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Test de compatibilité au laboratoire
Test ultime au lit du malade
AHU Houda Romdhane CRTS Sousse Interprétation et validation des tests immuno-
hématologiques
20 Octobre 2016 Tabarka
Prélèvement Donneur Préparation Qualification
Biologique Distribution Transfusion Receveur
Etablissement de transfusion sanguine ETS
Etablissement de Soin ES
La sécurité transfusionnelle comporte un ensemble de mesures à
prendre en vue de prévenir les complications inhérentes à la
transfusion . Test de
compatibilité au laboratoire
Test ultime au lit du malade
Introduction
Introduction
Un ensemble d’examens immuno-hématologiques est nécessaire
avant toute transfusion de CGR:
GS ABO et RhD du patient
Phénotype Rhésus(C,c,E,e) et Kell(K)
Test de compatibilité au laboratoire
RAI.
Test de compatibilité au laboratoire ( Cross Match)
�Obligatoire avant toute transfusion de CGR :circulaire (49/05)
�Sérum du patient testé vis-à-vis des unités de CGR à transfuser
� Doit comporter, au minimum, un test à l’anti-globuline
Humaine(AGH).
�Permet de vérifier l’absence chez le receveur d’Ac reconnaissant
des Ag présents sur les GR à transfuser autres que les Ag ABO.
�Permet une distribution nominative du CGR
�Ne dispense en aucun cas du contrôle ultime au lit du malade
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
1. Prescription de la demande
2. Prélèvement
3. Réalisation pratique
4. Lecture et Interprétation
5. Durée de validité
6. Traçabilité
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Modalités pratiques
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
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1/ Prescription de la demande
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
Formulaire de demande de produits sanguins (Circulaire 49/05).
N.B: Patient GS inconnu:
déterminer d’abord le GS !!!
Demande dûment remplie et accompagnée:
� d’une carte de GS
� d’un prélèvement sanguin.
• De moins de 72h/ Tube sec: sérum
EDTA: plasma
• Quantité suffisante
• Sérum hémolysé: non utilisé
• Ne pas prélever à partir de la branule.
• Étiqueter l’échantillon au chevet du malade
• L’étiquette doit comporter Nom, Prénom, Matricule/DDN.
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2/ le prélèvement
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
1. Vérification du GS du patients: EG
� Eviter les erreurs de prélèvement.
2. Choix des unités de CGR à tester:
� Règles immunologiques de la transfusion
� ATCD: historique transfusionnel et immuno-hématologique
du patient: GS,RAI,TCD…)
3. Vérification du GS de l’unité à tester:
� Eviter les erreurs d’étiquetage
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3/ Réalisation pratique: Etapes à respecter
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
4. Bien centrifuger l’échantillon: 4000tr/5-10min
5. Choix de la technique :
� TCI en respectant les bonnes pratiques de laboratoire.
6. Maintien de la chaine du froid:
� Laisser les CGR le moins de temps possible sur la paillasse
� Travailler prescription par prescription (Sécurisation de
l’identification)
7. Conserver les tubes pendant 7j à 4degré pour une éventuelle
réévaluation
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3/ Réalisation pratique: Etapes à respecter
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
Donor RBCs (washed)
Patient serum
Pas d’ agglutination ~ compatible
Agglutination ~ incompatible
3/ Réalisation pratique: Principe LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
Test indirect à l’anti-globuline humaine= Test de Coombs Indirect(TCI)
En tube
-1 goutte de la suspension
d’hématies du donneur à 3% en salin*
-2 gouttes du sérum à tester -Incubation à 37°C pendant 45 mn* -3 lavages -Ajout de l’AGH -Centrifugation 20 s à 1500 trs/mn -Lecture
En gel test : GDL
-50 μl de la suspension d’hématies du
donneur à 0.8 % en salin* -25 μl du sérum à étudier -Incubation à 37°C pendant 45 mn*
-Centrifugation 10’ à 800tr/mn -Lecture
12 * Si les hématies sont préparées dans une solution à basse force ionique (BFI): incubation
pendant 15 mn seulement
3/ Réalisation pratique: Technique= TCI
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
En tube En gel test
�3 lavages : risques:
-lavage insuffisant: neutralisation de l’AGH -Dissociation du complexe Ag-Ac
� AGH ajoutée secondairement sur le culot lavé
�Pas de lavage (diminution du temps d’analyse: important pour test de compatibilité)
�Standardisation: AGH présente dans le milieu de filtration( quantité identique pour tous les tests ) Evite toute erreur technique par omission de l’ajout de l’AGH
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3/ Réalisation pratique: Technique= TCI
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
En tube En gel test
�Recherche des agglutinats par agitation :
� agitation trop forte
Faux négatifs (dissociation des faibles agglutinats)
� agitation trop faible après une centrifugation très rapide
Faux positifs
�lecture directe sans agitation du support de réaction
�centrifugation standardisée .
