neproteinski dušikovi spojevi 23.3.15
Post on 13-Sep-2015
99 Views
Preview:
DESCRIPTION
TRANSCRIPT
-
Neproteinski duikovi spojevi
Dr.sc. eljka VogrincKliniki zavod za laboratorijsku
dijagnostiku KBC Zagreb
-
Neproteinski duikovi spojevi (NPN) Niskomolekularni spojevi s duikom koji nastaju u
tijelu kao produkt razliitih metabolikih pregradnji proteina
Najvei dio NPN ine: Ureja Kreatinin Mokrana kiselina (urati) Amonijak
Izluuju se iz tijela najvie bubrezima (glomerularnom filtracijom) - mjerenje u krvi i urinu se koristi kao indikator bubrene funkcije
-
Ureja Glavni metaboliki produkt razgradnje
proteina i aminokiselina Oko 75% neproteinskog duika se iz
organizma izluuje u obliku ureje Sinteza u jetri urea ciklus
Uklanjanje toksinog amonijaka nastalog katabolizmom AK
Uklanjanje iz organizma: Bubrezi oko 90% - urin GIT Koa
Biljeg bubree funkcije
NH4+ + HCO3- + Aspartat + 3ATP + H2O Urea + Fumarat + 2ADP + AMP 2Pi + PPi
-
Ureja i bubrena funkcija Filtracija u glomerulima, ne reapsorbira se niti se dodatno stvara Porast koncentracije ureje u krvi u razliitim bubrenim bolestima:
Akutni i kronini glomerulonefritis ili pijelonefritis Nefroskleroza ...
Porast koncentracije ureje u krvi proporcionalan je oteenju bubrega Uremija ( ureja u krvi): akutna i kronina insuficijencija bubrega
Na koncentraciju ureje u krvi utjeu jo i: Prehrana (proteinska dijeta - ureje u krvi!) Pojaana razgradnja proteina Terapija (kortikosteroidi!) Dehidracija Srane bolesti...
-
Metode odreivanja ureje1. Reakcija ureje s -diketonima
- Nedovoljno specifina metoda, potrebna prethodna deproteinizacija seruma, reagens je nestabilan... - zastarjelo, nije za rutinsku uporabu
2. Odreivanje amonijaka nakon hidrolize ureje s ureazom(npr. Berthelotova reakcija)- metode s ureazom specifine; razliite modifikacije
3. Odreivanje ureje pomou ion-selektivnih elektroda (ISE)- selektivne metode za odreivanje amonijaka koji nastaje iz urejedjelovanjem ureaze s ISE membrane
4. Enzimsko odreivanje osloboenog amonijaka nakon hidrolize s ureazom (optiki test)- visoko specifina metoda na principu optikog testa referentna metoda- naelo mjerenja: djelovanjem ureaze ureja se hidrolizira, a nastali amonijak reagira uz katalitiko djelovanje glutamat-dehidrogenaze (GLDH) s 2-oksoglutaratom i NADH. Smanjenje apsorbancije do kojeg dolazi proporcionalno je koncentraciji duika iz ureje u uzorku
-
Referentne vrijednosti za ureju Serum/plazma:
2,8-8,3 mmol/L Mokraa (24-satni uzorak)
430-710 mmol/dU Predanalitika:
Stabilnost ureje u uzorku: +4-25C do 7 dana-20C do 1 god.
-
Kreatinin Nastaje spontanom razgradnjom
iz kreatina i kreatin fosfata kao nusprodukt miinog metabolizma
Dnevna pregradnja: oko 2% kreatina
Koncentracija u krvi je proporcionalna miinoj masi u fiziolokim uvjetima konstantna koncentracija u krvi iz dana u dan
Uklanjanje iz organizma: Bubrezi
Kompletno se filtrira u glomerulima, ne reapsorbira se, a dodatno se vrlo malo secernira u tubulima
Biljeg bubrene funkcije
-
Kreatinin kao biljeg bubrene funkcije Kompletno se filtrira u
bubregu endogeni biljeg glomerularne filtracije (GFR)
Pouzdan za praenje GFR kod bolesnika s kroninom bubrenom boleu
Mjerenje u krvi jednostavno, brzo i jeftino
Zlatni standard
Klirens testovi
-
Razliita stanja utjeu na koncentraciju u krvi, neovisno o funkciji bubrega
Velike inter- i intraindividualne razlike dob, spol, ishrana, fizika
aktivnost... Bubreni tubuli secerniraju
dodatno malu koliinu kreatinina
U akutnim stanjima(gubitak miine mase, ok, parenteralna prehrana, terapija...) -koncentracija u krvi jako varira
Kasni biljeg bubrenog oteenja: porast koncentracije u serumu nekoliko dana nakon poetka bolesti gubitak i do 50% bubrene funkcije
Kreatinin kao biljeg bubrene funkcije
KREATININ NIJE IDEALNI BILJEG!
