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ALBINISMO OCULOCUTÁNEO RELACIONADO CON LA TIROSINASA (OCA):
GENÉTICA Y OPTOMETRÍA EN REVELACIÓN
DIANA PAOLA SANABRIA LOZANO
UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
LABORATORIO DE GENÉTICA HUMANA
BOGOTÁ D. C., COLOMBIA
2009
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ALBINISMO OCULOCUTÁNEO RELACIONADO CON LA TIROSINASA (OCA):
GENÉTICA Y OPTOMETRÍA EN REVELACIÓN
Trabajo de Grado para optar al título de Bióloga
Diana Paola Sanabria Lozano
Directora:
Helena Groot de Restrepo
Microbióloga M. Sc
Codirector:
Julio Guzmán Vargas
Optómetra, Abogado M. Sc
Asesora:
María Claudia Lattig Matiz
Microbióloga M.Sc PhD.
UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
LABORATORIO DE GENÉTICA HUMANA
BOGOTÁ D. C., COLOMBIA
Diciembre, 2009
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ALBINISMO OCULOCUTÁNEO RELACIONADO CON LA TIROSINASA (OCA):
GENÉTICA Y OPTOMETRÍA EN REVELACIÓN
DUIANA PAOLA SANABRIA LOZANO
Laboratorio de Genética Humana, Departamento de Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias. Universidad de los Andes
e-mail: [email protected], [email protected]
RESUMEN
El estudio del albinismo oculocutáneo como condición hereditaria relacionada con la biosíntesis de
la melanina, ha permitido dilucidar cómo funciona esta ruta metabólica y cuál es su importancia en
los organismos donde está presente. La tirosinasa, que es la enzima clave en este proceso, se
encuentra codificada en el gen TYR en humanos. Este trabajo está enfocado en mi caso y gira en
torno a dos objetivos principales: El primero, buscar y ubicar en el árbol genealógico de mi familia
las mutaciones del gen TYR que están afectando la funcionalidad de la tirosinasa. Y el segundo,
evaluar si un sistema óptico simple, que consiste en usar en conjunto un par de lentes de contacto
cosmoprotésicos junto con anteojos, permiten incrementar de forma significativa la agudeza visual.
Como resultados, se encontró una sustitución de G por A en el nucleótido 140 por mi línea
familiar paterna. Esta mutación implica un cambio en el aminoácido 47 que suele ser glicina por
ácido aspártico. Estudios donde se evalúan varios casos, han reportado esta misma mutación en
poblaciones hispanas, en Islas Canarias y en judíos sefarditas de Marruecos.. La mutación por mi
línea materna aún falta por encontrarse. En cuanto al sistema óptico, dado que es posible crear
una cámara obscrua artificial que filtre la luz que entra al ojo puede ser una buena alternativa para
incrementar la calidad de la imagen por ende la agudeza visual en pacientes con albinismo.
Palabras clave: Albinismo Oculocutáneo, Tirosinasa, Gen TYR, nystagmus, baja visión, lente de
contacto cosmoprotésico.
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TABLA DE CONTENIDO
1. INTRODUCCIÓN ....................................................................................................................................................... 4
Objetivo general ..................................................................................................................................................................... 7
Objetivos específicos ............................................................................................................................................................ 7
2. MARCO TEÓRICO ..................................................................................................................................................... 8
2.1 La melanina: Generalidades .......................................................................................................................................... 8
2.2 Biosíntesis de la melanina: ............................................................................................................................................. 8
2.3 Células melanogénicas especializadas ...................................................................................................................... 10
2.3.1 Melanogénesis en los melanocitos de piel y de folículo piloso ................................................................. 12
2.3.2 Melanogénesis en el Epitelio Pigmentario de la Retina ............................................................................... 12
2.4 Tirosinasa: Aspectos moleculares y bioquímicos .................................................................................................. 13
2.4.1 Gen TYR ................................................................................................................................................................. 13
2.4.2 Tirosinasa: Estructura, Biosíntesis y funcionamiento .................................................................................. 15
2.5 Albinismo oculocutáneo: Clasificación: ................................................................................................................... 20
2.6 Albinismo oculocutáneo relacionado con la tirosinasa: Implicaciones oculares ........................................... 23
2.7 La tirosinasa en el desarrollo de la retina .......................................................................................................... 25
3. MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................................................................... 27
3.1 Genética .......................................................................................................................................................................... 27
3.1.1 Árbol genealógico familiar .................................................................................................................................. 27
3.1.2 Amplificación y secuenciación del gen TYR ................................................................................................... 28
3.2 Optometría ..................................................................................................................................................................... 30
3.2.1 Lentes cosmoprotésicos ..................................................................................................................................... 30
4. RESULTADOS ........................................................................................................................................................... 32
4.1 Genética .......................................................................................................................................................................... 32
4.1.1 Búsqueda de la mutación 140 G>A mediante Polimorfismos de fragmentos de Restricción (RFLPs) ............................................................................................................................................................................................. 33
4.2 Optometría ..................................................................................................................................................................... 35
5. DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES .................................................................................................................. 36
5.1 Genética .......................................................................................................................................................................... 36
5.1.1 Mutación 140 G>A (G47D) ............................................................................................................................... 36
5.1.2 Y… ¿Qué ocurrió con la otra mutación? ....................................................................................................... 38
5.2 Optometría ................................................................................................................................................................ 39
6. AGRADECIIENTOS ............................................................................................................................................... 41
7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................................................................. 42
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1. INTRODUCCIÓN
El albinismo oculocutáneo es una ausencia congénita, parcial o total, de pigmentos
melánicos causada por mutaciones en los genes que codifican para ciertas proteínas
involucradas en la biosíntesis y transporte de la melanina donde la tirosinasa es la principal
(Zhao and Boissy, 1994). Según el fenotipo y la proteína comprometida, actualmente es
clasificado en 4 tipos principales cuyo patrón hereditario es de carácter mendeliano,
autosómico recesivo (Gronskov et al., 2007). Aunque la prevalencia de los diferentes
tipos, y del albinismo en sí, varía entre las poblaciones humanas, es una condición genética
que ha sido reportada en la mayoría de los grupos étnicos; se estima que una de cada
17.000 personas a nivel mundial lo presenta. Las personas con albinismo oculocutáneo se
caracterizan por carecer de pigmento en la piel, pelo y ojos, siendo sensibles al sol, por lo
cual, el riesgo de padecer cáncer de piel es alto (Witkop, 1979).