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3/ Réalisation pratique: Technique= TCI
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
En tube En gel test
�Reproductibilité médiocre pour les Ac de faible titre
�Sensibilité moindre
� Relecture différée impossible
�Meilleure reproductibilité
�Sensibilité +++
�Relecture différée possible: sécurité d’attribution des résultats
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3/ Réalisation pratique: Technique= TCI
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
En tube En gel filtration (cotation Diamed)
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Les résultats sont exprimés en nombre de croix
4/ lecture et interprétation LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
En tube En gel filtration
(cotation Diamed)
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3/ Lecture et interprétation LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
� Absence d’agglutination � test de compatibilité négatif
� Joindre une Etiquette solidaire aux unités compatibles.
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4/ lecture et Interprétation
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
�Présence d’une réaction d’agglutination avec une ou plusieurs unités
� test de compatibilité positif.
�Toute unité positive est dite incompatible et ne pourra être délivrée
(sauf accord du responsable et dans des cas très particuliers d’auto Ac
sans allo Ac masqué)
�Distribution, livraison
� Un Cross match positif impose des explorations quant au
problème impliqué.
� le patient ne devrait pas être transfusé avant que la cause du
problème ne soit décidée → sélection de sang approprié.
� Quand une incompatibilité est détectée, les résultats du
témoin auto et la RAI devraient être passés en revue.
4/ lecture et interprétation
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
CM positif
Vraie agglutination
RAI, T auto TCD,élution
Phénotypage :éventuellement élargi pour R et D
Fausse agglutination
-Qualité de l’échantillon? -Respect des conditions opératoires?
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4/ lecture et interprétation
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
� Problème technique:
• Forte concentration de la suspension des CGR?
• Lavage non fait du culot globulaire?
• Problème de centrifugation des cartes?
� Problème mécanique:
• Phénomène de rouleaux?
• Prélèvement branule?
• Présence d'Artefacts: carte gel desséchée? Périmée?
4/ lecture et interprétation: Fausse agglutination
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
Vraie Agglutination
RAI T auto
TCD
RAI Négative T auto Négatif
TCD Négatif
RAI positive T auto Négatif
TCD Négatif
RAI positive T auto positif
TCD Positif
Anticorps anti-privé test de compatiblité positif reproductible avec une seule unité
AlloAc identification →CGR compatibilisés dépourvus des Ag correspondants
Situation complexe Auto Ac ± Allo Ac
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4/ lecture et interprétation LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
3 se
mai
nes
3 m
ois
Taux de l’Ac
1èr
e tr
ansf
usio
n 3jours
CM négatif
CM négatif
Seuil de détection de l’Ac
TS° TS°
1èr épisode transfusionnel immunogène Réponse primaire
2ème épisode transfusionnel apportant le même Ag Réponse secondaire
2èm
e tr
ansf
usio
n
5/ Durée de Validité
valide trois jours (72h) après le prélèvement de l’échantillon.
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
Date de la demande
Date de l’examen (CM)
N° du CGR
Date de péremption
Nom prénom
Matricule Service Date de l’annulation
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Registre de compatibilité si labo non informatisé:
6/ Traçabilité
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
Avantages • Permet d’éviter les
incompatibilités ABO. • Permet de détecter:
� les Ac anti-privé � la majorité des AlloAc.
• Assure une sécurité immunologique immédiate.
Inconvénients • Ne prévient pas l’immunisation.
• Ne garantit pas la survie des CGR
• Ne permet pas de détecter:
-les AlloAc dont l’Ag correspondant n’est
pas porté par les hématies du
donneur.
