informe de laboratorio nº 5 bioquimica
Post on 17-Oct-2015
98 Views
Preview:
TRANSCRIPT
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
1/24
UNIVERSIDAD NACIONALS NTI GO NTNEZ DE M YOLO
FACULTAD DE CIENCIAS del ambienteESCUELA PROFESIONAL DE ingeniera ambiental
CURSO:BIOQUMICA AMBIENTAL
TEMA:PRACTICA N05 TITULACIN DE UN AMINOCIDO Y LAAPLICACIN DE LA ECUACIN HENDERSON HASELBALCH
Determinar del PK1 Y Pk2DOCENTE:
VICTOR H.ZAMBRANO A.ALUMNA:
Quionez collas Fiorella 112.0605.010
HUARAZ ANCASH PERU
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
2/24
I INTRODUCCIN
Somos conscientes que LA TITULACIN DE UN AMINOCIDO Y LA APLICACIN DELA ECUACIN DE HENDERSON-HASSELBALCH, es una prctica de laboratorio muy
importante, ya que nos permiti conocer la medida del pK de los grupos
ionizables del cido glutmico, su capacidad amortiguadora y la aplicacin de
ste en la ecuacin de Henderson- Hasselbalch. La principal finalidad es lograr
la comprensin integral de este tema, y para ello, hemos considerado
conveniente organizar nuestro trabajo de la siguiente manera: conoceremos qu
materiales, equipos o reactivos vamos a utilizar; y cules son los procedimientos
que vamos a llevar a cabo para realizar dicha prctica.
Tendremos muy en cuenta las bases tericas, tanto del pH, la constante de
equilibrio y disociacin (pK), y la ecuacin de HENDERSON-HASSELBALCH. Luego,
como motivo de aplicacin, mediremos y comparemos los diversos pH de las
soluciones de cido glutmico e hidrxido de sodio (NaOH), finalmente
registraremos nuestros resultados en una tabla, y en un grfico identificaremos:
Pk1y Pk2.
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
3/24
II.OBJETIVOS
Experimentar y entender cmo se comporta un sistema amortiguador de pH.
Aprender el uso de la ecuacin de Henderson Hasselbalch.
III.FUNDAMENTO TERICO
ECUACIN DE HENDERSON-HASSELBALCH
La ecuacin de Henderson-Hasselbalch es una frmula qumica que se utiliza para
calcular el pH, de una solucin buffer, o tampn, a partir del pK a(la constante
de disociacin del cido) y de las concentraciones de equilibrio del cido con su
base conjugada.
Los cidos fuertes presentan valores altos de Ka, mientras que los cidos dbiles
presentan valores bajos de Ka. Estas constantes de disociacin son caractersticasde cada par conjugado cido-bsico para una temperatura determinada.
En la disociacin de un cido:
La constante de equilibrio es:
()
Si tomamos logaritmos:
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
4/24
Y cambiando de signos:
O lo que es lo mismo:
Y reordenando, tenemos:
()
De las ecuaciones () y () resulta claro que la capacidad amortiguadora de un
sistema es mxima cuando la cantidad de anin libre, es igual a la cantidad de
[AcH] no disociado, esto es, cuando:
De manera que:
Entonces:
pH = pKa
Tambin podemos expresar la ecuacin de Henderson-Hasselbalch de una
forma vlida para todos los amortiguadores:
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
5/24
A partir de esta frmula se pueden deducir fcilmente las propiedades de los
amortiguadores:
a) El pH de una disolucin amortiguadora depende de la naturaleza del cidodbil que lo integra (de su pK), de modo que para cantidades
equimoleculares de sal y de cido, el pH es justamente el pK de este
cido. Dicho de otra forma, se puede definir el pK de un cido dbil como
el pH del sistema amortiguador que se obtiene cuando [sal] = [cido].
