm do caacutetodo tendo sido inseridas com o auxiacutelio

de um aplicador de borracha silicone (SERVA)

27


bull CAII

A separaccedilatildeo de CAII fez-se em gel de amido (15 pv SIGMA) conforme o descrito

por AMORIM (1983) com algumas modificaccedilotildees e ainda por focagem isoeleacutectrica em

gradiente de pH livre

Utilizam-se os seguintes sistemas tampatildeo para a separaccedilatildeo por electroforese em gel de

amido

Tampatildeo das Pontes Tris 0250 M pH = 76 Aacutecido ciacutetrico 0067 M

Tampatildeo do Gel Diluiccedilatildeo 110 do tampatildeo das pH = 76 pontes

As amostras foram inseridas em meio Sephadex G-200 (PHARMACIA) na proporccedilatildeo

de 11 As electroforeses foram realizadas em placa de arrefecimento (8degC) e com um

gradiente de potencial de 5 Vcm durante 16 h

A teacutecnica utilizada para a separaccedilatildeo de CAII por focagem isoeleacutectrica foi a descrita por

BOWLING et ai (1990) com algumas modificaccedilotildees A composiccedilatildeo da soluccedilatildeo de

polimerizaccedilatildeo e os paracircmetros eleacutectricos utilizados estatildeo indicados nas tabelas 243 e 244

respectivamente


(caacutetodo) As amostras foram inseridas com o auxiacutelio de um aplicador de borracha silicone

(SERVA) colocado a 15 cm do caacutetodo

28


Tabela 243 Soluccedilatildeo de polimerizaccedilatildeo utilizada na separaccedilatildeo de CAII por focagem isoeleacutectrica

Componentes da soluccedilatildeo

Acrilamida 28 (pv)


Sacarose

Anfoacutelitos 4-65 (PHARMACIA)



PSA 10 (pv)

Quantidades 18 ml

08 ml

2 g

500 |ol

100 ul


10 ul

70 ul

Tabela 244 Paracircmetros eleacutectricos utilizados na separaccedilatildeo de CAII por focagem isoeleacutectrica



3

5

30 min

15 min

15 min

Focagem 2500 25 8

10

12

30 min

30 min

30 min

bull PEPB

A separaccedilatildeo da PEPB foi realizada em gel de amido (15 pv SIGMA) de acordo

com a teacutecnica descrita por POVEY et ai (1972) com algumas modificaccedilotildees

29


Utilizou-se o seguinte sistema tampatildeo

Tampatildeo das Pontes Tris 01 M

pH = 74 NaH2P04 01 M

Tampatildeo do Gel Diluiccedilatildeo 110 do tampatildeo das

pH = 74 pontes

As amostras satildeo inseridas em meio Sephadex G-200 (PHARMACIA) na proporccedilatildeo de

11 As electroforeses foram realizadas em placas de arrefecimento (8degC) e com um gradiente

de potencial de 5 Vcm durante 16 h

bull DIA

No caso da separaccedilatildeo de DIA a teacutecnica eacute idecircntica agrave utilizada para CAII electroforese

em gel de amido (15 pv SIGMA) conforme o descrito por AMORIM (1983) com algumas

modificaccedilotildees

bull NP MDH PGD GPJ e MPI

As separaccedilotildees das enzimas NP MDH PGD GPI e MPI fizeram-se em simultacircneo por

electroforese em gel de amido (15 pv SIGMA) conforme o descrito por AMORIM et ai

(1982) com algumas modificaccedilotildees


1130 M

0400 M

0020 M 0010 M

Tampatildeo das Pontes NaOH

pH = 60 Aacutecido ciacutetrico

Tampatildeo do Gel HisHCl

pH = 60 NaOH

30



de 11 As electroforeses foram realizadas em placas de arrefecimento (8degC) e com um


ALB

Nas tabelas 245 e 246 indicam-se respectivamente a composiccedilatildeo da soluccedilatildeo de

polimerizaccedilatildeo para a separaccedilatildeo de ALB por focagem isoeleacutectrica segundo a teacutecnica descrita

por ROCHA et ai (1991) com algumas modificaccedilotildees e os paracircmetros eleacutectricos

Tabela 245 Soluccedilatildeo de polimerizaccedilatildeo utilizada para a separaccedilatildeo de ALB por focagem isoeleacutectrica


Acrilamida 28 (pv)


Ureia





PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

48 g

250 ni

250 ni

125 ul


30 ul

70 ul

Tabela 246 Paracircmetros eleacutectricos utilizados na separaccedilatildeo de ALB por focagem isoeleacutectrica


Preacute focagem 1500 25

Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

31



(caacutetodo) As amostras foram aplicadas a 15 cm do caacutetodo com o auxiacutelio de um aplicador de

borracha silicone (SERVA)

TF

A separaccedilatildeo da moleacutecula de TF foi efectuada por focagem isoeleacutectrica A composiccedilatildeo

da soluccedilatildeo de polimerizaccedilatildeo e os paracircmetros eleacutectricos utilizados estatildeo indicados nas tabelas

247 e 248 respectivamente

Tabela 247 Soluccedilatildeo de polimerizaccedilatildeo utilizada para a separaccedilatildeo da TF por focagem isoeleacutectrica


Acrilamida 28 (pv)


Sacarose

Anfoacutelitos 35-5(LKB)


Aacutegua bidestilada

TEMED 10 (vv) PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

100 ul

500 ul


30 ul

70 ul

Tabela 248 Paracircmetros eleacutectricos utilizados na separaccedilatildeo de TF por focagem isoeleacutectrica



Focagem 2500 25

l 20 min

2 10 min

3 10 min

8 30 min

10 30 min

12 30 min

32


As soluccedilotildees para os eleacutectrodos foram de aacutecido aspaacutertico 004 M (acircnodo) e de NaOH

1 M (caacutetodo) As amostras foram aplicadas a 15 cm do caacutetodo com o auxiacutelio de um aplicador

de borracha silicone (SERVA)

GC

Nas tabelas 249 e 2410 apresenta-se respectivamente a composiccedilatildeo da soluccedilatildeo de

polimerizaccedilatildeo e os paracircmetros eleacutectricos utilizados na focagem isoeleacutectrica de GC

Tabela 249 Soluccedilatildeo de polimerizaccedilatildeo utilizada para a separaccedilatildeo da GC por focagem isoeleacutectrica


Acrilamida 28 (pv)


Sacarose


Anfoacutelitos 4-6 (LKB)


PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

437 ul

188 (il

eacute 10 ml volume final

10 ul

70 ul

Tabela 2410 Paracircmetros eleacutectricos utilizados na separaccedilatildeo de GC por focagem isoeleacutectrica



Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

33


Para os eleacutectrodos foram utilizadas soluccedilotildees de aacutecido aspaacutertico 004 M (acircnodo) e de

NaOH 02 M (caacutetodo) As amostras foram inseridas com o auxiacutelio de um aplicador de

borracha silicone (SERVA) colocado a 15 cm do caacutetodo

25 - MEacuteTODOS DE DETECCcedilAtildeO

Apoacutes a separaccedilatildeo das proteiacutenas os padrotildees electroforeacuteticos foram geralmente obtidos

por detecccedilatildeo especiacutefica aproveitando a actividade cataliacutetica das enzimas Noutros casos a

revelaccedilatildeo foi feita por coloraccedilatildeo geral de proteiacutenas

bull HB

A visualizaccedilatildeo da HB foi obtida mediante coloraccedilatildeo geral de proteiacutenas segundo o

seguinte procedimento

Fixaccedilatildeo

Imersatildeo do gel numa soluccedilatildeo de aacutecido tricloroaceacutetico 125 (pv) durante 10 minutos

Coloraccedilatildeo geral de proteiacutenas

Coloraccedilatildeo com uma soluccedilatildeo de Coomassie R-250 0115 (pv) numa mistura de aacutecido

aceacuteticoetanolaacutegua destilada (42571) apoacutes aquecimento seguida de filtraccedilatildeo durante

5-10 minutos A descoloraccedilatildeo eacute feita com aacutecido aceacutetico etanol e aacutegua destilada

aquecida a cerca de 60degC ateacute se obter o contraste desejado

bull CAII

Apoacutes separaccedilatildeo por electroforese em gel de amido visualizou-se a CAII pela sua

actividade esteraacutesica adicionando-se diacetato de fluoresceiacutena (em quantidades vestigiais que

34


foram previamente dissolvidas em 200 uacute de acetona) a uma soluccedilatildeo de incubaccedilatildeo tamponada

(pH = 66) Esta soluccedilatildeo de incubaccedilatildeo eacute composta por aacutecido ciacutetrico 27 mM e Na2HP04

116 mM e foi aplicada sobre o gel de amido com o auxiacutelio de papeacuteis de filtro Whatman ndegl

Em seguida incubou-se durante 30 minutos a 37degC A observaccedilatildeo das bandas de CAII (devido

agrave sua capacidade esteraacutesica) eacute feita sob luz ultravioleta

Apoacutes separaccedilatildeo por focagem isoeleacutectrica utilizou-se uma coloraccedilatildeo geral de proteiacutenas

para visualizaccedilatildeo da CAII segundo o meacutetodo descrito para a HB sem fixaccedilatildeo

bull PEPB

A detecccedilatildeo da PEPB apoacutes a separaccedilatildeo electroforeacutetica foi feita atraveacutes da aplicaccedilatildeo

sobre o gel de amido de papeacuteis de filtro Whatman ndegl embebidos numa soluccedilatildeo de coloraccedilatildeo

seguindo-se uma incubaccedilatildeo de 30 minutos a 37degC

A soluccedilatildeo de coloraccedilatildeo conteacutem o substrato da PEPB L-leucilglicil-glicina 0004 M

veneno de cobra da espeacutecie Agkistrodon piscivorus piscivorus 04 (pv) MTT 24 mM e

metosulfato de fenazina (PMS) 03 mM num tampatildeo de pH = 80 (Tris HC1005 M)

bull DIA

Apoacutes a separaccedilatildeo por electroforese em gel de amido a identificaccedilatildeo da DIA foi obtida

pela adiccedilatildeo de uma soluccedilatildeo de coloraccedilatildeo a uma fatia do gel A incubaccedilatildeo decorreu durante 2

horas a 37degC

A soluccedilatildeo de coloraccedilatildeo foi realizada em duas fases

Io - colocou-se 26-diclorofenol-indofenol (DCIP) 01 mM com um tampatildeo de

pH = 85 (Tris HC1 005M) adicionando-se agrave mistura aacutegua bidestilada ateacute perfazer

50 ml Em seguida filtrou-se a soluccedilatildeo

2o - agrave soluccedilatildeo filtrada adicionou-se MTT 03 mM e NADH 02 mM e agitou-se antes

de verter sobre a fatia de gel de amido

35


bull NP

A detecccedilatildeo da enzima NP apoacutes a separaccedilatildeo por electroforese foi feita atraveacutes da

aplicaccedilatildeo sobre o gel de amido de papeacuteis de filtro Whatman ndegl embebidos com a soluccedilatildeo de

coloraccedilatildeo Em seguida incubou-se durante 15 minutos a 37degC

A soluccedilatildeo de incubaccedilatildeo conteacutem inosina 37 mM MTT 24 mM XOD 0004 Uml uma

gota de azul de Meldola (SIGMA) (10 vv em aacutegua bidestilada) e uma soluccedilatildeo de tampatildeo

de incubaccedilatildeo pH = 75 constituiacuteda por KH2P04 005 M e NaOH 004 M

bull MDH

Na detecccedilatildeo da actividade enzimaacutetica de MDH foi utilizado o meacutetodo de sandwich

apoacutes a sua separaccedilatildeo electroforeacutetica em gel de amido Em seguida incubou-se durante 15

minutos a 37degC O meacutetodo de sandwich consiste na aplicaccedilatildeo de uma fatia de gel de amido

entre duas folhas de papel de filtro Whatman ndegl embebido com a soluccedilatildeo de coloraccedilatildeo

A soluccedilatildeo de coloraccedilatildeo utilizada na detecccedilatildeo da MDH conteacutem NAD 1 mM MTT

2 mM e piruvato de soacutedio (quantidades vestigiais) Esta soluccedilatildeo foi feita com um tampatildeo de

incubaccedilatildeo pH = 74 constituiacutedo por aacutecido maacutelico 0222 M Tris 050 M e MgCl2 002 M

bull PGP

A detecccedilatildeo da actividade enzimaacutetica de PGD foi feita pelo meacutetodo de sandwich apoacutes a

sua separaccedilatildeo electroforeacutetica em gel de amido

A soluccedilatildeo de coloraccedilatildeo conteacutem quantidades vestigiais de aacutecido 6-fosfoglucoacutenico

NADP MTT e uma gota de azul de Meldola (05 pv em aacutegua bidestilada) dissolvidos num

tampatildeo de pH = 74 constituiacutedo por Tris 01 M HisHCl 01 M Imidazol 0015 M e MgCl2

0005 M

36


bull GPI

A detecccedilatildeo da actividade enzimaacutetica de GPI foi feita pelo meacutetodo de sandwich apoacutes a


A soluccedilatildeo de coloraccedilatildeo conteacutem frutose-6-fosfato 55 mM NADP 22 mM MTT

4 mM desidrogenase da glucose-6-fosfato (G6PD) 14 Uml e uma gota de azul de Meldola

(05 pv em aacutegua bidestilada) dissolvidos num tampatildeo de pH = 74 constituiacutedo por Tris 01

M HisHCl 01 M Imidazol 0015 M e MgCl2 0005 M

bull MPI

Detectou-se a actividade enzimaacutetica de MPI pelo meacutetodo de sandwich apoacutes a sua

separaccedilatildeo electroforeacutetica em gel de amido

A soluccedilatildeo de coloraccedilatildeo conteacutem manose-6-fosfato 42 mM NADP 13 mM MTT

24 mM e uma gota de azul de Meldola (05 pv em aacutegua bidestilada) dissolvidos num


0005 M Por fim adicionaram-se as enzimas isomerase da glucose-6-fosfato (GPI) 3 Uml e

desidrogenase da glucose-6-fosfato (G6PD) 5 Uml

bull ALBeTF

A detecccedilatildeo de ALB e de TF foi efectuada atraveacutes do meacutetodo de coloraccedilatildeo geral de

proteiacutenas descrito para a HB utilizando-se Coomasie R-250 sem fixaccedilatildeo

bull GCcedil

A visualizaccedilatildeo de GC efectuou-se por detecccedilatildeo imunoenzimaacutetica apoacutes transferecircncia da

proteiacutena para uma membrana de nitrocelulose (045 pm SCHLEICHER amp SCHULL)

segundo a teacutecnica descrita por FERRAND (1995)

37


Apoacutes esse processo de transferecircncia as membranas de nitrocelulose foram lavadas 3

vezes (15 minutos) numa soluccedilatildeo de Tween 20 (MERCK) 0025 (vv) em soro fisioloacutegico

tamponado com fosfato (PBS Na2HP04 50 mM KH2P04 18mM NaCl 147 mM pH = 71) e

bloqueadas numa soluccedilatildeo de leite em poacute magro (5 pv em PBS) durante 18 h com agitaccedilatildeo

permanente e agrave temperatura ambiente

Depois da primeira lavagem aplicou-se o antisoro (anti-GC humana ATAB 81936)

diluiacutedo 1170 em PBS com 1 (pv) de albumina seacuterica bovina (SIGMA) durante 1 h agrave

temperatura ambiente

Repetiu-se novamente a lavagem segundo o processo jaacute referido seguindo-se a

aplicaccedilatildeo do segundo antisoro (anticorpos contra imunoglobulinas caprinas desenvolvidos em

coelho e conjugados com uma peroxidase ATAB 83806) diluiacutedo 1600 em PBS com 1

(pv) de albumina seacuterica bovina (SIGMA) durante 1 h agrave temperatura ambiente

Depois de duas lavagens (5 minutos) com Tween 20PBS procedeu-se agrave detecccedilatildeo da

GC com uma soluccedilatildeo de 9-amino-2-etilcarbazol 004 (pv) e de metanol 20 (vv) em PBS

As bandas correspondentes agrave actividade peroxidaacutesica aparecem rapidamente bloqueando-se a

reacccedilatildeo com aacutegua bidestilada

26 - MEacuteTODOS DE CAacuteLCULO

As frequecircncias geacutenicas foram calculadas por contagem directa de genes a partir da

distribuiccedilatildeo fenotiacutepica obtida

O caacutelculo dos valores de heterozigotia meacutedia (H) da proporccedilatildeo de loci polimoacuterficos

(P) do nuacutemero meacutedio de alelos por locus (ria) estatiacutesticas F e frequecircncias fenotiacutepicas

esperadas segundo o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg foi efectuado com a utilizaccedilatildeo do

programa BIOSYS versatildeo 17 (SWOFFORD amp SELANDER 1989)

O caacutelculo de distacircncias geneacuteticas e obtenccedilatildeo de dendrogramas foi efectuado com o

programa PHYLIP versatildeo 35 (FELSENTEIN 1993)

38

Resultados e Discussatildeo

3 - RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

31 - ANAacuteLISE DOS MEacuteTODOS DE SEPARACcedilAtildeO

De entre os 12 loci estudados neste trabalho detectaram-se 5 monomoacuterficos

(PEPB DIA GPI MDH e PGD) e 7 polimoacuterficos (HB CAII NP MPI ALB TF e GC)

Loci monomoacuterficos

bull PEPB

A utilizaccedilatildeo de teacutecnicas de electroforese em gel de amido permitiu a detecccedilatildeo de

um soacute fenoacutetipo (figura 311) correspondente a indiviacuteduos homozigoacuteticos para o alelo

PEPB2 descrito por DEL LAMA et ai (1992) No entanto na raccedila Minhota detectou-se

um indiviacuteduo heterozigoacutetico

O fenoacutetipo PEPB 2 apresenta um padratildeo com duas bandas uma de grande

intensidade e outra secundaacuteria mais anoacutedica de menor intensidade No indiviacuteduo

heterozigoacutetico 2-1 (natildeo representado) observou-se um padratildeo de trecircs bandas sendo a

terceira mais anoacutedica e menos intensa

A quase inexistecircncia de PEPB1 nas raccedilas estudadas estaacute de acordo com o referido

em DEL LAMA et ai (1992) que sugere a fixaccedilatildeo de PEPB2 na maior parte das

populaccedilotildees de bovinos de origem europeia (com excepccedilatildeo das raccedilas italianas Marchigiana

e Chianina)

39


+

Figura 311 Fenoacutetipos de PEPB observados por electroforese convencional em gel de amido

bull DIA

Os resultados obtidos para a enzima DIA revelaram ausecircncia de polimorfismo

electroforeacutetico (figura 312) Resultados semelhantes foram tambeacutem obtidos em vaacuterias

raccedilas autoacutectones espanholas (GONZALEZ et ai 1987 IGLESIAS 1989 ARRANZ et ai

1992)

MAKAVEEV (1979 in IGLESIAS 1989) detectou polimorfismo desta enzima em

eritroacutecitos de buacutefalos da Bulgaacuteria e nas raccedilas bovinas Frisia e Simmental descrevendo dois

alelos codominantes DIAA e DIAB

Figura 312 Padratildeo de DIA observado por electroforese convencional em gel de amido

40


Natildeo se detectou variaccedilatildeo electroforeacutetica para o locus GPI Estes resultados natildeo se

podem comparar com os obtidos noutras raccedilas por natildeo ter sido possiacutevel consultar outros

trabalhos onde se descrevesse variaccedilatildeo do locus GPI em gado bovino

A figura 313 apresenta o padratildeo obtido para esta enzima observando-se trecircs

bandas duas com grande intensidade e uma banda mais anoacutedica de menor intensidade

Figura 313 Padratildeo de GPI obtido em hemolisados por electroforese convencional em gel de amido

bull MDH

A enzima MDH revelou-se monomoacuterfiacuteca Este resultado eacute concordante com outros

estudos (ARRANZ et ai 1992)

Na figura 314 observa-se o padratildeo de bandas detectado por electroforese

convencional em gel de amido

Figura 314 Padratildeo de MDH observado por electroforese convencional em gel de amido

41


bull PGD

A enzima PGD revelou-se monomoacuterfica para as raccedilas Barrosatilde e Minhota tambeacutem

neste caso natildeo se encontrou qualquer referecircncia bibliograacutefica relativa a um possiacutevel

polimorfismo deste locus em gado bovino

Na figura 315 observa-se o padratildeo obtido para esta enzima Em amostras

armazenadas por um longo periacuteodo de tempo detectaram-se duas bandas sendo a mais

anoacutedica a que revela menor intensidade as amostras mais recentes apresentam um padratildeo

electroforeacutetico com uma soacute banda

Figura 315 Padratildeo de PGD observado por electroforese convencional em gel de amido

Loci polimoacuterficos

bull HB

A electroforese convencional natildeo permite discriminar os electromorfos de HB No

entanto a utilizaccedilatildeo de sistemas de focagem isoeleacutectrica conduz agrave detecccedilatildeo de

polimorfismo nesta proteiacutena observando-se dois fenoacutetipos HB A e HB AB

Na figura 316 observa-se o padratildeo electroforeacutetico desta moleacutecula resultante da

expressatildeo de dois alelos codominantes HBA e HBB Resultados idecircnticos estatildeo

descritos em raccedilas bovinas da Peniacutensulas Ibeacuterica (VICENTE 1978 KiDD et ai 1980

IGLESIAS 1989)

42


+ -HBB

HBA

AB AB A A

Figura 316 Separaccedilatildeo de hemoglobina nativa por focagem isoeleacutectrica

bull poundAH

A utilizaccedilatildeo de electroforese em gel de amido e focagem isoeleacutectrica permitiu

identificar trecircs fenoacutetipos CAII F CAII FS e CAII S atribuiacutedos agrave expressatildeo de dois alelos

codominantes CAF e CAS (figuras 317 e 318) Poreacutem a separaccedilatildeo por electroforese em

gel de amido implica alguma morosidade (tempos de corrida muito longos) e em amostras

coaguladas o erro de leitura pode ser superior a 20 Estas dificuldades satildeo minimizadas

quando se recorre a focagem isoeleacutectrica

Assim a separaccedilatildeo da enzima CAII por focagem isoeleacutectrica oferece vaacuterias vantagens

nomeadamente

bull rapidez e simplicidade de execuccedilatildeo

bull utilizaccedilatildeo de pequenas quantidades de material bioloacutegico

bull maior nuacutemero de amostras fenotipadas por corrida

bull possibilidade de utilizaccedilatildeo de amostras coaguladas

43


F F F S FS FS F S FS

Figura 317 Fenoacutetipos de CAII observados sob luz ultravioleta apoacutes separaccedilatildeo por electroforese convencional em gel de amido e coloraccedilatildeo com diacetato de fluoresceina

CAIIF

| CAIIS

Figura 318 Fenoacutetipos de CAII observados por focagem isoeleacutectrica apoacutes coloraccedilatildeo geral de proteiacutenas

bull NP

A expressatildeo fenotiacutepica de NP resulta das combinaccedilotildees possiacuteveis entre um alelo

dominante NPH e um recessivo NPL (ANSAY 1973) Este facto implica que apenas em

presenccedila do feno tipo NP L eacute possiacutevel fazer corresponder um genoacutetipo (jaacute que o fenoacutetipo NP H

pode corresponder aos genoacutetipos HH e HL e o fenoacutetipo NP L corresponde ao genoacutetipo LL)

Na figura 319 apresenta-se o padratildeo obtido para a proteiacutena apoacutes separaccedilatildeo

electroforeacutetica em gel de amido

44

+

w

FS FS ]


H L L H L L

Figura 319 Fenoacutetipos de NP detectados por electroforese convencional em gel de amido

bull MPI

Na raccedila Minhota detectaram-se quatro fenoacutetipos MPI AB MPI B MPI BC e MPI C

anteriormente descritos por ANSAY (1973) em bovinos na raccedila Barrosatilde apenas se observam

os trecircs uacuteltimos fenoacutetipos De acordo com o mesmo autor os fenoacutetipos encontrados nesta raccedila

resultam da combinaccedilatildeo de dois alelos codominantes MPIB e MPPC enquanto que MPIA

aparece na raccedila Minhota com uma frequecircncia reduzida

Como se pode observar pela anaacutelise da figura 3110 MPIA aparece como o alelo

mais anoacutedico MPIC como o mais catoacutedico e o alelo mais frequente MPIB situa-se numa

posiccedilatildeo intermeacutedia em relaccedilatildeo aos anteriores Contudo a intensidade das bandas eacute muito

fraca tornando-se quase imperceptiacutevel em alguns casos Esta grande dificuldade em obter um

contraste de bandas adequado mesmo apoacutes longos periacuteodos de incubaccedilatildeo a 37degC poderaacute

eventualmente levar a uma incorrecta interpretaccedilatildeo dos fenoacutetipos Assim a utilizaccedilatildeo de

sistemas de focagem isoeleacutectrica na determinaccedilatildeo destes fenoacutetipos seria aconselhaacutevel a fim

de verificar os resultados obtidos por electroforese convencional

45


Figura 3110 Fenoacutetipos de MPI observados por electroforese convencional em gel de amido

bull ALB

A separaccedilatildeo por focagem isoeleacutectrica permitiu detectar polimorfismo em ALB Cada

indiviacuteduo homozigoacutetico aparece com trecircs bandas duas de maior intensidade e uma mais

aciacutedica com menor intensidade os indiviacuteduos heterozigoacuteticos podem apresentar ateacute seis

bandas

Esta heterogeneidade nos padrotildees de ALB tem sido interpretada como o resultado da

capacidade desta proteiacutena se ligar a vaacuterias substacircncias diferentes (FERRAND 1995) Com a

inclusatildeo de ureia (8M) na matriz de separaccedilatildeo reagente que provoca a desnaturaccedilatildeo da

proteiacutena levando a uma alteraccedilatildeo do seu pi para uma zona mais baacutesica do gradiente

conseguem-se obter padrotildees de bandas mais simples e mais definidos (KAWAGUCHI 1973

FERRAND 1995)

Na figura 3111 apresentam-se os padrotildees observados que foram interpretados como

sendo determinados por trecircs alelos codominantes ALBA ALBB e ALBV

GAHNE et ai (1977) e IGLESIAS (1989) detectaram por electroforese em gel de

poliacrilamida e de amido respectivamente dois variantes em gado bovino ALBA e

ALBB A utilizaccedilatildeo de focagem isoeleacutectrica veio confirmar a existecircncia destes dois alelos e

acrescentar um terceiro designado por ALBV com uma mobilidade mais aciacutedico do que

ALBA

46


A B A B A B B B A B A G

Figura 3111 Fenoacutetipos de ALB determinados em amostras de plasma por focagem isoeleacutectrica na presenccedila de ureia 8M

ARRANZ et ai (1992) revelaram a existecircncia de um outro variante (ALBD) com

mobilidade electroforeacutetica intermeacutedia entre ALBA e ALBB ainda natildeo descrito em

nenhuma raccedila autoacutectone espanhola Este alelo poderaacute corresponder ao alelo ALBV

encontrado neste trabalho apesar de apresentar um pi mais aacutecidico do que ALBA (ARRANZ

comunicaccedilatildeo pessoal)

Desta forma a teacutecnica de separaccedilatildeo por focagem isoeleacutectrica provou ser eficaz na

separaccedilatildeo dos variantes de ALB tal como jaacute foi demonstrado no gato (BELL et ai 1994) na

ovelha (ERHARDT amp SIMIANER 1993) e no coelho (FERRAND amp ROCHA 1992)

bull TF

A transferrina eacute um dos marcadores mais importantes no estudo e caracterizaccedilatildeo

geneacutetica de raccedilas bovinas devido ao seu elevado polimorfismo No entanto a sua fenotipagem

natildeo eacute simples existindo frequentemente problemas de resoluccedilatildeo e de separaccedilatildeo das bandas

(IGLESIAS 1989)

A fim de averiguar qual a melhor forma de separar os diferentes produtos geacutenicos

descritos no locus TF testaram-se vaacuterios sistemas electroforeacuteticos em geacuteis de agarose numa

vasta gama de sistemas tampatildeo Esta teacutecnica natildeo ofereceu resultados satisfatoacuterios pelo que se

passou agrave separaccedilatildeo da TF por focagem isoeleacutectrica recorrendo a matrizes de poliacrilamida

47


com diferentes concentraccedilotildees de ureia (6M e 8M) tambeacutem neste caso natildeo se conseguiram

resultados positivos

Este tipo de dificuldades encontradas na fenotipagem da TF por focagem isoeleacutectrica

tinham jaacute sido descritos noutras espeacutecies nomeadamente na cabra (ERHARDT 1986) e no

coelho (FERRAND 1995) No entanto TSUJI et ai (1989) demostraram ser possiacutevel fenotipar

esta proteiacutena em bovinos por focagem isoeleacutectrica sem grandes problemas e sem qualquer

aditivo na matriz de poliacrilamida

Desta forma a utilizaccedilatildeo de uma teacutecnica de focagem isoeleacutectrica com um gradiente de

pH 35-65 reforccedilado em 40-65 permitiu separar os produtos geacutenicos do locus TF Contudo

os padrotildees obtidos nem sempre eram definidos tornando-se dificilmente interpretaacuteveis

Na tentativa de melhorar os padrotildees de resoluccedilatildeo e de verificar se a variaccedilatildeo detectada

natildeo resultava de diferenccedilas no estado feacuterrico da moleacutecula de TF ou ainda da existecircncia de

aacutecidos siaacutelicos ligados agrave moleacutecula procedeu-se agrave sua separaccedilatildeo apoacutes vaacuterios tratamentos das

amostras

A remoccedilatildeo dos aacutecidos siaacutelicos atraveacutes do tratamento das amostras com neuraminidase

natildeo permitiu a obtenccedilatildeo de bandas definidas este tratamento natildeo altera significativamente o

padratildeo das bandas de TF de bovinos como jaacute tinha sido descrito por PENHALLOU et ai

(1991)

A obtenccedilatildeo de TF no estado apofeacuterrico foi conseguida submetendo as amostras a um

tratamento com EDTA-dissoacutedico Neste caso observa-se que apoTF apresenta uma

mobilidade menor e um padratildeo de bandas mais simples mas ainda sem uma definiccedilatildeo

adequada

A forma Fe2TF foi obtida mediante vaacuterios tratamentos com dadores de Fe (ver capiacutetulo