-les anticorps de faible titre en
particulier si les hématies du donneur
sont hétérozygotes. 25
Intérêts et limites
LE TEST DE COMPATIBLITE AU LABORATOIRE
Test ultime au lit du malade ( contrôle ultime pré- transfusionnel :CUPT)
Le test ultime au lit du malade ou Contrôle Ultime Pré-
Transfusionnel(C.U.P.T)
� Dernier verrou sécuritaire avant l’acte transfusionnel,
c’est une étape obligatoire et capitale
�Rempart aux dysfonctionnements possibles à tous les niveaux
de la chaine transfusionnelle
Introduction
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Permet d’éviter ce que nous redoutons tous: l’accident hémolytique
potentiellement mortel par incompatibilité ABO
Introduction
6 points clés
� Réalisé immédiatement avant chaque transfusion
� Au lit du malade en sa présence ( aucune des étapes ne doit
être effectuée en salle de soins)
� Ne concerne qu’un seul patient à la fois
� pour le même patient; à renouveler pour chaque CGR
� Obligatoire y compris en cas d’urgence vitale
� Réalisé par la personne qui pose la transfusion:
« je contrôle, je transfuse »
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
1. Le contrôle ultime de concordance Tous les PSL
2. Le contrôle ultime de compatibilité les CGR
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
Obligatoire (Circulaire 49/2005)
Réalisé en deux étapes:
L’identité du patient Contrôle ultime de concordance
En interrogeant le patient ( si son état le permet): faire décliner nom, prénom et date de naissance
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
Contrôle ultime de concordance
la carte de GS
la fiche transfusionnelle
-l’étiquette adhésive au PSL -l’étiquette solidaire de l’unité de sang à transfuser
Groupes sanguins
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
Contrôle ultime de concordance
Numéro du PSL
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
�� GS identiques (Receveur/CGR) : TS° ISOGROUPE
Pratiquer le contrôle ultime de compatibilité
Conformité des règles transfusionnelles:
� GS différents (Receveur / CGR) : TS° NON ISOGROUPE
Vérifier qu’elle est compatible
Pratiquer le contrôle ultime de compatibilité.
Contrôle ultime de concordance
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
Contrôle ultime de compatibilité
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
- Contrôle de compatibilité ABO :Epreuve globulaire � GS ABO du patient � GS ABO du CGR à transfuser
-Les Ag présents sur les GR sont révélés par les réactifs (Ac): �Anti-A (Bleu ) �Anti-B (jaune)
- Lecture : formation d’agglutinats visibles absence d’agglutinats
Principe Contrôle ultime de compatibilité
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
Contrôle ultime de compatibilité
Lame ou
plaque
4 spatules
Dispositifs: Sérums tests liquides:
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
-Bien conservés à +4°C
-Non périmés
-Régulièrement contrôlés
-Nécessité d’une procédure validée,
pour la traçabilité
Contrôle ultime de compatibilité Sérums tests liquides:
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
receveur
Contrôle ultime de compatibilité Sérums tests liquides:
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
Dispositif : SAFETY CARD AB Contrôle ultime de compatibilité
Sérums tests desséchés
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
Règle d’interprétation
Protocole
Personne réalisant le test
Zones individualisées:
� Identification
� Manipulation
� Interprétation
� Décision
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
Dispositif : SAFETY CARD AB
Ne jamais transfuser quand il y a pour le même réactif : � agglutination avec la poche � pas d’agglutination avec le patient
Règle:
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
NE JAMAIS DONNER L’Ag QUE LE RECEVEUR NE POSSEDE PAS
Transfusion ISO groupe Je transfuse
Réaction identique :
- même aspect
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
GS Patient: B GS culot: B
Je dois valider la compatibilité
Réaction NON identique :
Transfusion NON iso groupe COMPATIBLE Je transfuse
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
GS Patient: A GS culot: O
Transfusion NON iso groupe INCOMPATIBLE JE NE TRANSFUSE PAS
Réaction NON identique :
-Patient: ne possède aucun Ag sur ses GR, il a forcément les anti-A et anti-B dans son sérum - CGR apporte l’Ag B RISQUE D’HÉMOLYSE
Je dois valider la compatibilité
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
GS culot: B GS Patient: O
Difficultés d’interprétation Devant toute difficulté ou doute dans l’interprétation: - Bloquer la transfusion,
- Refaire le contrôle ,
- Demander l’avis du médecin responsable de la TS°
- Contacter le CRTS
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
« Chaloupage » trop énergique
Surface de réaction trop petite
Aspect
homogène
Agglutinats visible
TEST ULTIME AU LIT DU MALADE
Difficultés d’interprétation
Conclusion
� Le CM Permet, quand il est réalisé dans le respect des bonnes
pratiques de laboratoire, d’assurer une sécurité
immunologique immédiate optimale.
� Adapté à la Tunisie:
� Problème de disponibilité permanente d’un panel
discriminatif et équilibré .
� L’interprétation de La RAI nécessite un biologiste bien
informé.
Conclusion
� La sécurité transfusionnelle est la responsabilité à la fois des
centres de transfusion et des services transfuseurs.
� Le contrôle ultime au lit du malade est le dernier verrou de
sécurité et permet d’éviter les accidents par incompatibilité
ABO
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