La falta de melanina en la zona uveal del ojo (iris, coroides y cuerpo ciliar) y en el epitelio
pigmentario de la retina, ocasionan hipoplasia foveal (Meyer et al., 2002) o poco desarrollo
de los tejidos de la retina, más específicamente de la fóvea. A su vez se genera un
desenrutamiento o desviación anormal de las fibras del nervio óptico en el quiasma
durante el desarrollo embrionario (King et al., 2003). Lo anterior se traduce en una
reducción considerable de la agudeza visual que varía entre 20/60 y 20/400 (distancia en
pies a la que un individuo es capaz de visualizar un objeto/distancia estándar a la que se
puede observar el mismo objeto teniendo visión sana, cuya relación es 20/20). En algunos
casos hay pérdida de visión binocular y visión estereoscópica o percepción en tercera
dimensión, lo cual puede generar estrabismo. Del mismo modo, es común encontrar
errores de refracción de la luz que se suelen desarrollarse en la etapa de crecimiento
debido a los defectos morfológicos anteriormente mencionados (miopía, astigmatismo e
hipermetropía) (Creel et al., 1978). Adicionalmente, los ojos describen un movimiento
denominado nystagmus (nombre en latín) que en pacientes albinos es de carácter
oscilatorio horizontal involuntario. Debido a este movimiento, se reduce la capacidad para
enfocar un punto fijo, por ende, contribuye también a la baja visión (Abadi, 2002).
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Hasta el presente no se han difundido tratamientos para el albinismo que permitan
generar pigmento o mejorar significativamente la capacidad visual, pero es posible tomar
medidas preventivas y correctivas frente a consecuencias que se puedan derivar. Al
respecto, la Organización Nacional para el Albinismo y la Hipopigmentación NOAH
((NOAH), 2009) sugiere evitar la exposición al sol, o aplicar protectores solares de factor
alto. En cuanto a los ojos, es muy recomendado usar anteojos con protección UV y
emplear fórmulas oftálmicas en los casos donde se presentan problemas de refracción,
incluso es posible corregirlos mediante cirugía laser. En cuanto al nystagmus se ha
propuesto intervenir quirúrgicamente los músculos rectores, aunque en pacientes con
albinismo no se ha logrado un aumento significativo de la capacidad visual, incluso se ha
reportado que el patrón de onda del nystagmus suele sufrir alteraciones (Hertle et al.,
2004).
El desarrollo de estudios en busca de mutaciones que afecten la funcionalidad de proteínas
implicadas en la ruta metabólica de la melanina en pacientes con albinismo, ha servido y
sigue siendo una fuente de información para predecir sus características estructurales
puntuales y funcionales, además de su desempeño y relevancia. Teniendo estudiada y
documentada esta información, será posible abrir las puertas al desarrollo de tratamientos
y terapias específicas de cada tipo de albinismo así como de otras fallas metabólicas
relacionadas con la ruta de la melanina. Asimismo, es importante estudiar y difundir entre
la comunidad médica métodos oftalmológicos alternativos a los convencionales que
permitan incrementar la agudeza visual de pacientes con albinismo, haciéndolos una
opción accesible de acuerdo con sus necesidades.
El trabajo de grado presente se desarrolló justamente alrededor de estos dos
componentes: la búsqueda de mutaciones en los tres pirremos exones del gen que codifica
para la tirosinasa (TYR) y el planteamiento de un sistema óptico con el que es posible
disminuir el nystagmus y crear una camara obscura que ayuda a compensar la ausencia de
pigmento en el ojo, en pro de mejorar la calidad visual. Para ello, me permito hablar en
primera persona, decidí tomar como referencia mi caso personal. Dado que a la luz de la
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bioética y de la opinión de algunos, de quienes tienen o vayan a tener conocimiento de
este trabajo se pueden generar controversias, antes de comenzar a hablar de mi trabajo
en forma, quiero dejar constancia de que lo he realizado voluntariamente, teniendo la
firme convicción de que antes de ser perjudicial, es muy beneficioso, no solo para mí, sino
para todos aquellos que teniendo o no alguna relación con el albinismo, deseen informarse
acerca del tema y quizás ir más allá. Siento que es un deber y a la vez un placer para mí
como próxima profesional en el área de la Biología, con profunda pasión por la Genética,
realizar este trabajo y plasmar en él, un poco de lo que ha sido mi experiencia con el
albinismo.
Primero que todo deseo presentarme. Mi nombre es Diana Paola Sanabria Lozano, en
estos momentos tengo 22 años. Me diagnosticaron albinismo oculocutáneo tipo IA a la
edad de dos meses. Presento todas las características físicas de este tipo de albinismo, piel
muy blanca, cabello blanco y ojos azul-violeta. Mi agudeza visual antes de mi intervención
quirúrgica era de 20/400, la cual es reconocido en Estados Unidos como “legalmente
ciego”. No obstante, comprendiendo el término “ciego” como la inhabilidad de percibir
estímulos visuales, el término más apropiado en mi caso es “baja visión”. Desde que tengo
recuerdo usé anteojos para corregir problemas refractivos de miopía y astigmatismo. Mi
fórmula oftálmica antes era, en el ojo derecho: Miopía de 3.75 y Astigmatismo de 6.15 a
180º, y en el ojo derecho: Miopía de 3.00 y astigmatismo de 6.00 a 0º. En cuanto a
antecedentes de albinismo en mi familia, por el lado materno posiblemente hubo un caso
hace varias generaciones atrás; por mi lado paterno no se conocen antecedentes
familiares, pero un primo de segundo grado también presenta albinismo oculocutáneo tipo
IB. Daré más detalles en la parte de materiales y métodos. Por ahora iniciaré con los
objetivos, a continuación profundizaré un poco en el tema de la pigmentación en humanos,
el albinismo oculocutáneo, su clasificación e implicaciones oculares en el Marco Teórico,
luego en la parte de Materiales y Métodos detallaré mi estudio para finalizar con los
resultados, la discusión y las conclusiones.
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1.1 OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Hacer un aporte al estudio del albinismo en humanos a través de la caracterización
genética de mi caso, y plantear un sistema óptico para controlar el nystagmus en pro de
aumentar la agudeza visual.
Este objetivo general se llevó a cabo a través de los siguientes objetivos específicos:
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
- Secuenciar los tres primeros exones del gen que codifica para la Tirosinasa e
identificar las mutaciones que comprometen su funcionalidad en el caso de estudio.
- Elaborar el árbol genealógico de mi grupo familiar y mapear las mutaciones
encontradas en parientes mediante RFLPs y secuenciación.
- Establecer una aproximación a un modelo de protocolo de manejo terapéutico del
nystagmus en pacientes con albinismo a través de la adaptación de un sistema
óptico simple.
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2. MARCO TEÓRICO
2.1 LA MELANINA: GENERALIDADES
El término “melanina” hace referencia a pigmentos de color café o negro presentes en
bacterias, hongos, plantas y animales. Las melaninas constan de grupos indol enlazados
covalentemente, cuyas funciones principales son brindar protección absorbiendo la luz
ultravioleta del sol, atrapar elementos tóxicos como radicales libres y metales, y funciones
ecológicas como atracción sexual y camuflaje (Riley, 1997; Spritz and Hearing, 1994). Los
pigmentos melánicos se han clasificado según su estructura química y tonalidad en
feomelanina, que varía entre rojo y amarillo y eumelanina, que varía entre negro y café
(figura 1). La mezcla y cantidad de ambos pigmentos determinarán el color de las
estructuras donde estén presentes.