Figura 1:Curva de valoracin cido-base
b) El pH del sistema amortiguador depende de la proporcin relativa entre lasal y el cido, pero no de las concentraciones absolutas de estos
componentes. De aqu se deduce que aadiendo agua al sistema, lasconcentraciones de sal y cido disminuyen paralelamente, pero su
cociente permanece constante, y el pH no cambia. Sin embargo, si la
dilucin llega a ser muy grande, el equilibrio de disociacin del cido se
desplazara hacia la derecha, aumentando la [sal] y disminuyendo [cido],
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
6/24
con lo cual el cociente aumenta y el pH tambin, de forma que se ira
acercando gradualmente a la neutralidad (pH 7).
c) Cuando se aaden cidos o bases fuertes a la disolucin amortiguadora, elequilibrio se desplaza en el sentido de eliminar el cido aadido (hacia la
izquierda) o de neutralizar la base aadida (hacia la derecha). Este
desplazamiento afecta a las proporciones relativas de sal y cido en el
equilibrio. Como el pH vara con el logaritmo de este cociente, la
modificacin del pH resulta exigua hasta que uno de los componentes est
prximo a agotarse.
VALORACIN CIDO-BASE
Las valoraciones o volumetras cido-base permiten conocer la concentracin de
un cido o de una base presente en una disolucin.
En estas valoraciones se mide el volumen de cido (o de base) de una
concentracin conocida necesaria para neutralizar un volumen determinado de
base (o de cido) de concentracin desconocida. Cuando se valoran cidos se
llaman acidimetras y cuando se valoran bases, alcalimetras.
El nombre volumetra hace referencia a la medida del volumen de lasdisoluciones empleadas, que nos permite calcular la concentracin buscada.
Aparte del clculo de concentraciones, una valoracin cido-base permite
conocer el grado de pureza de ciertas sustancias.
Clases de valoracin cido-base
Se pueden clasificar en dos grandes grupos:
- Alcalimetras: Determinacin de la concentracin de una base empleandoun cido fuerte de concentracin conocida como sustancia valorante. Seemplea casi siempre cido clorhdrico, HCl; a veces cido sulfrico, H2SO4; y
casi nunca los cidos ntrico (HNO3) y perclrico, (HClO4).
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
7/24
- Acidimetras. Determinacin de la concentracin de un cido empleandouna base fuerte de concentracin conocida como sustancia valorante, como
el NaOH.
Curva de valoracinEs el grfico de pH en funcin del volumen.
Punto de equivalencia: valor del pH
Se llama punto de equivalencia al momento en que son iguales los equivalentes
de la sustancia valorada y los de la sustancia valorante. Este punto de
equivalencia se detecta muy fcilmente ya que se observa en sus inmediaciones
un brusco salto de pH que se puede detectar en un potencimetro, pH-metro o
con un indicador.
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
8/24
CIDO GLUTMICO
El cido glutmico(glutamato) es un aminocido no esencial que se utiliza en el
organismo para la sntesis de protenas. Sus smbolos son Glu o E. El glutamato es
el neurotransmisor excitador (estimulante) ms comn en el sistema nervioso
central. Es de gran importancia en el funcionamiento del Sistema Nervioso
Central, tambin acta como estimulante del sistema inmunolgico. Su papel
como neurotransmisor est mediado por la estimulacin de receptores
especficos, denominados receptores de glutamato. Todas las neuronas contienen
glutamato, pero solo unas pocas lo usan como neurotransmisor. Desempea un
papel esencial en la relacin con los procesos de transaminacin, es decir la
reaccin entre un aminocido y un alfa-cetocido, en la que el grupo amino estransferido de aquel a ste, con la consiguiente conversin del aminocido en su
correspondiente alfa-cetocido.
Despus de la formacin de glutamato, ste transfiere su grupo amino
directamente a una variedad de alfa-cetocidos por varias reacciones reversibles
de transaminacin: donacin libremente reversible de un grupo amino alfa de un
aminocido al grupo ceto-alfa de un alfa-cetocido, acompaado de la formacin
de un nuevo aminocido y un nuevo alfa-cetocido.