Material e Meacutetodos) Os resultados soacute se mostraram satisfatoacuterios atraveacutes da saturaccedilatildeo da

moleacutecula de TF com uma soluccedilatildeo de sulfato de amoacutenio feacuterrico provavelmente por causar uma

maior estabilidade da moleacutecula ao longo da sua separaccedilatildeo por focagem isoeleacutectrica com

elevadas voltagens pois segundo WELCHS (1990) a forma difeacuterrica da transferrina eacute mais

resistente agrave desnaturaccedilatildeo e ao calor do que a forma apoTF

48


Estatildeo descritos pelo menos oito alelos no locus TF TFAl TFA2 TFB TFD1

TFD2 TFE TFF e TFG os mais comuns no gado europeu (Bos taurus) satildeo TFA

TFD1 TFD2 e TFE (JAMIESON 1965) No gado asiaacutetico e africano (Bos indicus) ocorrem

aleacutem das formas anteriores os alelos TFB e TFF

Na figura 3112 apresenta-se o proteinograma obtido com a utilizaccedilatildeo de amostras

saturadas com Fe Esta teacutecnica permitiu a separaccedilatildeo de TFD em TFD1 e TFD2 e a

detecccedilatildeo de todos os outros fenoacutetipos descritos em bovinos europeus Assim observaram-se

quatro alelos codominantes TFA TFD1 TFD2 e TFE

A expressatildeo fenotiacutepica dos alelos em homozigotia caracteriza-se pela presenccedila de dois

dupletos de bandas aparecendo a banda mais aciacutedica de cada dupleto com intensidade mais

fraca Os indiviacuteduos herozigoacuteticos podem apresentar ateacute oito bandas

Figura 3112 Fenoacutetipos de TF determinados por focagem isoeleacutectrica apartir de amostras saturadas com uma soluccedilatildeo de sulfato de amoacutenio feacuterrico

IGLESIAS (1989) detectou TFA e TFD nas cinco raccedilas de bovinos da Galiza o

variante TFE na raccedila Cachena espanhola e um outro variante raro TFR com mobilidade

mais lenta na raccedila Rubia Galega

bull QQ

A GC eacute uma proteiacutena plasmaacutetica que demonstra um elevado grau de heterogeneidade

geneacutetica em mamiacuteferos (FERRAND 1995)

A separaccedilatildeo de GC em focagem isoeleacutectrica seguida da utilizaccedilatildeo de immunoblotting

melhorou de forma consideraacutevel a capacidade de investigar a variaccedilatildeo desta proteiacutena em

49


diferentes espeacutecies (JUNEJA et ai 1987 PENEDO amp JUNEJA 1989 STRATIL et ai 1990

KALAacuteB et ai 1990 STERN et ai 1992 VANKAN amp BELL 1992 FERRAND 1995)

Nas figuras 3113 e 3114 apresentam-se alguns dos fenoacutetipos obtidos na separaccedilatildeo

da GC por focagem isoeleacutectrica Verifica-se que em amostras tratadas com neuraminidase o

padratildeo de bandas se apresenta mais simplificado surgindo no entanto duas bandas (uma

mais baacutesica e uma mais aciacutedica) de natureza desconhecida Os padrotildees observados foram

interpretados como sendo determinados por dois alelos GCF e GCS

mdashGCF

S F S FS S FS F F S FS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Figura 3113 Fenoacutetipos de GC determinados por focagem isoeleacutectrica amostras 1 8 9 e 10 tratadas com neuraminidase amostras 2 a 7 diluiacutedas em aacutegua bidestilada

S1 $ l S- -

FS S S S F S FS S FS F S

Figura 3114 Fenoacutetipos de GC determinados em amostras de plasma tratados com neuraminidase apoacutes focagem isoeleacutectrica

Nota-se a existecircncia de dois alelos codominantes GCF e GCS sendo o segundo

mais aciacutedico do que o primeiro

50


32 - ANAacuteLISE FAMILIAR

A realizaccedilatildeo da anaacutelise familiar relativo ao conjunto de loci polimoacuterficos estudados

observa-se no estudo de 27 pares matildeefilho Esta situaccedilatildeo resulta da grande dificuldade

existente na obtenccedilatildeo de informaccedilatildeo sobre os machos

Os resultados apresentam-se nas tabelas 321 a 326 natildeo foi possiacutevel testar o

equiliacutebrio de Hardy-Weinberg devido ao reduzido tamanho da amostra bem como ao facto de

vaacuterios alelos ocorrerem em baixa frequecircncia

Refira-se que natildeo foi detectado qualquer caso de exclusatildeo matildeefilho

Tabela 321 Sistema CAII Distribuiccedilatildeo fenotiacutepica em 27 pares matildeefilho Os valores esperados segundo o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg estatildeo indicados entre parecircntesis

Total

4 (32) 17

(122) 6

(116) 27

Tabela 322 Sistema NP Distribuiccedilatildeo fenotiacutepica em 27 pares matildeefilho Os valores esperados segundo o equiliacutebrio de Hardy--Weinberg estatildeo indicados entre parecircntesis

Total

14

(114)

13

(156)

27

^ ^ ^ Filho

Matildee - ^ F

Fenoacutetipos

F f~ (11)

FS 2

(21)

S

Total 3

Fenoacutetipos

FS S

3

(21)

10 5

(61) (40)

1 5

(40) (76)

14 10

- v ^ ^ Filho Fenoacutetipos

Matildee - ^ H L

Fenoacutetipos

H 10 4

(77) (37)

L 5 8

(37) (119)

Total 15 12

51


Tabela 323 Sistema MPI Distribuiccedilatildeo fenotiacutepica em 26 pares matildeefilho Os valores esperados segundo o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg estatildeo indicados entre parecircntesis

^ Filho Fenoacutetipos Total

Matildee ^ ~ ^ A AB AC B BC c Fenoacutetipos

A 0 0 0 - - - 0

(00) (00) (00) (00)

AB 0 0 0 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

AC 0 0 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

B - 0 - 24 1 - 25

(00) (242) (06) (248)

BC - 0 0 1 0 0 1

(00) (00) (06) (06) (00) (12)

C - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 0 0 0 25 1 0 26

Tabela 324 Sistema ALB Distribuiccedilatildeo fenotiacutepica em 27 pares matildeefilho Os valores esperados segundo o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg estatildeo indicados entre parecircntesis

^ ^ Filho Fenoacutetipos Total

M atilde e ^ ^ - s ^ ^ A AB AV B BV V

Fenoacutetipos

A 24 2 0 - - - 26

(251) (04) (02) (257)

AB 0 0 0 0 0 -

0

(04) (04) (00) (00) (00) (08)

AG 1 0 0 - 0 0 1

(02) (00) (02) (00) (00) (04)

B - 0 - 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00)

BG - 0 0 0 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

G - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 25 2 0 0 0 0 27

52


Tabela 325 Sistema TF Distribuiccedilatildeo fenotiacutepica em 27 pares matildeefilho Os valores esperados segundo o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg estatildeo indicados entre parecircntesis

Filho Fenoacutetipos Total

Matildee ^ A ADI AD2 AE Dl D1D2 DIE D2 D2E E

Fenoacutetipos

A 6

(51)

1

(14)

4

(21)

1

(03)

12

(89)

ADI 1 2 0 0 0 0 0 - - - 3

(14) (24) (06) (01) (04) (06) (01) (56)

AD2 2 0 5 0 - 0 - 2 0 - 9

(21) (06) (36) (01) (06) (08) (01) (79)

AE 0 0 0 0 - - 0 - 0 0 0

(03) (01) (01) (06) (01) (01) (00) (13) Dl 0

(04) 1

(01)

1

(02)

0

(00)

- 2

(07)

D1D2 - 0 1 - 0 0 0 0 0 - 1

(06) (06) (02) (10) (00) (02) (00) (26) DIE - 0 - 0 0 0 0 - 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (02) (00) (00) (04)

D2 0

(08) 0

(02)

0

(03)

0

(01)

- 0

(14) D2E - - 0 0 - 0 0 0 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (01) (02) (00) (05) E 0

(00) 0

(00)

0

(00)

0

(00)

0

(00)

Total 9 3 10 1 1 1 0 2 0 0 27

Tabela 326 Sistema GC Distribuiccedilatildeo fenotiacutepica em 27 pares matildeefilho Os valores esperados segundo o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg estatildeo indicados entre parecircntesis

- - ^ F i l h o Fenoacutetipos Total

Matildee ^ ^ 1 2-1 2

Fenoacutetipos

1 17 2 19

(156) (31) (187)

2-1 5 2 0 7

(31) (38) (06) (75)

2 _ 1 0 1

(06) (01) (07)

Total 22 5 0 27

53


33 - ANAacuteLISE POPULACIONAL LOCUS A LOCUS

Neste capiacutetulo faz-se a anaacutelise populacional dos loci polimoacuterficos e ainda dos loci

PEPB e DIA para os quais natildeo se detectou variaccedilatildeo na raccedila Barrosatilde A sua inclusatildeo justifica-

-se pelo facto de serem polimoacuterficos noutras raccedilas bovinas ou em espeacutecies aparentadas

bull PEPB

O locus PEPB revelou-se monomoacuterfico nas trecircs populaccedilotildees de bovinos de raccedila

Barrosatilde e Minhota tendo sido detectado um uacutenico produto geacutenico PEPB2 (observado um

indiviacuteduo heterozigoacutetico da raccedila Minhota) No entanto este locus eacute referido como polimoacuterfico

em raccedilas bovinas criadas no Brasil onde se detectaram dois alelos codominantes PEPB1 e

PEPB2 (DEL LAMA et ai 1992)

O alelo PEPB2 estaacute fixado nas raccedilas de origem europeia incluindo as estudadas neste

trabalho excepto nas raccedilas italianas Marchigiana e Chianina nas quais PEPB1 apresenta

frequecircncias geacutenicas entre 011 e 014 (tabela 331)

Tabela 331 Frequecircncias geacutenicas de PEPB em vaacuterias raccedilas bovinas

N

Frequecircncias geacutenicas N PEPB1 PEPB2 Referecircncia

Barrosatilde inscrita 141 - 100 Este trabalho

Barrosatilde natildeo inscrita 153 - 100 t i

Minhota 62 001 plusmn0003 099 plusmn 0003 ec

Blonde dAquitaine 13 - 100 DEL LAMAetal 1992)

Charolesa 118 - 100 laquo

Chianina 83 014 plusmn003 086 plusmn 003 t t

Hereford 79 - 100 et

Frisia 125 - 100 t t

Jersey 139 - 100

Limousine 24 - 100

Marchigiana 85 011 plusmn002 089 plusmn 002 te

Simmental 75 - 100 t t

54


bull DIA

Pela anaacutelise da tabela 332 verifica-se natildeo existir variaccedilatildeo geneacutetica neste locus nas

raccedilas bovinas apresentadas estando fixado o alelo DIAS os resultados obtidos estatildeo de

acordo com os jaacute publicados por outros autores (GONZALEZ et ai 1987 IGLESIAS 1989) Por

outro lado nas populaccedilotildees de buacutefalos ocorre um segundo alelo DIAF com frequecircncias

entre 019 e 021

Tabela 332 Frequecircncias geacutenicas de DIA em vaacuterias populaccedilotildees de raccedilas bovinas e buacutefalos

Frequecircncias geacutenicas

N DIAF DIAS Referecircncia

Portugal

Barrosatilde inscrita 141

Barrosatilde natildeo inscrita 153

Minhota 62

Espanha

Cachena 71

Caldelana 60

Frieiresa 33

Limiana 39

Rubia Gallega 168

Vianesa 40

Sayaguesa (Zamora) 147

Morucha (Salamanca) 101

Alistana Sanabresa 157

Blanca Cacerena 62

Caacuterdena Andaluza 25

Asturiana de los Vallegraves 127

Asturiana de la Montana 106

Bulgaacuteria

Buacutefalo 122

Murrah (Buacutefalo) 51

raquo IGLESIAS (1989)

- 100 Este trabalho

- 100

- 100 a

- 100 IGLESIAS (1989)

- 100

- 100

- 100

- 100

- 100

- 100 GONZALEZ et al (19

- 100

- 100 st

- 100 st

- 100

- 100

- 100

019 + 00 081 plusmn00 MAKAVEEV(1984

021 plusmn00 079 plusmn 00 laquo

55


bull HB

Os resultados obtidos no estudo de HB permitiram distinguir dois fenoacutetipos definidos

por dois alelos HBA e HBB (tabela 333)

Tabela 333 Distribuiccedilatildeo fenotiacutepica de HB em populaccedilotildees das raccedilas Barrosatilde e Minhota Os valores esperados de acordo com o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg estatildeo indicados entre parecircntesis

Fenoacutetipos N HBA HBAB HBB

Barrosatilde inscrita 141 141

Barrosatilde natildeo inscrita 153 153

Minhota 62 56 6 0

(561) (58) (01)

As frequecircncias geacutenicas das raccedilas estudadas bem como outras jaacute publicadas referentes a

vaacuterias raccedilas bovinas europeias e a duas espeacutecies de buacutefalos encontram-se discriminadas na

tabela 334

A elevada frequecircncia do alelo HBA nas raccedilas estudadas (fixado na raccedila Barrosatilde)

situam-nas juntamente com outras raccedilas bovinas do centro e sul da Europa onde este alelo

ocorre com frequecircncias entre 080-098 (VICENTE 1978) Nas restantes raccedilas europeias

HBA ocorre com uma ampla margem de variaccedilatildeo (038 - 100) apresentando-se quase

sempre como o alelo mais frequente

No caso dos buacutefalos observa-se uma inversatildeo nos valores das frequecircncias geacutenicas

sendo o alelo HBB o mais frequente

A presenccedila de HBB nos bovinos europeus apesar de em baixa frequecircncia pode ser

indicativo de uma origem a partir de raccedilas asiaacuteticas ou africanas jaacute que eacute nestes continentes

que este alelo ocorre com frequecircncia mais elevadas as frequecircncias geacutenicas mais elevadas estatildeo

descritas no gado zebu da Aacutefrica (BRAEND 1971 VICENTE 1978)

56


Tabela 334 Frequecircncias geacutenicas de HB em vaacuterias populaccedilotildees de raccedilas bovinas e buacutefalos

N


N HBA HBB Referecircncia

Portugal

Barrosatilde inscrita 141 100 - Este trabalho

Barrosatilde natildeo inscrita 153 100 -

Minhota 62 095 plusmn 002 005 plusmn 002

Mertolenga 147 093 plusmn 002 007 plusmn 002 KTOD et ai (1980)

Alentejana 155 096 plusmn 001 004 plusmn001 IacuteIacute

Mirandesa 107 099+001 001 plusmn001 NOBRE (S data)

Espanha

Cachena 71 091 + 002 009 plusmn 002 IGLESIAS (1989)

Caldelana 60 097 plusmn 002 003 plusmn 002

Frieiresa 33 095 plusmn 003 005 plusmn 003

Limiana 39 090 plusmn 003 010 plusmn003

Rubia Gallega 168 093 plusmn 001 007 plusmn001 ce

Vianesa 40 098 plusmn 002 002 plusmn002

Sayaguesa (Zamora) 147 083 plusmn002 017 plusmn002 GONZALEZ et al ( 1987)

Morucha (Salamanca) 101 084 plusmn 003 016 plusmn003 ce

Alistana Sanabresa 157 099 plusmn 001 001 plusmn001

Blanca Cacerefia 62 071 plusmn 004 029 plusmn 004 laquo

Caacuterdena Andaluza 25 096 plusmn 003 004 plusmn 003 IacuteIacute

Asturiana de los Vallegraves 127 091 plusmn002 009 plusmn002

Pirenaica 383 084 plusmn 001 016 plusmn001 VICENTE (1978)

Tudanca 42 065 plusmn 005 035 plusmn 005 laquo

Morena del N O 25 100 -

Frisona 97 100 - laquo

Asturiana de la Montaria 106 079+003 021 plusmn003

De Lidia 124 079 plusmn 003 021 plusmn003 KlDDeacutetal (1980)

Retinta 164 081 plusmn002 019 plusmn002

Itaacutelia

Chianina 264 096 plusmn 001 004 plusmn 001 CARENZiera (1970)

Marchigiana 112 099 plusmn001 001 plusmn001

Bulgaacuteria

Sofia Brown 173 089 plusmn 002 011 plusmn002 MAKAVEEV (1970)

Buacutefalo 77 009 plusmn 002 091 plusmn002 MAKAVEEV(1984)

Murrah (Buacutefalo) 51 015 plusmn004 085 plusmn 004 ce

G Bretanha

Jersey 467 038 plusmn 002 062 plusmn 002 LARSENefa (1974)

in IGLESIAS (1989)

57


A frequecircncia obtida para HBB na raccedila Minhota (005) aproxima-a das raccedilas do sul da

Europa onde este alelo ocorre com uma frequecircncia de aproximadamente 01 Por outro lado a

completa ausecircncia de HBB na raccedila Barrosatilde eacute um resultado interessante mas para o qual natildeo

eacute possiacutevel fornecer actualmente uma explicaccedilatildeo satisfatoacuteria

CAII

A distribuiccedilatildeo dos fenoacutetipos observados para o locus CAII apresenta-se na tabela

335

Tabela 335 Distribuiccedilatildeo fenotiacutepica de CAU em populaccedilotildees das raccedilas Barrosatilde e Minhota Entre parecircntesis indicam-se os valores esperados de acordo com o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg

Fenoacutetipos N CA F CAFS CAS

Barrosatilde inscrita 141 17 58 66

(149) (622) (639)

Barrosatilde natildeo inscrita 153 20 71 62

(200) (710) (620)

Minhota 62 3 13 46

(14) (162) (444)

x2

0651 1 0420

0000 1 0995

Os valores do teste de 2 nas populaccedilotildees de raccedila Barrosatilde demonstram natildeo haver

desvios significativos ao equiliacutebrio de Hardy-Weinberg apesar de se observar um ligeiro

excesso de homozigoacuteticos F na populaccedilatildeo de raccedila Barrosatilde (inscrita) Para a raccedila Minhota natildeo

foi possiacutevel testar o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg

Na tabela 336 apresentam-se as frequecircncias geacutenicas de CAII nas populaccedilotildees

estudadas bem como as publicadas por outros autores

O locus CAII apresenta-se polimoacuterfico na maior parte das populaccedilotildees bovinas

europeias sendo o alelo CAIIS o que ocorre com frequecircncia mais elevada

58


Tabela 336 Frequecircncias geacutemeas de CAU em vaacuterias populaccedilotildees de raccedilas bovinas e de buacutefalos

N

Frequecircncias geacutenicas N CAS CAF Referecircncia

Portugal

Barrosatilde inscrita 141 068 plusmn 003 032 plusmn 003 Este trabalho

Barrosatilde natildeo inscrita 153 064+003 036 plusmn 003

Minhota 62 085 plusmn 003 015+003 Iacute Iacute

Mertolenga 147 085 plusmn 002 015+002 Kn)Deiacutea(1980)

Alentejana 155 091 plusmn 002 009 plusmn 002

Mirandesa 107 099 + 001 001+001 NOBRE (S data)

Espanha


Caldelana 60 096 plusmn 002 004 plusmn 002 ce

Frieiresa 33 094 + 003 006 plusmn 003

Limiana 39 083 + 004 017 plusmn 004

Rubia Gallega 168 089 plusmn 002 011+002

Vianesa 40 086 + 004 014 plusmn 004

Sayaguesa 147 072 plusmn 003 028+003 GONZALEZ eacutetal (1987)

Morucha 101 072 plusmn 003 028 plusmn 003 a

Alistana Sanabresa 157 092 plusmn 002 008+002 iacute iacute

Blanca Cacerena 62 067 plusmn 004 033 plusmn 004 IacuteIacute

Caacuterdena Andaluza 25 100

Asturiana de los Vallegraves 127 087 plusmn 002 013+002 laquo

Asturiana de la Montaria 106 077 plusmn003 023 plusmn 003 IacuteIacute

Tudanca 42 076 plusmn 005 024 plusmn 005 VICENTE (1978)

Morena del NO 25 092 plusmn 004 008 plusmn 004

De Lidia 124 061+003 039 plusmn 003 KjDDetal (1980)

Retinta 164 065 + 003 035+003 iacuteiacute

Bulgaacuteria

Buacutefalo 263 007 + 001 093+001 MAKAVEEV(1984)

Murran (Buacutefalo) 51 020 plusmn 004 080 plusmn 004 laquo

Alemanha

Frisia 550 083 plusmn 001 017 + 001 THTNNES eacutetal (1976)

Suiacuteccedila

Simmental 1039 079 + 001 021+001 KAgraveSTLIeacutetal (1980)

Castanha Suiacuteccedila 546 087 plusmn 001 013+001

Friburg 223 084 + 002 016+002

in IGLESIAS (1989)

59


As frequecircncias aleacutelicas de CAIPS e CAIPF nas raccedilas Cachena espanhola e Barrosatilde

portuguesa satildeo idecircnticas o que poderaacute eventualmente indicar estar-se em presenccedila de uma soacute

raccedila com designaccedilotildees diferentes nos dois paiacuteses Esta hipoacutetese eacute reforccedilada pelo facto de natildeo

haver diferenccedilas significativas entre dados morfomeacutetricos obtidos nas duas raccedilas (LEAL 1995)

Nos buacutefalos observa-se mais uma vez uma inversatildeo nas frequecircncias dos dois alelos do

locus CAII em relaccedilatildeo aos bovinos sendo CAF o mais frequente com valores situados entre

080 e 093

bull NP

Pela anaacutelise das tabelas 337 e 338 verifiacuteca-se a presenccedila dos dois alelos descritos

neste locus nas vaacuterias raccedilas bovinas sendo NPL o mais frequente nas raccedilas europeias (052 e

099) Observa-se uma grande similaridade entre os valores das frequecircncias geacutenicas o que natildeo

permite diferenciar as raccedilas estudadas neste trabalho das restantes

Tabela 337 Distribuiccedilatildeo fenotiacutepica de NP em populaccedilotildees das raccedilas Barrosatilde e Minhota

N

Fenoacutetipos

N NP H NPL

Barrosatilde inscrita 141 69 72

Barrosatilde natildeo inscrita 153 55 98

Minhota 62 19 43

60


Tabela 338 Frequecircncias geacutenicas para NP em vaacuterias populaccedilotildees e raccedilas bovinas

N


N NPH NPL Referecircncia

Portugal


Barrosatilde natildeo inscrita 153 020 plusmn 002 080 plusmn 002 cc

Minhota 62 017 + 004 083 + 004

Espanha

Cachena 71 020 plusmn 003 080 plusmn 003 IGLESIAS (1989)

Caldelana 60 013+003 087 plusmn 003 t t

Frieiresa 33 011+004 089 plusmn 004

Limiana 39 008 plusmn 003 092 plusmn 003

Rubia Gallega 168 015+002 085 plusmn 002

Vianesa 40 013 + 004 087 plusmn 004 t i

Sayaguesa 147 014 + 002 086 plusmn 002 GONZALEZ et ai ( 1987)

Morucha 101 020 plusmn 003 080 plusmn 003

Alistana Sanabresa 157 001+001 099 + 001

Blanca Cacerena 62 048 plusmn 005 052 plusmn 005 laquo


Asturiana de los Vallegraves 127 028 plusmn 003 072 plusmn 003

Asturiana de la Montana 106 026 plusmn 003 074 plusmn 003

Beacutelgica

Charolesa 130 026 plusmn 003 074 + 003 ANSAY amp HANSET (1972)

Frisia 91 006 plusmn 002 094 plusmn 002 t t

in IGLESIAS (1989)

MPI

A distribuiccedilatildeo dos fenoacutetipos observados para o locus MPI apresenta-se na tabela 339

Das trecircs populaccedilotildees estudadas apenas a raccedila Minhota apresenta valores observados

proacuteximos dos valores esperados segundo o formalismo de Hardy-Weinberg Por outro lado

apesar de natildeo ter sido possiacutevel testar o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg nas restantes populaccedilotildees

a aparente diferenccedila entre valores observados e esperados poderaacute dever-se a um excesso de

indiviacuteduos homozigoacuteticos para MPIC Este resultado poderaacute estar relacionado com o

processo de amostragem ou com outras causas como o acasalamento entre indiviacuteduos

61


aparentados a existecircncia de sub-populaccedilotildees de tamanho pequeno ou ainda a um reduzido

nuacutemero de machos reprodutores

Tabela 339 Distribuiccedilatildeo fenotiacutepica de MPI em populaccedilotildees das raccedilas Barrosatilde e Minhota Entre parecircntesis indicam-se os valores esperados de acordo com o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg

Fenoacutetipos N MPIA MPIAB MPIAC MPIB MPIBC MPIC

Barrosatilde inscrita 138 - - - 131 6 1

(1301) (78) (01)

Barrosatilde natildeo inscrita 1 5 2 - - - 147 4 1

(1460) (59) (01)

Minhota 61 0 3 0 56 2 0

(00) (29) (01) (561) (19) (00)

A anaacutelise da tabela 3310 permite verificar que MPIB e MPIC ocorrem nas duas

raccedilas de bovinos estudadas sendo MPIB o alelo mais comum nas trecircs populaccedilotildees A

ocorrecircncia de MPI A na raccedila Minhota contraria o descrito por ANSAY (1973) quando afirma

a exclusividade do fenoacutetipo AB na raccedila Charolesa

Tabela 3310 Frequecircncias geacutenicas de MPI nas populaccedilotildees estudadas

N


N MPPA MPPB MPIC

Barrosatilde inscrita 138 - 097 + 001 003+001

Barrosatilde natildeo inscrita 152 - 098 + 001 002+001

Minhota 61 002 plusmn 001 096 plusmn002 002 plusmn 001

A informaccedilatildeo disponiacutevel sobre este marcador em anteriores trabalhos de anaacutelise

geneacutetica em bovinos eacute quase inexistente Tal poderaacute dever-se agraves dificuldades de visualizaccedilatildeo

encontradas na sua fenotipagem por electroforese convencional A detecccedilatildeo de MPI estaacute

descrita em tecidos musculares e em leucoacutecitos neste trabalho utilizaram-se eritroacutecitos para o

estudo de variaccedilatildeo geneacutetica desta proteiacutena mas eacute provaacutevel que a sua expressatildeo ocorra apenas

na fracccedilatildeo leucocitaacuteria (natildeo separada) o que explicaria precisamente a sua fraca actividade

62


ALB

A distribuiccedilatildeo dos fenoacutetipos observados para o locus ALB apresenta-se na tabela

3311

Apesar de natildeo ter sido possiacutevel testar o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg todas as

amostras estudadas mostram desvios muito reduzidos entre valores observados e esperados

Tabela 3311 Distribuiccedilatildeo fenotiacutepica de ALB em populaccedilotildees das raccedilas Barrosatilde e Minhota Entre parecircntesis indicam-se os valores esperados de acordo com o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg

N

Fenoacutetipos N ALBA ALBAB ALBB ALBBV ALBAV ALB V

Barrosatilde inscrita 142 137 3 - - 2 -(1370) (30) (00) (00) (20) (00)

Barrosatilde natildeo inscrita 153 145 5 1 - 2 -(1440) (68) (01) (01) (20) (00)

Minhota 62 59

(590)

3 (30) (00)

Na tabela 3312 estatildeo discriminadas as frequecircncias geacutenicas estimadas para as

populaccedilotildees estudadas bem como as de outras populaccedilotildees de bovinos da Europa e de buacutefalos

da Bulgaacuteria

Verifica-se que ALBA eacute o alelo mais comum encontrando-se aparentemente fixado

em vaacuterias raccedilas bovinas de origem europeia

Como jaacute referido para HB a presenccedila de ALBB nas raccedilas europeias parece

relacionar-se com a sua localizaccedilatildeo geograacutefica verificando-se que de uma maneira geral a sua

frequecircncia aumenta agrave medida que nos aproximamos do sul da Europa e de Aacutefrica eacute no gado

zebu africano que este alelo ocorre com frequecircncias mais elevadas variando entre 030 e 060

(VICENTE 1978) Assim a presenccedila de ALBB no gado europeu poderaacute indicar a passagem

pela Europa de bovinos oriundos de Aacutefrica (CECCHINI amp Nus 1986) Eacute de notar que apenas a

raccedila Minhota e algumas das restantes raccedilas da Peniacutensula Ibeacuterica natildeo apresentam ALBB

63


Tabela 3312 Frequecircncias geacutenicas de ALB em vaacuterias populaccedilotildees de raccedilas bovinas e em buacutefalos


N ALBA (F) ALBB (S) ALBV Referecircncia

Portugal

Barrosatilde inscrita 142 098 + 001 001 plusmn 001 001 plusmn001 Este trabalho

Barrosatilde natildeo inscrita 153 097 + 001 002+001 001 plusmn001

Minhota 62 098 plusmn 001 - 002 plusmn 001

Mertolenga 147 084 plusmn 002 016 + 002 - KlDDetal (1980)

Alentejana 155 094+001 006 plusmn 001 -

Mirandesa 106 094 + 002 006 plusmn 002 - NOBRE (S data)

Espanha -

Cachena 71 098 + 001 002+001 - IGLESIAS (1989)

Caldelana 60 098 plusmn 001 002 + 001 -

Frieiresa 33 100 - - raquo

Limiana 39 097 + 002 003 plusmn 002 -

Rubia Gallega 201 099 plusmn 000 001 plusmn000 -

Vianesa 40 093 + 003 007 + 003 -

Sayaguesa 147 096 plusmn001 004 plusmn 001 - GONZALEZ et al (1987)

Moracha 101 089 plusmn 002 011+002 -

Alistaria Sanabresa 157 090 plusmn 002 010 plusmn002 -

Blanca Cacerena 62 056 plusmn 005 044 plusmn 005 -

Caacuterdena Andaluza 25 100 - -

Asturiana de los Vallegraves 127 099 + 001 001 plusmn001 -

Asturiana de la Montana 106 099 plusmn001 001 plusmn001 -

Pirenaica 265 092 + 001 008 plusmn001 - VICENTE (1978)

Tudanca 42 100 - -

Morena del N O 25 092 + 004 008 plusmn 004 -

Frisona 97 100 - -

De Lidia 124 100 - - KIDDeacutetal (1980)

Retinta 164 097 + 001 003 plusmn001 -

Itaacutelia

Chinina 264 089 + 001 011 plusmn001 - CARENZIeacutetal (1970)

Marchigiana 124 074 + 003 026 plusmn 003 -

Beacutelgica

Pied vermelha Este-Flandern 503 100 - - BOUQUET amp VAN de WEGHE (1972)

Vermelha Oeste-Flandern 155 100 - -

Pied preta 174 100 - -

Pied vermelha-Campine 265 100 - -

w IGLESIAS (1989)

(Continua)

64


Tabela 3312 Frequecircncias geacutenicas de ALB em vaacuterias populaccedilotildees de raccedilas bovinas e de buacutefalos (continuaccedilatildeo)

Frequecircncias geacutenicas N ALBA (F) ALBB (S) ALBV Referecircncia

Bulgaacuteria

Sofia Brow 170 096+001 004 + 001 - M A K A V E E V ( 1 9 7 0 )

Buacutefalo 225 047 plusmn 002 053 plusmn 002 - M A K A V E E V ( 1 9 8 4 )

Murrah (Buacutefalo) 76 012+003 088 plusmn 003 -

G Bretanha

Charolesa 99 084 plusmn 003 016 + 003 - SPOONER amp OLIVER (1969)

Frisia 1422 100 - -

Hereford 215 099 plusmn 001 001+001 -

Jersey 217 100 - -

laquo IGLESIAS (1989)

Neste trabalho descreve-se tambeacutem o alelo ALBV com uma frequecircncia de 001 e

002 nas raccedilas Barrosatilde e Minhota respectivamente Este alelo natildeo se encontra descrito em

qualquer raccedila europeia podendo a sua detecccedilatildeo estar relacionada com a capacidade resolvente

da teacutecnica de focagem isoeleacutectrica utilizada na separaccedilatildeo de ALB