Figura 1: Estructura química de un oligómero de a) feomelanina y b) eumelanina. La feomelanina difiere de la eumelanina en el número y disposición de los grupos catecol y por presentar azufre, producto de la unión de los aminoácidos cisteín o glutationato, además de ser menos resistente a la fotólisis por irradiación con luz UV que la eumelanina.
2.2 BIOSÍNTESIS DE LA MELANINA:
Tanto la feomelanina como la eumelanina se producen mediante una serie de reacciones
de oxidación que parten del aminoácido L-tirosina, también conocidas como ruta de
Raper-Mason o melanogénesis (Figura 2) (Mason, 1955). Las enzimas protagonistas son
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proteínas pertenecientes a la familia de la tirosinasa: son la tirosinasa y las proteínas
relacionadas con la tirosina Tyrp1 o TRP1 y la Tyrp2 o TRP2. Estas reacciones se llevan a
cabo empleando oxígeno y aniones peróxido como sustrato, por ende estas enzimas
funcionan como enzima atrapadoras de radicales libres (Valverde et al., 1996).
Figura 2: Biosíntesis de la melanina. La tirosinasa es la enzima principal de esta ruta metabólica, cataliza cuatro reacciones además de ser determinante y limitante de la velocidad de reacción y cantidad de producto final.
La ruta comienza con la hidroxilación de la L-tirosina a L-3,4-dihidroxifenilalanina (L-
DOPA) que de forma subsecuente es oxidada a DOPAquinona. Ambas reacciones son
catalizadas por la tirosinasa, por su actividad hidroxilasa y oxidasa respectivamente
(Cooksey, 1997). A partir de este punto la ruta se bifurca para formar los dos respectivos
productos finales: feomelanina y eumelanina. En el primer caso, una cisteína o un
glutationato se une a la DOPAquinona para formar cisteilDOPA o glutationilDOPA
respectivamente. Ambos compuestos son precursores de la feomelanina, En el segundo
caso, la DOPAquinona se cicla espontáneamente formando el indoleno-2-ácido
carboxílico-5,6-quinona también conocido como DOPAcromo. En este paso la ruta
nuevamente se bifurca, aunque el producto final de ambas ramas esta vez será la
eumelanina. En una de ellas, mediante una tautomerización catalizada por la Tyrp2,
también conocida como dopacromotautomerasa (DPT), es convertido a 2-ácido
carboxílico 5,6-dihidroxindol (DHICA), que puede ser oxidado ya sea por la Tyrp1 o por
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la tirosinasa a ácido carboxílico indol 5,6-quinona que es un precursor de la melanina. En
la otra ramificación, la DOPAcromo es convertida en dihidroxindol (DHI) que se
transforma en indol 5,6-quinona, otro precursor de la melanina (Ito, 2003; Riley, 1997).
2.3 CÉLULAS MELANOGÉNICAS ESPECIALIZADAS
En los vertebrados, específicamente en humanos, la melanina se sintetiza en las células
melanogénicas especializadas, formando deposiciones o gránulos circulares, si la célula
sintetiza feomelanina, y ovalados, si sintetiza eumelanina (Nordlund et al, 1998(. Las células
melanogénicas son de dos tipos (Figura 2):
- Los melanocitos que son células dendríticas derivadas de la cresta neural, están
distribuidas por la superficie corporal (pelo y epidermis), en el iris del ojo, la
coroides y los cuerpos ciliares.
- Las células neuroectodérmicas derivadas de la cúpula óptica durante el desarrollo
embrionario, son de forma hexagonal y se encuentran conformando el epitelio
pigmentario de la retina (Eisen, 1996; Marks and Seabra, 2001).
En estas células, la biosíntesis de la melanina se lleva a cabo en el melanosoma (Jimbow et
al., 2000) que es un organelo de tipo lisosomal anclado a la membrana cuya matriz
envuelve el gránulo (Orlow, 1995). Según su especialidad se denomina feomelanosoma o
eumelanosoma y ambos pueden coexistir en una misma célula (Inazu and Mishima, 1993).
El desarrollo y “maduración” de los melanosomas es lo que conlleva a la producción de
melanina.
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Figura 3: Células melanogénicas. a) Melanocitos de la epidermis. Tomado de Ackerman et al y de
Masonic Cander Cemter de la Universidad de Minesota www.cancer.umn.edu/cancerinfo/NCI/CDR62802.html. b)
melanocitos de la corteza del folículo piloso. Tomado de Scribendi et al y de Junkeiro y Carneiro. c)
Células hexagonales del epitelio pigmentario de la retina. Tomada de Klimanskaya et al y de Young B.
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2.3.1 MELANOGÉNESIS EN LOS MELANOCITOS DE PIEL Y DE FOLÍCULO PILOSO
En el caso de los melanocitos, las células epiteliales (queratinocitos) endocitan las
terminaciones de sus procesos dendríticos para formar gránulos de melanina (Wolff et al.,
1974). Aquí ya se pueden observar deposiciones de feomelanina pero no de eumelanina
aún (Mirica et al., 2005; Seiji et al., 1963). Se cree que mediante vesículas de transporte
provenientes del Retículo endoplásmico rugoso y del aparato de Golgi, la tirosinasa, las
Tyrp1 y Tyrp2 y la proteína asociada al lisosoma 1 (LAPM1) enzimas, son incorporadas en
el estadio temprano de maduración denominado premelanosoma y se asocian formando
un complejo junto con los receptores de hormonas (Jimbow et al., 2000).
2.3.2 MELANOGÉNESIS EN EL EPITELIO PIGMENTARIO DE LA RETINA
Antes de explicar el funcionamiento de las células del epitelio pigmentario de la retina, se
explicará un poco en qué consiste esta parte del ojo y su funcionamiento. La retina de los
mamíferos se divide en dos componentes que se desarrollan a partir del neuroectodermo
prosencefálico (Gilbert, 2006): el epitelio pigmentario retiniano y la retina neural. El
epitelo pigmenterio de la retina está constituido por células hexagonales pigmentadas que
forman interconexiones con los fotoreceptores (conos y bastones) (Kierszenbaum, 2007).
Cuando el organismo ha alcanzado el estadio adulto, estas células no vuelven a dividirse,
pero permanecen funcionales. El epitelio pigmentario de la retina lleva a cabo funciones
cruciales relacionadas con el metabolismo ocular, como transportar sustancias desde y
hacia los epitelios de la retina neural, almacenar los pigmentos retinoides, eliminar los
radicales libres reactivos con el oxígeno inducidos por la luz y está encargado de fagocitar
las membranas de los discos que contienen pigmentos visuales (rodopsinas), provenientes
de los bastones, una vez han cumplido su vida útil. La fagocitosis de los discos es un
proceso regulado por ciclos circadianos diarios. De igual forma funciona como barrera
entre la retina neural y el tejido vascular del ojo (sangre) (Schraermeyer and Heimann,
1999; Strauss, 2005). El complejo Epitelio Pigmentario Retinieano – coroides contiene
melanina en mayor concentración que en el resto del cuerpo. Se ha demostrado in vitro
que en el epitelio pigmentario de adulto, la producción y actividad de la tirosina es
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inducida después de ocurrir la fagocitosis de los discos del segmento externo de los conos
(Julien et al., 2007; Oetting et al., 2003; Schallreuter et al., 2003; Schraermeyer et al.,
2006) así como la expresión de otros genes (Chowers et al., 2004).