Tambin desempea un papel importante en la sntesis de distintos aminocidos
que necesitan la formacin previa de ste cido, como es el caso de ornitina,
arginina, prolina e hidroxiprolina.
Es uno de los aminocidos ms abundantes del organismo y un comodn para el
intercambio de energa entre los tejidos. Se considera un aminocido no esencial
porque se puede sintetizar en muchos tejidos, teniendo un papel fundamental en
el mantenimiento y el crecimiento celular.
Se aisl por primera vez en 1866, y en 1908 se descubri que era el componente
responsable del efecto potenciador del sabor de los extractos del alga Laminaria
japnica, usados tradicionalmente en la cocina japonesa. Desde 1909 se produce
comercialmente para su uso como aditivo alimentario. El mtodo ms usado es
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
9/24
por fermentacin de azcares residuales de la industria agroalimentaria, siendo
Japn y Estados Unidos los principales productores. El cido D-glutmico, muy
parecido qumicamente, no tiene actividad ni como elemento de construccin de
las protenas ni como potenciador del sabor.
El cido glutmico no es un aminocido esencial, es decir; el organismo humano
es capaz por s mismo de fabricar todo el que necesita a partir de otros
componentes. Cuando la ingesta es mayor que la necesaria para la fabricacin de
protena, se utiliza el exceso como una fuente de energa.
El cerebro tiene una concentracin de cido glutmico libre, unas 100 veces
superior a la de la sangre. No obstante, la ingestin de esta substancia no le
afecta positiva ni negativamente. Las advertencias sobre su toxicidad para el
cerebro que se encuentran a veces se basan en el efecto sobre animales a dosisenormes, que extrapoladas al hombre representaran del orden de 1/4 de Kg de
una sola vez, y adems inyectado. No obstante, la mayor sensibilidad del cerebro
en animales jvenes hace que haya dejado de utilizarse en alimentos infantiles
en muchos pases (en bastantes, de forma voluntaria por los fabricantes).
Varios estudios han demostrado que el bazo, intestino, estmago y pncreas,
consumen el 95% del cido glutamnico ingerido en la dieta. Esto nos indica la
necesidad de consumir una dieta rica en protenas para no alterar el equilibrio deaminocidos con acceso al resto del organismo despus de este paso inicial de
nutrientes por el aparato digestivo.
Funciones que desempea:
Estas son algunas de las funciones ms importantes que el cido glutamnico,
Nos ayuda en la produccin del cido clorhdrico. Controla los niveles de amoniacoen el cerebro. Junto a la vitamina B6, es precursor del neurotransmisor GABA(cido gamma
aminobutrico), cuya accin sedante sobre el sistema nervioso es importante.
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
10/24
Lo requieren como fuente de energa las clulas del sistema inmunitario. Ayuda en produccin de energa para el cerebro. Ayuda a controlar el alcoholismo. Ayuda a la cicatrizacin de lceras. Alivia la fatiga, la depresin y la impotencia. Se usa en la demencia senil y la falta de concentracin. Excelente en el tratamiento de las funciones normales de la prstata. Interviene especficamente en la utilizacin de la glucosa por las clulas del
cerebro.
Funciona como sistema de transporte de aminocidos y de nitrgeno desdetejidos perifricos hacia el hgado.
Precursor en la biosntesis de las bases pricas y pirimidnicas. Tiene un papel fundamental en el mantenimiento y crecimiento celular. Precursor para la sntesis de cidos nucleicos (ADN). Previene la atrofia intestinal e infecciones. Reduce la permeabilidad intestinal. Regula la produccin de ureaen elhgado. Es precursor para la sntesis de un metabolito con alto potencial antioxidante,
como es la produccin de glutatin.
Parece ser que interviene en la liberacin de las GnRH (hormona liberadorade la gonadotropina, fundamental para el dismorfismo cerebral y corporal.