TF

A transferrina eacute provavelmente o mais informativo dos sistemas polimoacuterficos estudados

em virtude do nuacutemero de alelos que apresenta

A distribuiccedilatildeo dos fenoacutetipos observados para o locus TF apresenta-se na tabela 3313

E possiacutevel verificar a existecircncia de equiliacutebrio de Hardy-Weinberg em todas as populaccedilotildees

estudadas

Da anaacutelise das frequecircncias geacutenicas expressas na tabela 3314 verifica-se que este locus

apresenta quatro produtos geacutenicos na maioria das raccedilas europeias sendo os alelos TFA e

TFD (incluindo os subtipos TFD1 e TFD2) os que apresentam frequecircncias mais elevadas

(027 a 092 para o alelo TFA e 026 a 073 para o alelo TFD)

Observa-se tambeacutem que a frequecircncia de TFD2 nas raccedilas estudadas eacute mais elevada do

que a de TFD1 como ocorre na maioria das raccedilas ibeacutericas

65


No que se refere a TFE verifica-se que a sua frequecircncia eacute relativamente baixa nas

raccedilas europeias (001 e 022) e estaacute mesmo ausente em quase todas as raccedilas da regiatildeo da

Galiza (com excepccedilatildeo da raccedila Cachena espanhola e Rubia Gallega) e na raccedila Minhota Note-se

a grande semelhanccedila entre os valores de frequecircncias geacutenicas deste alelo na raccedila Cachena

espanhola (005) e nas populaccedilotildees de raccedila Barrosatilde (004 e 003) o que mais uma vez sugere

uma grande proximidade entre as duas Apesar de ocorrer em baixa frequecircncia nos bovinos

europeus a presenccedila de TFE nestas raccedilas pode indicar uma proveniecircncia asiaacutetica ou africana

pois eacute nestes continentes que aquele alelo eacute mais comum (BRAEND 1971)

66


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68


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69


bull GC

A distribuiccedilatildeo dos fenoacutetipos observados para o locus GC apresenta-se na tabela 3315

A sua anaacutelise permite verificar a existecircncia de diferenccedilas entre os valores observados e

esperados para raccedila Barrosatilde (populaccedilatildeo inscrita no Livro Genealoacutegico) Este desvio ao

equiliacutebrio de Hardy-Weinberg deve-se agrave existecircncia de um excesso de homozigoacuteticos

sugerindo assim a ocorrecircncia de uma possiacutevel subestruturaccedilatildeo na populaccedilatildeo

Nas restantes amostras estudadas natildeo foi possiacutevel aplicar o teste de Contudo a

diferenccedila entre valores observados e esperados de acordo com o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg

eacute praticamente inexistente na populaccedilatildeo Barrosatilde natildeo inscrita e pouco acentuada na raccedila

Minhota

Tabela 3315 Distribuiccedilatildeo fenotiacutepica de GC em populaccedilotildees das raccedilas Barrosatilde e Minhota Entre parecircntesis indicam-se os valores esperados de acordo com o equiliacutebrio de Hardy-Weinberg

Fenoacutetipos N GCS GCFS GCF


(945) (419) (45)


(1087) (406) (37)

Minhota 62 54 5 3

(514) (101) (04)

x2

3913 1 0048

A distribuiccedilatildeo das frequecircncias geacutenicas apresentada na tabela 3316 mostra que GCS eacute

o alelo mais comum nas raccedilas europeias (com excepccedilatildeo da raccedila Frisia da Sueacutecia) As raccedilas

estudadas neste trabalho tecircm frequecircncias aleacutelicas para este locus que as aproximam das raccedilas

espanholas

70


Tabela 3316 Frequecircncias geacutenicas de GC em vaacuterias populaccedilotildees de raccedilas bovinas


N GCF(ouA) GCS(ouB) GCC Referecircncia

Portugal

Barrosatilde inscrita

Barrosatilde natildeo inscrita

Minhota

Alentejana

Mirandesa

Espanha

De Lidia

Frisona

Beacutelgica

Branca e azul

Flemish vermelha

Campine vermelha e branca

Preta e branca

Flemish branca e vermelha

Sueacutecia

Vermelha e Branca

Frisia

141 018 plusmn0023

153 016 plusmn002

62 009 plusmn 003

028 plusmn 004

97 020 plusmn 003

1306 008 plusmn001

124 015 plusmn002

2323 031 plusmn001

431 016 plusmn001

299 012 plusmn001

299 019 plusmn002

140 006 plusmn 001

1030 039 plusmn001

273 079 plusmn 002

082 plusmn 002

084 plusmn 002

091 plusmn003

072 plusmn 004

080 plusmn 003

092 plusmn 001

085 plusmn 002

069 plusmn 001

084 plusmn 001

088 plusmn 001

081 plusmn002

065 plusmn 003

061 plusmn001

021 plusmn002

029 plusmn 003

Este trabalho

CUNHA (1994)

NOBRE (S data)

PIEDRAFUA et ai (1984)

VAN de WEGHE et ai (1982)

GAHNE(1963)

in PIEDRAFUA et ai (1984)

71


34 - ANAacuteLISE POPULACIONAL CONJUNTA

341 - Diversidade geneacutetica na raccedila Barrosatilde

As estimativas da variabilidade geneacutetica das populaccedilotildees de bovinos das raccedilas Barrosatilde e

Minhota efectuaram-se considerando apenas 6 loci polimoacuterficos HB CAII MPI ALB TF e

GC

Tabela 341 Estimativa da variabilidade geneacutetica (6 loci) atraveacutes dos valores de heterozigotia observada (Ho) e esperada (He) nas populaccedilotildees estudadas

Barrosatilde inscrita Barrosatilde natildeo inscrita Minhota Locus

Ho He Ho He Ho He

HB 0000 0000 0000 0000 0097 0093

CAH 0411 0441 0464 0464 0210 0262

MPI 0043 0056 0026 0039 0082 0080

ALB 0035 0035 0046 0058 0048 0048

TF 0603 0590 0556 0595 0694 0638

GC 0248 0297 0261 0265 0081 0163

Os resultados expressos na tabela 341 mostram em geral a ausecircncia de diferenccedilas

significativas entre os valores de heterozigotia observada (Ho) e heterozigotia esperada (He)

para os loci estudados Deve contudo notar-se que na raccedila Minhota e quanto ao locus GC o

valor de He eacute aproximadamente o dobro da Ho Nos restantes loci o ligeiro desvio observado

entre Ho e He sugere em geral um deacutefice de heterozigoacuteticos

Nas duas populaccedilotildees de raccedila Barrosatilde os sistemas TF e CAII satildeo os que apresentam

valores de heterozigotia mais elevados Pelo contraacuterio os loci MPI e ALB mostram valores de

heterozigotia baixos possivelmente devido ao excesso de homozigoacuteticos (MPI B e ALB A)

detectados nas trecircs populaccedilotildees

Na tabela 342 apresentam-se os valores do nuacutemero meacutedio de alelos por locus (ria)

percentagem de loci polimoacuterficos (P) heterozigotia meacutedia observada (Ho) e heterozigotia

esperada (He) nas populaccedilotildees de bovinos estudados Estes valores devem ser interpretados

72


tendo em conta o facto de os 6 loci investigados serem polimoacuterficos em pelo menos uma

populaccedilatildeo

Tabela 342 Variabilidade geneacutetica detectada em trecircs populaccedilotildees de bovinos atraveacutes da anaacutelise de 6 loci polimoacuterficos N - efectivo meacutedio estudado por locus na - nuacutemero meacutedio de alelos por locus P - proporccedilatildeo de loci polimoacuterficos Ho - heterozigotia observada He - heterozigotia meacutedia esperada Entre parecircntesis indicam-se os valores do desvio padratildeo

Raccedila Populaccedilatildeo N na P Ho He

Barrosatilde inscrita 1407 233 833 0223 0237

(06) (042) (0100) (0100)

Barrosatilde natildeo inscrita 1528 233 833 0226 0237

(02) (042) (0098) (0101)

Minhota 618 233 1000 0202 0214

(02) (021) (0101) (0090)

A sua anaacutelise permite verificar em primeiro lugar a ocorrecircncia de uma grande

semelhanccedila entre os valores de H nas duas raccedilas estudadas Barrosatilde e Minhota revelando a

existecircncia de uma variabilidade geneacutetica idecircntica nas trecircs populaccedilotildees de bovinos Observa-se

tambeacutem que os valores de heterozigotia meacutedia observada (Ho) natildeo diferem significativamente

dos valores de heterozigotia esperados (He) nas trecircs populaccedilotildees sendo o valor mais elevado o

encontrado na populaccedilatildeo de raccedila Barrosatilde (237)

Os elevados valores de P (833 na raccedila Barrosatilde e 100 na raccedila Minhota) resultam

do facto de apenas se terem utilizado loci polimoacuterficos nesta anaacutelise e o nuacutemero meacutedio de

alelos por locus (na) eacute igual nas trecircs populaccedilotildees estudadas (233)

A tabela 343 apresenta estimativas de FB Frr e FST para as trecircs populaccedilotildees de

bovinos Os valores de Fis indicam a existecircncia de uma acentuada deficiecircncia de

heterozigoacuteticos nos loci MPI e GC Nos restantes loci verifica-se por um lado a tendecircncia

para um excesso de heterozigoacuteticos nos loci HB e TF (com valores de -0051 e -0021

respectivamente) e por outro lado para uma ligeira deficiecircncia de heterozigoacuteticos nos loci

CAII e ALB (com valores de 0066 e 0072 respectivamente) A meacutedia ponderada de FiS

mostra uma deficiecircncia de heterozigoacuteticos de 48

73


Tabela 343 Distribuiccedilatildeo relativa da diversidade geneacutetica nas trecircs populaccedilotildees de bovinos Hs-heterozigotia intrapopulacional HT-heterozigotia total Valores das estatiacutesticas F para 6 loci analisados

Locus H s Hx Fis FIT FST

HB 0030 0031 -0051 -0016 0033

CAII 0387 0404 0066 0104 0041

MPI 0058 0059 0130 0133 0004

ALB 0046 0047 0072 0075 0004

TF 0605 0627 -0021 0015 0036

GC 0241 0244 0183 0193 0012

Meacutedia 0228 0235 0048 0078 0031

As estimativas de FST indicam a existecircncia de um baixo grau de diferenciaccedilatildeo

populacional nos bovinos estudados Os valores de FST para os 6 loci analisados podem

considerar-se baixos (entre 0004 e 0041) apresentando uma meacutedia ponderada de 0031

Assim soacute uma pequena parte da diversidade geneacutetica (31) se deve a diferenccedilas entre as

populaccedilotildees sendo muito maior a diversidade dentro de cada populaccedilatildeo do que entre as

populaccedilotildees

Os baixos valores de FST encontrados para os loci MPI e ALB resultam de frequecircncias

elevadas de MPIB e ALBA respectivamente e traduzem uma grande homogeneidade entre

as raccedilas bovinas estudadas natildeo se detectando subestruturaccedilatildeo populacional

342 - Comparaccedilatildeo com outras raccedilas ibeacutericas

Tendo em conta o pequeno nuacutemero de loci comuns a este e a outros estudos

estimaram-se diferentes valores de heterozigotia meacutedia consoante o nuacutemero de loci de que se

dispunha Na tabela 344 e 345 apresentam-se valores de heterozigotia meacutedia para as

diferentes raccedilas obtidos a partir de quatro (FF) e cinco loci (FF+) respectivamente bem como

os valores de na P e os respectivos desvios padratildeo em vaacuterias raccedilas de bovinos ibeacutericos

A diversidade geneacutetica do bovino Barrosatilde avaliada pela taxa meacutedia de heterozigotia

(0281-0272 e 0249-0260 para 5 e 4 loci respectivamente) parece ocupar uma posiccedilatildeo

74


intermeacutedia no seio das raccedilas ibeacutericas Tambeacutem o grau de variabilidade geneacutetica nos bovinos

avaliado por paracircmetros como o nuacutemero meacutedio de alelos por locus e a proporccedilatildeo de loci

polimoacuterficos (P) demonstra que as raccedilas estudadas neste trabalho ocupam uma posiccedilatildeo

intermeacutedia quando comparadas com outras raccedilas ibeacutericas

A anaacutelise das tabelas 344 e 345 mostra que todas as medidas de diversidade geneacutetica

(H P e de na) apresentam valores idecircnticos Esta semelhanccedila permite supor que o processo de

domesticaccedilatildeo iniciado haacute menos de 10000 anos natildeo levou a uma grande diferenciaccedilatildeo

geneacutetica entre as raccedilas pelo menos relativamente aos marcadores geneacuteticos estudados neste

trabalho Desta forma verifica-se que as principais diferenccedilas entre as raccedilas resultam de

pequenas alteraccedilotildees das suas frequecircncias geacutenicas provavelmente causadas pelo baixo nuacutemero

de animais destinados agrave reproduccedilatildeo (mais marcado nos machos) e pelos cruzamentos dirigidos

em cada raccedila

Por outro lado este baixo niacutevel de diferenciaccedilatildeo geneacutetica deveraacute estar tambeacutem

associado ao facto de na origem das raccedilas bovinas ibeacutericas se encontrar um uacutenico processo de

domesticaccedilatildeo seguido provavelmente de um processo de expansatildeo populacional bastante

recente do Proacuteximo Oriente ateacute agrave Europa Adicionalmente estima-se que a diferenciaccedilatildeo dos

bovinos em raccedilas autoacutectones soacute teraacute ocorrido nos uacuteltimos 300 anos (LOFTUS et ai 1994)

Neste contexto os eventuais estrangulamentos do efectivo populacional (bottleneck)

e efeitos de fundador ocorridos durante o periacuteodo inicial da domesticaccedilatildeo do gado bovino e

capazes de afectar de forma muito diferente vaacuterios nuacutecleos populacionais natildeo satildeo detectados

na Peniacutensula Ibeacuterica

75


Tabela 344 Variabilidade geneacutetica em vaacuterias raccedilas de bovinos atraveacutes da anaacutelise de 4 loci polimoacuterficos N - efectivo meacutedio estudado por locus ria - nuacutemero meacutedio de alelos por locus P-- proporccedilatildeo de loci polimoacuterficos yent - heterozigotia meacutedia esperada Entre parecircntesis indicam-se os valores do desvio padratildeo

Raccedila Populaccedilatildeo N nbdquo P H +

Portugal

Barrosatilde inscrita 1410(00) 23 (05) 750 0249 (0135)

Barrosatilde natildeo inscrita 1530 (00) 23 (05) 755 0260(0135)

Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0216 (0094)

Mertolenga 1470 (00) 23 (03) 1000 0315 (0097)

Alentejana 1550(00) 23 (03) 1000 0239 (0123)

Mirandesa 1065 (03) 20 (00) 1000 0159(0110)

Espanha

Cachena 710 (00) 23 (03) 1000 0279(0111)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0166 (0107)

Frieiresa 330 (00) 18(03) 750 0177(0112)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0246 (0087)

Rubia Gallega 1845(95) 25 (05) 1000 0215(0110)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0221 (0087)

Sayaguesa 1470 (00) 23 (03) 1000 0320 (0094)

Morucha 1010(00) 23 (03) 1000 0361 (0084)

Alistaria Sanabresa 1570 (00) 23 (03) 1000 0213 (0104)

Blanca Cacerefia 618 (03) 20 (00) 1000 0377 (0078)

Caacuterdena Andaluza 250 (00) 15(03) 500 0131 (0106)

Asturiana de los Vallegraves 1265 (05) 23 (03) 1000 0237(0107)

Asturiana de la Montana 1060 (00) 23 (03) 1000 0280 (0088)

Tudanca 420 (00) 20 (04) 750 0321 (0109)

Morena del N O 250 (00) 18 (03) 750 0203 (0108)

Frisona 6540 (00) 18 (05) 500 0203 (0130)

De Lidia 1240 (00) 23 (03) 1000 0367(0135)

Retinta 1640 (00) 23 (03) 1000 0338 (0107)

76


Tabela 345 Variabilidade geneacutetica em vaacuterias raccedilas de bovinos atraveacutes da anaacutelise de 5 loci polimoacuterficos N - efectivo meacutedio estudado por locus na - nuacutemero meacutedio de alelos por locus P--proporccedilatildeo de loci polimoacuterficos H^ - heterozigotia meacutedia esperada Entre parecircntesis indicam-se os valores do desvio padratildeo

Raccedila Populaccedilatildeo N na P i r Portugal

Barrosatilde inscrita 1410 (00) 22 (04) 800 0281 (0109)

Barrosatilde natildeo inscrita 1530(00) 22 (04) 800 0272 (0105)

Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0229 (0074)

Espanha Cachena 710 (00) 22 (02) 1000 0289 (0087)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0180 (0084)

Frieiresa 330 (00) 18 (02) 800 0180 (0087)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0226(0071)

Rubia Gallega 1812(81) 24 (04) 1000 0223 (0086)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0374 (0168)

Sayaguesa 1470 (00) 22 (02) 1000 0305 (0074)

Morucha 1010 (00) 22 (02) 1000 0353 (0066)


Blanca Cacerefla 616 (02) 20(00) 1000 0402 (0065)


Asturiana de los Vallegraves 1266 (04) 22 (02) 1000 0270 (0089)

Asturiana de la Montaria 1060(00) 22 (02) 1000 0301 (0072)

343 - Diferenciaccedilatildeo geneacutetica

Nas tabelas 346 e 347 apresentam-se as distacircncias geneacuteticas de Nei (NEI 1978)

calculadas para 23 (4 loci HB CAII ALB e TF) e 15 (5 loci HB CAII ALB TF e NP)

raccedilas bovinas ibeacutericas respectivamente Da sua anaacutelise ressalta o facto de aqueles valores

serem na sua maioria bastante baixos

De entre as raccedilas bovinas ibeacutericas estudadas a Frisona e a Cachena demonstram estar

mais proacuteximas da raccedila Barrosatilde com valores de DNei de 0092 (4 loci) e de 0104 (5 loci)

respectivamente Por outro lado as raccedilas Asturiana de la Montana e Vianesa aparecem como

as mais diferenciadas DNei= 0334 (4 loci ) e Dgtjei= 0330 (5 loci) respectivamente

77


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80


No que se refere agrave raccedila Minhota verifica-se que a Frieiresa eacute a que estaacute mais proacutexima

(valores de 0077 e 0074 para 4 e 5 loci respectivamente) e que mais um vez eacute a Asturiana de

la Montana a mais diferenciada das raccedilas (valores de 0389 e 0349 para 4 e 5 loci respectivamente)

A diferenciaccedilatildeo geneacutetica entre as raccedilas bovinas ibeacutericas encontra-se representada nos

dendrogramas construiacutedos pelos meacutetodos de agrupamento NJ (Neighbor-joining SATTOU amp

NEI 1987) e UPGMA (Unweightedpair-group arithmetic average SNEATH amp SOKAL 1973)

(figuras 341 342 343 e 344) Foram realizados testes de reamostragem do tipo

bootstrap (100 reacuteplicas) para a anaacutelise da consistecircncia dos padrotildees de ramificaccedilatildeo

apresentando-se os seus valores entre parecircntesis

A anaacutelise conjunta dos quatro dendrogramas permite verificar uma falta de consistecircncia

nos vaacuterios padrotildees de ramificaccedilatildeo para as raccedilas bovinas ibeacutericas associada a valores de

bootstrap em geral muito reduzidos De facto observa-se que o padratildeo de ramificaccedilatildeo dos

dendrogramas se altera consoante o meacutetodo de agrupamento usado e o nuacutemero de loci considerados Estas alteraccedilotildees nos agrupamentos das diferentes raccedilas devem-se

provavelmente agrave instabilidade causada pelo reduzido nuacutemero de loci polimoacuterficos utilizados

neste estudo bem como ao facto de as frequecircncias geacutenicas serem muito semelhantes em todas

as populaccedilotildees estudadas

Deve contudo referir-se que a raccedila Barrosatilde aparece normalmente associada a vaacuterias

raccedilas do norte da Peniacutensula Ibeacuterica nomeadamente a Cachena (Galiza) a Asturiana de la

Montana (Astuacuterias) a Sayaquesa e a Morucha (Salamanca)

No que se refere agrave raccedila Minhota esta aparece vaacuterias vezes associada agraves raccedilas Rubia

Gallega Frisona Asturiana de los Vallegraves e Frieiresa

81


(18)

(14)

(11)

(5)

(3)

Sayaquesa

(39)

[32)

(21)1-

- -HsT

(49)

(1)

(3)

(18)

(8)

(13)1

(12)

19)

(16T

De Lidia

(99) Asturiana de la Montana

Tudanca bullMorucha

Cachena Barrosatilde mdashFrisona

Minhota -Asturiana de los Vallegraves Rubia Gallega

Frieiresa Alentejana

(65)

Mertolenga -Vianesa

Blanra Cacerefla

Retinta Linuacuteana

i (39)r

Mirandesa Caacuterdena Andaluza Morena NO

Caldelana Alistano Sanabresa

Figura 341 Dendrograma construiacutedo com base nas distacircncias geneacuteticas de NEI (1978) entre 23 raccedilas de bovinos (4 loci HBCAII ALB e TF) atraveacutes do meacutetodo de agrupamento NJ Os valores de probabilidade de ocorrecircncia de cada agrupamento obtidos atraveacutes de um teste de bootstrap indicam-se entre parecircntesis

82


Morucha

Cachena Sayaquesa

Rubia Gallega Asturiana de los Vallegraves Freiresa

Frisona Minhota Alentejana Mertolenga

(43) ( 2 8 gt - ^ C a W e l a l

( iacute 7gtrl - Mirandesa L__ Alistano Sanabresa

Caacuterdena Andaluza Vianesa

Barrosatilde Retinta

De Lidia Tudanca

Asturiana de la Montana Morena NO Blanca Cacerena

Figura 342 Dendrograma construiacutedo com base nas distacircncias geneacuteticas de NEI (1978) entre 23 raccedilas de bovinos (4 loci HB CAII ALB e TF) atraveacutes do meacutetodo de agrupamento UPGMA Os valores de probabilidade de ocorrecircncia de cada agrupamento obtidos atraveacutes de um teste de bootstrap indicam-se entre parecircntesis

83


(42)f

(30)1 I

(7)

2D

(23)1

I mdash l( 2 8 )

r

(49) r (23) r L

i4) I

(18) (23) bull

(28)

(55gt

-Caldelana Caacuterdena Andaluza

Alistano Sanabresa _ _ Rabia Galkga

Minhota Frieiresa

gt Asturiana de los Vallegraves

Asturiana de Ia Montana Barrosatilde

Sayaquesa mdashMorucha

Cachena Limiana

Blanca Cacerena Vianesa

Figura 343 Dendrograma construiacutedo com base nas distacircncias geneacuteticas de NEI (1978) entre 15 raccedilas de bovinos (5 loci HB CAII ALB TF e NP) atraveacutes do meacutetodo de agrupamento NJ Os valores de probabilidade de ocorrecircncia de cada agrupamento obtidos atraveacutes de um teste de bootstrap indicam-se entre parecircntesis

(21)

(18)

(100)

(55)

(15)T r i shyT

C a

(40) |_Caacute

Alistano Sanabresa

(37)

(61)

(46

(29)

^ o i j r mdash

Caldelana Caacuterdena Andaluza

Limiana Vianesa

Rubia Gallega Asturiana de los Vallegraves

(32j~

j2frTL

Frieiresa

Minhota Cachena Morucha

Sayaquesa

Barrosatilde bull Blanca Cacerena

Asturiana de la Montana

Figura 344 Dendrograma construiacutedo com base nas distacircncias geneacuteticas de NEI (1978) entre 15 raccedilas de bovinos (5 loci HB CAII ALB TF e NP) atraveacutes do meacutetodo de agrupamento UPGMA Os valores de probabilidade de ocorrecircncia de cada agrupamento obtidos atraveacutes de um teste de bootstrap indicam-se entre parecircntesis

84


No seu conjunto estes resultados natildeo satildeo suficientes para o estabelecimento de uma

histoacuteria evolutiva das actuais raccedilas bovinas ibeacutericas nem para a separaccedilatildeo da raccedila Barrosatilde das

restantes Consequentemente natildeo eacute possiacutevel neste momento fazer corresponder a anaacutelise da

diversidade e estrutura geneacutetica das populaccedilotildees ibeacutericas de gado bovino com alguma das

hipoacuteteses evolutivas propostas por diversos autores com base em evidecircncia morfoloacutegica

(VALLEJO 1978 IGLESIAS 1989 CORDEIRO 1986 JORGE 1996)

De acordo com essa evidecircncia a raccedila Barrosatilde (e tambeacutem a Cachena) derivaria do

denominado tronco mauritaacutenico (Bos primigenius opisthonomus) ou seja de populaccedilotildees

originaacuterias do Norte de Aacutefrica que teriam passado para o sul da Peniacutensula Ibeacuterica alcanccedilando

mais tarde o Norte de Portugal e de Espanha Por outro lado a filiaccedilatildeo da raccedila Minhota

segundo JORGE (1996) deriva do tronco aquitacircnico (Bos primigenius primigenius) tal como a

maior parte das raccedilas da Galiza das Astuacuterias e dos Pirineacuteus

Embora os resultados apresentados neste trabalho pareccedilam de facto indicar que as

raccedilas Barrosatilde e Minhota derivam de troncos diferentes eacute necessaacuterio aprofundar de forma

muito consideraacutevel a investigaccedilatildeo sobre a estrutura geneacutetica das raccedilas bovinas ibeacutericas antes de

se poder formular conclusotildees mais sustentadas

85

Con8ideraccedil8es Finais

4 - CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS

O trabalho desenvolvido nesta dissertaccedilatildeo permitiu o estudo de alguns sistemas

geneacuteticos polimoacuterficos jaacute descritos em bovinos (HB CAII NP MPI ALB TF e GC) nas

raccedilas Barrosatilde e Minhota Permitiu ainda a aplicaccedilatildeo de teacutecnicas de separaccedilatildeo electroforeacuteticas

mais eficazes em alguns desses sistemas

Vaacuterias limitaccedilotildees durante a execuccedilatildeo praacutetica deste trabalho obrigaram de alguma

forma a alteraccedilotildees no programa inicial Entre elas devem referir-se

1 a recolha de amostras de sangue mostrou-se difiacutecil e demorada sendo necessaacuteria a

coordenaccedilatildeo de esforccedilos de vaacuterias entidades (Direcccedilatildeo Regional de Agricultura de

Entre Douro e Minho e brigadas de Sanidade Animal locais) de veterinaacuterios e de

criadores de bovinos retirando tempo agrave execuccedilatildeo praacutetica do trabalho

2 a afinaccedilatildeo de vaacuterias teacutecnicas electroforeacuteticas para certos marcadores geneacuteticos

envolveu um consideraacutevel esforccedilo de investigaccedilatildeo

3 a impossibilidade de apurar atempadamente as teacutecnicas de separaccedilatildeo ou de

visualizaccedilatildeo para a amilase a ceruloplasmina e a poacutes-transferrina

4 a escassa bibliografia sobre o bovino Barrosatilde e sobre as teacutecnicas utilizadas neste

trabalho em gado bovino

Apesar das limitaccedilotildees considera-se que este trabalho se reveste de alguma importacircncia

pelo facto de constituir um contributo para a caracterizaccedilatildeo geneacutetica de uma raccedila bovina muito

peculiar A este respeito entendeu-se que numa primeira fase se procederia ao estudo de um

conjunto de proteiacutenas polimoacuterficas de forma a poder iniciar uma comparaccedilatildeo com outras raccedilas

bovinas nomeadamente ibeacutericas para as quais jaacute existem resultados publicados Por outro

86

Consideraccedilotildees Finais

lado o estabelecimento de um conjunto de teacutecnicas de fenotipagem dos loci considerados

permite desde logo a sua aplicaccedilatildeo em questotildees de identificaccedilatildeo individual e de anaacutelise da

paternidade

Eacute contudo evidente que o aprofundamento deste trabalho deveraacute necessariamente

evoluir na direcccedilatildeo da anaacutelise molecular da variaccedilatildeo geneacutetica Adicionalmente seraacute do maior

interesse alargar o domiacutenio de investigaccedilatildeo agraves restantes raccedilas bovinas autoacutectones

Em face do exposto entende-se ser possiacutevel definir trecircs linhas de investigaccedilatildeo para os

proacuteximos anos

1 - ampliaccedilatildeo da bateria de sistemas geneacuteticos polimoacuterficos detectados em proteiacutenas do

sangue e do leite

2 - anaacutelise da variabilidade geneacutetica de um conjunto de microssateacutelites se possiacutevel

associados a algumas das proteiacutenas polimoacuterficas jaacute descritas

3 - estudo do polimorfismo da moleacutecula de DNA-mitocondrial

De uma forma geral pode assim considerar-se que os principais objectivos definidos

no iniacutecio deste trabalho foram alcanccedilados pelo que se apresentam em seguida as conclusotildees

87

Conclusotildees

5 - CONCLUSOtildeES

A utilizaccedilatildeo de um sistema de focagem isoeleacutectrica permitiu detectar a existecircncia de

polimorfismo geneacutetico na hemoglobina distinguindo-se dois produtos geacutenicos na raccedila bovina

Minhota HBA e HBB Na raccedila Barrosatilde HBA foi o uacutenico produto geacutenico encontrado

A utilizaccedilatildeo de um sistema de focagem isoeleacutectrica permitiu a detecccedilatildeo de dois

produtos geacutenicos no locus CAII (CAIPF e CAIPS) e revelou-se mais eficaz de que as

teacutecnicas de separaccedilatildeo convencional em gel de amido

A investigaccedilatildeo realizada permitiu detectar a ocorrecircncia de polimorfismo geneacutetico de

MPI atraveacutes de um sistema electroforeacutetico em gel de amido tendo-se detectado trecircs produtos

geacutenicos (MPIA MPIB e MPIC) A fraca actividade de MPI e a grande dificuldade na

obtenccedilatildeo de um contraste de bandas adequado poderaacute dever-se ao facto de a sua expressatildeo soacute

ocorrer na fracccedilatildeo leucocitaacuteria do sangue

A aplicaccedilatildeo de um sistema de focagem isoeleacutectrica na presenccedila de ureia (8M) revelou-

-se muito eficaz na separaccedilatildeo de ALB e permitiu detectar pela primeira vez um novo variante

ALBV ligeiramente mais aciacutedico do que ALBA

A combinaccedilatildeo de uma teacutecnica de focagem isoeleacutectrica com um preacutevio tratamento das

amostras a fim de saturar a moleacutecula de TF com Fe permitiu a detecccedilatildeo de quatro produtos

geacutenicos (TF A TFD1 TFD2 e TFE) nas raccedilas estudadas

88

Conclusotildees

A combinaccedilatildeo de uma teacutecnica de focagem isoeleacutectrica com a detecccedilatildeo por

immunoblotting permitiu detectar dois produtos geacutenicos no locus GC (GCA e GCB) O

tratamento de amostras com neuraminidase permitiu a obtenccedilatildeo de padrotildees mais simples do

que os conseguidos com amostras nativas Esta simplificaccedilatildeo resulta da provaacutevel remoccedilatildeo de

aacutecidos siaacutelicos ligados agrave moleacutecula de GC

Natildeo se detectou nenhum caso de exclusatildeo na anaacutelise de segregaccedilatildeo de 27 pares

matildeefilho feita separadamente para cada locus

Verifiacutecou-se a presenccedila de dois alelos raros HBB e PEPB1 na raccedila Minhota Estes

alelos poderatildeo ser utilizados na distinccedilatildeo das duas raccedilas estudadas