-
Metode odreivanja kreatinina:
Kolorimetrijska metoda (Jaff, 1886.god.) kreatinin + pikrinska kiselina alkalni pH naranasto-uto
obojeni kompleks Intenzitet obojenja proporcionalan je koncentraciji
kreatinina u uzorku Razliite modifikacije metode Jednostavna i dostupna, automatiziranaNEDOSTACI: Velik utjecaj interferirajuih supstanci Interferencije:
Pseudokromogeni iz plazme (proteini, glukoza, ketoni...): lano poviene vrijednosti KN
Hiperbilirubinemija: lano sniene vrijednosti KN
-
Enzimske metode
Kreatinin se uz kreatininazu, kretinazu i sarkozin oksidazu prevodi u glicin, formaldehid i H2O2:
Intenzitet obojenja direktno je proporcionalan koncentraciji kreatinina u uzorku i mjeri se fotometrijski
Metoda je specifinija od kolorimetrijske; manje interferencija Bolja korelacija rezultata s HPLC metodom Tonija procjena GFR mogua primjena empirijskih formula
HPLC Referentna metoda Nije za rutinski rad
creatinine + H2O creatininase creatinecreatine + H2O creatinase sarcosine + ureasarcosine + O2 + H2O sarcosine oxidase glycine + formaldehyde + H2O2H2O2 + aminophenazone/HTIB POD chromogen + H2O
-
Standardizacija mjerenja kreatinina
Standardizacija mjerenja: uvoenje kompenzacijeu kolorimetrijske metode matematika korekcija kojom se smanjuje utjecaj proteina na reakciju (najee od -18 do -26 mol/L)
Standardizacijom se osiguravaju jednaki rezultati pretrage iz razliitih laboratorija osiguravanje sljedivosti u procjeni GFR Doziranje terapije, praenje bolesnika s KBB ...
Od 2009. standardizacija mjerenja je obaveza za sve proizvoae IVD testova za kreatinin (sve metode!) pripravak humanog serumskog referentnog materijala za kreatinin - NIST SRM
967 ; IDMS (kalibratori!) Standardizacija mjerenja: uvoenje kompenzacije matematika
korekcija kojom se smanjuje utjecaj proteina na reakciju (najee od -18 do -26 mol/L)
Visok analitiki bias izmeu pojedinih metoda velike razlike u rezultatima kreatinina izmeu laboratorija
-
Referentne vrijednosti za kreatinin Ovisne o dobi i spolu Serum/plazma (odrasli):
M: 64-104 mol/L : 49-90 mol/L
Mokraa (24-satni uzorak): M: 7,1-17,1 mmol/L :9,7-17,7 mmol/L
Omjer koncentracije ureja/kreatinin: kriterij za razlikovanje prerenalne od renalne bolesti konc. ureje u odnosu na KN je znak prerenalne
bolesti (zastoj rada srca, pojaan katabolizam proteina i dr.)
-
Mokrana kiselina Krajnji metaboliki
produkt razgradnje nukleinskih kiselina (purinskih baza) u organizmu Egzogeni i endogeni
purini Egzogeni purini:
uneeni hranom (meso!) koncentracija u krvi
ovisna o prehrani
Biosinteza i razgradnja purina:
-
Krv: 134-403 mol/L Urin (75%): 1,48-4,43 mmol/LStolica (25%)
Homeostaza mokrane kiseline (urata)
-
Mokrana kiselina (urati) u krvi Na koncentraciju u krvi utjeu:
Spol (vie vrijednosti kod mukaraca) Dob (najvee vrijednosti kod novoroenadi) Genetski imbenici ivotni uvjeti (prehrana)
Uklanjanje iz cirkulacije : Bubrezi (oko 75%)
Filtracija u glomerulima, reapsorpcija u proksimalnim tubulima, aktivno izluivanje u distalnim tubulima
Crijeva (oko 25%) Crijevne bakterije - razgradnja
-
Dijagnostiko znaenje Poveana koncentracija mokrane kiseline (urata) u krvi
(hiperuricemija) moe biti posljedica: Pojaane sinteze purina Poveanog unosa purina hranom (meso) Pojaane razgradnje purina Smanjenog izluivanja bubrezima
Primarna i sekundarna hiperuricemija: Primarna zbog poremeaja u kontrolnom mehanizmu povratne
sprege u sintezi i razgradnji Sekundarna zbog ubrzanog metabolizma purina
najee u zloudnim bolestima ali i u infekcijama, psorijazi i dr.