Su dficit puede provocar:
Estos son algunos de los trastornos que la deficiencia del cido glutamnico,
puede ocasionar en el organismo:
Alteraciones graves en el aprendizaje, la memorizacin y la plasticidadneuronal.
Alteraciones importantes del sistema nervioso. Falta de concentracin y de reflejos.
Exceso de cido Glutamnico en el organismo:
http://www.rdnattural.es/enfermedades/el-cuerpo-humano/higado/http://www.rdnattural.es/enfermedades/el-cuerpo-humano/higado/http://www.rdnattural.es/enfermedades/el-cuerpo-humano/higado/http://www.rdnattural.es/enfermedades/el-cuerpo-humano/higado/ -
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
11/24
Se cree que el exceso del cido glutamnico en el espacio extracelular, es la
causa de la enfermedad ELA (Esclerosis Lateral Amiotrfica).
Toxicidad:
Su toxicidad es mnima. A partir de experimentos con animales se puede deducir
que la dosis letal para un hombre adulto sera de bastante ms de 1 Kg ingerido
de una sola vez.
A partir de 1968 empez a hablarse del sndrome del restaurante chino,
designando por este trmino una serie de sntomas (hormigueo, somnolencia,
sensacin de calor y opresin en la cara,) de los que se acusaba a la ingestin de
cantidades relativamente elevadas de glutamato, muy utilizado en la cocina
oriental. En un estudio de hace 10 aos, se estimaba que este fenmeno poda
afectar al 1-2% de los adultos, pero slo a concentraciones en los alimentos del
orden de 30 g/Kg. Adems, muchas de las personas que alegan ser sensibles al
glutamato no lo son en realidad, no presentando los sntomas descritos en
pruebas ciegas. Cuando estos sntomas subjetivos se presentan, desaparecen
rpidamente, y no van acompaados de cambios fisiolgicos (temperatura local,
presin arterial, etc.).
IV.MATERIALES, EQUIPOS, SOLUCIONES Y REACTIVOS
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
12/24
1.Probeta de 100 ml 2.Pizeta
3. Bureta 4.Pipeta de 1.0 ml
5. Vaso de precipitado de 100 ml
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
13/24
7.Gradilla 8.Potencimetro
9.Tiras reactivas de pH 10. NAOH 1.0 mol/L
V.PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
14/24
Poner 20 ml de la solucin de cido glutmico en un vaso de precipitado de100ml
Proceder a la medicin del pH Aadir 0.1ml de NaOH 1.0 mol/l agitar el vaso y volver a medir el pH,
anotar los resultados.
Repetir el paso 3 hasta llegar a un pH aproximado de 12. Hacer lo mismo (paso 1 a 4) para otros aminocidos.
VI.ANLISIS DE RESULTADOS
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
15/24
NaOH ml pH del cidoglutmico
Inicial 0.0 0.61 0.12 0.23 0.3
4 0.45 0.56 207 208 209 4010 4011 5012 5013 5014 5015 5016 50
17 5018 5019 5020 50
Tabla N1:Valores de los pH y volmenes de las soluciones
GRFICO N1:Curva de valoracin cido-bsica del cido Glutmico
VII.DISCUSIN DE RESULTADOS
2.5
2.7
2.9
3.1
3.3
3.5
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 2
PH
Volumen (ml)
V RI CIN DEL VOLUMENY PH DEL CIDO
GLUTMICO
pH del cido Glutmico
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
16/24
No se logr obtener el Ph 12 debido a que el NaOH no se encontrabaal 1.0 mol por litro, por el contrario se encontraba en 0.1 molar, lo
cual indicaba que estaba demasiado diluido y no favoreci a la
resolucin de la prctica.
Segn los radicales que posee el cido glutmico, debera de tener3 pKa, es decir, pK1, pK2 y pK3.
VIII.CONCLUSIONES
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
17/24
Un sistema amortiguador de pH se comporta como una resistencia a uncambio brusco en la variacin del pH al aplicarle cido o alguna base.