Foi encontrado um valor de heterozigotia meacutedia de 0237 em populaccedilotildees de raccedila

Barrosatilde indicativo de uma variabilidade geneacutetica intermeacutedia em relaccedilatildeo agrave generalidade das

raccedilas ibeacutericas As diferenccedilas observadas entre as vaacuterias raccedilas ibeacutericas poderatildeo reflectir

fenoacutemenos histoacuterico-evolutivos muito recentes dada a sua proximidade e grande semelhanccedila

Foi observado um reduzido niacutevel de diferenciaccedilatildeo entre as raccedilas Barrosatilde e Minhota

(FST= 0031) demonstrando-se que a maior parte da diversidade geneacutetica se atribui a diferenccedilas

intrapopulacionais Este valor de FST pode considerar-se baixo quando comparado com o

obtido no estudo de outras espeacutecies animais sugerindo um elevado fluxo geacutenico

interpopulacional Por outro lado reflecte ainda uma histoacuteria demograacutefica muito recente

A utilizaccedilatildeo de meacutetodos de agrupamento NJ e UPGMA obtidos a partir de matrizes de

distacircncias geneacuteticas de Nei natildeo permitiu separar a raccedila Barrosatilde das restantes raccedilas ibeacutericas

89

Referecircncias Bibliograacuteficas

6 - REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

AMORIM A (1983) Contribuiccedilatildeo para o conhecimento da Geneacutetica Humana Estudo de Geneacutetica Bioquiacutemica

Formal e Populacional e de Ligaccedilatildeo Factorial Tese de Doutoramento Faculdade de Ciecircncias do

Porto

AMORIM A KOMPF J SCHUNTER F amp RITTER H (1982) Aminolevulinate dehydratase (EC42124)

Linkage analysis Hum Genet 61 48-49

ANSAY M (1973) Techniques microelectrophoretiques dans lanalyse de la multipliciteacute enzymatique chez les

bovins Deacutetection Eacutelectrophoreacutetique des Polymorphismes Biochimiques Chez les Mammifegraveres

Application a LEacutetude Geacuteneacutetique des Populations Centre National de la Recherche Scientifique

Paris 43-58

ARANA A pound amp ZARAGOZA P (1986) Nueva electroforetica dei enzima NADH-Diafrosa (DIA-2) detectada

en la espeacutecie Oryctolagus cuniculus (L) Zootecnia XXXV ndeg 7-12 125-130

ARAUacuteJO J (1986) Contribuiccedilatildeo para o estudo dos bovinos de raccedila Barrosatilde Relatoacuterio de estaacutegio da

licenciatura em Engenharia Zooteacutecnica Universidade dos Accedilores

ARNOLD I C J amp Bouw J (1989) A new allele of glucose phosphate isomerase in dogs Animal Genetics

20 217-220

ARRANZ J J BAYON Y amp SAN PRIMITIVO F (1992) Biochemical polymorphisms in Spanish Avilena-

-Negra Ibeacuterica cattle Animal Genetics 23 (suppl 1) 19

ARRANZ J J BAYON Y amp SAN PRIMITIVO F (1996) Comparison of protein markers and microsatellites in

differentiation of cattle populations Animal Genetics 27 415-419

ASHTON G C (1965) Cattle serum transferrins A balanced polymorphism Genetics 52 983-997

90


BAINES J amp MEacuteLEK J (1980) Egipto - Deuses Templos e Faraoacutes Grandes Culturas e Civilizaccedilotildees Ciacuterculo

de Leitores

BELL K ARTHUR H amp ANDERSON I L (1994) Esterase and albumin polymorphism in the domestic cat

(Felis catus) XXIV International Conference on Animal Genetics Praga Julho 1994

BEKENEV V A amp ORLOVA G V (1991) Polymorphism of erytrocytic enzymes in Large White pig breeds in

Siberia Animal Genetics 22 (suppl 1) 23-24

BOWLING A T amp CLARK R S (1988) Excess of heacuteteacuterozygotes at albumin locus in American Standardbred

horses Animal Genetics 19 331-341

BOWLING A T GORDON L PENEDO M C T WICTUM E amp BEEBOUT J (1990) A single gel for

determining genetic of equine erythrocyte carbonic anhydrase (CA) and catalase (Cat) Animal

Genetics 21 191-197

BRADLEY D G MACHUGH D E CUNNINGHAM P amp LOFTUS R T (1996) Mitochondrial diversity and

the origins of African and European cattle Proceeding of the National Academy of Sciences of USA

93 5131-5135

BRAEND M (1971) Studies on the relationships between cattle breeds in Africa Asia and Europe Evidence

obtained by studies of blood groups and protein polymorphisms World Review of Animal Production

VIO (1) 10-14

BRAEND M (1988) Haemoglobin polymorphism in Norwegian Red Cattle Animal Genetics 19 59-62

BRAEND M NESSE 1 L amp EFREMOV G D (1988) Expression and genetics of caprine haemoglobins

Animal Genetics 18 223-231

BROWN L B KANE H amp AYRES H (1993) Vital signs WW Norton e Co pp 323 New York

CARTER D C HE X M MUNSON S EL TWIGG P D GERNERT K M BROOM M B amp MILLER T

Y (1989) Three dimensional structure of human serum albumin Science 244 1195-1198

CECCHINI G amp Nus M D (1986) Literature review on cattle blood polymorphisms and preliminary results

of analysis in East African Zebu in Ethiopia Agric Subtrop and Ttropicale 3 (80) 433-463

91

Referocircicias Bibliograacuteficas

CiacuteZovAacute D STRATIL A MULLER E amp CEPICA S (1993) A new partially deficient transferrin variant in

the pig Animal Genetics 24 305-306

CLARKE S W TUCKER E M amp OSTERHOFF D R (1989) Blood groups and biochemical polymorphism

in the Namaqua sheep breed Animal Genetics 20 279-286

CLUTTON-BROCK J (1992) Domestication of animals In Jomes S Martin R Pilbeam D (eds) The

Cambridge Encyclopedia of Human Evolution pp 380-385 Cambridge University Press

CORDEIRO J P (1986) As raccedilas bovinas em Portugal - Sua Origem O meacutedico veterinaacuterio I (1) 29-39

CRISTOFALO G Cozzi M C amp VALIATI P (1992) Identification of a new variant in the equine serum

alB-glycoprotein (A1B) system Animal Genetics 23 (suppl 1) 24

CUNHA L M (1994) Caracterizaccedilatildeo Morfo-Funcional e Geneacutetica da Raccedila Bovina Alentejana Trabalho de

fim de curso apresentado agrave Escola Superior Agraacuteria de Beja

DEL LAMA S N DEL LAMA M A MESTRINER M A amp MORTARI N (1992) Peptidase B polymorphism

in cattle erythrocytes Biochem Genet 30 247-255

DRATCH P TATE M KRAAY G J amp GERWING V (1992) Plasma proteins differentiating European red

deer and North American elk Animal Genetics 23 (suppl 1) 32

EGGEN A amp FRIES R (1995) An integrated cytogenetic and meiotic map of the bovine genome Animal

Genetics 26 215-236

ERHARDT G (1986) Transferrin variants in sheep separation and characterization by polyacrylamide gel

electrophoresis and isoelectric focusing Animal Genetics 17 343-352

ERHARDT G (1991) Genetic polymorphism of vitamin D binding protein and serum albumin in sheep

Animal Genetics 22 (suppl 1) 28-29

ERHARDT G amp SIMIANER H (1993) Linkage between the loci for serum albumin and vitamin D binding

protein (GC) in sheep Animal Genetics 24 301-303

EPSTEIN H amp MASON I L (1984) Cattle In Mason I L (ed) Evolution of domesticated animals pp 7-

-27 Longman

92


FAO (1993) A diversidade da Natureza Um patrimoacutenio valioso Documento produzido pela FAO Divisatildeo de

informaccedilatildeo - Out de 1993 Veterinaacuteria Teacutecnica 10 10-12

FAO (1996) World Watch List for Domestic Animal Diversity 2a ediccedilatildeo FAOUNEP pp 334 Roma

FARNDALE B M HUBBARD D E amp ANDERSON L L (1992) A new PGD variant in New Zeland

Thoroughbred horses Animal Genetics 23 (suppl 1) 24

FELSENSTEIN J (1993) PHYLIP (Phylogeny Inference Package) Version 35 Distributed by the autor Seattle

University of Washington

FERNANDES M T S (1996) Raccedilas de bovinos autoacutectones Um importante recurso geneacutetico animal portuguecircs

a preservar e a defender Veterinaacuteria Teacutecnica 12 10-15

FERRAND N (1995) Variaccedilatildeo geneacutetica de proteiacutenas em populaccedilotildees de coelho (Oryctolagus cuniculus) -

- Anaacutelise da diferenciaccedilatildeo subespecifica subestruturaccedilatildeo expansatildeo geograacutefica e domesticaccedilatildeo

Dissertaccedilatildeo de Doutoramento em Biologia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias da Universidade do

Porto

FERRAND N amp ROCHA J (1991) Genetic polymorphism of serum albumin in wild rabbits populations

Animal Genetics 22 (suppl 1) 36

FORBES P MACKEITH B amp PEBERDY R (1986) Mamiacuteferos Ungulados e Lagomorfos Ciacuterculo de Leitores

FRIES R EGGEN A amp WOMACK J E (1993) The bovine genome map Mammalian Genome 4 405-428

GAHNE B(1963) Inherited variation in the post-albumin of cattle serum Hereditas 50126-135

GAHNE B JUNEJA R K amp GROLMUS J (1977) Horizontal polyacrylamine gel electrophoresis for the

simultaneous phenotyping of transferrin post-transferrin albumin and post-albumin in the blood

plasma of cattle Arum Bid Grps Biochem Genet 8127-137

GARCIA L S VICENTE M V BECERRA A L YEBRA F A RODRIcircGUES M F amp LOacutePEZ J M S

(1992) Razas Bovinas Autoacutectonas de Galicia - I Razas Morenas Galegas (Recursos Xeneacuteticos a

Conservar) Xunta de Galicia

GARCIA M ROSAacuteRIO J amp ANTUNES M (1981) Bovinos em Portugal Direcccedilatildeo dos Serviccedilos Veterinaacuterios -

- DGSV pp 44-78 Lisboa

93


GLOWATZKI-MULLIS M L GAILLARD C WIGGER G amp FRIES R (1995) Microsatellite-based

parentage control in cattle Animal Genetics 26 7-12

GONCcedilALVES GARCIA M L (1964) A Raccedila Bovina Barrosatilde Boletim Pecuaacuterio n deg 1 Ano XXXII DGSP

pp 103-172 Lisboa

GONZALEZ P TUNON MJ amp VALLEJO M (1987) Genetic relationships between Spanish native breeds of

cattle Animal Genetics 18 249-256

HALL S B L COTHRAN E G amp KING J A (1991) Variability of manosephosphate isomerase (MPI)

from haemolysate in 14 horse breeds Animal Genetics 22 (suppl 1) 22

HARRIS H amp HOPKINSON D A (1976) Handbook of enzyme electrophoresis in human genetics North-

-Holland Publishers

HEMMER H (1990) Domestication The decline of environmental appreciation Cambridge University Press

HERZOG S (1988) Polymorphism and genetic control of erythrocyte 6-phosphogluconate dehydrogenase in

the genus Cervus Animal Genetics 19 291-294

HERZOG S (1989) Genetic polymorphism of transferrin in fallow deer Cervus dama L Animal Genetics 20

421-426

IGLESIAS A B (1989) Estrutura y relaciones geneacuteticas de razas bovinas mediante marcadores geneacuteticos

(Polimorfismos Bioquiacutemicos) Dissertaccedilatildeo de Doutoramento em Biologia apresentada agrave Faculdade de

Biologia da Universidade de Santiago

JAMIESON A (1965) The genetics of transferrins in cattle Heredity 20 419-441

JANZEN M K amp COTHRAN E G (1991) A new PGD variant from North American horses of feral origin


JORGE E S (1996) Bovinos da raccedila Minhota Contribuiccedilatildeo para a sua histoacuteria Veterinaacuteria Teacutecnica 10 10-

-18

94


JUNEJA R K GAHNE B amp STRATIL A (1987) Polymorphic plasma postalbumins of some domestic

animals (pig Po2 horse XK and dog Pa proteins) identified as homologous Animal Genetics 18 119-

-124

JUNEJA R K KURYL J GAHNE B amp ZURKOWSKI M (1989) Linkage between the loci for transferrin

and ceruloplasmin in pigs Animal Genetics 20 307-311

KALAB P STRATIL A amp GLASNAacuteK V (1990) Genetic polymorphism of serum vitamin D-binding protein

(GC) in sheep and mouflon Animal Genetic 21 317-321

KAWAGUCHI T (1973) Polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of serum albumin into three

bands Clinica ChimicaActa 45 85-92

KIDD K K STONE W H CRIMELLA C CARENZI C CASATI M amp ROGNONI G (1980)

Immunogenetic and population genetic analyses of Iberian cattle Anim Blood Grps Biochem Genet

11 21-38

KRISTJANSSON F K (1963) Genetic control of two pre-albumins in pigs Genetics 48 1059-1063

KRISTJANSSON F K amp HICKMAN C G (1965) Subdivision of the allele TF D for transferrins in Holstein

and Ayrshire cattle Genetics 52 627-630

KUROSAWA Y amp TANAKA K (1988) Electrophoretic variants of serum transferrin in wild pig populations of

Japan Animal Genetics 19 31-35

LEAL C (1995) Apreciaccedilatildeo fenotiacutepica de um nuacutecleo de bovinos de raccedila Barrosatilde e amostragem para sua

caracterizaccedilatildeo geneacutetica Relatoacuterio de estaacutegio de licenciatura em Biologia - Ramo Cientiacutefico

Tecnoloacutegico em Ecologia e Recursos Zooloacutegicos Faculdade de Ciecircncias da Universidade do Porto

LITT M amp LUTTY J A (1989) A hipervariable microsatellite revealed by in vitro amplification of a

dinucleotide repeat within the cardiac muscle actin gene American Jornal of Human Genetics 44

397-401

LOFTUS R T MACHUGH D E NGERE L O BALAIN D S BADI A M BRADLEY D G amp

CUNNINGHAM E P (1994a) Mitochondrial genetic variation in European African and Indian cattle

populations Animal Genetics 25 265-271

95


LOFTUS R T MACHUGH B E BRADLEY B G SHARP P M amp CUNNINGHAM P (1994b) Evidence

for two independent domestications of cattle Proceeding of the National Academy of Sciences of USA

91 2757-2761

MACHUGH D E LOFTUS R T BRADLEY B G SHARP P M amp CUNNINGHAM P (1994)

Microsatellite DNA variation and among European cattle breeds Proceedings of the Royal Society of

London B 256 25-31

MACHUGH B E SHRIVER M B LOFTUS R T CUNNINGHAM P amp BRADLEY B G (1997)

Microsatellite DNA Variation and the Evolution Domestication and Phylogeography of taurine and

zebu cattle (Bos taunts and Bos indicus) Genetics 146 1071-1086

MARTINS R (1982) Conservaccedilatildeo e melhoramento dos bovinos de raccedila Barrosatilde Relatoacuterio de estaacutegio de

licenciatura em Produccedilatildeo Animal Instituto Universitaacuterio de Traacutes-os-Montes e Alto Douro

MIRANDA DO VALE J (1949) Gado Bissulco Livraria Saacute da Costa Lisboa

MORAIS M L (1992) Estudo Desenvolvimento e Optimizaccedilatildeo de Teacutecnicas de Separaccedilatildeo e Detecccedilatildeo

Especiacutefica de Proteiacutenas Dissertaccedilatildeo de Mestrado em Biologia Celular apresentada agrave Faculdade de

Ciecircncias da Universidade de Coimbra

NEI M (1978) Estimation of average heterozygosity and genetic distance from a small number of individuals

Genetics 89 583-590

NICHOLS E A CHAPMAN V M amp RUDDLE F H (1973) Polymorphism and linkage for

Mannosephosphate isomerase in Mus musculus Biochem Genet 8 47-53

NOBRE J M (s data) Caracterizaccedilatildeo geneacutetica da raccedila bovina Mirandesa Trabalho de fim de curso

efectuado na Estaccedilatildeo Nacional de Selecccedilatildeo e Reproduccedilatildeo Animal Curso de Engenharia Zooteacutecnica da

Universidade de Eacutevora

PENEDO M C T FOWLER M E BOWLING A T ANDERSON B L amp GORDON L (1988) Genetic

variation in the Wood of llamas Llama glama and alpaca Llama pacos Animal Genetics 19 267-

-276

PENEDO M C T amp JUNEJA R K (1989) Polymorphic plasma postalbumin (PO) of llamas and alpacas

identified as GC Protein Animal Genetics 20 221-223

96


PENHALLOW R C MASON A B amp WOODWORTH R C (1991) Electrophoretic characterization of

human equine and bovine transferrins Comp Biochem Physiol 98B 41-45

PEREIRA A A (1997) Caracterizaccedilatildeo Geneacutetica de Algumas Subpopulaccedilotildees de Truta de Rio Salmo trutta L

da Bacia Hidrograacutefica do Rio Lima Dissertaccedilatildeo de Mestrado em Ecologia Aplicada apresentada agrave

Faculdade de Ciecircncias da Universidade do Porto

PIEDRAFITA J TEJEDOR M T amp ZARAGAZA L (1984) Post-Albuminas y Post-Transferrinas en

poblaciones bovinas Espafiolas Frisona y De Lidia Comunicacioacuten Presentada A La 34deg Reunion

Anual De La Federacioacuten Europea de Zootecnia 114-121

POVEY S CORNEY G LEWIS W H P ROBSON E B PARRINGTON J M amp HARRIS H (1972) The

genetics of peptidase C in man Ann Hum Genet 35 455-465

PRETSCH W amp MERKLE S (1990) Glucose Phosphate Isomerase Enzyme - Activity Mutants in Mus

musculus Genetical and Biochemical Characterization Biochemical Genetics 28 97-110

RASERO R D I STASIO L amp BERRA G P (1993) Polymorphism of erythocyte glucosephosphae isomerase

in sheep Animal Genetics 24 63-64

RITTER EL FRIEDRICHSON U amp SCHMITT J (1974) Genetic variation of Manose phosphate isomerase in

Man Humangenetik 22 261

RITTER H amp SCHMITT J (1973) Genetic polymorphism of Manose phosphate isomerase in Primates

Humangenetik 19 325-326

ROCHA J KOtildeMPF J FERRAND N AMORIM A amp RITTER H (1991) Separation of human alloalbumin

variants by isoelectric focusing Electrophoresis 12 313-314

ROGERSON J (1991) Biacuteblia- Os Caminhos de Deus Grandes Culturas e Civilizaccedilotildees Ciacuterculo de Leitores

RON M BAND M YANAI A amp WELLER J L (1994) Mapping quantitative trait loci with DNA

microsatellites in a commercial dairy cattle population Animal Genetics 25 259-264

RUSSEL G (1996) The analysis of genetic diversity in cattle to preserve future breeding options (Online)

Available http wwwribbsrcacukcdiv_wwwinformhtm (1996 November 29)

97


SAITOU N amp NEI M (1987) The neighbor-joining method a new method for reconstructing phylogenetic

trees Mol Biol Evol 4 406-425

SANTOS O C M (1995) Caracterizaccedilatildeo Geneacutetica de Populaccedilotildees de Lebre Ibeacuterica (Lepus granatensis) e

Lebre Europeia (Lepus europaeus) - Aspectos Bioquiacutemicos e Populacionais Dissertaccedilatildeo de Mestrado

em Ecologia Aplicada apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias da Universidade do Porto

SARAIVA J A (1993) Histoacuteria de Portugal Publicaccedilotildees Europa-Ameacuterica

SARTORE G STORMONT C MORRIS B G amp GRUNDER A A (1969) Multiple electrophoretic forms of

Carbonic Anhydrase in red cells of domestic cattle (Bos taurus) and American buffalo (Bison bison)

Genetics 61823-831

SCHNEIDER H SCHNEIDER M P C SILVA B T F amp SALZANO F M (1990) Transferrin and albumin

polymorphisms in buffaloes from Brazil Animal Genetics 21 335-337

SEATH P H A amp SOKAL R R (1973) Numeric Taxonomy W H Freeman amp Co

SELVARAJ O S MUKHERJEE T K DHALIWAL S S TAN S G amp BARKER J S F (1991) Biochemical

polymorphisms in the local goats of South-East Asia Animal Genetics 22 (suppl 1) 32

STERN C M MILLER S A amp SCHANFIELD M S (1992) Differentiation of wapiti and Eurasian red deer

by isoelectric focusing electrophoresis of GC on agarose gels Animal Genetics 23 (suppl 1) 23

STORMONT C amp SUZUKI Y (1963) Genetic control of albumin phenotypes in horses Proceeding of the

Society for Experimental Biology and Medicine 144 673-675

STRATIL A GLASNAacuteK V BOBAacuteK P CiacutezovAacute D GAacuteBRISOVAacute E amp KALAB P (1990) Variation of some

serum proteins in red deer Cervus elaphus L Animal Genetics 21 285-293

SWOFFORD D L amp SELANDER R B (1989) BIOSYS-1 A computer program for the analysis of allelic

variation in population genetics and biochemical systematics Release 17 Illinois Natural History

Survey

TASHIAN R E (1989) The carbonic anhydrases widening perspectives on their evolution expression and

function BioEssays 10 186-192

98


TASHIAN R E amp CARTER N D (1976) Biochemical Genetics of Carbonic Anhydrase In Harris H (ed)

Advances in Human Genetics 7 1-56 Plenum

TATE M L amp MCEWAN K M (1992) Genetic polymorphism of erytrocyte diaphorase in red deer Cervus

elaphusL Animal Genetics 23 449-452

TSUJI S SAOAMITSU Y amp GOTO N (1989) Ultrathin-leyer isoelectric focusing for bovine serum

transferrin phenotyping Biochem Genet 27 425-429

TUCKER E M amp YOUNG J D (1988) Genetic control of red-cell nucleoside transport and its association

with the B blood-group locus and nucleoside phosphorylase activity in sheep Biochem Genet 26 489-

-501

TUNON M J GONZALEZ P amp VALLEJO M (1989) Genetic relationships between 14 native Spanish

breeds of goat Animal Genetics 20 205-212

USHA A P (1996) Cattle diversity by blood typing (Online) Available http

wwwribbsrcacukcdiv_wwwinfobhtm ( 1996)

USHA A P SIMPSON S P amp WILLIAMS J L (1995) Probability of random sire exclusion using

microsatellite markers for parentage verification Animal Genetics 26 155-161

VANDEBERG J amp AIVALIOTIS M (1990) Mannose-6-phosphate isomerase polymorphism in baboon

erythrocytes Biochemical Genetics 28 495-501

VAN DE WEGHE A VAN ZEVEREN A amp BOUQUET Y (1982) The vitamin D binding protein in domestic

animals Comp Biochem Physiol 73B 977-982

VAN DE WEGHE A YABLANSKI T S VAN ZEVEREN A amp BOUQUET Y (1988) A third variant of glucose

phosphate isomerase in pigs Animal Genetics 19 55-58

VANKAN D M amp BELL K (1992 a) A new allele in Australian goats Animal Genetics 23 453-456

VANKAN D M amp BELL K (1992 b) Genetic polymorphism of vitamin D-binding protein (GC) in Australian

goats Animal Genetics 23 457-462

VICENTE M V (1978) Razas vacunas autoacutectonas en vias de extincioacuten (Aportaciones al estuacutedio geneacutetico)

Fundacioacuten Juan March Serie Universitaacuteria LXK 10-51

99


VIEIRA J (1993) Utilizaccedilatildeo de marcadores geneacuteticos na caracterizaccedilatildeo e certificaccedilatildeo de populaccedilotildees

domeacutesticas e selvagens de coelho (Oryctolagus cunicuius) Dissertaccedilatildeo de Mestrado apresentada agrave


VIEIRA J amp FERRAND N (1995) Four new alleles at the mannose-6-phosphate isomerase locus in rabbit


WANG S FOOTE W C amp BUNCH T D (1990) Transferrin and haemoglobin polymorphism in

domesticated goats in the USA Animal Genetics 21 91-94

WEBER J L amp MAY P E (1989) Abundant class of human DNA polymorphisms which can be typed using

the polymerase chain reaction American Jornal of Human Genetics 44 388-396

WELCHS S (1990) A comparison of the structure and properties of serum transferrin from 17 animal species

Comp Biochem Physiol 97 B (3) 417-427

100

ANEXO

Anexos

RESUMO E CONCLUSOtildeES

Neste trabalho apresenta-se uma contribuiccedilatildeo para o estudo geneacutetico da raccedila bovina Barrosatilde e de uma outra raccedila (Minhota) atraveacutes da anaacutelise da variaccedilatildeo geneacutetica de proteiacutenas detectada pela utilizaccedilatildeo de sistemas electroforeacuteticos convencionais e por focagem isoeleacutectrica

Definiram-se os seguintes objectivos fundamentais

1 estudo da variabilidade geneacutetica da raccedila Barrosatilde ao niacutevel das proteiacutenas eritrocitaacuterias e plasmaacuteticas 2 desenvolvimento e afinaccedilatildeo de teacutecnicas de separaccedilatildeo de proteiacutenas por electroforese e focagem

isoeleacutectrica e sua detecccedilatildeo especiacutefica (histoquiacutemica e imunoloacutegica) 3 anaacutelise familiar dos polimorfismos encontrados 4 avaliaccedilatildeo do grau de diferenciaccedilatildeo geneacutetica existente entre a raccedila Barrosatilde e outras raccedilas bovinas

Escolheu-se um conjunto de 12 sistemas geneacuteticos (sete dos quais se revelaram polimoacuterficos) que pudesse satisfazer os objectivos fundamentais do trabalho

Assim apoacutes desenvolvimento de teacutecnicas de separaccedilatildeo para os sistemas geneacuteticos considerados procedeu-se a uma anaacutelise familiar baseada nos polimorfismos encontrados nas populaccedilotildees de raccedila Barrosatilde ao estudo de distribuiccedilatildeo populacional dos fenoacutetipos das duas raccedilas estudadas e de outras raccedilas bovinas da Europa (principalmente da Peniacutensula Ibeacuterica)

Com base neste trabalho obtiveram-se as seguintes conclusotildees

bull a utilizaccedilatildeo de um sistema de focagem isoeleacutectrica permitiu detectar a existecircncia de polimorfismo geneacutetico na hemoglobina distinguindo-se dois produtos geacutenicos na raccedila bovina Minhota HBA e HBB Na raccedila Barrosatilde HBA foi o uacutenico produto geacutenico encontrado

bull a utilizaccedilatildeo de um sistema de focagem isoeleacutectrica permitiu a detecccedilatildeo de dois produtos geacutenicos no locus CAII (CAIIF e CAIPS) e revelou-se mais eficaz de que as teacutecnicas de separaccedilatildeo convencional em gel de amido

bull a investigaccedilatildeo realizada permitiu detectar a ocorrecircncia de polimorfismo geneacutetico de MPI atraveacutes de um sistema electroforeacutetico em gel de amido tendo-se detectado trecircs produtos geacutenicos (MPIA MPIB e MPIC) A fraca actividade de MPI e a grande dificuldade na obtenccedilatildeo de um contraste de bandas adequado poderaacute dever-se ao facto de a sua expressatildeo soacute ocorrer na fracccedilatildeo leucocitaacuteria do sangue

bull a aplicaccedilatildeo de um sistema de focagem isoeleacutectrica na presenccedila de ureia (8M) revelou-se muito eficaz na separaccedilatildeo de ALB e permitiu detectar pela primeira vez um novo variante ALBV ligeiramente mais aciacutedico do que ALB A

bull a combinaccedilatildeo de uma teacutecnica de focagem isoeleacutectrica com um preacutevio tratamento das amostras a fim de saturar a moleacutecula de TF com Fe permitiu a detecccedilatildeo de quatro produtos geacutenicos (TFA TFD1 TFD2 e TFE) nas raccedilas estudadas

bull a combinaccedilatildeo de uma teacutecnica de focagem isoeleacutectrica com a detecccedilatildeo por immunoblotting permitiu detectar dois produtos geacutenicos no locus GC (GCA e GCB) O tratamento de amostras com neuraminidase permitiu a obtenccedilatildeo de padrotildees mais simples do que os conseguidos com amostras nativas Esta simplificaccedilatildeo resulta da provaacutevel remoccedilatildeo de aacutecidos siaacutelicos ligados agrave moleacutecula de GC

bull natildeo se detectou nenhum caso de exclusatildeo na anaacutelise de segregaccedilatildeo de 27 pares matildeefilho feita separadamente para cada locus

bull verificou-se a presenccedila de dois alelos raros HBB e PEPB1 na raccedila Minhota Estes alelos poderatildeo ser utilizados na distinccedilatildeo das duas raccedilas estudadas

I

Anexos

bull foi encontrado um valor de heterozigotia meacutedia de 0237 em populaccedilotildees de raccedila Barrosatilde indicativo de uma variabilidade geneacutetica intermeacutedia em relaccedilatildeo agrave generalidade das raccedilas ibeacutericas As diferenccedilas observadas entre as vaacuterias raccedilas ibeacutericas poderatildeo reflectir fenoacutemenos histoacuterico-evolutivos muito recentes dada a sua proximidade e grande semelhanccedila

bull foi observado um reduzido niacutevel de diferenciaccedilatildeo entre as raccedilas Barrosatilde e Minhota (FST = 0031) demonstrando-se que a maior parte da diversidade geneacutetica se atribui a diferenccedilas intrapopulacionais Este valor de FST pode considerar-se baixo quando comparado com o obtido no estudo de outras espeacutecies animais sugerindo um elevado fluxo geacutemeo interpopulacional Por outro lado reflecte ainda uma histoacuteria demograacutefica muito recente

bull a utilizaccedilatildeo de meacutetodos de agrupamento NJ e UPGMA obtidos a partir de matrizes de distacircncias geneacuteticas de Nei natildeo permitiu separar a raccedila Barrosatilde das restantes raccedilas ibeacutericas

II

Anexos

Tabela A Frequecircncias geacutenicas para os vaacuterios sistemas polimoacuterficos encontrados na raccedila Barrosatilde (indiviacuteduos inscritos e natildeo inscritos) utilizadas na anaacutelise familiar