2.4 TIROSINASA: ASPECTOS MOLECULARES Y BIOQUÍMICOS
La tirosinasa (monofenol, L-DOPA: oxigeno oxidoreductasa, EC 1.14.18.1) es una
glicoproteína de membrana que sigue la vía de secreción celular durante su
procesamiento, es la precursora de la ruta metabólica ya expuesta y se encarga de
catalizar varias reacciones como a se mencionó anteriormente y es importante en el
desarrollo embrionario del nervio óptico y de la retina, como se describe más adelante.
2.4.1 GEN TYR
El gen TYR, que es el que codifica para esta enzima, está ubicado en la región q14-21 del
cromosoma 11 en humanos, abarcando un espacio aproximado de 65 Kb. Está
conformado por cinco exones y cuatro intrones (Kwon et al., 1987) (Figura 4). El gen de
la tirosinasa tiene un sitio mayor de inicio de la transcripción y tres sitios menores
(Nordlund, 1998). A partir de la secuencia transcrita de este gen, se pueden generar
diferentes secuencias de ARN mensajero “maduro”, esto se denomina splicing alternativo.
Sin embargo solo algunas de esas secuencias son traducidas a proteínas y solamente una
traduce la forma funcional de la tirosinasa cuya secuencia transcrita es de 2082 pb (Muller
et al., 1988).
Otra peculiaridad que presenta este gen es que la región que comprende los exones IV y
V incluyendo las zonas intrónicas (68 kb aproximadamente) comparten un 98.55% de
homología con un fragmento ubicado en el mismo cromosoma pero en el brazo corto
(Figura 4) (Takeda et al., 1989). Este fragmento no codificante, es un pseudogen que ha
sido denominado TYRL (en inglés TYR-like) (Barton et al., 1988) y se presume que surgió
a partir de un evento de duplicación y translocación ocurrido hace 24 millones de años
aproximadamente (Giebel et al., 1991a). Dado lo anterior no es recomendable amplificar y
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secuenciar esta región del gen mediante métodos tradicionales, porque se podría estar
incurriendo en una ambigüedad, no se tendría certeza si el producto obtenido sea parte
del gen TYR o del pseudogen TYRL (Chaki et al., 2005).
Figura 4: Tirosinasa en Humanos: a) La tirosinasa se encuentra codificada en el cromosoma 11, está compuesta por cinco exones. La región de los exones IV y V comparte un 98,55% de homología con el pseudogen TYRL. b) (Ray et al, 2007). El primer exón codifica para el péptido señal, la primera y segunda zona rica en cisteína, el sitio para enlace de cobre CuA y parte de la tercera región rica en cisteína. El segundo exón codifica para el resto de la tercera región rica en cisteína hasta antes del segundo sitio de enlace de cobre. El tercero codifica para el sitio CuB. El tercero para la región entre CuB y el dominio transmmbranal y el quinto para el dominio transmembranal y la cola citoplasmática. Las ramificaciones superiores corresponden a lo sitios de glicosilacion.
En cuanto al promotor de la tirosinasa es una secuencia de 115 pb de alta complejidad que
contiene las cajas TATA y CAAT, elemento Sp-1, dos sitios hipersensibles a DNAsa I
(sitios HS), sitios de unión al factor de transcripción asociado con la microftalmia (MITF)
como cajas M, cajas E y elementos distales de la tirosinasa (TDE). De igual forma,
elementos de respuesta a luz UV (URE), cajas Oct-1 de unión a dominios de factores de
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transcripción, sitios de anclaje para la proteína activadora (AP) forbol ester inducible
(cinco sitios AP1 y dos sitios AP2), elementos de respuesta a glucocorticoides (GRE),
elementos de respuesta a ácido retinóico (RER) y tiroidico (TRE), elemento 1 de la
tirosinasa (TE1), proteína de alta movilidad de grupo (HMG-1) y una secuencia consenso
para la unión del factor nuclear hepatocítico (Bertolotto et al., 1998; Ganss et al., 1994;
Montoliu et al., 1996; Schallreuter et al., 2003).
2.4.2 TIROSINASA: ESTRUCTURA, BIOSÍNTESIS Y FUNCIONAMIENTO
La forma funcional de la tirosinasa tiene un peso aproximado entre 65 y 80kDa (Halaban
et al., 1997; Sanchez-Ferrer et al., 1995), su punto isoeléctrico es a pH=4.3 y está
constituida por 529 aminoácidos, cuya numeración no comienza con el primer aminoácido
que es la metionina, sino 18 aminoácidos después, dado que los primeros 18 aminoácidos
corresponden al péptido señal ubicado en la región N-terminal, que es removido de la
proteína luego de ser procesada. Estos residuos son designados con números negativos
(Wang and Hebert, 2006).
A modo de contextualización, a continuación se describe la estructura de la proteína
madura y luego se resume su proceso de maduración en el lumen del retículo
endoplásmico y en el aparato de Gilgi. Esta información se incluye en este documento con
el fin de ayudar a comprender cómo y en qué nivel se ve afectada la tirosinasa según la o
las mutaciones presentes en el gen TYR.
2.4.2.1 Estructura funcional de la tirosinasa
La tirosinasa en su estructura funcional se puede dividir en tres dominios (Figura 4b):
Ectodominio lumenal: En el melanosoma, este dominio se encuentra ubicado hacia el
lumen. Comprende 455 aminoácidos localizados en la región N-terminal. En este sitio
reside el centro de actividad catalítica de la enzima que consiste en dos moléculas de
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cobre, cada una ubicada en un sitio distinto (CuA y CuB). Cada molècula se acopla a 3
residuos de histidina mediante enlaces coordinados: CuA comprende las histidinas His162,
184 y 193, y CuB las His345, 349 y 371. Se cree que en la primera reacción el anillo
fenólico de la tirosina interactúa con el sitio CuA, mientras que en la segunda, la L-DOPA
interactúa con el sitio CuB (Olivares et al., 2002). Presenta 7 sitios de glicosilación
distribuidos independientemente a lo largo de este dominio y 17 residuos de cisteína
(Cys). Un residuo Cys está ubicado en la zona de clivaje de la secuencia señal, y otro en la
cola citoplasmática. Los otros 15 residuos forman puentes disulfuro y están agrupados en
tres grupos o “clusters”: los dos primeros se ubican en posición C-terminal del sitio CuA,
y están involucrados en el correcto plegamiento de la proteína y en interacciones
proteína-proteína (con Tyrp1 y Tyrp2) respectivamente; el otro está ubicado entre el
sitio CuA y el CuB y se presume que es necesario para la interacción con chaperonas.