La ecuacin de Henderson-Hasselbalch utiliza las concentraciones deequilibrio de un cido y base conjugada, y la constante de disociacin del
cido para calcular el pH de una solucin tampn.
Un dador protnico y su correspondiente aceptor forman un par cido-baseconjugados.
Los cidos y bases dbiles se disocian parcialmente y por lo tanto, laconcentracin de los iones H+ u OH- es menor que la totalidad de sus
grupos ionizables.
Los cidos y bases fuertes se disocian por completo, es decir, la totalidadde los iones H+ u OH-estn en forma libre, y su concentracin depender
de la concentracin del cido o de la base de donde provienen.
Casi todos los cidos orgnicos se disocian parcialmente. Un aminocido puede comportarse como un amortiguador porque tiene la
propiedad de comportarse como un cido dbil.
La valoracin o titulacin es un mtodo que consiste en la cuantificacinde una solucin de una sustancia por medio de la reaccin al equilibrio,
con otro compuesto cuya concentracin y volumen se conocen.
El cuerpo humano posee sistemas amortiguadores tales como el sistemaamortiguador del bicarbonato, el del fosfato y el de las protenas.
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
18/24
IX.RECOMENDACIONES
Medir adecuadamente la cantidad de cada sustancia a utilizar. Marcar correcta y adecuadamente los vasos que contienen cada
sustancia.
Calibrar adecuadamente el potencimetro. El cido glutmico debe tener una concentracin ptima de 0.0025M para
obtener resultados verdicos.
X.BIBLIOGRAFA
MURRAY ROBERT K. (2010) BIOQUMICA HARPER. BIOQUMICA ILUSTRADA28. ED. EDITORIAL: MCGRAW-HILL
HICKS GMEZ JUAN JOS (2007) BIOQUMICA 2. ED. EDITORIAL: MCGRAW-HILL
LAGUNA J, PIA E.2009). BIOQUMICA: 6. ED EDITORIAL MANUAL MODERNO. MATHEWS-VAN HOLDE-AHERN (2002) BIOQUMICA 3A. ED. EDITORIAL.
PEARSON
TRUDY MCKEE (2009) BIOQUMICA LAS BASES MOLECULARES DE LA VIDA 4.ED EDITORIAL: MCGRAW-HILL
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
19/24
I. CUESTIONARIO
1.Qu es un sistema amortiguador acido-base y para qu sirve?
Un sistema amortiguador conformado por un cido dbil (dador de protones) y
su base conjugada (aceptor de protones), es un sistema acuoso capaz de
resistir o menguar los cambios drsticos en el pH cundo se le agregapequeas cantidades de cido (H+) o base (OH-).
2.Cules son los sistemas amortiguadores ms importantes del cuerpo
humano?
El cuerpo humano tambin cuenta con sistemas amortiguadores destacando
entre ellos:
a. Sistema amortiguador del bicarbonato:
Consiste en una solucin acuosa con dos componentes: un cido dbil
(el cido carbnico o H2CO3) y una sal bicarbonato, por ejemplo
bicarbonato de sodio (NaHCO3). El H2CO3, se forma en el organismo
mediante la reaccin:
http://aprendosistemarenal.blogspot.com/2010/05/intercambio-de-proton-intracelular-por.htmlhttp://aprendosistemarenal.blogspot.com/2010/05/intercambio-de-proton-intracelular-por.html -
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
20/24
CO2+ H2H2CO3
Esta reaccin es lenta y las cantidades de H2CO3 que se forman son
pequesimas a menos que tenga lugar en presencia de la enzima
anhidrasa carbnica. Esta enzima es especialmente abundante en las
paredes de los alvolos pulmonares, desde all se libera el CO2;
tambin se encuentra en las clulas epiteliales de los tbulos renales,
donde el CO2reacciones con el H2O para formar el H2CO3.