LOCUS ALELOS FREQUEcircNCIA GEacuteNICA

CAII 294 035

065

NP 294 H

L

024

076

MPI 290 A

B

C

000

098

002

ALB 294 A

B

V

097

002

001

TF 294 A

Dl

D2

E

057

016

023

004

GC 294 083 017

TTI

Agradecimentos

IacuteNDICE











Origem



211 - Amostragem


















5 - CONCLUSOtildeES


ANEXO


Agradecimentos

Quero aqui apresentar o meu agradecimento agrave ajuda prestada por certas pessoas sem a qual

natildeo era possiacutevel a realizaccedilatildeo do presente trabalho

Ao Prof Doutor Nuno Ferrand de Almeida agradeccedilo a oportunidade e o apoio constante que

demonstrou durante a realizaccedilatildeo deste trabalho as indicaccedilotildees que forneceu na estruturaccedilatildeo e

elaboraccedilatildeo do mesmo pela cedecircncia de bibliografia bem como as criacuteticas e sucessivas revisotildees do

manuscrito

Ao Prof Doutor Paulo Alexandrino quero agradecer o apoio na realizaccedilatildeo deste mesmo

trabalho assim como todas as indicaccedilotildees que forneceu para a sua realizaccedilatildeo praacutetica

Ao Prof Doutor Jorge Eiras pelas facilidades concedidas na utilizaccedilatildeo do laboratoacuterio de

Bioquiacutemica do Departamento de Zoologia e Antropologia e ao ICETA pelas facilidades concedidas na

utilizaccedilatildeo dos laboratoacuterios de Geneacutetica Animal

Agrave comissatildeo do Mestrado na figura da Prof Dra Leonor Fidalgo e ao respectivo corpo docente

os importantes conhecimentos transmitidos durante o ano curricular deste mestrado

Agrave AMIBA (Associaccedilatildeo do Minho dos Criadores de Bovinos de Raccedila Barrosatilde) principalmente

ao Sr Miguel Machado e Dr Joseacute Leite pelo apoio dado pela ajuda na recolha de amostras de sangue

e pelo simpaacutetico acolhimento que demonstraram na sua associaccedilatildeo estando sempre prontos a dispensar

os seus serviccedilos

Agrave DRAEDM (Direcccedilatildeo Regional de Agricultura de Entre Douro e Minho) em especial ao

Sr Engdeg Corte Real Santos (Estaccedilatildeo de Produccedilatildeo Animal da Zona Agraacuteria do Vale do Ave) agradeccedilo

todo o apoio e encorajamento que demonstrou

Quero tambeacutem agradecer a colaboraccedilatildeo e o tempo despendido nas vaacuterias saiacutedas de campo aos

funcionaacuterios do Livro Genealoacutegico (ao Sr Guilherme em especial) e aos funcionaacuterios das brigadas de

Sanidade Animal de Vieira do Minho e Poacutevoa de Lanhoso












INDICE










Origem 15



211-Amostragem 17


















ANEXO

























i






2













1992)
















3





























4





















(figura 112)

5











MASON 1984)












6























Proteiacutenas






7



(BRAEND 1971)





tema

Polimorfismo do DNA
























8






















9
















do VALE 1949)







do VALE 1949)

10












FERNANDES 1996)













li


B



12









parece estaacutevel













13







LEGENDA


ESCALA 11380000


14
























Origem







15






(GARCIA et ai 1981)








(IGLESIAS 1989)









e plasmaacuteticas





raccedilas bovinas

16




211 - Amostragem






Vieira do Minho











17









CP SODl TF

PEPC IDH1

AMY1 AMY1A PGM1

4

LDHB PEPB


6

IADA

ALDH1

CAII

ME1 PGM3 SOD2

NP

10

CAT HBBq22-q27

PGD IALDH2 DIA4

HP GPIq22-q24

MPI iBF GLOl

LDHA MDH2


18


bull HB





1986)







bull CAII-EC4211













19


bull PEPB-EC3412






1992)

bull DIA-EC1643






1992)

bull NP-EC2421







20


bull MDH-ECl 1137








bull PGD-EC11144







bull GPI-EC5319







21


bull MPI-EC5318











bull ALB













22


bull TF
















bull GC










23






bull HB



bull CAII











24


bull ALB



bull TF



obtidos










TF (FERRAND 1995)









25





bull GCcedil







obtidos














26


HB







Acrilamida 28 (pv)


Sacarose


7-9 (PHARMACIA)


PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

300 p1

300 ul


10 ul

70 ul




2

3

30 min

15 min

15 min

Focagem 1500 25 15 2h 30 min




27


bull CAII





amido









respectivamente




28




Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

Quantidades 18 ml

08 ml

2 g

500 |ol

100 ul


10 ul

70 ul




3

5

30 min

15 min

15 min

Focagem 2500 25 8

10

12

30 min

30 min

30 min

bull PEPB



29




pH = 74 NaH2P04 01 M


pH = 74 pontes




bull DIA









1130 M

0400 M

0020 M 0010 M




pH = 60 NaOH

30





ALB






Acrilamida 28 (pv)


Ureia





PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

48 g

250 ni

250 ni

125 ul


30 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

31





TF






Acrilamida 28 (pv)


Sacarose





18 ml

08 ml

2 g

100 ul

500 ul


30 ul

70 ul




Focagem 2500 25

l 20 min

2 10 min

3 10 min

8 30 min

10 30 min

12 30 min

32





GC





Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

437 ul

188 (il


10 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

33









bull HB



Fixaccedilatildeo







bull CAII



34









bull PEPB







bull DIA



horas a 37degC







35


bull NP







bull MDH








bull PGP






0005 M

36


bull GPI







bull MPI








bull ALBeTF



bull GCcedil




37



























38







bull PEPB












e Chianina)

39


+


bull DIA




1992)





40








bull MDH






41


bull PGD










bull HB







IGLESIAS 1989)

42


+ -HBB

HBA

AB AB A A


bull poundAH








nomeadamente





43




CAIIF

| CAIIS


bull NP







44

+

w

FS FS ]


H L L H L L


bull MPI














45



bull ALB




bandas






FERRAND 1995)







ALBA

46












bull TF




(IGLESIAS 1989)





47















amostras




(1991)




adequada







48

















bull QQ





49









mdashGCF

S F S FS S FS F F S FS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10


S1 $ l S- -





50











Total

4 (32) 17

(122) 6

(116) 27


Total

14

(114)

13

(156)

27

^ ^ ^ Filho

Matildee - ^ F

Fenoacutetipos

F f~ (11)

FS 2

(21)

S

Total 3

Fenoacutetipos

FS S

3

(21)

10 5

(61) (40)

1 5

(40) (76)

14 10


Matildee - ^ H L

Fenoacutetipos

H 10 4

(77) (37)

L 5 8

(37) (119)

Total 15 12

51





A 0 0 0 - - - 0

(00) (00) (00) (00)

AB 0 0 0 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

AC 0 0 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

B - 0 - 24 1 - 25

(00) (242) (06) (248)

BC - 0 0 1 0 0 1

(00) (00) (06) (06) (00) (12)

C - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 0 0 0 25 1 0 26




Fenoacutetipos

A 24 2 0 - - - 26

(251) (04) (02) (257)

AB 0 0 0 0 0 -

0

(04) (04) (00) (00) (00) (08)

AG 1 0 0 - 0 0 1

(02) (00) (02) (00) (00) (04)

B - 0 - 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00)

BG - 0 0 0 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

G - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 25 2 0 0 0 0 27

52





Fenoacutetipos

A 6

(51)

1

(14)

4

(21)

1

(03)

12

(89)

ADI 1 2 0 0 0 0 0 - - - 3

(14) (24) (06) (01) (04) (06) (01) (56)

AD2 2 0 5 0 - 0 - 2 0 - 9

(21) (06) (36) (01) (06) (08) (01) (79)

AE 0 0 0 0 - - 0 - 0 0 0

(03) (01) (01) (06) (01) (01) (00) (13) Dl 0

(04) 1

(01)

1

(02)

0

(00)

- 2

(07)

D1D2 - 0 1 - 0 0 0 0 0 - 1

(06) (06) (02) (10) (00) (02) (00) (26) DIE - 0 - 0 0 0 0 - 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (02) (00) (00) (04)

D2 0

(08) 0

(02)

0

(03)

0

(01)

- 0

(14) D2E - - 0 0 - 0 0 0 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (01) (02) (00) (05) E 0

(00) 0

(00)

0

(00)

0

(00)

0

(00)

Total 9 3 10 1 1 1 0 2 0 0 27




Fenoacutetipos

1 17 2 19

(156) (31) (187)

2-1 5 2 0 7

(31) (38) (06) (75)

2 _ 1 0 1

(06) (01) (07)

Total 22 5 0 27

53






bull PEPB










N










Jersey 139 - 100

Limousine 24 - 100



54


bull DIA





entre 019 e 021




Portugal



Minhota 62

Espanha

Cachena 71

Caldelana 60

Frieiresa 33

Limiana 39

Rubia Gallega 168

Vianesa 40




Blanca Cacerena 62




Bulgaacuteria

Buacutefalo 122



- 100 Este trabalho

- 100

- 100 a

- 100 IGLESIAS (1989)

- 100

- 100

- 100

- 100

- 100


- 100

- 100 st

- 100 st

- 100

- 100

- 100



55


bull HB







Minhota 62 56 6 0

(561) (58) (01)



tabela 334












56



N



Portugal







Espanha




















Itaacutelia



Bulgaacuteria




G Bretanha


in IGLESIAS (1989)

57






CAII


335




(149) (622) (639)


(200) (710) (620)

Minhota 62 3 13 46

(14) (162) (444)

x2

0651 1 0420

0000 1 0995









58



N


Portugal







Espanha




Limiana 39 083 + 004 017 plusmn 004


Vianesa 40 086 + 004 014 plusmn 004












Bulgaacuteria



Alemanha


Suiacuteccedila



Friburg 223 084 + 002 016+002

in IGLESIAS (1989)

59








080 e 093

bull NP






N

Fenoacutetipos

N NP H NPL



Minhota 62 19 43

60



N



Portugal



Minhota 62 017 + 004 083 + 004

Espanha














Beacutelgica



in IGLESIAS (1989)

MPI








61







(1301) (78) (01)


(1460) (59) (01)

Minhota 61 0 3 0 56 2 0

(00) (29) (01) (561) (19) (00)






N


N MPPA MPPB MPIC










62


ALB


3311




N




Minhota 62 59

(590)

3 (30) (00)



da Bulgaacuteria










63





Portugal







Espanha -




Limiana 39 097 + 002 003 plusmn 002 -


Vianesa 40 093 + 003 007 + 003 -


Moracha 101 089 plusmn 002 011+002 -







Tudanca 42 100 - -


Frisona 97 100 - -


Retinta 164 097 + 001 003 plusmn001 -

Itaacutelia



Beacutelgica





w IGLESIAS (1989)

(Continua)

64




Bulgaacuteria




G Bretanha


Frisia 1422 100 - -

Hereford 215 099 plusmn 001 001+001 -

Jersey 217 100 - -






TF





estudadas







65










66


2

1 I

I

ca o


r i o

c5 sect H O

M

CA o


u H

o


S

m

r i

lt3 r i

oo Os

O r-

o

r i

M3 o -oC mdashi ltN

f f

MD

00 tf

IcircC3

2 G PQ 3

o

r i


vq oo

-o o

S3 a

67


agrave

iacute tf a o

2

ia u

lto sect

1 1

bull8 ti o

a

a

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69


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Minhota




(945) (419) (45)


(1087) (406) (37)

Minhota 62 54 5 3

(514) (101) (04)

x2

3913 1 0048




espanholas

70





Portugal



Minhota

Alentejana

Mirandesa

Espanha

De Lidia

Frisona

Beacutelgica

Branca e azul

Flemish vermelha


Preta e branca


Sueacutecia

Vermelha e Branca

Frisia

141 018 plusmn0023

153 016 plusmn002

62 009 plusmn 003

028 plusmn 004

97 020 plusmn 003

1306 008 plusmn001

124 015 plusmn002

2323 031 plusmn001

431 016 plusmn001

299 012 plusmn001

299 019 plusmn002

140 006 plusmn 001

1030 039 plusmn001

273 079 plusmn 002

082 plusmn 002

084 plusmn 002

091 plusmn003

072 plusmn 004

080 plusmn 003

092 plusmn 001

085 plusmn 002

069 plusmn 001

084 plusmn 001

088 plusmn 001

081 plusmn002

065 plusmn 003

061 plusmn001

021 plusmn002

029 plusmn 003

Este trabalho

CUNHA (1994)

NOBRE (S data)



GAHNE(1963)


71






GC



Ho He Ho He Ho He

HB 0000 0000 0000 0000 0097 0093

CAH 0411 0441 0464 0464 0210 0262

MPI 0043 0056 0026 0039 0082 0080

ALB 0035 0035 0046 0058 0048 0048

TF 0603 0590 0556 0595 0694 0638

GC 0248 0297 0261 0265 0081 0163













72



populaccedilatildeo




(06) (042) (0100) (0100)


(02) (042) (0098) (0101)

Minhota 618 233 1000 0202 0214

(02) (021) (0101) (0090)

















73




HB 0030 0031 -0051 -0016 0033

CAII 0387 0404 0066 0104 0041

MPI 0058 0059 0130 0133 0004

ALB 0046 0047 0072 0075 0004

TF 0605 0627 -0021 0015 0036

GC 0241 0244 0183 0193 0012

Meacutedia 0228 0235 0048 0078 0031


















74













em cada raccedila










75




Portugal



Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0216 (0094)

Mertolenga 1470 (00) 23 (03) 1000 0315 (0097)

Alentejana 1550(00) 23 (03) 1000 0239 (0123)

Mirandesa 1065 (03) 20 (00) 1000 0159(0110)

Espanha

Cachena 710 (00) 23 (03) 1000 0279(0111)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0166 (0107)

Frieiresa 330 (00) 18(03) 750 0177(0112)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0246 (0087)

Rubia Gallega 1845(95) 25 (05) 1000 0215(0110)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0221 (0087)

Sayaguesa 1470 (00) 23 (03) 1000 0320 (0094)

Morucha 1010(00) 23 (03) 1000 0361 (0084)






Tudanca 420 (00) 20 (04) 750 0321 (0109)

Morena del N O 250 (00) 18 (03) 750 0203 (0108)

Frisona 6540 (00) 18 (05) 500 0203 (0130)

De Lidia 1240 (00) 23 (03) 1000 0367(0135)

Retinta 1640 (00) 23 (03) 1000 0338 (0107)

76






Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0229 (0074)

Espanha Cachena 710 (00) 22 (02) 1000 0289 (0087)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0180 (0084)

Frieiresa 330 (00) 18 (02) 800 0180 (0087)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0226(0071)

Rubia Gallega 1812(81) 24 (04) 1000 0223 (0086)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0374 (0168)

Sayaguesa 1470 (00) 22 (02) 1000 0305 (0074)

Morucha 1010 (00) 22 (02) 1000 0353 (0066)















77


8

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15

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80























81


(18)

(14)

(11)

(5)

(3)

Sayaquesa

(39)

[32)

(21)1-

- -HsT

(49)

(1)

(3)

(18)

(8)

(13)1

(12)

19)

(16T

De Lidia


Tudanca bullMorucha




(65)

Mertolenga -Vianesa

Blanra Cacerefla


i (39)r




82


Morucha

Cachena Sayaquesa



(43) ( 2 8 gt - ^ C a W e l a l




De Lidia Tudanca



83


(42)f

(30)1 I

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(23)1

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(28)

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Minhota Frieiresa




Cachena Limiana



(21)

(18)

(100)

(55)

(15)T r i shyT

C a

(40) |_Caacute

Alistano Sanabresa

(37)

(61)

(46

(29)

^ o i j r mdash


Limiana Vianesa


(32j~

j2frTL

Frieiresa


Sayaquesa




84


















85
























86




paternidade





proacuteximos anos


sangue e do leite






87

Conclusotildees

5 - CONCLUSOtildeES


















88

Conclusotildees





















89





Porto






Paris 43-58






20 217-220






90



de Leitores









Genetics 21 191-197



93 5131-5135



VIO (1) 10-14









91


















Genetics 26 215-236








-27 Longman

92














Porto














93





pp 103-172 Lisboa






-Holland Publishers





421-426








-18

94




-124









11 21-38











397-401




95




91 2757-2761



London B 256 25-31











Genetics 89 583-590








-276



96



























97










Genetics 61823-831














Survey



98










-501


















99













100

ANEXO

Anexos

















I

Anexos




II

Anexos



CAII 294 035

065

NP 294 H

L

024

076

MPI 290 A

B

C

000

098

002

ALB 294 A

B

V

097

002

001

TF 294 A

Dl

D2

E

057

016

023

004

GC 294 083 017

TTI

Agradecimentos

IacuteNDICE











Origem



211 - Amostragem


















5 - CONCLUSOtildeES


ANEXO













INDICE










Origem 15



211-Amostragem 17


















ANEXO

























i






2













1992)
















3





























4





















(figura 112)

5











MASON 1984)












6























Proteiacutenas






7



(BRAEND 1971)





tema

Polimorfismo do DNA
























8






















9
















do VALE 1949)







do VALE 1949)

10












FERNANDES 1996)













li


B



12









parece estaacutevel













13







LEGENDA


ESCALA 11380000


14
























Origem







15






(GARCIA et ai 1981)








(IGLESIAS 1989)









e plasmaacuteticas





raccedilas bovinas

16




211 - Amostragem






Vieira do Minho











17









CP SODl TF

PEPC IDH1

AMY1 AMY1A PGM1

4

LDHB PEPB


6

IADA

ALDH1

CAII

ME1 PGM3 SOD2

NP

10

CAT HBBq22-q27

PGD IALDH2 DIA4

HP GPIq22-q24

MPI iBF GLOl

LDHA MDH2


18


bull HB





1986)







bull CAII-EC4211













19


bull PEPB-EC3412






1992)

bull DIA-EC1643






1992)

bull NP-EC2421







20


bull MDH-ECl 1137








bull PGD-EC11144







bull GPI-EC5319







21


bull MPI-EC5318











bull ALB













22


bull TF
















bull GC










23






bull HB



bull CAII











24


bull ALB



bull TF



obtidos










TF (FERRAND 1995)









25





bull GCcedil







obtidos














26


HB







Acrilamida 28 (pv)


Sacarose


7-9 (PHARMACIA)


PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

300 p1

300 ul


10 ul

70 ul




2

3

30 min

15 min

15 min

Focagem 1500 25 15 2h 30 min




27


bull CAII





amido









respectivamente




28




Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

Quantidades 18 ml

08 ml

2 g

500 |ol

100 ul


10 ul

70 ul




3

5

30 min

15 min

15 min

Focagem 2500 25 8

10

12

30 min

30 min

30 min

bull PEPB



29




pH = 74 NaH2P04 01 M


pH = 74 pontes




bull DIA









1130 M

0400 M

0020 M 0010 M




pH = 60 NaOH

30





ALB






Acrilamida 28 (pv)


Ureia





PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

48 g

250 ni

250 ni

125 ul


30 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

31





TF






Acrilamida 28 (pv)


Sacarose





18 ml

08 ml

2 g

100 ul

500 ul


30 ul

70 ul




Focagem 2500 25

l 20 min

2 10 min

3 10 min

8 30 min

10 30 min

12 30 min

32





GC





Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

437 ul

188 (il


10 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

33









bull HB



Fixaccedilatildeo







bull CAII



34









bull PEPB







bull DIA



horas a 37degC







35


bull NP







bull MDH








bull PGP






0005 M

36


bull GPI







bull MPI








bull ALBeTF



bull GCcedil




37



























38







bull PEPB












e Chianina)

39


+


bull DIA




1992)





40








bull MDH






41


bull PGD










bull HB







IGLESIAS 1989)

42


+ -HBB

HBA

AB AB A A


bull poundAH








nomeadamente





43




CAIIF

| CAIIS


bull NP







44

+

w

FS FS ]


H L L H L L


bull MPI














45



bull ALB




bandas






FERRAND 1995)







ALBA

46












bull TF




(IGLESIAS 1989)





47















amostras




(1991)




adequada







48

















bull QQ





49









mdashGCF

S F S FS S FS F F S FS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10


S1 $ l S- -





50











Total

4 (32) 17

(122) 6

(116) 27


Total

14

(114)

13

(156)

27

^ ^ ^ Filho

Matildee - ^ F

Fenoacutetipos

F f~ (11)

FS 2

(21)

S

Total 3

Fenoacutetipos

FS S

3

(21)

10 5

(61) (40)

1 5

(40) (76)

14 10


Matildee - ^ H L

Fenoacutetipos

H 10 4

(77) (37)

L 5 8

(37) (119)

Total 15 12

51





A 0 0 0 - - - 0

(00) (00) (00) (00)

AB 0 0 0 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

AC 0 0 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

B - 0 - 24 1 - 25

(00) (242) (06) (248)

BC - 0 0 1 0 0 1

(00) (00) (06) (06) (00) (12)

C - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 0 0 0 25 1 0 26




Fenoacutetipos

A 24 2 0 - - - 26

(251) (04) (02) (257)

AB 0 0 0 0 0 -

0

(04) (04) (00) (00) (00) (08)

AG 1 0 0 - 0 0 1

(02) (00) (02) (00) (00) (04)

B - 0 - 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00)

BG - 0 0 0 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

G - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 25 2 0 0 0 0 27

52





Fenoacutetipos

A 6

(51)

1

(14)

4

(21)

1

(03)

12

(89)

ADI 1 2 0 0 0 0 0 - - - 3

(14) (24) (06) (01) (04) (06) (01) (56)

AD2 2 0 5 0 - 0 - 2 0 - 9

(21) (06) (36) (01) (06) (08) (01) (79)

AE 0 0 0 0 - - 0 - 0 0 0

(03) (01) (01) (06) (01) (01) (00) (13) Dl 0

(04) 1

(01)

1

(02)

0

(00)

- 2

(07)

D1D2 - 0 1 - 0 0 0 0 0 - 1

(06) (06) (02) (10) (00) (02) (00) (26) DIE - 0 - 0 0 0 0 - 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (02) (00) (00) (04)

D2 0

(08) 0

(02)

0

(03)

0

(01)

- 0

(14) D2E - - 0 0 - 0 0 0 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (01) (02) (00) (05) E 0

(00) 0

(00)

0

(00)

0

(00)

0

(00)

Total 9 3 10 1 1 1 0 2 0 0 27




Fenoacutetipos

1 17 2 19

(156) (31) (187)

2-1 5 2 0 7

(31) (38) (06) (75)

2 _ 1 0 1

(06) (01) (07)

Total 22 5 0 27

53






bull PEPB










N










Jersey 139 - 100

Limousine 24 - 100



54


bull DIA





entre 019 e 021




Portugal



Minhota 62

Espanha

Cachena 71

Caldelana 60

Frieiresa 33

Limiana 39

Rubia Gallega 168

Vianesa 40




Blanca Cacerena 62




Bulgaacuteria

Buacutefalo 122



- 100 Este trabalho

- 100

- 100 a

- 100 IGLESIAS (1989)

- 100

- 100

- 100

- 100

- 100


- 100

- 100 st

- 100 st

- 100

- 100

- 100



55


bull HB







Minhota 62 56 6 0

(561) (58) (01)



tabela 334












56



N



Portugal







Espanha




















Itaacutelia



Bulgaacuteria




G Bretanha


in IGLESIAS (1989)

57






CAII


335




(149) (622) (639)


(200) (710) (620)

Minhota 62 3 13 46

(14) (162) (444)

x2

0651 1 0420

0000 1 0995









58



N


Portugal







Espanha




Limiana 39 083 + 004 017 plusmn 004


Vianesa 40 086 + 004 014 plusmn 004












Bulgaacuteria



Alemanha


Suiacuteccedila



Friburg 223 084 + 002 016+002

in IGLESIAS (1989)

59








080 e 093

bull NP






N

Fenoacutetipos

N NP H NPL



Minhota 62 19 43

60



N



Portugal



Minhota 62 017 + 004 083 + 004

Espanha














Beacutelgica



in IGLESIAS (1989)

MPI








61







(1301) (78) (01)


(1460) (59) (01)

Minhota 61 0 3 0 56 2 0

(00) (29) (01) (561) (19) (00)






N


N MPPA MPPB MPIC










62


ALB


3311




N




Minhota 62 59

(590)

3 (30) (00)



da Bulgaacuteria










63





Portugal







Espanha -




Limiana 39 097 + 002 003 plusmn 002 -


Vianesa 40 093 + 003 007 + 003 -


Moracha 101 089 plusmn 002 011+002 -







Tudanca 42 100 - -


Frisona 97 100 - -


Retinta 164 097 + 001 003 plusmn001 -

Itaacutelia



Beacutelgica





w IGLESIAS (1989)

(Continua)

64




Bulgaacuteria




G Bretanha


Frisia 1422 100 - -

Hereford 215 099 plusmn 001 001+001 -

Jersey 217 100 - -






TF





estudadas







65










66


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69


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Minhota




(945) (419) (45)


(1087) (406) (37)

Minhota 62 54 5 3

(514) (101) (04)

x2

3913 1 0048




espanholas

70





Portugal



Minhota

Alentejana

Mirandesa

Espanha

De Lidia

Frisona

Beacutelgica

Branca e azul

Flemish vermelha


Preta e branca


Sueacutecia

Vermelha e Branca

Frisia

141 018 plusmn0023

153 016 plusmn002

62 009 plusmn 003

028 plusmn 004

97 020 plusmn 003

1306 008 plusmn001

124 015 plusmn002

2323 031 plusmn001

431 016 plusmn001

299 012 plusmn001

299 019 plusmn002

140 006 plusmn 001

1030 039 plusmn001

273 079 plusmn 002

082 plusmn 002

084 plusmn 002

091 plusmn003

072 plusmn 004

080 plusmn 003

092 plusmn 001

085 plusmn 002

069 plusmn 001

084 plusmn 001

088 plusmn 001

081 plusmn002

065 plusmn 003

061 plusmn001

021 plusmn002

029 plusmn 003

Este trabalho

CUNHA (1994)

NOBRE (S data)



GAHNE(1963)


71






GC



Ho He Ho He Ho He

HB 0000 0000 0000 0000 0097 0093

CAH 0411 0441 0464 0464 0210 0262

MPI 0043 0056 0026 0039 0082 0080

ALB 0035 0035 0046 0058 0048 0048

TF 0603 0590 0556 0595 0694 0638

GC 0248 0297 0261 0265 0081 0163













72



populaccedilatildeo




(06) (042) (0100) (0100)


(02) (042) (0098) (0101)

Minhota 618 233 1000 0202 0214

(02) (021) (0101) (0090)

















73




HB 0030 0031 -0051 -0016 0033

CAII 0387 0404 0066 0104 0041

MPI 0058 0059 0130 0133 0004

ALB 0046 0047 0072 0075 0004

TF 0605 0627 -0021 0015 0036

GC 0241 0244 0183 0193 0012

Meacutedia 0228 0235 0048 0078 0031


















74













em cada raccedila










75




Portugal



Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0216 (0094)

Mertolenga 1470 (00) 23 (03) 1000 0315 (0097)

Alentejana 1550(00) 23 (03) 1000 0239 (0123)

Mirandesa 1065 (03) 20 (00) 1000 0159(0110)

Espanha

Cachena 710 (00) 23 (03) 1000 0279(0111)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0166 (0107)

Frieiresa 330 (00) 18(03) 750 0177(0112)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0246 (0087)

Rubia Gallega 1845(95) 25 (05) 1000 0215(0110)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0221 (0087)

Sayaguesa 1470 (00) 23 (03) 1000 0320 (0094)

Morucha 1010(00) 23 (03) 1000 0361 (0084)






Tudanca 420 (00) 20 (04) 750 0321 (0109)

Morena del N O 250 (00) 18 (03) 750 0203 (0108)

Frisona 6540 (00) 18 (05) 500 0203 (0130)

De Lidia 1240 (00) 23 (03) 1000 0367(0135)

Retinta 1640 (00) 23 (03) 1000 0338 (0107)

76






Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0229 (0074)

Espanha Cachena 710 (00) 22 (02) 1000 0289 (0087)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0180 (0084)

Frieiresa 330 (00) 18 (02) 800 0180 (0087)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0226(0071)

Rubia Gallega 1812(81) 24 (04) 1000 0223 (0086)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0374 (0168)

Sayaguesa 1470 (00) 22 (02) 1000 0305 (0074)

Morucha 1010 (00) 22 (02) 1000 0353 (0066)















77


8

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15

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80























81


(18)

(14)

(11)

(5)

(3)

Sayaquesa

(39)

[32)

(21)1-

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(49)

(1)

(3)

(18)

(8)

(13)1

(12)

19)

(16T

De Lidia


Tudanca bullMorucha




(65)

Mertolenga -Vianesa

Blanra Cacerefla


i (39)r




82


Morucha

Cachena Sayaquesa



(43) ( 2 8 gt - ^ C a W e l a l




De Lidia Tudanca



83


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(28)

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Minhota Frieiresa




Cachena Limiana



(21)

(18)

(100)

(55)

(15)T r i shyT

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(40) |_Caacute

Alistano Sanabresa

(37)

(61)

(46

(29)

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Limiana Vianesa


(32j~

j2frTL

Frieiresa


Sayaquesa




84


















85
























86




paternidade





proacuteximos anos


sangue e do leite






87

Conclusotildees

5 - CONCLUSOtildeES


















88

Conclusotildees





















89





Porto






Paris 43-58






20 217-220






90



de Leitores









Genetics 21 191-197



93 5131-5135



VIO (1) 10-14









91


















Genetics 26 215-236








-27 Longman

92














Porto














93





pp 103-172 Lisboa






-Holland Publishers





421-426








-18

94




-124









11 21-38











397-401




95




91 2757-2761



London B 256 25-31











Genetics 89 583-590








-276



96



























97










Genetics 61823-831














Survey



98










-501


















99













100

ANEXO

Anexos

















I

Anexos




II

Anexos



CAII 294 035

065

NP 294 H

L

024

076

MPI 290 A

B

C

000

098

002

ALB 294 A

B

V

097

002

001

TF 294 A

Dl

D2

E

057

016

023

004

GC 294 083 017

TTI

Agradecimentos

IacuteNDICE











Origem



211 - Amostragem


















5 - CONCLUSOtildeES


ANEXO


























i






2













1992)
















3





























4





















(figura 112)

5











MASON 1984)












6























Proteiacutenas






7



(BRAEND 1971)





tema

Polimorfismo do DNA
























8






















9
















do VALE 1949)







do VALE 1949)

10












FERNANDES 1996)













li


B



12









parece estaacutevel













13







LEGENDA


ESCALA 11380000


14
























Origem







15






(GARCIA et ai 1981)








(IGLESIAS 1989)









e plasmaacuteticas





raccedilas bovinas

16




211 - Amostragem






Vieira do Minho











17









CP SODl TF

PEPC IDH1

AMY1 AMY1A PGM1

4

LDHB PEPB


6

IADA

ALDH1

CAII

ME1 PGM3 SOD2

NP

10

CAT HBBq22-q27

PGD IALDH2 DIA4

HP GPIq22-q24

MPI iBF GLOl

LDHA MDH2


18


bull HB





1986)







bull CAII-EC4211













19


bull PEPB-EC3412






1992)

bull DIA-EC1643






1992)

bull NP-EC2421







20


bull MDH-ECl 1137








bull PGD-EC11144







bull GPI-EC5319







21


bull MPI-EC5318











bull ALB













22


bull TF
















bull GC










23






bull HB



bull CAII











24


bull ALB



bull TF



obtidos










TF (FERRAND 1995)