Dominio transmembranal: compuesto por 26 aminoácidos. Se caracteriza por ser un
segmento hidrofóbico que está encargado de anclar la tirosinasa en la membrana del
lumen del melanosoma y ubicar la cola C-terminal hacia el citosol.
Cola citoplasmática C-terminal: Poseen dos señales intracelulares blanco: Un motivo
de leucina (LL) y otro motivo basado en tirosina (YXXB, donde B es un residuo
hidrofóbico). En esta región se encuentra la secuencia señal que conduce a la tirosinasa
hacia los melanosomas (Beermann et al., 1995).
Estos dos últimos dominios son necesarios para direccionar la tirosinasa hacia el
mlanosoma (Jimbow et al., 2000).
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2.4.2.2 Tirosinasa: Procesamiento y tráfico celular
Retículo endoplásmico Rugoso
El procesamiento de la tirosinasa comienza cuando su traducción está en curso. En ese
momento, el mRNA, el ribosoma y la cadena de péptidos naciente forman un complejo
que es translocado o cambiado de ubicación en el interior de la célula. Como primer paso,
una vez el péptido señal ha sido traducido, la partícula reconocedora de la señal (SRP en
inglés) se une y dirige el complejo hacia el receptor de la SRP ubicado en la cara exterior
de la membrana del retículo endoplásmico. Luego, el péptido señal es transferido de la
SRP al translocón sec61 que es un canal a través del cual la cadena de péptidos naciente
ingresa al lumen del retículo endoplásmico a medida que se va traduciendo (Hegde, 2005).
Mientras la traducción continúa, la proteína es modificada mediante la unión de un glucano
al grupo amino de siete asparaginas distribuidas a lo largo del dominio lumenal de la
proteína. Esta modificación también denominada glicosilación tipo N, es catalizada por la
oligosacarido transferasa. Las asparaginas concernientes se encuentran en la cadena de
aminoácideos en la configuración consenso Asn-X-(Thr/Ser); donde X representa
cualquier aminoácido, a excepción de la prolina que tendería a formar enlaces rígidos,
impidiendo la glicosilación, aun si se encuentra inmediatamente después del sitio consenso.
Cuando ya se han traducido los primeros 142 aminoácidos y se han glicosilado tres de las
siete asaparaginas, el péptido señal es clivado por la secuencia-señal peptidasa (Ray et al.,
2007; Wang and Hebert, 2006).
De igual forma, el retículo endoplásmico cuenta entre su maquinaria con una serie de
chaperonas que participan en el proceso de plegamiento y control de calidad de la
maduración, no solo de la tirosinasa, sino de todas las proteínas que se sintetizan a través
de esta vía. En el proceso de glicosilación participan varias de ellas. El glucano que se
acopla a cada asparagina también es conocido como oligosacárido precursor de la
glicosilación y está compuesto por 14 azúcares entre los que se encuentran la N-
acetilglucosamina, manosa y glucosa. El oligosacárido precursor es modificado en el
18
retículo endoplásmico, perdiendo 3 glucosas y una manosa. Las glucosidasas I y II se
encargan de retirar las dos primeras. Luego dos lectinas, la calenxina y la calreticulina, se
unen a los sitios glicosilados cuando la proteína aún no está plegada y cuando se han
traducido el segundo sitio de glicosilación y el tercer sitio de glicosilación respectivamente.
Estas chaperonas tienen como función retener la proteína en el retículo endoplásmico
mientras se pliega, prevenir la formación errónea de agregados proteicos y promueven la
unión de otras chaperonas a los residuos de cisteína que aun no han formado puentes
disulfuro. Cuando la glucosidasa II retira la tercera glucosa, la calnexina y la calreticulina
pierden afinidad por la proteína Sin embargo, si la proteína no se ha plegado
completamente o está mal plegada, la glicosiltransferasa añade otra glucosa nuevamente
(Wang et al., 2005). Una de las funciones de este ciclo de glicosilación es retrasar el
proceso de plegamiento, que no llega a completarse sino cuando la proteína es liberada
por ambas lectinas.
Otra chaperona es la proteína BiP que se ancla al translocón sec 61 luego de que el
péptido señal es clivado, y se va acoplando con los residuos hidrofóbicos de la cadena sin
plegar apenas van ingresando al lumen. Esta chaperona cumple con numerosas funciones
como unirse a la sec61 para mantener la barrera de permeabilidad selectiva de la
membrana mientras el trnaslocoón permanece abierto, ayudar mediante movimientos
dependientes de ATP a ingresar la cadena de péptidos al lumen del retículo endoplásmico,
además de velar por el plegamiento de las proteínas, marcando aquellas que no estén bien
plegadas y activando la respectiva repuesta de degradación cuando se dan estos casos
(Wang and Hebert, 2006).
Un paso crítico en la maduración de toda proteína es la formación de puentes desulfuro.
Para ello, la tirosinasa cuenta en su dominio principal con 15 residuos Cys. Nuevamente,
cuando la cadena ha sido traducida hasta el aminoácido 142 y luego de que el péptido
señal es clivado, comienza la reacción de oxidación catalizada por la disulfuro isomerasa
(ERp57) reclutada por la calnexina y la calreticulina (Wang et al., 2005). A continuación,
comienza la formación mediada por la Tyrp1 y al parecer la Tyrp2 también está
19
involucradade homodímeros o cadenas compuestas por dos subunidades iguales, (Manga
et al., 2000). Cuando finaliza esta fase del plegamiento, los sitios CuA y CuB, se
contraponen para formar el sitio activo de la enzima.
Aparato de Golgi
Cuando ha finalizado el proceso de maduración y plegamiento en el retículo, la tirosinasa
es empacada en vesículas de COPII que emergen a partir de la membrana del retículo
endoplásmico y actúan como medio de transporte hacia el aparato de Golgi (Wang and
Hebert, 2006). Primero, las vesículas llegan al compartimiento intermediario retículo
endoplásmico–aparato de Golgi donde son conducidas hacia el compartimiento cis del
aparato de Golgi (cis-Golgi). Una vez allí, las manosas son removidas por las manosidasas I
y II de los sitios de glicosilación y las glicosil transferasas realizan modificaciones en estos
sitios (Halaban et al., 1997). A continuación, los átomos de cobre de los sitios activos que
previemanete han sido trasportados del citoplasma al compartimiento trans del aparato
de Golgi por una metalochaperona ATPasa tipo P llamada ATP7A. Luego son
incorporados a la proteína, que ha sido transportada al trans-Golgi mediante esfingolípidos
(Sprong et al., 2001). No obstante, este proceso no se conoce con claridad aún (Petris et
al., 2000). Se cree que en este punto la tirosinasa es activada, sus dos átomos de cobre se
reducen de Cu2+ a Cu1+. Los donadores de electrones pueden ser la L-DOPA, el ácido
ascórbico y radicales libres de peróxido. Por esta razón su actividad catalítica es activada
por la tirosina por ser sustrato disponible y la L-DOPA por donarle electrones (Wood
and Schallreuter, 1991).