El H2CO3se ioniza dbilmente para formar pequesimas cantidades de
H+y de HCO3-
H2CO3H++ HCO3-
El segundo componente del sistema, el bicarbonato, se encuentra
principalmente en forma de sal sdica (NaHCO3) y predomina en el LEC
(lquido extracelular). El NaHCO3 se ioniza casi por completo,
formando iones de bicarbonato (HCO3-) y de sodio (Na+):
NaHCO3
Na+
+ HCO3-
b. Sistema amortiguador de fosfato:
El sistema amortiguador de fosfato interviene sobre todo en el
amortiguamiento del lquido de los tbulos renales y de los LIC (lquido
intracelular). Los elementos principales de este sistema son H2PO4-
(anin fosfato dicido) y HPO4+(catin fosfato monocido). Cuando se
aade a una mezcla de estas sustancias un cido fuerte, se produce lo
siguiente:
HCl + Na2HPO4NaH2PO4+ NaCl
El sistema amortiguador del fosfato es especialmente importante en
los lquidos tubulares de los riones porque el fsforo suele
http://aprendosistemarenal.blogspot.com/2010/05/participacion-de-los-sistemas.htmlhttp://aprendosistemarenal.blogspot.com/2010/05/participacion-de-los-sistemas.html -
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
21/24
concentrarse mucho en esos tbulos. Adems es importante para el
amortiguamiento de los LIC, ya que la concentracin de fosfato en
estos lquidos es muy superior a la que existe en los LEC (lquido extra
celular)
c. Sistema amortiguador de las protenas:
Gracias a sus elevadas concentraciones, sobre todo en el interior de
las clulas, las protenas son uno de los amortiguadores ms
importantes del organismo. Constituyen el amortiguador ms
abundante en el LIC y en el plasma. La hemoglobina es una protena
que resulta especialmente eficaz como amortiguador dentro de los
eritrocitos, en tanto que la albmina constituye la principal protenaamortiguadora en el plasma.
Como las protenas se componen de aminocidos, contienen al menos
un grupo carboxilo (-COOH) y al menos un grupo amino (-NH2); estos
grupos son los elementos funcionales del sistema amortiguador
protenico.
El grupo carboxilo libre en un extremo de la protena acta como cido
al liberar H+
cuando se eleva el pH. En esta forma el H+
puedereaccionar con cualquier exceso de OH- que hay en la solucin para
formar agua.
El grupo amino libre que se encuentra en el otro extremo de la
protena puede actuar como base y combinarse con H+ cuando
disminuye el pH.
Por consiguiente, las protenas pueden amortiguar tanto los cidos
como las bases. Adems de los grupos terminales carboxilo y amino,
siete de los 20 aminocidos tienen cadenas laterales que pueden
amortiguar el H+.
3.Qu es el pK de un par acido base?
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
22/24
EL pK mide la fuerza de disociacin del cido para formar su base conjugada.
As: El pK es la funcin potencial, (-Log) de Ka o de Kb y que tiene el propsito
de manejar nmeros ms "cmodos". Por ejemplo el cido actico tiene una
Ka=1.8x10-5
pKa= -Log (1.85x10-5) = 4.74
4.Dibujar la frmula del cido glutmico, la glicina y lisina e identificar a los
grupos amino, carboxlico y su radical indicar la naturaleza del mismo.
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
23/24
-
5/27/2018 INFORME DE LABORATORIO N 5 BIOQUIMICA
24/24
5.Se puede utilizar los aminocidos como amortiguadores de pH
fundamente su respuesta.
Para mantener el pH de los lquidos corporales constante hacemos uso de
sistemas que llamamos amortiguadores (ingls, buffer; francs, tampn), los
cuales en este caso, las protenas, son buenos amortiguadores por que los
aminocidos que lo constituyen se comportan como cidos dbiles.
Los aminocidos tienen esas propiedades de ah la costumbre de cuando se
tiene acidez estomacal tomar leche, pero no son muy prcticos ya que elrango de pH de amortiguacin o bien la zona amortiguadora de una disolucin
de este tipo es muy reducida.
top related