Sniena koncentracija urata u krvi Nasljedne metabolike bolesti Lijekovi (aspirin)
-
Najei uzroci hiperuricemije: Bolesti bubrega
Akutne i kronine bolesti bubrena insuficijencija
Giht (ulog) Odlaganje urata u zglobove zbog prekomjerne
sinteze purina (primarna hiperuricemija!) Kristali urata u zglobnoj tekuini
Nasljedni poremeaji Lesh-Nyhanov sindrom
-
Metode odreivanja urata Dvije skupine spektrometrijskih metoda: REDUKTIVNE I ENZIMSKE Reduktivne metode
Princip: mokrana kiselina se s fosfovolframatom oksidira u alantoin pri emu se fosfovolframat reducira u plavo obojeni spoj
Nedovoljno specifine Enzimske metode
Princip: mokrana kiselina se oksidira djelovanjem enzima urikaze u alantoin pri emu nastaje vodikov peroksid (H2O2) koji se mjeri u UV podruju (340-380 nm) direktno ili razliitim pomonim reakcijama s kromogenom
Preporuena metoda: spektrofotometrijska UV metoda s urikazom
-
Referentne vrijednosti za urate (odrasli >20 god.) Serum/plazma:
M: 182-403 mol/L : 134-337 mol/L
Mokraa (24-satni uzorak): M, : 1,48-4,43 mmol/dU
-
Amonijak NH3 Nastaje deaminacijom
aminokiselina najveim dijelom u probavnom traktu djelovanjem bakterijskih enzima (proteaze, ureaze i aminooksidaze)
Ostala mjesta stvaranja: Bubreg, mozak, miii
Brzo uklanjanje iz organizma zbog velike toksinosti amonijaka:
utjecaj na acidobazinu ravnoteu
direktna oteenja mozga (koma!)...
HIPERAMONIJEMIJA !!
-
Uklanjanje amonijaka iz organizma: Jetra
uklanja najvei dio stvorenog amonijaka
Ureja ciklusom se amonijak prevodi u ureju
Mozak, miii Vezivanjem za
glutaminsku kiselinu i stvaranjem glutamina
Bubreg Izluivanje mokraom
UREJA CIKLUS
DIJAGNOSTIKA BOLESTI JETRE
-
Metode odreivanja amonijaka u plazmi Vanost predanalitike:
Amonijak se poveava u krvi i nakon vaenja (enzimska pregradnja se nastavlja i in vitro, u epruveti)
Krv odmah nakon vaenja staviti na led (-20C) Metode odreivanja (NH3 ili NH4+)
Direktno, enzimsko mjerenje preporuene metode Indirektno mjerenje
titracijom nakon eluiranja amonijaka iz plazme Kolorimetrijski nakon vezivanja za ionske izmjenjivae...
Enzimska UV metoda s -ketoglutaratom i glutamat dehidrogenazom (GLD)
Naelo mjerenja: amonijak reagira s -ketoglutaratom i NADPH u prisutnosti GLD (katalizator) pri emu nastaje glutamat i NADP+. Koncentracija stvorenog NADP+ je direktno proporcionalna koncentraciji amonijaka u uzorku. Mjeri se pad apsorpcije svjetlosti na 340 nm
Rutinski u laboratoriju!
-
Referentne vrijednosti za amonijak: Ovisne o dobi djeca imaju vie vrijednosti
Plazma (odrasli): M: 14,7-55,3 mmol/L : 11,2-48,2 mmol/L
Hiperamonijemija ( NH3): Teka oteenja jetre, hepatika koma Teka krvarenja iz GIT Nasljedni metaboliki poremeaji
top related