En este punto, la enzima ya ha adquirido su configuración funcional y abandona el aparato
de Golgi. Primero es marcada en el motivo de dileucina (Calvo et al., 1999) y luego es
empacada en vesículas de transporte para ingresar a los melanosomas en maduración
(premelanosoma). Aquí varias proteínas, entre ellas la Tyrp1 y la gp75 son las responsables
de estabilizar la estructura de la tirosinasa (Kobayashi et al., 1998) y también ingresan al
melanosoma que comienza su actividad metabólica que es altamente dependiente del pH.
La primera conversión de tirosina a DOPA se produce a pH ácido que luego es elevado a
20
neutro, incluso básico por un sistema de bombas de protones para promover las
siguientes reacciones. La actividad óptima de esta enzima se da a pH entre neutro y
básico. A pH por debajo de 5, su actividad es muy reducida (Fuller et al., 2001).
Cuando se presenta alguna falla en la biosíntesis de la melanina, bien sea por mutaciones
en los genes implicados en esta ruta, por mal funcionamiento de los melanosomas o por
factores externos, habrá una producción baja o nula de pigmento ya sea en todo el cuerpo
o en alguna(s) zona(s) específica(s). Dentro del albinismo se encierra un conjunto de estas
fallas que puede afectar solamente los ojos (albinismo ocular) o los ojos, la piel y el cabello
(albinismo oculocutáneo). En el albinismo oculocutáneo han sido identificados varios genes
que están implicados. Hasta el momento se ha reportado que todos ellos son autosómicos
(codificados en cromosomas no determinantes del sexo); de herencia mendeliana recesiva,
es decir que no hay interacciones génicas, el gen implicado no afecta la expresión de otros
genes, y el fenotipo albino se manifiesta cuando cada alelo del gen que es aportado por el
padre y la madre están afectados (Gronskov et al., 2007). En otras palabras, puede nacer
un niño albino de padres no albinos, de un padre albino y el otro portador del gen
defectuoso o de ambos padres albinos. Cabe aclarar que si uno de los dos padres aporta
un alelo defectuoso pero el otro aporta un alelo que codifica para una proteína que
funciona correctamente, el individuo no será albino.
2.5 ALBINISMO OCULOCUTÁNEO: CLASIFICACIÓN:
La clasificación de los tipos de albinismo actualmente se basa en el gen comprometido más
que en el fenotipo, que si bien brinda una buena aproximación, no permite dilucidar el
trasfondo genético, puesto que más de un genotipo puede dar lugar a un mismo fenotipo
(Oetting and King, 1994). Un diagnóstico tradicional de albinismo, que de hecho arroja
resultados certeros (si solamente se desea diagnosticar albinismo), incluye pruebas clínicas
como evaluación de presencia de pigmento en piel, pelo y ojos. No obstante, para
confirmar el tipo, es necesario hacer pruebas de biología molecular que ayuden a
determinar el gen implicado (King et al., 2003).
21
Hasta el momento se han aceptado 4 tipos de albinismo:
• Albinismo oculocutáneo tipo 1 (OCA1, OMIM 203100)
Este tipo de albinismo es ocasionado con mutaciones en el gen que codifica para la
Tirosinasa, ubicado en la región 11q14-q21 (Tomita et al., 1989), cuya funcionalidad puede
verse afectada parcial o totalmente. Se reconoce en personas que no presentaron
pigmento en el pelo en su nacimiento (King et al., 2003) y se ha estimado que 1 de 40.000
personas lo presenta (King, 1995). Sin embargo este tipo es raro en la población africana.
Según la implicación de la funcionalidad de la tirosinasa, el OCA1 ha sido clasificado en dos
subtipos:
- OCA1A: O tirosinasa negativo. No hay producción de tirosinasa (Schnur et al.,
1996), o la tirosinasa no presenta ninguna actividad (Tripathi et al., 1992). En estos
casos, la piel y el cabello son “blancos”, carecen totalmente de pigmento, el color
del iris puede variar entre azul claro y rosado, dado que el iris es totalmente
transparente, La agudeza visual es muy baja.
- OCA1B: También conocido anteriormente como albinismo amarillo. La función de
la tirosinasa está parcialmente comprometida. El fenotipo de estos individuos varía
entre pigmento ausente como en los casos de OCA1 a una pigmentación casi
normal debido a que tiende a haber acumulación de melanina con el paso del
tiempo, al igual que los individuos que presentan los tipos de albinismo descritos a
continuación. Los ojos varían de tonalidades azules a café. Dentro de este tipo de
albinismo se encuentran variante termosensibles, si la temperatura ambiente es
fría, estas personas pueden desarrollar pigmento en el cabello, pies y manos
únicamente (King et al., 1991).
• Albinismo oculocutáneo tipo 2 (OCA2; OMIM 203200)
Este tipo de albinismo está relacionado con mutaciones en el gen de la proteína P que está
codificado en la región 15q11.2-q12 (Lee et al., 1995; Rinchik et al., 1993). En el
22
metabolismo de la tirosinasa, esta proteína al parecer es un canal iónico encargada de su
localización cuando se encuentra el retículo endoplásmico, además de controlar el pH del
melanosoma (Ancans et al., 2001). En su ausencia, la tirosinasa es clivada y almacenada en
vesículas de secreción antes de haber cumplido con sus funciones y la que logre alcanzar el
melanosoma, no funciona de forma óptima (Chen et al., 2002; Manga et al., 2001). En la
población africana también se conoce como albinismo oculocutáneo café (en inglés Brown
OCA). La piel y el pelo son de color café claro o cobrizo y los ojos, grises. Generalmente,
los recién nacidos presentan pigmento en el pelo, la agudeza visual puede llegar hasta 3/10.
El tipo 2, es el más frecuente en la población africana, 1 de cada 36.000 personas en
Estados Unidos, 1 en 10.000 en la población afro-americana (USA) (Oetting and King,
1999), y puede llegar a alcanzar una frecuencia de 1 en 3.900 personas en algunos lugares
del sur de África (Kromberg and Jenkins, 1982).
• Albinismo oculocutáneo tipo 3 (OCA3)
También conocido como albinismo rojo o Refous. Es asociado a mutaciones en el gen que
codifica para la proteína relacionada con la tirosina Tyrp1 (9p23) (Boissy et al., 1996). La
Tyrp1 es una enzima encargada de catalizar uno de los pasos finales de la biosíntesis de la
melanina, además de estabilizar la tirosinasa cuando ingresa al melanosoma como ya se ha
mencionado anteriormente. Los individuos presentan cabello y piel rojizos. Los problemas
visuales no son comunes, dado que la carencia de pigmento no alcanza a afectar el
desarrollo del ojo (Sarangarajan and Boissy, 2001). Está presente en 1 de cada 8.500 en
África y es muy raro en poblaciones asiáticas y caucásicas (Rooryck et al., 2006).