25





bull GCcedil







obtidos














26


HB







Acrilamida 28 (pv)


Sacarose


7-9 (PHARMACIA)


PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

300 p1

300 ul


10 ul

70 ul




2

3

30 min

15 min

15 min

Focagem 1500 25 15 2h 30 min




27


bull CAII





amido









respectivamente




28




Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

Quantidades 18 ml

08 ml

2 g

500 |ol

100 ul


10 ul

70 ul




3

5

30 min

15 min

15 min

Focagem 2500 25 8

10

12

30 min

30 min

30 min

bull PEPB



29




pH = 74 NaH2P04 01 M


pH = 74 pontes




bull DIA









1130 M

0400 M

0020 M 0010 M




pH = 60 NaOH

30





ALB






Acrilamida 28 (pv)


Ureia





PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

48 g

250 ni

250 ni

125 ul


30 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

31





TF






Acrilamida 28 (pv)


Sacarose





18 ml

08 ml

2 g

100 ul

500 ul


30 ul

70 ul




Focagem 2500 25

l 20 min

2 10 min

3 10 min

8 30 min

10 30 min

12 30 min

32





GC





Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

437 ul

188 (il


10 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

33









bull HB



Fixaccedilatildeo







bull CAII



34









bull PEPB







bull DIA



horas a 37degC







35


bull NP







bull MDH








bull PGP






0005 M

36


bull GPI







bull MPI








bull ALBeTF



bull GCcedil




37



























38







bull PEPB












e Chianina)

39


+


bull DIA




1992)





40








bull MDH






41


bull PGD










bull HB







IGLESIAS 1989)

42


+ -HBB

HBA

AB AB A A


bull poundAH








nomeadamente





43




CAIIF

| CAIIS


bull NP







44

+

w

FS FS ]


H L L H L L


bull MPI














45



bull ALB




bandas






FERRAND 1995)







ALBA

46












bull TF




(IGLESIAS 1989)





47















amostras




(1991)




adequada







48

















bull QQ





49









mdashGCF

S F S FS S FS F F S FS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10


S1 $ l S- -





50











Total

4 (32) 17

(122) 6

(116) 27


Total

14

(114)

13

(156)

27

^ ^ ^ Filho

Matildee - ^ F

Fenoacutetipos

F f~ (11)

FS 2

(21)

S

Total 3

Fenoacutetipos

FS S

3

(21)

10 5

(61) (40)

1 5

(40) (76)

14 10


Matildee - ^ H L

Fenoacutetipos

H 10 4

(77) (37)

L 5 8

(37) (119)

Total 15 12

51





A 0 0 0 - - - 0

(00) (00) (00) (00)

AB 0 0 0 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

AC 0 0 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

B - 0 - 24 1 - 25

(00) (242) (06) (248)

BC - 0 0 1 0 0 1

(00) (00) (06) (06) (00) (12)

C - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 0 0 0 25 1 0 26




Fenoacutetipos

A 24 2 0 - - - 26

(251) (04) (02) (257)

AB 0 0 0 0 0 -

0

(04) (04) (00) (00) (00) (08)

AG 1 0 0 - 0 0 1

(02) (00) (02) (00) (00) (04)

B - 0 - 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00)

BG - 0 0 0 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

G - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 25 2 0 0 0 0 27

52





Fenoacutetipos

A 6

(51)

1

(14)

4

(21)

1

(03)

12

(89)

ADI 1 2 0 0 0 0 0 - - - 3

(14) (24) (06) (01) (04) (06) (01) (56)

AD2 2 0 5 0 - 0 - 2 0 - 9

(21) (06) (36) (01) (06) (08) (01) (79)

AE 0 0 0 0 - - 0 - 0 0 0

(03) (01) (01) (06) (01) (01) (00) (13) Dl 0

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(07)

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(06) (06) (02) (10) (00) (02) (00) (26) DIE - 0 - 0 0 0 0 - 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (02) (00) (00) (04)

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(01) (01) (00) (00) (01) (02) (00) (05) E 0

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Total 9 3 10 1 1 1 0 2 0 0 27




Fenoacutetipos

1 17 2 19

(156) (31) (187)

2-1 5 2 0 7

(31) (38) (06) (75)

2 _ 1 0 1

(06) (01) (07)

Total 22 5 0 27

53






bull PEPB










N










Jersey 139 - 100

Limousine 24 - 100



54


bull DIA





entre 019 e 021




Portugal



Minhota 62

Espanha

Cachena 71

Caldelana 60

Frieiresa 33

Limiana 39

Rubia Gallega 168

Vianesa 40




Blanca Cacerena 62




Bulgaacuteria

Buacutefalo 122



- 100 Este trabalho

- 100

- 100 a

- 100 IGLESIAS (1989)

- 100

- 100

- 100

- 100

- 100


- 100

- 100 st

- 100 st

- 100

- 100

- 100



55


bull HB







Minhota 62 56 6 0

(561) (58) (01)



tabela 334












56



N



Portugal







Espanha




















Itaacutelia



Bulgaacuteria




G Bretanha


in IGLESIAS (1989)

57






CAII


335




(149) (622) (639)


(200) (710) (620)

Minhota 62 3 13 46

(14) (162) (444)

x2

0651 1 0420

0000 1 0995









58



N


Portugal







Espanha




Limiana 39 083 + 004 017 plusmn 004


Vianesa 40 086 + 004 014 plusmn 004












Bulgaacuteria



Alemanha


Suiacuteccedila



Friburg 223 084 + 002 016+002

in IGLESIAS (1989)

59








080 e 093

bull NP






N

Fenoacutetipos

N NP H NPL



Minhota 62 19 43

60



N



Portugal



Minhota 62 017 + 004 083 + 004

Espanha














Beacutelgica



in IGLESIAS (1989)

MPI








61







(1301) (78) (01)


(1460) (59) (01)

Minhota 61 0 3 0 56 2 0

(00) (29) (01) (561) (19) (00)






N


N MPPA MPPB MPIC










62


ALB


3311




N




Minhota 62 59

(590)

3 (30) (00)



da Bulgaacuteria










63





Portugal







Espanha -




Limiana 39 097 + 002 003 plusmn 002 -


Vianesa 40 093 + 003 007 + 003 -


Moracha 101 089 plusmn 002 011+002 -







Tudanca 42 100 - -


Frisona 97 100 - -


Retinta 164 097 + 001 003 plusmn001 -

Itaacutelia



Beacutelgica





w IGLESIAS (1989)

(Continua)

64




Bulgaacuteria




G Bretanha


Frisia 1422 100 - -

Hereford 215 099 plusmn 001 001+001 -

Jersey 217 100 - -






TF





estudadas







65










66


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Minhota




(945) (419) (45)


(1087) (406) (37)

Minhota 62 54 5 3

(514) (101) (04)

x2

3913 1 0048




espanholas

70





Portugal



Minhota

Alentejana

Mirandesa

Espanha

De Lidia

Frisona

Beacutelgica

Branca e azul

Flemish vermelha


Preta e branca


Sueacutecia

Vermelha e Branca

Frisia

141 018 plusmn0023

153 016 plusmn002

62 009 plusmn 003

028 plusmn 004

97 020 plusmn 003

1306 008 plusmn001

124 015 plusmn002

2323 031 plusmn001

431 016 plusmn001

299 012 plusmn001

299 019 plusmn002

140 006 plusmn 001

1030 039 plusmn001

273 079 plusmn 002

082 plusmn 002

084 plusmn 002

091 plusmn003

072 plusmn 004

080 plusmn 003

092 plusmn 001

085 plusmn 002

069 plusmn 001

084 plusmn 001

088 plusmn 001

081 plusmn002

065 plusmn 003

061 plusmn001

021 plusmn002

029 plusmn 003

Este trabalho

CUNHA (1994)

NOBRE (S data)



GAHNE(1963)


71






GC



Ho He Ho He Ho He

HB 0000 0000 0000 0000 0097 0093

CAH 0411 0441 0464 0464 0210 0262

MPI 0043 0056 0026 0039 0082 0080

ALB 0035 0035 0046 0058 0048 0048

TF 0603 0590 0556 0595 0694 0638

GC 0248 0297 0261 0265 0081 0163













72



populaccedilatildeo




(06) (042) (0100) (0100)


(02) (042) (0098) (0101)

Minhota 618 233 1000 0202 0214

(02) (021) (0101) (0090)

















73




HB 0030 0031 -0051 -0016 0033

CAII 0387 0404 0066 0104 0041

MPI 0058 0059 0130 0133 0004

ALB 0046 0047 0072 0075 0004

TF 0605 0627 -0021 0015 0036

GC 0241 0244 0183 0193 0012

Meacutedia 0228 0235 0048 0078 0031


















74













em cada raccedila










75




Portugal



Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0216 (0094)

Mertolenga 1470 (00) 23 (03) 1000 0315 (0097)

Alentejana 1550(00) 23 (03) 1000 0239 (0123)

Mirandesa 1065 (03) 20 (00) 1000 0159(0110)

Espanha

Cachena 710 (00) 23 (03) 1000 0279(0111)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0166 (0107)

Frieiresa 330 (00) 18(03) 750 0177(0112)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0246 (0087)

Rubia Gallega 1845(95) 25 (05) 1000 0215(0110)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0221 (0087)

Sayaguesa 1470 (00) 23 (03) 1000 0320 (0094)

Morucha 1010(00) 23 (03) 1000 0361 (0084)






Tudanca 420 (00) 20 (04) 750 0321 (0109)

Morena del N O 250 (00) 18 (03) 750 0203 (0108)

Frisona 6540 (00) 18 (05) 500 0203 (0130)

De Lidia 1240 (00) 23 (03) 1000 0367(0135)

Retinta 1640 (00) 23 (03) 1000 0338 (0107)

76






Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0229 (0074)

Espanha Cachena 710 (00) 22 (02) 1000 0289 (0087)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0180 (0084)

Frieiresa 330 (00) 18 (02) 800 0180 (0087)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0226(0071)

Rubia Gallega 1812(81) 24 (04) 1000 0223 (0086)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0374 (0168)

Sayaguesa 1470 (00) 22 (02) 1000 0305 (0074)

Morucha 1010 (00) 22 (02) 1000 0353 (0066)















77


8

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15

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80























81


(18)

(14)

(11)

(5)

(3)

Sayaquesa

(39)

[32)

(21)1-

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(49)

(1)

(3)

(18)

(8)

(13)1

(12)

19)

(16T

De Lidia


Tudanca bullMorucha




(65)

Mertolenga -Vianesa

Blanra Cacerefla


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82


Morucha

Cachena Sayaquesa



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De Lidia Tudanca



83


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Minhota Frieiresa




Cachena Limiana



(21)

(18)

(100)

(55)

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(40) |_Caacute

Alistano Sanabresa

(37)

(61)

(46

(29)

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Limiana Vianesa


(32j~

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Frieiresa


Sayaquesa




84


















85
























86




paternidade





proacuteximos anos


sangue e do leite






87

Conclusotildees

5 - CONCLUSOtildeES


















88

Conclusotildees





















89





Porto






Paris 43-58






20 217-220






90



de Leitores









Genetics 21 191-197



93 5131-5135



VIO (1) 10-14









91


















Genetics 26 215-236








-27 Longman

92














Porto














93





pp 103-172 Lisboa






-Holland Publishers





421-426








-18

94




-124









11 21-38











397-401




95




91 2757-2761



London B 256 25-31











Genetics 89 583-590








-276



96



























97










Genetics 61823-831














Survey



98










-501


















99













100

ANEXO

Anexos

















I

Anexos




II

Anexos



CAII 294 035

065

NP 294 H

L

024

076

MPI 290 A

B

C

000

098

002

ALB 294 A

B

V

097

002

001

TF 294 A

Dl

D2

E

057

016

023

004

GC 294 083 017

TTI

Agradecimentos

IacuteNDICE











Origem



211 - Amostragem


















5 - CONCLUSOtildeES


ANEXO







2













1992)
















3





























4





















(figura 112)

5











MASON 1984)












6























Proteiacutenas






7



(BRAEND 1971)





tema

Polimorfismo do DNA
























8






















9
















do VALE 1949)







do VALE 1949)

10












FERNANDES 1996)













li


B



12









parece estaacutevel













13







LEGENDA


ESCALA 11380000


14
























Origem







15






(GARCIA et ai 1981)








(IGLESIAS 1989)









e plasmaacuteticas





raccedilas bovinas

16




211 - Amostragem






Vieira do Minho











17









CP SODl TF

PEPC IDH1

AMY1 AMY1A PGM1

4

LDHB PEPB


6

IADA

ALDH1

CAII

ME1 PGM3 SOD2

NP

10

CAT HBBq22-q27

PGD IALDH2 DIA4

HP GPIq22-q24

MPI iBF GLOl

LDHA MDH2


18


bull HB





1986)







bull CAII-EC4211













19


bull PEPB-EC3412






1992)

bull DIA-EC1643






1992)

bull NP-EC2421







20


bull MDH-ECl 1137








bull PGD-EC11144







bull GPI-EC5319







21


bull MPI-EC5318











bull ALB













22


bull TF
















bull GC










23






bull HB



bull CAII











24


bull ALB



bull TF



obtidos










TF (FERRAND 1995)









25





bull GCcedil







obtidos














26


HB







Acrilamida 28 (pv)


Sacarose


7-9 (PHARMACIA)


PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

300 p1

300 ul


10 ul

70 ul




2

3

30 min

15 min

15 min

Focagem 1500 25 15 2h 30 min




27


bull CAII





amido









respectivamente




28




Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

Quantidades 18 ml

08 ml

2 g

500 |ol

100 ul


10 ul

70 ul




3

5

30 min

15 min

15 min

Focagem 2500 25 8

10

12

30 min

30 min

30 min

bull PEPB



29




pH = 74 NaH2P04 01 M


pH = 74 pontes




bull DIA









1130 M

0400 M

0020 M 0010 M




pH = 60 NaOH

30





ALB






Acrilamida 28 (pv)


Ureia





PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

48 g

250 ni

250 ni

125 ul


30 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

31





TF






Acrilamida 28 (pv)


Sacarose





18 ml

08 ml

2 g

100 ul

500 ul


30 ul

70 ul




Focagem 2500 25

l 20 min

2 10 min

3 10 min

8 30 min

10 30 min

12 30 min

32





GC





Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

437 ul

188 (il


10 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

33









bull HB



Fixaccedilatildeo







bull CAII



34









bull PEPB







bull DIA



horas a 37degC







35


bull NP







bull MDH








bull PGP






0005 M

36


bull GPI







bull MPI








bull ALBeTF



bull GCcedil




37



























38







bull PEPB












e Chianina)

39


+


bull DIA




1992)





40








bull MDH






41


bull PGD










bull HB







IGLESIAS 1989)

42


+ -HBB

HBA

AB AB A A


bull poundAH








nomeadamente





43




CAIIF

| CAIIS


bull NP







44

+

w

FS FS ]


H L L H L L


bull MPI














45



bull ALB




bandas






FERRAND 1995)







ALBA

46












bull TF




(IGLESIAS 1989)





47















amostras




(1991)




adequada







48

















bull QQ





49









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50











Total

4 (32) 17

(122) 6

(116) 27


Total

14

(114)

13

(156)

27

^ ^ ^ Filho

Matildee - ^ F

Fenoacutetipos

F f~ (11)

FS 2

(21)

S

Total 3

Fenoacutetipos

FS S

3

(21)

10 5

(61) (40)

1 5

(40) (76)

14 10


Matildee - ^ H L

Fenoacutetipos

H 10 4

(77) (37)

L 5 8

(37) (119)

Total 15 12

51





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(00) (00) (00) (00)

AB 0 0 0 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

AC 0 0 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

B - 0 - 24 1 - 25

(00) (242) (06) (248)

BC - 0 0 1 0 0 1

(00) (00) (06) (06) (00) (12)

C - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 0 0 0 25 1 0 26




Fenoacutetipos

A 24 2 0 - - - 26

(251) (04) (02) (257)

AB 0 0 0 0 0 -

0

(04) (04) (00) (00) (00) (08)

AG 1 0 0 - 0 0 1

(02) (00) (02) (00) (00) (04)

B - 0 - 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00)

BG - 0 0 0 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

G - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 25 2 0 0 0 0 27

52





Fenoacutetipos

A 6

(51)

1

(14)

4

(21)

1

(03)

12

(89)

ADI 1 2 0 0 0 0 0 - - - 3

(14) (24) (06) (01) (04) (06) (01) (56)

AD2 2 0 5 0 - 0 - 2 0 - 9

(21) (06) (36) (01) (06) (08) (01) (79)

AE 0 0 0 0 - - 0 - 0 0 0

(03) (01) (01) (06) (01) (01) (00) (13) Dl 0

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1

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(07)

D1D2 - 0 1 - 0 0 0 0 0 - 1

(06) (06) (02) (10) (00) (02) (00) (26) DIE - 0 - 0 0 0 0 - 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (02) (00) (00) (04)

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(01) (01) (00) (00) (01) (02) (00) (05) E 0

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(00)

0

(00)

Total 9 3 10 1 1 1 0 2 0 0 27




Fenoacutetipos

1 17 2 19

(156) (31) (187)

2-1 5 2 0 7

(31) (38) (06) (75)

2 _ 1 0 1

(06) (01) (07)

Total 22 5 0 27

53






bull PEPB










N










Jersey 139 - 100

Limousine 24 - 100



54


bull DIA





entre 019 e 021




Portugal



Minhota 62

Espanha

Cachena 71

Caldelana 60

Frieiresa 33

Limiana 39

Rubia Gallega 168

Vianesa 40




Blanca Cacerena 62




Bulgaacuteria

Buacutefalo 122



- 100 Este trabalho

- 100

- 100 a

- 100 IGLESIAS (1989)

- 100

- 100

- 100

- 100

- 100


- 100

- 100 st

- 100 st

- 100

- 100

- 100



55


bull HB







Minhota 62 56 6 0

(561) (58) (01)



tabela 334












56



N



Portugal







Espanha




















Itaacutelia



Bulgaacuteria




G Bretanha


in IGLESIAS (1989)

57






CAII


335




(149) (622) (639)


(200) (710) (620)

Minhota 62 3 13 46

(14) (162) (444)

x2

0651 1 0420

0000 1 0995









58



N


Portugal







Espanha




Limiana 39 083 + 004 017 plusmn 004


Vianesa 40 086 + 004 014 plusmn 004












Bulgaacuteria



Alemanha


Suiacuteccedila



Friburg 223 084 + 002 016+002

in IGLESIAS (1989)

59








080 e 093

bull NP






N

Fenoacutetipos

N NP H NPL



Minhota 62 19 43

60



N



Portugal



Minhota 62 017 + 004 083 + 004

Espanha














Beacutelgica



in IGLESIAS (1989)

MPI








61







(1301) (78) (01)


(1460) (59) (01)

Minhota 61 0 3 0 56 2 0

(00) (29) (01) (561) (19) (00)






N


N MPPA MPPB MPIC










62


ALB


3311




N




Minhota 62 59

(590)

3 (30) (00)



da Bulgaacuteria










63





Portugal







Espanha -




Limiana 39 097 + 002 003 plusmn 002 -


Vianesa 40 093 + 003 007 + 003 -


Moracha 101 089 plusmn 002 011+002 -







Tudanca 42 100 - -


Frisona 97 100 - -


Retinta 164 097 + 001 003 plusmn001 -

Itaacutelia



Beacutelgica





w IGLESIAS (1989)

(Continua)

64




Bulgaacuteria




G Bretanha


Frisia 1422 100 - -

Hereford 215 099 plusmn 001 001+001 -

Jersey 217 100 - -






TF





estudadas







65










66


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69


bull GC









Minhota




(945) (419) (45)


(1087) (406) (37)

Minhota 62 54 5 3

(514) (101) (04)

x2

3913 1 0048




espanholas

70





Portugal



Minhota

Alentejana

Mirandesa

Espanha

De Lidia

Frisona

Beacutelgica

Branca e azul

Flemish vermelha


Preta e branca


Sueacutecia

Vermelha e Branca

Frisia

141 018 plusmn0023

153 016 plusmn002

62 009 plusmn 003

028 plusmn 004

97 020 plusmn 003

1306 008 plusmn001

124 015 plusmn002

2323 031 plusmn001

431 016 plusmn001

299 012 plusmn001

299 019 plusmn002

140 006 plusmn 001

1030 039 plusmn001

273 079 plusmn 002

082 plusmn 002

084 plusmn 002

091 plusmn003

072 plusmn 004

080 plusmn 003

092 plusmn 001

085 plusmn 002

069 plusmn 001

084 plusmn 001

088 plusmn 001

081 plusmn002

065 plusmn 003

061 plusmn001

021 plusmn002

029 plusmn 003

Este trabalho

CUNHA (1994)

NOBRE (S data)



GAHNE(1963)


71






GC



Ho He Ho He Ho He

HB 0000 0000 0000 0000 0097 0093

CAH 0411 0441 0464 0464 0210 0262

MPI 0043 0056 0026 0039 0082 0080

ALB 0035 0035 0046 0058 0048 0048

TF 0603 0590 0556 0595 0694 0638

GC 0248 0297 0261 0265 0081 0163













72



populaccedilatildeo




(06) (042) (0100) (0100)


(02) (042) (0098) (0101)

Minhota 618 233 1000 0202 0214

(02) (021) (0101) (0090)

















73




HB 0030 0031 -0051 -0016 0033

CAII 0387 0404 0066 0104 0041

MPI 0058 0059 0130 0133 0004

ALB 0046 0047 0072 0075 0004

TF 0605 0627 -0021 0015 0036

GC 0241 0244 0183 0193 0012

Meacutedia 0228 0235 0048 0078 0031


















74













em cada raccedila










75




Portugal



Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0216 (0094)

Mertolenga 1470 (00) 23 (03) 1000 0315 (0097)

Alentejana 1550(00) 23 (03) 1000 0239 (0123)

Mirandesa 1065 (03) 20 (00) 1000 0159(0110)

Espanha

Cachena 710 (00) 23 (03) 1000 0279(0111)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0166 (0107)

Frieiresa 330 (00) 18(03) 750 0177(0112)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0246 (0087)

Rubia Gallega 1845(95) 25 (05) 1000 0215(0110)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0221 (0087)

Sayaguesa 1470 (00) 23 (03) 1000 0320 (0094)

Morucha 1010(00) 23 (03) 1000 0361 (0084)






Tudanca 420 (00) 20 (04) 750 0321 (0109)

Morena del N O 250 (00) 18 (03) 750 0203 (0108)

Frisona 6540 (00) 18 (05) 500 0203 (0130)

De Lidia 1240 (00) 23 (03) 1000 0367(0135)

Retinta 1640 (00) 23 (03) 1000 0338 (0107)

76






Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0229 (0074)

Espanha Cachena 710 (00) 22 (02) 1000 0289 (0087)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0180 (0084)

Frieiresa 330 (00) 18 (02) 800 0180 (0087)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0226(0071)

Rubia Gallega 1812(81) 24 (04) 1000 0223 (0086)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0374 (0168)

Sayaguesa 1470 (00) 22 (02) 1000 0305 (0074)

Morucha 1010 (00) 22 (02) 1000 0353 (0066)















77


8

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15

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80























81


(18)

(14)

(11)

(5)

(3)

Sayaquesa

(39)

[32)

(21)1-

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(49)

(1)

(3)

(18)

(8)

(13)1

(12)

19)

(16T

De Lidia


Tudanca bullMorucha




(65)

Mertolenga -Vianesa

Blanra Cacerefla


i (39)r




82


Morucha

Cachena Sayaquesa



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De Lidia Tudanca



83


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Minhota Frieiresa




Cachena Limiana



(21)

(18)

(100)

(55)

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(40) |_Caacute

Alistano Sanabresa

(37)

(61)

(46

(29)

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Limiana Vianesa


(32j~

j2frTL

Frieiresa


Sayaquesa




84


















85
























86




paternidade





proacuteximos anos


sangue e do leite






87

Conclusotildees

5 - CONCLUSOtildeES


















88

Conclusotildees





















89





Porto






Paris 43-58






20 217-220






90



de Leitores









Genetics 21 191-197



93 5131-5135



VIO (1) 10-14









91


















Genetics 26 215-236








-27 Longman

92














Porto














93





pp 103-172 Lisboa






-Holland Publishers





421-426








-18

94




-124









11 21-38











397-401




95




91 2757-2761



London B 256 25-31











Genetics 89 583-590








-276



96



























97










Genetics 61823-831














Survey



98










-501


















99













100

ANEXO

Anexos

















I

Anexos




II

Anexos



CAII 294 035

065

NP 294 H

L

024

076

MPI 290 A

B

C

000

098

002

ALB 294 A

B

V

097

002

001

TF 294 A

Dl

D2

E

057

016

023

004

GC 294 083 017

TTI

Agradecimentos

IacuteNDICE











Origem



211 - Amostragem


















5 - CONCLUSOtildeES


ANEXO














1992)
















3





























4





















(figura 112)

5











MASON 1984)












6























Proteiacutenas






7



(BRAEND 1971)





tema

Polimorfismo do DNA
























8






















9
















do VALE 1949)







do VALE 1949)

10












FERNANDES 1996)













li


B



12









parece estaacutevel













13







LEGENDA


ESCALA 11380000


14
























Origem







15






(GARCIA et ai 1981)








(IGLESIAS 1989)









e plasmaacuteticas





raccedilas bovinas

16




211 - Amostragem






Vieira do Minho











17









CP SODl TF

PEPC IDH1

AMY1 AMY1A PGM1

4

LDHB PEPB


6

IADA

ALDH1

CAII

ME1 PGM3 SOD2

NP

10

CAT HBBq22-q27

PGD IALDH2 DIA4

HP GPIq22-q24

MPI iBF GLOl

LDHA MDH2


18


bull HB





1986)







bull CAII-EC4211













19


bull PEPB-EC3412






1992)

bull DIA-EC1643






1992)

bull NP-EC2421







20


bull MDH-ECl 1137








bull PGD-EC11144







bull GPI-EC5319







21


bull MPI-EC5318











bull ALB













22


bull TF
















bull GC










23






bull HB



bull CAII











24


bull ALB



bull TF



obtidos










TF (FERRAND 1995)









25





bull GCcedil







obtidos














26


HB







Acrilamida 28 (pv)


Sacarose


7-9 (PHARMACIA)


PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

300 p1

300 ul


10 ul

70 ul




2

3

30 min

15 min

15 min

Focagem 1500 25 15 2h 30 min




27


bull CAII





amido









respectivamente




28




Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

Quantidades 18 ml

08 ml

2 g

500 |ol

100 ul


10 ul

70 ul




3

5

30 min

15 min

15 min

Focagem 2500 25 8

10

12

30 min

30 min

30 min

bull PEPB



29




pH = 74 NaH2P04 01 M


pH = 74 pontes




bull DIA









1130 M

0400 M

0020 M 0010 M




pH = 60 NaOH

30





ALB






Acrilamida 28 (pv)


Ureia





PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

48 g

250 ni

250 ni

125 ul


30 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

31





TF






Acrilamida 28 (pv)


Sacarose





18 ml

08 ml

2 g

100 ul

500 ul


30 ul

70 ul




Focagem 2500 25

l 20 min

2 10 min

3 10 min

8 30 min

10 30 min

12 30 min

32





GC





Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

437 ul

188 (il


10 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

33









bull HB



Fixaccedilatildeo







bull CAII



34









bull PEPB







bull DIA



horas a 37degC







35


bull NP







bull MDH








bull PGP






0005 M

36


bull GPI







bull MPI








bull ALBeTF



bull GCcedil




37



























38







bull PEPB












e Chianina)

39


+


bull DIA




1992)





40








bull MDH






41


bull PGD










bull HB







IGLESIAS 1989)

42


+ -HBB

HBA

AB AB A A


bull poundAH








nomeadamente





43




CAIIF

| CAIIS


bull NP







44

+

w

FS FS ]


H L L H L L


bull MPI














45



bull ALB




bandas






FERRAND 1995)







ALBA

46












bull TF




(IGLESIAS 1989)





47















amostras




(1991)




adequada







48

















bull QQ





49









mdashGCF

S F S FS S FS F F S FS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10


S1 $ l S- -





50











Total

4 (32) 17

(122) 6

(116) 27


Total

14

(114)

13

(156)

27

^ ^ ^ Filho

Matildee - ^ F

Fenoacutetipos

F f~ (11)

FS 2

(21)

S

Total 3

Fenoacutetipos

FS S

3

(21)

10 5

(61) (40)

1 5

(40) (76)

14 10


Matildee - ^ H L

Fenoacutetipos

H 10 4

(77) (37)

L 5 8

(37) (119)

Total 15 12

51





A 0 0 0 - - - 0

(00) (00) (00) (00)

AB 0 0 0 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

AC 0 0 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

B - 0 - 24 1 - 25

(00) (242) (06) (248)

BC - 0 0 1 0 0 1

(00) (00) (06) (06) (00) (12)

C - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 0 0 0 25 1 0 26




Fenoacutetipos

A 24 2 0 - - - 26

(251) (04) (02) (257)

AB 0 0 0 0 0 -

0

(04) (04) (00) (00) (00) (08)

AG 1 0 0 - 0 0 1

(02) (00) (02) (00) (00) (04)

B - 0 - 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00)

BG - 0 0 0 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

G - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 25 2 0 0 0 0 27

52





Fenoacutetipos

A 6

(51)

1

(14)

4

(21)

1

(03)

12

(89)

ADI 1 2 0 0 0 0 0 - - - 3

(14) (24) (06) (01) (04) (06) (01) (56)

AD2 2 0 5 0 - 0 - 2 0 - 9

(21) (06) (36) (01) (06) (08) (01) (79)

AE 0 0 0 0 - - 0 - 0 0 0

(03) (01) (01) (06) (01) (01) (00) (13) Dl 0

(04) 1

(01)

1

(02)

0

(00)

- 2

(07)

D1D2 - 0 1 - 0 0 0 0 0 - 1

(06) (06) (02) (10) (00) (02) (00) (26) DIE - 0 - 0 0 0 0 - 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (02) (00) (00) (04)

D2 0

(08) 0

(02)

0

(03)

0

(01)

- 0

(14) D2E - - 0 0 - 0 0 0 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (01) (02) (00) (05) E 0

(00) 0

(00)

0

(00)

0

(00)

0

(00)

Total 9 3 10 1 1 1 0 2 0 0 27




Fenoacutetipos

1 17 2 19

(156) (31) (187)

2-1 5 2 0 7

(31) (38) (06) (75)

2 _ 1 0 1

(06) (01) (07)

Total 22 5 0 27

53






bull PEPB










N










Jersey 139 - 100

Limousine 24 - 100



54


bull DIA





entre 019 e 021




Portugal



Minhota 62

Espanha

Cachena 71

Caldelana 60

Frieiresa 33

Limiana 39

Rubia Gallega 168

Vianesa 40




Blanca Cacerena 62




Bulgaacuteria

Buacutefalo 122



- 100 Este trabalho

- 100

- 100 a

- 100 IGLESIAS (1989)

- 100

- 100

- 100

- 100

- 100


- 100

- 100 st

- 100 st

- 100

- 100

- 100



55


bull HB







Minhota 62 56 6 0

(561) (58) (01)



tabela 334












56



N



Portugal







Espanha




















Itaacutelia



Bulgaacuteria




G Bretanha


in IGLESIAS (1989)

57






CAII


335




(149) (622) (639)


(200) (710) (620)

Minhota 62 3 13 46

(14) (162) (444)

x2

0651 1 0420

0000 1 0995









58



N


Portugal







Espanha




Limiana 39 083 + 004 017 plusmn 004


Vianesa 40 086 + 004 014 plusmn 004












Bulgaacuteria



Alemanha


Suiacuteccedila



Friburg 223 084 + 002 016+002

in IGLESIAS (1989)

59








080 e 093

bull NP






N

Fenoacutetipos

N NP H NPL



Minhota 62 19 43

60



N



Portugal



Minhota 62 017 + 004 083 + 004

Espanha














Beacutelgica



in IGLESIAS (1989)

MPI








61







(1301) (78) (01)


(1460) (59) (01)

Minhota 61 0 3 0 56 2 0

(00) (29) (01) (561) (19) (00)






N


N MPPA MPPB MPIC










62


ALB


3311




N




Minhota 62 59

(590)

3 (30) (00)



da Bulgaacuteria










63





Portugal







Espanha -




Limiana 39 097 + 002 003 plusmn 002 -


Vianesa 40 093 + 003 007 + 003 -


Moracha 101 089 plusmn 002 011+002 -







Tudanca 42 100 - -


Frisona 97 100 - -


Retinta 164 097 + 001 003 plusmn001 -

Itaacutelia



Beacutelgica





w IGLESIAS (1989)

(Continua)

64




Bulgaacuteria




G Bretanha


Frisia 1422 100 - -

Hereford 215 099 plusmn 001 001+001 -

Jersey 217 100 - -






TF





estudadas







65










66


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69


bull GC









Minhota




(945) (419) (45)


(1087) (406) (37)

Minhota 62 54 5 3

(514) (101) (04)

x2

3913 1 0048




espanholas

70





Portugal



Minhota

Alentejana

Mirandesa

Espanha

De Lidia

Frisona

Beacutelgica

Branca e azul

Flemish vermelha


Preta e branca


Sueacutecia

Vermelha e Branca

Frisia

141 018 plusmn0023

153 016 plusmn002

62 009 plusmn 003

028 plusmn 004

97 020 plusmn 003

1306 008 plusmn001

124 015 plusmn002

2323 031 plusmn001

431 016 plusmn001

299 012 plusmn001

299 019 plusmn002

140 006 plusmn 001

1030 039 plusmn001

273 079 plusmn 002

082 plusmn 002

084 plusmn 002

091 plusmn003

072 plusmn 004

080 plusmn 003

092 plusmn 001

085 plusmn 002

069 plusmn 001

084 plusmn 001

088 plusmn 001

081 plusmn002

065 plusmn 003

061 plusmn001

021 plusmn002

029 plusmn 003

Este trabalho

CUNHA (1994)

NOBRE (S data)



GAHNE(1963)


71






GC



Ho He Ho He Ho He

HB 0000 0000 0000 0000 0097 0093

CAH 0411 0441 0464 0464 0210 0262

MPI 0043 0056 0026 0039 0082 0080

ALB 0035 0035 0046 0058 0048 0048

TF 0603 0590 0556 0595 0694 0638

GC 0248 0297 0261 0265 0081 0163













72



populaccedilatildeo




(06) (042) (0100) (0100)


(02) (042) (0098) (0101)

Minhota 618 233 1000 0202 0214

(02) (021) (0101) (0090)

















73




HB 0030 0031 -0051 -0016 0033

CAII 0387 0404 0066 0104 0041

MPI 0058 0059 0130 0133 0004

ALB 0046 0047 0072 0075 0004

TF 0605 0627 -0021 0015 0036

GC 0241 0244 0183 0193 0012

Meacutedia 0228 0235 0048 0078 0031


















74













em cada raccedila










75




Portugal



Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0216 (0094)

Mertolenga 1470 (00) 23 (03) 1000 0315 (0097)

Alentejana 1550(00) 23 (03) 1000 0239 (0123)

Mirandesa 1065 (03) 20 (00) 1000 0159(0110)

Espanha

Cachena 710 (00) 23 (03) 1000 0279(0111)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0166 (0107)

Frieiresa 330 (00) 18(03) 750 0177(0112)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0246 (0087)

Rubia Gallega 1845(95) 25 (05) 1000 0215(0110)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0221 (0087)

Sayaguesa 1470 (00) 23 (03) 1000 0320 (0094)

Morucha 1010(00) 23 (03) 1000 0361 (0084)






Tudanca 420 (00) 20 (04) 750 0321 (0109)

Morena del N O 250 (00) 18 (03) 750 0203 (0108)

Frisona 6540 (00) 18 (05) 500 0203 (0130)

De Lidia 1240 (00) 23 (03) 1000 0367(0135)

Retinta 1640 (00) 23 (03) 1000 0338 (0107)

76






Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0229 (0074)

Espanha Cachena 710 (00) 22 (02) 1000 0289 (0087)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0180 (0084)

Frieiresa 330 (00) 18 (02) 800 0180 (0087)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0226(0071)

Rubia Gallega 1812(81) 24 (04) 1000 0223 (0086)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0374 (0168)

Sayaguesa 1470 (00) 22 (02) 1000 0305 (0074)

Morucha 1010 (00) 22 (02) 1000 0353 (0066)















77


8

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81


(18)

(14)

(11)

(5)

(3)

Sayaquesa

(39)

[32)

(21)1-

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(49)

(1)

(3)

(18)

(8)

(13)1

(12)

19)

(16T

De Lidia


Tudanca bullMorucha




(65)

Mertolenga -Vianesa

Blanra Cacerefla


i (39)r




82


Morucha

Cachena Sayaquesa



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De Lidia Tudanca



83


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(28)

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Minhota Frieiresa




Cachena Limiana



(21)

(18)

(100)

(55)

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(40) |_Caacute

Alistano Sanabresa

(37)

(61)

(46

(29)

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Limiana Vianesa


(32j~

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Frieiresa


Sayaquesa




84


















85
























86




paternidade





proacuteximos anos


sangue e do leite






87

Conclusotildees

5 - CONCLUSOtildeES


















88

Conclusotildees





















89





Porto






Paris 43-58






20 217-220






90



de Leitores









Genetics 21 191-197



93 5131-5135



VIO (1) 10-14









91


















Genetics 26 215-236








-27 Longman

92














Porto














93





pp 103-172 Lisboa






-Holland Publishers





421-426








-18

94




-124









11 21-38











397-401




95




91 2757-2761



London B 256 25-31











Genetics 89 583-590








-276



96



























97










Genetics 61823-831














Survey



98










-501


















99













100

ANEXO

Anexos

















I

Anexos




II

Anexos



CAII 294 035

065

NP 294 H

L

024

076

MPI 290 A

B

C

000

098

002

ALB 294 A

B

V

097

002

001

TF 294 A

Dl

D2

E

057

016

023

004

GC 294 083 017

TTI

Agradecimentos

IacuteNDICE











Origem



211 - Amostragem


















5 - CONCLUSOtildeES


ANEXO






























4





















(figura 112)

5











MASON 1984)












6























Proteiacutenas






7



(BRAEND 1971)





tema

Polimorfismo do DNA
























8






















9
















do VALE 1949)







do VALE 1949)

10












FERNANDES 1996)













li


B



12









parece estaacutevel













13







LEGENDA


ESCALA 11380000


14
























Origem







15






(GARCIA et ai 1981)








(IGLESIAS 1989)









e plasmaacuteticas





raccedilas bovinas

16




211 - Amostragem






Vieira do Minho











17









CP SODl TF

PEPC IDH1

AMY1 AMY1A PGM1

4

LDHB PEPB


6

IADA

ALDH1

CAII

ME1 PGM3 SOD2

NP

10

CAT HBBq22-q27

PGD IALDH2 DIA4

HP GPIq22-q24

MPI iBF GLOl

LDHA MDH2


18


bull HB





1986)







bull CAII-EC4211













19


bull PEPB-EC3412






1992)

bull DIA-EC1643






1992)

bull NP-EC2421







20


bull MDH-ECl 1137








bull PGD-EC11144







bull GPI-EC5319







21


bull MPI-EC5318











bull ALB













22


bull TF
















bull GC










23






bull HB



bull CAII











24


bull ALB



bull TF



obtidos










TF (FERRAND 1995)









25





bull GCcedil







obtidos














26


HB







Acrilamida 28 (pv)


Sacarose


7-9 (PHARMACIA)


PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

300 p1

300 ul


10 ul

70 ul




2

3

30 min

15 min

15 min

Focagem 1500 25 15 2h 30 min




27


bull CAII





amido









respectivamente




28




Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

Quantidades 18 ml

08 ml

2 g

500 |ol

100 ul


10 ul

70 ul




3

5

30 min

15 min

15 min

Focagem 2500 25 8

10

12

30 min

30 min

30 min

bull PEPB



29




pH = 74 NaH2P04 01 M


pH = 74 pontes




bull DIA









1130 M

0400 M

0020 M 0010 M




pH = 60 NaOH

30





ALB






Acrilamida 28 (pv)


Ureia





PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

48 g

250 ni

250 ni

125 ul


30 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

31





TF






Acrilamida 28 (pv)


Sacarose





18 ml

08 ml

2 g

100 ul

500 ul


30 ul

70 ul




Focagem 2500 25

l 20 min

2 10 min

3 10 min

8 30 min

10 30 min

12 30 min

32





GC





Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

437 ul

188 (il


10 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

33









bull HB



Fixaccedilatildeo







bull CAII



34









bull PEPB







bull DIA



horas a 37degC







35


bull NP







bull MDH








bull PGP






0005 M

36


bull GPI







bull MPI








bull ALBeTF



bull GCcedil




37



























38







bull PEPB












e Chianina)

39


+


bull DIA




1992)





40








bull MDH






41


bull PGD










bull HB







IGLESIAS 1989)

42


+ -HBB

HBA

AB AB A A


bull poundAH








nomeadamente





43




CAIIF

| CAIIS


bull NP







44

+

w

FS FS ]


H L L H L L


bull MPI














45



bull ALB




bandas






FERRAND 1995)







ALBA

46












bull TF




(IGLESIAS 1989)





47















amostras




(1991)




adequada







48

















bull QQ





49









mdashGCF

S F S FS S FS F F S FS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10


S1 $ l S- -





50











Total

4 (32) 17

(122) 6

(116) 27


Total

14

(114)

13

(156)

27

^ ^ ^ Filho

Matildee - ^ F

Fenoacutetipos

F f~ (11)

FS 2

(21)

S

Total 3

Fenoacutetipos

FS S

3

(21)

10 5

(61) (40)

1 5

(40) (76)

14 10


Matildee - ^ H L

Fenoacutetipos

H 10 4

(77) (37)

L 5 8

(37) (119)

Total 15 12

51





A 0 0 0 - - - 0

(00) (00) (00) (00)

AB 0 0 0 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

AC 0 0 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

B - 0 - 24 1 - 25

(00) (242) (06) (248)

BC - 0 0 1 0 0 1

(00) (00) (06) (06) (00) (12)

C - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 0 0 0 25 1 0 26




Fenoacutetipos

A 24 2 0 - - - 26

(251) (04) (02) (257)

AB 0 0 0 0 0 -

0

(04) (04) (00) (00) (00) (08)

AG 1 0 0 - 0 0 1

(02) (00) (02) (00) (00) (04)

B - 0 - 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00)

BG - 0 0 0 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

G - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 25 2 0 0 0 0 27

52





Fenoacutetipos

A 6

(51)

1

(14)

4

(21)

1

(03)

12

(89)

ADI 1 2 0 0 0 0 0 - - - 3

(14) (24) (06) (01) (04) (06) (01) (56)

AD2 2 0 5 0 - 0 - 2 0 - 9

(21) (06) (36) (01) (06) (08) (01) (79)

AE 0 0 0 0 - - 0 - 0 0 0

(03) (01) (01) (06) (01) (01) (00) (13) Dl 0

(04) 1

(01)

1

(02)

0

(00)

- 2

(07)

D1D2 - 0 1 - 0 0 0 0 0 - 1

(06) (06) (02) (10) (00) (02) (00) (26) DIE - 0 - 0 0 0 0 - 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (02) (00) (00) (04)

D2 0

(08) 0

(02)

0

(03)

0

(01)

- 0

(14) D2E - - 0 0 - 0 0 0 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (01) (02) (00) (05) E 0

(00) 0

(00)

0

(00)

0

(00)

0

(00)

Total 9 3 10 1 1 1 0 2 0 0 27




Fenoacutetipos

1 17 2 19

(156) (31) (187)

2-1 5 2 0 7

(31) (38) (06) (75)

2 _ 1 0 1

(06) (01) (07)

Total 22 5 0 27

53






bull PEPB










N










Jersey 139 - 100

Limousine 24 - 100



54


bull DIA





entre 019 e 021




Portugal



Minhota 62

Espanha

Cachena 71

Caldelana 60

Frieiresa 33

Limiana 39

Rubia Gallega 168

Vianesa 40




Blanca Cacerena 62




Bulgaacuteria

Buacutefalo 122



- 100 Este trabalho

- 100

- 100 a

- 100 IGLESIAS (1989)

- 100

- 100

- 100

- 100

- 100


- 100

- 100 st

- 100 st

- 100

- 100

- 100



55


bull HB







Minhota 62 56 6 0

(561) (58) (01)



tabela 334












56



N



Portugal







Espanha




















Itaacutelia



Bulgaacuteria




G Bretanha


in IGLESIAS (1989)

57






CAII


335




(149) (622) (639)


(200) (710) (620)

Minhota 62 3 13 46

(14) (162) (444)

x2

0651 1 0420

0000 1 0995









58



N


Portugal







Espanha




Limiana 39 083 + 004 017 plusmn 004


Vianesa 40 086 + 004 014 plusmn 004












Bulgaacuteria



Alemanha


Suiacuteccedila



Friburg 223 084 + 002 016+002

in IGLESIAS (1989)

59








080 e 093

bull NP






N

Fenoacutetipos

N NP H NPL



Minhota 62 19 43

60



N



Portugal



Minhota 62 017 + 004 083 + 004

Espanha














Beacutelgica



in IGLESIAS (1989)

MPI








61







(1301) (78) (01)


(1460) (59) (01)

Minhota 61 0 3 0 56 2 0

(00) (29) (01) (561) (19) (00)






N


N MPPA MPPB MPIC










62


ALB


3311




N




Minhota 62 59

(590)

3 (30) (00)



da Bulgaacuteria










63





Portugal







Espanha -




Limiana 39 097 + 002 003 plusmn 002 -


Vianesa 40 093 + 003 007 + 003 -


Moracha 101 089 plusmn 002 011+002 -







Tudanca 42 100 - -


Frisona 97 100 - -


Retinta 164 097 + 001 003 plusmn001 -

Itaacutelia



Beacutelgica





w IGLESIAS (1989)

(Continua)

64




Bulgaacuteria




G Bretanha


Frisia 1422 100 - -

Hereford 215 099 plusmn 001 001+001 -

Jersey 217 100 - -






TF





estudadas







65










66


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69


bull GC









Minhota




(945) (419) (45)


(1087) (406) (37)

Minhota 62 54 5 3

(514) (101) (04)

x2

3913 1 0048




espanholas

70





Portugal



Minhota

Alentejana

Mirandesa

Espanha

De Lidia

Frisona

Beacutelgica

Branca e azul

Flemish vermelha


Preta e branca


Sueacutecia

Vermelha e Branca

Frisia

141 018 plusmn0023

153 016 plusmn002

62 009 plusmn 003

028 plusmn 004

97 020 plusmn 003

1306 008 plusmn001

124 015 plusmn002

2323 031 plusmn001

431 016 plusmn001

299 012 plusmn001

299 019 plusmn002

140 006 plusmn 001

1030 039 plusmn001

273 079 plusmn 002

082 plusmn 002

084 plusmn 002

091 plusmn003

072 plusmn 004

080 plusmn 003

092 plusmn 001

085 plusmn 002

069 plusmn 001

084 plusmn 001

088 plusmn 001

081 plusmn002

065 plusmn 003

061 plusmn001

021 plusmn002

029 plusmn 003

Este trabalho

CUNHA (1994)

NOBRE (S data)



GAHNE(1963)


71






GC



Ho He Ho He Ho He

HB 0000 0000 0000 0000 0097 0093

CAH 0411 0441 0464 0464 0210 0262

MPI 0043 0056 0026 0039 0082 0080

ALB 0035 0035 0046 0058 0048 0048

TF 0603 0590 0556 0595 0694 0638

GC 0248 0297 0261 0265 0081 0163













72



populaccedilatildeo




(06) (042) (0100) (0100)


(02) (042) (0098) (0101)

Minhota 618 233 1000 0202 0214

(02) (021) (0101) (0090)

















73




HB 0030 0031 -0051 -0016 0033

CAII 0387 0404 0066 0104 0041

MPI 0058 0059 0130 0133 0004

ALB 0046 0047 0072 0075 0004

TF 0605 0627 -0021 0015 0036

GC 0241 0244 0183 0193 0012

Meacutedia 0228 0235 0048 0078 0031


















74













em cada raccedila










75




Portugal



Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0216 (0094)

Mertolenga 1470 (00) 23 (03) 1000 0315 (0097)

Alentejana 1550(00) 23 (03) 1000 0239 (0123)

Mirandesa 1065 (03) 20 (00) 1000 0159(0110)

Espanha

Cachena 710 (00) 23 (03) 1000 0279(0111)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0166 (0107)

Frieiresa 330 (00) 18(03) 750 0177(0112)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0246 (0087)

Rubia Gallega 1845(95) 25 (05) 1000 0215(0110)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0221 (0087)

Sayaguesa 1470 (00) 23 (03) 1000 0320 (0094)

Morucha 1010(00) 23 (03) 1000 0361 (0084)






Tudanca 420 (00) 20 (04) 750 0321 (0109)

Morena del N O 250 (00) 18 (03) 750 0203 (0108)

Frisona 6540 (00) 18 (05) 500 0203 (0130)

De Lidia 1240 (00) 23 (03) 1000 0367(0135)

Retinta 1640 (00) 23 (03) 1000 0338 (0107)

76






Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0229 (0074)

Espanha Cachena 710 (00) 22 (02) 1000 0289 (0087)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0180 (0084)

Frieiresa 330 (00) 18 (02) 800 0180 (0087)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0226(0071)

Rubia Gallega 1812(81) 24 (04) 1000 0223 (0086)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0374 (0168)

Sayaguesa 1470 (00) 22 (02) 1000 0305 (0074)

Morucha 1010 (00) 22 (02) 1000 0353 (0066)















77


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(14)

(11)

(5)

(3)

Sayaquesa

(39)

[32)

(21)1-

- -HsT

(49)

(1)

(3)

(18)

(8)

(13)1

(12)

19)

(16T

De Lidia


Tudanca bullMorucha




(65)

Mertolenga -Vianesa

Blanra Cacerefla


i (39)r




82


Morucha

Cachena Sayaquesa



(43) ( 2 8 gt - ^ C a W e l a l




De Lidia Tudanca



83


(42)f

(30)1 I

(7)

2D

(23)1

I mdash l( 2 8 )

r

(49) r (23) r L

i4) I

(18) (23) bull

(28)

(55gt



Minhota Frieiresa




Cachena Limiana



(21)

(18)

(100)

(55)

(15)T r i shyT

C a

(40) |_Caacute

Alistano Sanabresa

(37)

(61)

(46

(29)

^ o i j r mdash


Limiana Vianesa


(32j~

j2frTL

Frieiresa


Sayaquesa




84


















85
























86




paternidade





proacuteximos anos


sangue e do leite






87

Conclusotildees

5 - CONCLUSOtildeES


















88

Conclusotildees





















89





Porto






Paris 43-58






20 217-220






90



de Leitores









Genetics 21 191-197



93 5131-5135



VIO (1) 10-14









91


















Genetics 26 215-236








-27 Longman

92














Porto














93





pp 103-172 Lisboa






-Holland Publishers





421-426








-18

94




-124









11 21-38











397-401




95




91 2757-2761



London B 256 25-31











Genetics 89 583-590








-276



96



























97










Genetics 61823-831














Survey



98










-501


















99













100

ANEXO

Anexos

















I

Anexos




II

Anexos



CAII 294 035

065

NP 294 H

L

024

076

MPI 290 A

B

C

000

098

002

ALB 294 A

B

V

097

002

001

TF 294 A

Dl

D2

E

057

016

023

004

GC 294 083 017

TTI

Agradecimentos

IacuteNDICE











Origem



211 - Amostragem


















5 - CONCLUSOtildeES


ANEXO






















(figura 112)

5











MASON 1984)












6























Proteiacutenas






7



(BRAEND 1971)





tema

Polimorfismo do DNA
























8






















9
















do VALE 1949)







do VALE 1949)

10












FERNANDES 1996)













li


B



12









parece estaacutevel













13







LEGENDA


ESCALA 11380000


14
























Origem







15






(GARCIA et ai 1981)








(IGLESIAS 1989)









e plasmaacuteticas





raccedilas bovinas

16




211 - Amostragem






Vieira do Minho











17









CP SODl TF

PEPC IDH1

AMY1 AMY1A PGM1

4

LDHB PEPB


6

IADA

ALDH1

CAII

ME1 PGM3 SOD2

NP

10

CAT HBBq22-q27

PGD IALDH2 DIA4

HP GPIq22-q24

MPI iBF GLOl

LDHA MDH2


18


bull HB





1986)







bull CAII-EC4211













19


bull PEPB-EC3412






1992)

bull DIA-EC1643






1992)

bull NP-EC2421







20


bull MDH-ECl 1137








bull PGD-EC11144







bull GPI-EC5319







21


bull MPI-EC5318











bull ALB













22


bull TF
















bull GC










23






bull HB



bull CAII











24


bull ALB



bull TF



obtidos










TF (FERRAND 1995)









25





bull GCcedil







obtidos














26


HB







Acrilamida 28 (pv)


Sacarose


7-9 (PHARMACIA)


PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

300 p1

300 ul


10 ul

70 ul




2

3

30 min

15 min

15 min

Focagem 1500 25 15 2h 30 min




27


bull CAII





amido









respectivamente




28




Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

Quantidades 18 ml

08 ml

2 g

500 |ol

100 ul


10 ul

70 ul




3

5

30 min

15 min

15 min

Focagem 2500 25 8

10

12

30 min

30 min

30 min

bull PEPB



29




pH = 74 NaH2P04 01 M


pH = 74 pontes




bull DIA









1130 M

0400 M

0020 M 0010 M




pH = 60 NaOH

30





ALB






Acrilamida 28 (pv)


Ureia





PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

48 g

250 ni

250 ni

125 ul


30 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

31





TF






Acrilamida 28 (pv)


Sacarose





18 ml

08 ml

2 g

100 ul

500 ul


30 ul

70 ul




Focagem 2500 25

l 20 min

2 10 min

3 10 min

8 30 min

10 30 min

12 30 min

32





GC





Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

437 ul

188 (il


10 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

33









bull HB



Fixaccedilatildeo







bull CAII



34









bull PEPB







bull DIA



horas a 37degC







35


bull NP







bull MDH








bull PGP






0005 M

36


bull GPI







bull MPI








bull ALBeTF



bull GCcedil




37



























38







bull PEPB












e Chianina)

39


+


bull DIA




1992)





40








bull MDH






41


bull PGD










bull HB







IGLESIAS 1989)

42


+ -HBB

HBA

AB AB A A


bull poundAH








nomeadamente





43




CAIIF

| CAIIS


bull NP







44

+

w

FS FS ]


H L L H L L


bull MPI














45



bull ALB




bandas






FERRAND 1995)







ALBA

46












bull TF




(IGLESIAS 1989)





47















amostras




(1991)




adequada







48

















bull QQ





49









mdashGCF

S F S FS S FS F F S FS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10


S1 $ l S- -





50











Total

4 (32) 17

(122) 6

(116) 27


Total

14

(114)

13

(156)

27

^ ^ ^ Filho

Matildee - ^ F

Fenoacutetipos

F f~ (11)

FS 2

(21)

S

Total 3

Fenoacutetipos

FS S

3

(21)

10 5

(61) (40)

1 5

(40) (76)

14 10


Matildee - ^ H L

Fenoacutetipos

H 10 4

(77) (37)

L 5 8

(37) (119)

Total 15 12

51





A 0 0 0 - - - 0

(00) (00) (00) (00)

AB 0 0 0 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

AC 0 0 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

B - 0 - 24 1 - 25

(00) (242) (06) (248)

BC - 0 0 1 0 0 1

(00) (00) (06) (06) (00) (12)

C - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 0 0 0 25 1 0 26




Fenoacutetipos

A 24 2 0 - - - 26

(251) (04) (02) (257)

AB 0 0 0 0 0 -

0

(04) (04) (00) (00) (00) (08)

AG 1 0 0 - 0 0 1

(02) (00) (02) (00) (00) (04)

B - 0 - 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00)

BG - 0 0 0 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

G - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 25 2 0 0 0 0 27

52





Fenoacutetipos

A 6

(51)

1

(14)

4

(21)

1

(03)

12

(89)

ADI 1 2 0 0 0 0 0 - - - 3

(14) (24) (06) (01) (04) (06) (01) (56)

AD2 2 0 5 0 - 0 - 2 0 - 9

(21) (06) (36) (01) (06) (08) (01) (79)

AE 0 0 0 0 - - 0 - 0 0 0

(03) (01) (01) (06) (01) (01) (00) (13) Dl 0

(04) 1

(01)

1

(02)

0

(00)

- 2

(07)

D1D2 - 0 1 - 0 0 0 0 0 - 1

(06) (06) (02) (10) (00) (02) (00) (26) DIE - 0 - 0 0 0 0 - 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (02) (00) (00) (04)

D2 0

(08) 0

(02)

0

(03)

0

(01)

- 0

(14) D2E - - 0 0 - 0 0 0 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (01) (02) (00) (05) E 0

(00) 0

(00)

0

(00)

0

(00)

0

(00)

Total 9 3 10 1 1 1 0 2 0 0 27




Fenoacutetipos

1 17 2 19

(156) (31) (187)

2-1 5 2 0 7

(31) (38) (06) (75)

2 _ 1 0 1

(06) (01) (07)

Total 22 5 0 27

53






bull PEPB










N










Jersey 139 - 100

Limousine 24 - 100



54


bull DIA





entre 019 e 021




Portugal



Minhota 62

Espanha

Cachena 71

Caldelana 60

Frieiresa 33

Limiana 39

Rubia Gallega 168

Vianesa 40




Blanca Cacerena 62




Bulgaacuteria

Buacutefalo 122



- 100 Este trabalho

- 100

- 100 a

- 100 IGLESIAS (1989)

- 100

- 100

- 100

- 100

- 100


- 100

- 100 st

- 100 st

- 100

- 100

- 100



55


bull HB







Minhota 62 56 6 0

(561) (58) (01)



tabela 334












56



N



Portugal







Espanha




















Itaacutelia



Bulgaacuteria




G Bretanha


in IGLESIAS (1989)

57






CAII


335




(149) (622) (639)


(200) (710) (620)

Minhota 62 3 13 46

(14) (162) (444)

x2

0651 1 0420

0000 1 0995









58



N


Portugal







Espanha




Limiana 39 083 + 004 017 plusmn 004


Vianesa 40 086 + 004 014 plusmn 004












Bulgaacuteria



Alemanha


Suiacuteccedila



Friburg 223 084 + 002 016+002

in IGLESIAS (1989)

59








080 e 093

bull NP






N

Fenoacutetipos

N NP H NPL



Minhota 62 19 43

60



N



Portugal



Minhota 62 017 + 004 083 + 004

Espanha














Beacutelgica



in IGLESIAS (1989)

MPI








61







(1301) (78) (01)


(1460) (59) (01)

Minhota 61 0 3 0 56 2 0

(00) (29) (01) (561) (19) (00)






N


N MPPA MPPB MPIC










62


ALB


3311




N




Minhota 62 59

(590)

3 (30) (00)



da Bulgaacuteria










63





Portugal







Espanha -




Limiana 39 097 + 002 003 plusmn 002 -


Vianesa 40 093 + 003 007 + 003 -


Moracha 101 089 plusmn 002 011+002 -







Tudanca 42 100 - -


Frisona 97 100 - -


Retinta 164 097 + 001 003 plusmn001 -

Itaacutelia



Beacutelgica





w IGLESIAS (1989)

(Continua)

64




Bulgaacuteria




G Bretanha


Frisia 1422 100 - -

Hereford 215 099 plusmn 001 001+001 -

Jersey 217 100 - -






TF





estudadas







65










66


2

1 I

I

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67


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68


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r- mdashi o o

I

69


bull GC









Minhota




(945) (419) (45)


(1087) (406) (37)

Minhota 62 54 5 3

(514) (101) (04)

x2

3913 1 0048




espanholas

70





Portugal



Minhota

Alentejana

Mirandesa

Espanha

De Lidia

Frisona

Beacutelgica

Branca e azul

Flemish vermelha


Preta e branca


Sueacutecia

Vermelha e Branca

Frisia

141 018 plusmn0023

153 016 plusmn002

62 009 plusmn 003

028 plusmn 004

97 020 plusmn 003

1306 008 plusmn001

124 015 plusmn002

2323 031 plusmn001

431 016 plusmn001

299 012 plusmn001

299 019 plusmn002

140 006 plusmn 001

1030 039 plusmn001

273 079 plusmn 002

082 plusmn 002

084 plusmn 002

091 plusmn003

072 plusmn 004

080 plusmn 003

092 plusmn 001

085 plusmn 002

069 plusmn 001

084 plusmn 001

088 plusmn 001

081 plusmn002

065 plusmn 003

061 plusmn001

021 plusmn002

029 plusmn 003

Este trabalho

CUNHA (1994)

NOBRE (S data)



GAHNE(1963)


71






GC



Ho He Ho He Ho He

HB 0000 0000 0000 0000 0097 0093

CAH 0411 0441 0464 0464 0210 0262

MPI 0043 0056 0026 0039 0082 0080

ALB 0035 0035 0046 0058 0048 0048

TF 0603 0590 0556 0595 0694 0638

GC 0248 0297 0261 0265 0081 0163













72



populaccedilatildeo




(06) (042) (0100) (0100)


(02) (042) (0098) (0101)

Minhota 618 233 1000 0202 0214

(02) (021) (0101) (0090)

















73




HB 0030 0031 -0051 -0016 0033

CAII 0387 0404 0066 0104 0041

MPI 0058 0059 0130 0133 0004

ALB 0046 0047 0072 0075 0004

TF 0605 0627 -0021 0015 0036

GC 0241 0244 0183 0193 0012

Meacutedia 0228 0235 0048 0078 0031


















74













em cada raccedila










75




Portugal



Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0216 (0094)