• Albinismo oculocutáneo tipo 4 (OCA4)
Este tipo de albinismo es ocasionado por mutaciones en el gen que codifica para la
proteína transportadoa asociada a la membrana (MATP o SLC45A2) ubicada en la región
5p13.3 (Fukamachi et al., 2001; Newton et al., 2001). La MATP es una proteína que
participa en el transporte de la tirosinasa del aparato de Golgi a los premelanosomas
(Costin et al., 2003). El fenotipo es similar al de los individuos con OCA2. Está presente
en 1 de cada 85.000 personas europeas, y en japoneses.
23
La prevalencia de los diferentes tipos, y del albinismo en sí, varía dentro de las poblaciones
humanas. Una posible explicación es que se ha encontrado un alto número de mutaciones
fundadoras en los diferentes genes. El tipo más frecuente es el OCA2.
2.6 ALBINISMO OCULOCUTÁNEO RELACIONADO CON LA TIROSINASA: IMPLICACIONES OCULARES
En pacientes con albinismo es muy frecuente encontrar implicaciones oculares a nivel
morfológico, fisiológico y funcional que afectan considerablemente la calidad visual.
Retomando lo mencionado en la introducción de este documento, entre ellas las más
destacadas son problemas de refracción por deformaciones en la córnea (miopía,
hipermetropía y astigmatismo) (Wildsoet, 2002), alargamiento de la cámara vítrea y poca
profundidad de la cámara anterior (Montiani-Ferreira, 2005) en especial, el astigmatismo
suele ser muy alto (Kasmann and Ruprecht, 1996; Rymer et al., 2007); fotofobia o alta
sensibilidad a la luz, e hipoplasia foveal, que es un bajo desarrollo de las células de la retina,
esencialmente las de la fóvea que es el punto que ofrece mejor calidad visual del ojo y del
nervio óptico; es decir, en edad adulta, un paciente con albinismo, las células de la fóvea
son más similares a las de un individuo en estadío embrionario que a las de un adulto. El
nystagmus, que es el movimiento pendular oscilatorio horizontal, cuya frecuencia y
amplitud se vuelve más lenta y más corta respectivamente con el paso de la edad y se
debe al debe al poco desarrollo de la fóvea y a la fotofobia (Creel et al., 1978). Por último,
un problema que se deriva de todos los anteriores es el estrabismo.
Nuevamente hablando en primera persona, describiré como es mi percepción visual, no
obstante no realizaré una comparación entre paciente con visión estándar-paciente con
albinismo, dado que desconozco como es la visión estándar. En cuanto a la luz, a lo largo
de mi vida he aprendido a manejar este problema, bien sea entrecerrando los ojos o
haciendo sombra con mi mano. En este sentido los anteojos con protección UV han sido
de gran ayuda. En cuanto al estrabismo, presento una ligera desviación en el ojo derecho
que comenzó a manifestarse desde los 11 años de edad, yo considero que esto no es
24
causa del albinismo, sino de una montura de lentes que tuve en aquella época que me
quedaba grande. Por otro lado considero que mis ojos están en capacidad de percibir
formas y colores, sin embargo, creo que la distancia de percepción es el problema
principal. Cuando usaba corrección de mis problemas refractivos de miopía y
astigmatismo, mejoraba mi visión en términos de nitidez. Podía distinguir detalles de los
objetos y leer a mayor distancia, pero el cambio no era muy significativo porque no logré
hacerlo en 20/20, sino en 20/100.
Según la literatura que citaré a continuación, esto se debe a tres factores: el primero es el
nystagmus. Aunque que en mi caso efectivamente se ha ido disminuyendo con la edad,
cuando hay estímulos de luz muy fuertes, nerviosismo o por cansancio ocular suele
aumentar. El segundo, es la hipoplasia foveal, que al parecer se debe a la ausencia de la
tirosinasa que es clave en el desarrollo ocular, como explicaré más adelante. Y el tercero,
el que es clave en este trabajo, es la ausencia de la melanina en el iris, la coroides y en el
epitelio pigmentario de la retina (Figura 5). Una de las funciones de la melanina es
restringir el paso de toda la luz que potencialmente podría entrar en el ojo. Según el
doctor Julio Guzmán, codirector de este trabajo, la melanina crea en el ojo lo que
análogamente equivale a una cámara obscura. El ejemplo más acertado para explicar esto
es una sala de cine. Las salas de cine normalmente están a oscuras, no solamente para
mantener la atención del público, sino además para garantizar la buena calidad del brillo y
del contraste de las imágenes. Una sala de cine bajo plena luz del día, aunque es una idea
fuera de lo común no tendría mucho éxito porque los asistentes deberán hacer su mejor
esfuerzo para distinguir las imágenes. Esto es una aproximación a lo que ocurre en
pacientes con albinismo. Dado que la luz penetra en el ojo directamente, casi sin ninguna
barrera, las imágenes aunque se formen en la retina, perderán brillo y contraste de manera
significativa (Shen et al., 2001).
25
Figura 5: Fondo del globo ocular. (a). Paciente con albinismo. (n). paciente con pigmentación normal. La falta de pigmento en los ojos, más específicamente en el iris y en el epitelio de la retina, ocasionan alta sensibilidad a la luz o fotofobia. Al observar los ojos de un paciente con albinismo se visualizan únicamente las ramificaciones de las venas que irrigan la retina nerviosa, esto se denomina transiluminación del iris. La luz atraviesa las estructuras como el iris y la pupila, la capa de las células fotoreceptoras es visible.
2.7 LA TIROSINASA EN EL DESARROLLO DE LA RETINA
La tirosinasa comienza a expresarse en el Epitelio pigmentario de la retina del nuevo ser
en formación en la etapa de organogénesis denominada neuroblasto. En la retina se
encuentran unas células, las células ganglionares cuyos axones se prolongan hasta el núcleo
geniculado dorso-lateral localizado en la zona media cerebro (Figura 7). Se cree que la
expresión de la tirosinasa durante las divisiones del neuroblasto ayuda a guiar a estos
axones hacia su destino final correctamente. Aunque no es propiamente la tirosinasa la
directamente responsable de este proceso, sino la L-DOPA, producto de la hidroxilación
de la tirosina, que entre otras cosas está encargada de regular la producción celular en la
retina (Ilia and Jeffery, 1999; Lavado et al., 2006). Dada la ausencia de la L-DOPA en
pacientes albinos, tanto la tasa de producción celular como la de apoptosis es mayor a lo
corriente. Razón por la cual las capas de toda la retina en general son más delgadas (Ilia
and Jeffery, 1999; Rachel et al., 2002). Explicando con más profundidad, el patrón de
prolongación de los axones de las células ganglionares, aproximadamente la mitad de ellos
(los que se encuentran hacia la zona temporal de la retina) se dirige hacia el núcleo
geniculado lateral del mismo lado (proyección ipsilateral o no cruzada), mientras que la
otra mitad cruza hacia el lado opuesto en un punto que se denomina quiasma óptico
26
(proyección contralateral o cruzada) (Jeffery, 2001). En pacientes con albinismo es usual
encontrar que más de la mitad de los axones se proyectan contralateralmente, alterando
la visión binocular que se ve reflejada en el campo visual y la visión estereoscópica o en
tercera dimensión (Figura 6) (Jeffery et al., 1997).