Mertolenga 1470 (00) 23 (03) 1000 0315 (0097)

Alentejana 1550(00) 23 (03) 1000 0239 (0123)

Mirandesa 1065 (03) 20 (00) 1000 0159(0110)

Espanha

Cachena 710 (00) 23 (03) 1000 0279(0111)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0166 (0107)

Frieiresa 330 (00) 18(03) 750 0177(0112)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0246 (0087)

Rubia Gallega 1845(95) 25 (05) 1000 0215(0110)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0221 (0087)

Sayaguesa 1470 (00) 23 (03) 1000 0320 (0094)

Morucha 1010(00) 23 (03) 1000 0361 (0084)






Tudanca 420 (00) 20 (04) 750 0321 (0109)

Morena del N O 250 (00) 18 (03) 750 0203 (0108)

Frisona 6540 (00) 18 (05) 500 0203 (0130)

De Lidia 1240 (00) 23 (03) 1000 0367(0135)

Retinta 1640 (00) 23 (03) 1000 0338 (0107)

76






Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0229 (0074)

Espanha Cachena 710 (00) 22 (02) 1000 0289 (0087)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0180 (0084)

Frieiresa 330 (00) 18 (02) 800 0180 (0087)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0226(0071)

Rubia Gallega 1812(81) 24 (04) 1000 0223 (0086)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0374 (0168)

Sayaguesa 1470 (00) 22 (02) 1000 0305 (0074)

Morucha 1010 (00) 22 (02) 1000 0353 (0066)















77


8

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15

H



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80























81


(18)

(14)

(11)

(5)

(3)

Sayaquesa

(39)

[32)

(21)1-

- -HsT

(49)

(1)

(3)

(18)

(8)

(13)1

(12)

19)

(16T

De Lidia


Tudanca bullMorucha




(65)

Mertolenga -Vianesa

Blanra Cacerefla


i (39)r




82


Morucha

Cachena Sayaquesa



(43) ( 2 8 gt - ^ C a W e l a l




De Lidia Tudanca



83


(42)f

(30)1 I

(7)

2D

(23)1

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(49) r (23) r L

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(18) (23) bull

(28)

(55gt



Minhota Frieiresa




Cachena Limiana



(21)

(18)

(100)

(55)

(15)T r i shyT

C a

(40) |_Caacute

Alistano Sanabresa

(37)

(61)

(46

(29)

^ o i j r mdash


Limiana Vianesa


(32j~

j2frTL

Frieiresa


Sayaquesa




84


















85
























86




paternidade





proacuteximos anos


sangue e do leite






87

Conclusotildees

5 - CONCLUSOtildeES


















88

Conclusotildees





















89





Porto






Paris 43-58






20 217-220






90



de Leitores









Genetics 21 191-197



93 5131-5135



VIO (1) 10-14









91


















Genetics 26 215-236








-27 Longman

92














Porto














93





pp 103-172 Lisboa






-Holland Publishers





421-426








-18

94




-124









11 21-38











397-401




95




91 2757-2761



London B 256 25-31











Genetics 89 583-590








-276



96



























97










Genetics 61823-831














Survey



98










-501


















99













100

ANEXO

Anexos

















I

Anexos




II

Anexos



CAII 294 035

065

NP 294 H

L

024

076

MPI 290 A

B

C

000

098

002

ALB 294 A

B

V

097

002

001

TF 294 A

Dl

D2

E

057

016

023

004

GC 294 083 017

TTI

Agradecimentos

IacuteNDICE











Origem



211 - Amostragem


















5 - CONCLUSOtildeES


ANEXO












MASON 1984)












6























Proteiacutenas






7



(BRAEND 1971)





tema

Polimorfismo do DNA
























8






















9
















do VALE 1949)







do VALE 1949)

10












FERNANDES 1996)













li


B



12









parece estaacutevel













13







LEGENDA


ESCALA 11380000


14
























Origem







15






(GARCIA et ai 1981)








(IGLESIAS 1989)









e plasmaacuteticas





raccedilas bovinas

16




211 - Amostragem






Vieira do Minho











17









CP SODl TF

PEPC IDH1

AMY1 AMY1A PGM1

4

LDHB PEPB


6

IADA

ALDH1

CAII

ME1 PGM3 SOD2

NP

10

CAT HBBq22-q27

PGD IALDH2 DIA4

HP GPIq22-q24

MPI iBF GLOl

LDHA MDH2


18


bull HB





1986)







bull CAII-EC4211













19


bull PEPB-EC3412






1992)

bull DIA-EC1643






1992)

bull NP-EC2421







20


bull MDH-ECl 1137








bull PGD-EC11144







bull GPI-EC5319







21


bull MPI-EC5318











bull ALB













22


bull TF
















bull GC










23






bull HB



bull CAII











24


bull ALB



bull TF



obtidos










TF (FERRAND 1995)









25





bull GCcedil







obtidos














26


HB







Acrilamida 28 (pv)


Sacarose


7-9 (PHARMACIA)


PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

300 p1

300 ul


10 ul

70 ul




2

3

30 min

15 min

15 min

Focagem 1500 25 15 2h 30 min




27


bull CAII





amido









respectivamente




28




Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

Quantidades 18 ml

08 ml

2 g

500 |ol

100 ul


10 ul

70 ul




3

5

30 min

15 min

15 min

Focagem 2500 25 8

10

12

30 min

30 min

30 min

bull PEPB



29




pH = 74 NaH2P04 01 M


pH = 74 pontes




bull DIA









1130 M

0400 M

0020 M 0010 M




pH = 60 NaOH

30





ALB






Acrilamida 28 (pv)


Ureia





PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

48 g

250 ni

250 ni

125 ul


30 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

31





TF






Acrilamida 28 (pv)


Sacarose





18 ml

08 ml

2 g

100 ul

500 ul


30 ul

70 ul




Focagem 2500 25

l 20 min

2 10 min

3 10 min

8 30 min

10 30 min

12 30 min

32





GC





Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

437 ul

188 (il


10 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

33









bull HB



Fixaccedilatildeo







bull CAII



34









bull PEPB







bull DIA



horas a 37degC







35


bull NP







bull MDH








bull PGP






0005 M

36


bull GPI







bull MPI








bull ALBeTF



bull GCcedil




37



























38







bull PEPB












e Chianina)

39


+


bull DIA




1992)





40








bull MDH






41


bull PGD










bull HB







IGLESIAS 1989)

42


+ -HBB

HBA

AB AB A A


bull poundAH








nomeadamente





43




CAIIF

| CAIIS


bull NP







44

+

w

FS FS ]


H L L H L L


bull MPI














45



bull ALB




bandas






FERRAND 1995)







ALBA

46












bull TF




(IGLESIAS 1989)





47















amostras




(1991)




adequada







48

















bull QQ





49









mdashGCF

S F S FS S FS F F S FS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10


S1 $ l S- -





50











Total

4 (32) 17

(122) 6

(116) 27


Total

14

(114)

13

(156)

27

^ ^ ^ Filho

Matildee - ^ F

Fenoacutetipos

F f~ (11)

FS 2

(21)

S

Total 3

Fenoacutetipos

FS S

3

(21)

10 5

(61) (40)

1 5

(40) (76)

14 10


Matildee - ^ H L

Fenoacutetipos

H 10 4

(77) (37)

L 5 8

(37) (119)

Total 15 12

51





A 0 0 0 - - - 0

(00) (00) (00) (00)

AB 0 0 0 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

AC 0 0 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

B - 0 - 24 1 - 25

(00) (242) (06) (248)

BC - 0 0 1 0 0 1

(00) (00) (06) (06) (00) (12)

C - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 0 0 0 25 1 0 26




Fenoacutetipos

A 24 2 0 - - - 26

(251) (04) (02) (257)

AB 0 0 0 0 0 -

0

(04) (04) (00) (00) (00) (08)

AG 1 0 0 - 0 0 1

(02) (00) (02) (00) (00) (04)

B - 0 - 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00)

BG - 0 0 0 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

G - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 25 2 0 0 0 0 27

52





Fenoacutetipos

A 6

(51)

1

(14)

4

(21)

1

(03)

12

(89)

ADI 1 2 0 0 0 0 0 - - - 3

(14) (24) (06) (01) (04) (06) (01) (56)

AD2 2 0 5 0 - 0 - 2 0 - 9

(21) (06) (36) (01) (06) (08) (01) (79)

AE 0 0 0 0 - - 0 - 0 0 0

(03) (01) (01) (06) (01) (01) (00) (13) Dl 0

(04) 1

(01)

1

(02)

0

(00)

- 2

(07)

D1D2 - 0 1 - 0 0 0 0 0 - 1

(06) (06) (02) (10) (00) (02) (00) (26) DIE - 0 - 0 0 0 0 - 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (02) (00) (00) (04)

D2 0

(08) 0

(02)

0

(03)

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(14) D2E - - 0 0 - 0 0 0 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (01) (02) (00) (05) E 0

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(00)

0

(00)

0

(00)

0

(00)

Total 9 3 10 1 1 1 0 2 0 0 27




Fenoacutetipos

1 17 2 19

(156) (31) (187)

2-1 5 2 0 7

(31) (38) (06) (75)

2 _ 1 0 1

(06) (01) (07)

Total 22 5 0 27

53






bull PEPB










N










Jersey 139 - 100

Limousine 24 - 100



54


bull DIA





entre 019 e 021




Portugal



Minhota 62

Espanha

Cachena 71

Caldelana 60

Frieiresa 33

Limiana 39

Rubia Gallega 168

Vianesa 40




Blanca Cacerena 62




Bulgaacuteria

Buacutefalo 122



- 100 Este trabalho

- 100

- 100 a

- 100 IGLESIAS (1989)

- 100

- 100

- 100

- 100

- 100


- 100

- 100 st

- 100 st

- 100

- 100

- 100



55


bull HB







Minhota 62 56 6 0

(561) (58) (01)



tabela 334












56



N



Portugal







Espanha




















Itaacutelia



Bulgaacuteria




G Bretanha


in IGLESIAS (1989)

57






CAII


335




(149) (622) (639)


(200) (710) (620)

Minhota 62 3 13 46

(14) (162) (444)

x2

0651 1 0420

0000 1 0995









58



N


Portugal







Espanha




Limiana 39 083 + 004 017 plusmn 004


Vianesa 40 086 + 004 014 plusmn 004












Bulgaacuteria



Alemanha


Suiacuteccedila



Friburg 223 084 + 002 016+002

in IGLESIAS (1989)

59








080 e 093

bull NP






N

Fenoacutetipos

N NP H NPL



Minhota 62 19 43

60



N



Portugal



Minhota 62 017 + 004 083 + 004

Espanha














Beacutelgica



in IGLESIAS (1989)

MPI








61







(1301) (78) (01)


(1460) (59) (01)

Minhota 61 0 3 0 56 2 0

(00) (29) (01) (561) (19) (00)






N


N MPPA MPPB MPIC










62


ALB


3311




N




Minhota 62 59

(590)

3 (30) (00)



da Bulgaacuteria










63





Portugal







Espanha -




Limiana 39 097 + 002 003 plusmn 002 -


Vianesa 40 093 + 003 007 + 003 -


Moracha 101 089 plusmn 002 011+002 -







Tudanca 42 100 - -


Frisona 97 100 - -


Retinta 164 097 + 001 003 plusmn001 -

Itaacutelia



Beacutelgica





w IGLESIAS (1989)

(Continua)

64




Bulgaacuteria




G Bretanha


Frisia 1422 100 - -

Hereford 215 099 plusmn 001 001+001 -

Jersey 217 100 - -






TF





estudadas







65










66


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69


bull GC









Minhota




(945) (419) (45)


(1087) (406) (37)

Minhota 62 54 5 3

(514) (101) (04)

x2

3913 1 0048




espanholas

70





Portugal



Minhota

Alentejana

Mirandesa

Espanha

De Lidia

Frisona

Beacutelgica

Branca e azul

Flemish vermelha


Preta e branca


Sueacutecia

Vermelha e Branca

Frisia

141 018 plusmn0023

153 016 plusmn002

62 009 plusmn 003

028 plusmn 004

97 020 plusmn 003

1306 008 plusmn001

124 015 plusmn002

2323 031 plusmn001

431 016 plusmn001

299 012 plusmn001

299 019 plusmn002

140 006 plusmn 001

1030 039 plusmn001

273 079 plusmn 002

082 plusmn 002

084 plusmn 002

091 plusmn003

072 plusmn 004

080 plusmn 003

092 plusmn 001

085 plusmn 002

069 plusmn 001

084 plusmn 001

088 plusmn 001

081 plusmn002

065 plusmn 003

061 plusmn001

021 plusmn002

029 plusmn 003

Este trabalho

CUNHA (1994)

NOBRE (S data)



GAHNE(1963)


71






GC



Ho He Ho He Ho He

HB 0000 0000 0000 0000 0097 0093

CAH 0411 0441 0464 0464 0210 0262

MPI 0043 0056 0026 0039 0082 0080

ALB 0035 0035 0046 0058 0048 0048

TF 0603 0590 0556 0595 0694 0638

GC 0248 0297 0261 0265 0081 0163













72



populaccedilatildeo




(06) (042) (0100) (0100)


(02) (042) (0098) (0101)

Minhota 618 233 1000 0202 0214

(02) (021) (0101) (0090)

















73




HB 0030 0031 -0051 -0016 0033

CAII 0387 0404 0066 0104 0041

MPI 0058 0059 0130 0133 0004

ALB 0046 0047 0072 0075 0004

TF 0605 0627 -0021 0015 0036

GC 0241 0244 0183 0193 0012

Meacutedia 0228 0235 0048 0078 0031


















74













em cada raccedila










75




Portugal



Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0216 (0094)

Mertolenga 1470 (00) 23 (03) 1000 0315 (0097)

Alentejana 1550(00) 23 (03) 1000 0239 (0123)

Mirandesa 1065 (03) 20 (00) 1000 0159(0110)

Espanha

Cachena 710 (00) 23 (03) 1000 0279(0111)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0166 (0107)

Frieiresa 330 (00) 18(03) 750 0177(0112)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0246 (0087)

Rubia Gallega 1845(95) 25 (05) 1000 0215(0110)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0221 (0087)

Sayaguesa 1470 (00) 23 (03) 1000 0320 (0094)

Morucha 1010(00) 23 (03) 1000 0361 (0084)






Tudanca 420 (00) 20 (04) 750 0321 (0109)

Morena del N O 250 (00) 18 (03) 750 0203 (0108)

Frisona 6540 (00) 18 (05) 500 0203 (0130)

De Lidia 1240 (00) 23 (03) 1000 0367(0135)

Retinta 1640 (00) 23 (03) 1000 0338 (0107)

76






Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0229 (0074)

Espanha Cachena 710 (00) 22 (02) 1000 0289 (0087)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0180 (0084)

Frieiresa 330 (00) 18 (02) 800 0180 (0087)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0226(0071)

Rubia Gallega 1812(81) 24 (04) 1000 0223 (0086)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0374 (0168)

Sayaguesa 1470 (00) 22 (02) 1000 0305 (0074)

Morucha 1010 (00) 22 (02) 1000 0353 (0066)















77


8

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15

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80























81


(18)

(14)

(11)

(5)

(3)

Sayaquesa

(39)

[32)

(21)1-

- -HsT

(49)

(1)

(3)

(18)

(8)

(13)1

(12)

19)

(16T

De Lidia


Tudanca bullMorucha




(65)

Mertolenga -Vianesa

Blanra Cacerefla


i (39)r




82


Morucha

Cachena Sayaquesa



(43) ( 2 8 gt - ^ C a W e l a l




De Lidia Tudanca



83


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(30)1 I

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(28)

(55gt



Minhota Frieiresa




Cachena Limiana



(21)

(18)

(100)

(55)

(15)T r i shyT

C a

(40) |_Caacute

Alistano Sanabresa

(37)

(61)

(46

(29)

^ o i j r mdash


Limiana Vianesa


(32j~

j2frTL

Frieiresa


Sayaquesa




84


















85
























86




paternidade





proacuteximos anos


sangue e do leite






87

Conclusotildees

5 - CONCLUSOtildeES


















88

Conclusotildees





















89





Porto






Paris 43-58






20 217-220






90



de Leitores









Genetics 21 191-197



93 5131-5135



VIO (1) 10-14









91


















Genetics 26 215-236








-27 Longman

92














Porto














93





pp 103-172 Lisboa






-Holland Publishers





421-426








-18

94




-124









11 21-38











397-401




95




91 2757-2761



London B 256 25-31











Genetics 89 583-590








-276



96



























97










Genetics 61823-831














Survey



98










-501


















99













100

ANEXO

Anexos

















I

Anexos




II

Anexos



CAII 294 035

065

NP 294 H

L

024

076

MPI 290 A

B

C

000

098

002

ALB 294 A

B

V

097

002

001

TF 294 A

Dl

D2

E

057

016

023

004

GC 294 083 017

TTI

Agradecimentos

IacuteNDICE











Origem



211 - Amostragem


















5 - CONCLUSOtildeES


ANEXO
























Proteiacutenas






7



(BRAEND 1971)





tema

Polimorfismo do DNA
























8






















9
















do VALE 1949)







do VALE 1949)

10












FERNANDES 1996)













li


B



12









parece estaacutevel













13







LEGENDA


ESCALA 11380000


14
























Origem







15






(GARCIA et ai 1981)








(IGLESIAS 1989)









e plasmaacuteticas





raccedilas bovinas

16




211 - Amostragem






Vieira do Minho











17









CP SODl TF

PEPC IDH1

AMY1 AMY1A PGM1

4

LDHB PEPB


6

IADA

ALDH1

CAII

ME1 PGM3 SOD2

NP

10

CAT HBBq22-q27

PGD IALDH2 DIA4

HP GPIq22-q24

MPI iBF GLOl

LDHA MDH2


18


bull HB





1986)







bull CAII-EC4211













19


bull PEPB-EC3412






1992)

bull DIA-EC1643






1992)

bull NP-EC2421







20


bull MDH-ECl 1137








bull PGD-EC11144







bull GPI-EC5319







21


bull MPI-EC5318











bull ALB













22


bull TF
















bull GC










23






bull HB



bull CAII











24


bull ALB



bull TF



obtidos










TF (FERRAND 1995)









25





bull GCcedil







obtidos














26


HB







Acrilamida 28 (pv)


Sacarose


7-9 (PHARMACIA)


PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

300 p1

300 ul


10 ul

70 ul




2

3

30 min

15 min

15 min

Focagem 1500 25 15 2h 30 min




27


bull CAII





amido









respectivamente




28




Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

Quantidades 18 ml

08 ml

2 g

500 |ol

100 ul


10 ul

70 ul




3

5

30 min

15 min

15 min

Focagem 2500 25 8

10

12

30 min

30 min

30 min

bull PEPB



29




pH = 74 NaH2P04 01 M


pH = 74 pontes




bull DIA









1130 M

0400 M

0020 M 0010 M




pH = 60 NaOH

30





ALB






Acrilamida 28 (pv)


Ureia





PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

48 g

250 ni

250 ni

125 ul


30 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

31





TF






Acrilamida 28 (pv)


Sacarose





18 ml

08 ml

2 g

100 ul

500 ul


30 ul

70 ul




Focagem 2500 25

l 20 min

2 10 min

3 10 min

8 30 min

10 30 min

12 30 min

32





GC





Acrilamida 28 (pv)


Sacarose




PSA 10 (pv)

18 ml

08 ml

2 g

437 ul

188 (il


10 ul

70 ul




Focagem 1500 25

1 30 min

2 15 min

3 15 min

4 3 h

5 30 min

33









bull HB



Fixaccedilatildeo







bull CAII



34









bull PEPB







bull DIA



horas a 37degC







35


bull NP







bull MDH








bull PGP






0005 M

36


bull GPI







bull MPI








bull ALBeTF



bull GCcedil




37



























38







bull PEPB












e Chianina)

39


+


bull DIA




1992)





40








bull MDH






41


bull PGD










bull HB







IGLESIAS 1989)

42


+ -HBB

HBA

AB AB A A


bull poundAH








nomeadamente





43




CAIIF

| CAIIS


bull NP







44

+

w

FS FS ]


H L L H L L


bull MPI














45



bull ALB




bandas






FERRAND 1995)







ALBA

46












bull TF




(IGLESIAS 1989)





47















amostras




(1991)




adequada







48

















bull QQ





49









mdashGCF

S F S FS S FS F F S FS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10


S1 $ l S- -





50











Total

4 (32) 17

(122) 6

(116) 27


Total

14

(114)

13

(156)

27

^ ^ ^ Filho

Matildee - ^ F

Fenoacutetipos

F f~ (11)

FS 2

(21)

S

Total 3

Fenoacutetipos

FS S

3

(21)

10 5

(61) (40)

1 5

(40) (76)

14 10


Matildee - ^ H L

Fenoacutetipos

H 10 4

(77) (37)

L 5 8

(37) (119)

Total 15 12

51





A 0 0 0 - - - 0

(00) (00) (00) (00)

AB 0 0 0 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

AC 0 0 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

B - 0 - 24 1 - 25

(00) (242) (06) (248)

BC - 0 0 1 0 0 1

(00) (00) (06) (06) (00) (12)

C - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 0 0 0 25 1 0 26




Fenoacutetipos

A 24 2 0 - - - 26

(251) (04) (02) (257)

AB 0 0 0 0 0 -

0

(04) (04) (00) (00) (00) (08)

AG 1 0 0 - 0 0 1

(02) (00) (02) (00) (00) (04)

B - 0 - 0 0 - 0

(00) (00) (00) (00)

BG - 0 0 0 0 0 0

(00) (00) (00) (00) (00) (00)

G - - 0 - 0 0 0

(00) (00) (00) (00)

Total 25 2 0 0 0 0 27

52





Fenoacutetipos

A 6

(51)

1

(14)

4

(21)

1

(03)

12

(89)

ADI 1 2 0 0 0 0 0 - - - 3

(14) (24) (06) (01) (04) (06) (01) (56)

AD2 2 0 5 0 - 0 - 2 0 - 9

(21) (06) (36) (01) (06) (08) (01) (79)

AE 0 0 0 0 - - 0 - 0 0 0

(03) (01) (01) (06) (01) (01) (00) (13) Dl 0

(04) 1

(01)

1

(02)

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(07)

D1D2 - 0 1 - 0 0 0 0 0 - 1

(06) (06) (02) (10) (00) (02) (00) (26) DIE - 0 - 0 0 0 0 - 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (02) (00) (00) (04)

D2 0

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(14) D2E - - 0 0 - 0 0 0 0 0 0

(01) (01) (00) (00) (01) (02) (00) (05) E 0

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0

(00)

0

(00)

Total 9 3 10 1 1 1 0 2 0 0 27




Fenoacutetipos

1 17 2 19

(156) (31) (187)

2-1 5 2 0 7

(31) (38) (06) (75)

2 _ 1 0 1

(06) (01) (07)

Total 22 5 0 27

53






bull PEPB










N










Jersey 139 - 100

Limousine 24 - 100



54


bull DIA





entre 019 e 021




Portugal



Minhota 62

Espanha

Cachena 71

Caldelana 60

Frieiresa 33

Limiana 39

Rubia Gallega 168

Vianesa 40




Blanca Cacerena 62




Bulgaacuteria

Buacutefalo 122



- 100 Este trabalho

- 100

- 100 a

- 100 IGLESIAS (1989)

- 100

- 100

- 100

- 100

- 100


- 100

- 100 st

- 100 st

- 100

- 100

- 100



55


bull HB







Minhota 62 56 6 0

(561) (58) (01)



tabela 334












56



N



Portugal







Espanha




















Itaacutelia



Bulgaacuteria




G Bretanha


in IGLESIAS (1989)

57






CAII


335




(149) (622) (639)


(200) (710) (620)

Minhota 62 3 13 46

(14) (162) (444)

x2

0651 1 0420

0000 1 0995









58



N


Portugal







Espanha




Limiana 39 083 + 004 017 plusmn 004


Vianesa 40 086 + 004 014 plusmn 004












Bulgaacuteria



Alemanha


Suiacuteccedila



Friburg 223 084 + 002 016+002

in IGLESIAS (1989)

59








080 e 093

bull NP






N

Fenoacutetipos

N NP H NPL



Minhota 62 19 43

60



N



Portugal



Minhota 62 017 + 004 083 + 004

Espanha














Beacutelgica



in IGLESIAS (1989)

MPI








61







(1301) (78) (01)


(1460) (59) (01)

Minhota 61 0 3 0 56 2 0

(00) (29) (01) (561) (19) (00)






N


N MPPA MPPB MPIC










62


ALB


3311




N




Minhota 62 59

(590)

3 (30) (00)



da Bulgaacuteria










63





Portugal







Espanha -




Limiana 39 097 + 002 003 plusmn 002 -


Vianesa 40 093 + 003 007 + 003 -


Moracha 101 089 plusmn 002 011+002 -







Tudanca 42 100 - -


Frisona 97 100 - -


Retinta 164 097 + 001 003 plusmn001 -

Itaacutelia



Beacutelgica





w IGLESIAS (1989)

(Continua)

64




Bulgaacuteria




G Bretanha


Frisia 1422 100 - -

Hereford 215 099 plusmn 001 001+001 -

Jersey 217 100 - -






TF





estudadas







65










66


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r- mdashi o o

I

69


bull GC









Minhota




(945) (419) (45)


(1087) (406) (37)

Minhota 62 54 5 3

(514) (101) (04)

x2

3913 1 0048




espanholas

70





Portugal



Minhota

Alentejana

Mirandesa

Espanha

De Lidia

Frisona

Beacutelgica

Branca e azul

Flemish vermelha


Preta e branca


Sueacutecia

Vermelha e Branca

Frisia

141 018 plusmn0023

153 016 plusmn002

62 009 plusmn 003

028 plusmn 004

97 020 plusmn 003

1306 008 plusmn001

124 015 plusmn002

2323 031 plusmn001

431 016 plusmn001

299 012 plusmn001

299 019 plusmn002

140 006 plusmn 001

1030 039 plusmn001

273 079 plusmn 002

082 plusmn 002

084 plusmn 002

091 plusmn003

072 plusmn 004

080 plusmn 003

092 plusmn 001

085 plusmn 002

069 plusmn 001

084 plusmn 001

088 plusmn 001

081 plusmn002

065 plusmn 003

061 plusmn001

021 plusmn002

029 plusmn 003

Este trabalho

CUNHA (1994)

NOBRE (S data)



GAHNE(1963)


71






GC



Ho He Ho He Ho He

HB 0000 0000 0000 0000 0097 0093

CAH 0411 0441 0464 0464 0210 0262

MPI 0043 0056 0026 0039 0082 0080

ALB 0035 0035 0046 0058 0048 0048

TF 0603 0590 0556 0595 0694 0638

GC 0248 0297 0261 0265 0081 0163













72



populaccedilatildeo




(06) (042) (0100) (0100)


(02) (042) (0098) (0101)

Minhota 618 233 1000 0202 0214

(02) (021) (0101) (0090)

















73




HB 0030 0031 -0051 -0016 0033

CAII 0387 0404 0066 0104 0041

MPI 0058 0059 0130 0133 0004

ALB 0046 0047 0072 0075 0004

TF 0605 0627 -0021 0015 0036

GC 0241 0244 0183 0193 0012

Meacutedia 0228 0235 0048 0078 0031


















74













em cada raccedila










75




Portugal



Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0216 (0094)

Mertolenga 1470 (00) 23 (03) 1000 0315 (0097)

Alentejana 1550(00) 23 (03) 1000 0239 (0123)

Mirandesa 1065 (03) 20 (00) 1000 0159(0110)

Espanha

Cachena 710 (00) 23 (03) 1000 0279(0111)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0166 (0107)

Frieiresa 330 (00) 18(03) 750 0177(0112)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0246 (0087)

Rubia Gallega 1845(95) 25 (05) 1000 0215(0110)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0221 (0087)

Sayaguesa 1470 (00) 23 (03) 1000 0320 (0094)

Morucha 1010(00) 23 (03) 1000 0361 (0084)






Tudanca 420 (00) 20 (04) 750 0321 (0109)

Morena del N O 250 (00) 18 (03) 750 0203 (0108)

Frisona 6540 (00) 18 (05) 500 0203 (0130)

De Lidia 1240 (00) 23 (03) 1000 0367(0135)

Retinta 1640 (00) 23 (03) 1000 0338 (0107)

76






Minhota 620 (00) 20 (00) 1000 0229 (0074)

Espanha Cachena 710 (00) 22 (02) 1000 0289 (0087)

Caldelana 600 (00) 20 (00) 1000 0180 (0084)

Frieiresa 330 (00) 18 (02) 800 0180 (0087)

Limiana 390 (00) 20 (00) 1000 0226(0071)

Rubia Gallega 1812(81) 24 (04) 1000 0223 (0086)

Vianesa 400 (00) 20 (00) 1000 0374 (0168)

Sayaguesa 1470 (00) 22 (02) 1000 0305 (0074)

Morucha 1010 (00) 22 (02) 1000 0353 (0066)















77


8

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15

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80























81


(18)

(14)

(11)

(5)

(3)

Sayaquesa

(39)

[32)

(21)1-

- -HsT

(49)

(1)

(3)

(18)

(8)

(13)1

(12)

19)

(16T

De Lidia


Tudanca bullMorucha




(65)

Mertolenga -Vianesa

Blanra Cacerefla


i (39)r




82


Morucha

Cachena Sayaquesa



(43) ( 2 8 gt - ^ C a W e l a l




De Lidia Tudanca



83


(42)f

(30)1 I

(7)

2D

(23)1

I mdash l( 2 8 )

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(49) r (23) r L

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(18) (23) bull

(28)

(55gt



Minhota Frieiresa




Cachena Limiana



(21)

(18)

(100)

(55)

(15)T r i shyT

C a

(40) |_Caacute

Alistano Sanabresa

(37)

(61)

(46

(29)

^ o i j r mdash


Limiana Vianesa


(32j~

j2frTL

Frieiresa


Sayaquesa




84


















85
























86




paternidade





proacuteximos anos


sangue e do leite






87

Conclusotildees

5 - CONCLUSOtildeES


















88

Conclusotildees





















89





Porto






Paris 43-58






20 217-220






90



de Leitores









Genetics 21 191-197



93 5131-5135



VIO (1) 10-14









91


















Genetics 26 215-236








-27 Longman

92














Porto














93





pp 103-172 Lisboa






-Holland Publishers





421-426








-18

94




-124









11 21-38











397-401




95




91 2757-2761



London B 256 25-31











Genetics 89 583-590








-276



96



























97










Genetics 61823-831














Survey



98










-501


















99













100

ANEXO

Anexos

















I

Anexos




II

Anexos



CAII 294 035

065

NP 294 H

L

024

076

MPI 290 A

B

C

000

098

002

ALB 294 A

B

V

097

002

001

TF 294 A

Dl

D2

E

057

016

023

004

GC 294 083 017

TTI

Agradecimentos

IacuteNDICE











Origem



211 - Amostragem


















5 - CONCLUSOtildeES


ANEXO


caracterizaÇÃo genÉtica da raÇa bovina barrosÃ · 2012. 6. 26. · caria sofiarodrigue s leal...

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