Figura 6: a) Trayectoria de los axones de las células gnaglionales durante el desarrollo. Desde los globos oculares hasta la corteza cerebral. El punto de entrecruzamiento se denomina quiasma óptico. b) A la izquierda,, campo visual de un paciente no albino, a la derecha campo visual de un paciente albino. El campo visual se altera debido a que los axones que forman el nervio óptico cruzan hacia el lado opuesto en proporción mayor de lo usual. (Ray et al, 2007).
27
3. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1 GENÉTICA
3.1.1 ÁRBOL GENEALÓGICO FAMILIAR
Para llevar a cabo esta parte del trabajo, primero reconstruí el pedigree o árbol
genealógico de mi familia con la información relevante de seis generaciones (Figura 7). Mi
núcleo familiar está constituido por mis padres y mis dos hermanas, donde yo ocupo el
segundo lugar y soy el único caso de albinismo oculocutáneo IA. Primero hablaré un poco
sobre la historia familiar por mi lado materno. Mi mamá es Bogotana, pero los ancestros
de mi abuela materna (IV-16) provienen de el municipio de Chía – Cundinamarca,
mientras que por parte de mi abuelo (IV-15), su padre (III-4) provino del municipio de
Purificación – Tolima y su madre (III-5) fue oriunda del municipio de Sopó –
Cundinamarca. Siguiendo esta última línea en el árbol genealógico (partiendo desde mí
hasta la madre de mi abuelo materno) una generación más atrás se observa un caso de
albinismo oculocutáneo (II-1). Los descendientes de mi bisabuela tuvimos conocimiento de
este caso a través de ella. No obstante, su tío vivió hace más de 100 años. En esta época
apenas se estaban comenzando a desarrollar estudios en albinismo, por tanto era muy
interesante comprobar si probablemente por este lado del árbol genealógico
efectivamente este familiar era albino.
Por mi lado paterno, toda la familia es proveniente de Boyacá, de un municipio llamado
Ciénega. Casos de albinismo en mi ascendencia no se conocen, pero se sabe que en el
municipio habitan personas con albinismo. Como se observa en el árbol genealógico, mi
familia por este lado es numerosa, por tanto conozco personalmente solo a algunos de
mis tíos-abuelos y a pocos de mis primos en segundo y tercer grado. Mientras realizaba
este trabajo tuve conocimiento de que el hijo (VI-1) de una prima (V-2) presenta albinismo
oculocutáneo tipo 1B. Invité a ambos a participar en estudio para evaluar y confirmar si él
también porta mi mutación en el gen TYR de origen paterno. En mi historia familiar
28
incluyo los lugares de origen de mis ancestros para aportar información en futuros
estudios de genética de poblaciones. En total participamos 12 personas (figuras en azul) a
quienes se nos tomó una muestra de 5ml de sangre periférica a partir de las cuales se
extrajo ADN genómico de acuerdo con las instrucciones del Kit para aislamiento de ADN
humano de CorpoGen (Bogotá-Colombia).
Figura 7: Pedigree o árbol genealógico correspondiente a la familia Sanabria Lozano. La flecha roja es mi caso (Albinismo oculocutáneo tipo IA). En la posición (VI-1) se encuentra mi primo quien presenta Albinismo oculocututáneo tipo IB.
3.1.2 AMPLIFICACIÓN Y SECUENCIACIÓN DEL GEN TYR
A partir de la secuencia referencia del gen TYR disponible en GeneBank
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/) (N° de acceso: NG_008748.1) se diseñaron seis
parejas de primers: cuatro para amplificar el primer exón y las otras dos, para los exones
II y III respectivamente, incluyendo entre 60 y 100 pb de las zonas intrónicas flanqueantes
(Tabla 1).
Con respecto a los exones IV y V, dada la alta homología que presentan con el pseudegen
TYRL, no se tuvieron en cuenta en este estudio. Chaki y colaboradores (2005),
29
mencionan una serie de mutaciones de ambos exones reportadas hasta ese momento, que
en realidad corresponden a polimorfismos del pseudogen en cuestión. Por esta razón y
para garantizar la correcta amplificación del gen, recomiendan digerir el pseudogen con
enzimas de restricción, antes de amplificar por PCR, o usar primers muy específicos. Otro
método alternativo para evaluar estos exones sería realizar RT-PCR a partir de muestras
de piel o folículo piloso.
Tabla 1: Secuencias de primers empleados para amplificar los tres primeros exones del gen TYR.
Exón primer 5'-3'
Longitud de fragmento
(pb)
Posición de anillamiento en gen TYR
(pb)
I-A F agtgtttgatgctggaggtg 336 4942-4961
R caagtggtgcattggacaga 5259-5277
I-B F tggagaaggaatgctgtcca 353 5174-5193
R agtctgagctgatggtatgc 5508-5527
1-C F acagagagacgactcttggt 317 5419-5438
R caccgcaacaagaagagtct 5717-5736
1-D F gattttgcccatgaagcacc 293 5677-5696
R taccctgcctgaagaagtga 5951-5970
II F ggagttccaacatttctgcc 370 18252-18271
R cctcctaggactttggataag 18602-18621
III F cacactgggtatccagaatg 382 54784-54803
R cacatttgataggcaccctc 55147-55166
Para amplificar los exones I, II, y III del gen TYR se llevó a cabo una Reacción en Cadena
de la Polimerasa (PCR) en un volumen final de reacción de 25µL con 50ng de ADN
genómico aproximadamente. Para una reacción individual se mezclaron 1µL de cada
primer [0.4µM], 2µL de ADN genómico, 8.5µL de agua ultrapura y 12.5µLde Master-Mix
TaqMan® Universal PCR que contiene AmpliTaq Gold DNA Polymerasa, AmpErase
UNG, dNTPs con dUTP (Applied Biosystems
http://cerh.tamu.edu/facility_cores/Old%20Facility%20Core%20Web%20Pages/genomics/p
df/TaqMan_PCR.pdf).
30
La amplificación se realizó en un ciclo inicial de denaturación a 95°C por 5 minutos,
seguido de 30 ciclos que constaron de una denaturación a 95°C por 45 segundos,
anillamiento a 60°C por 45 segundos y extensión a 72°C por un minuto. Al terminar los
30 ciclos se llevó a cabo una extensión final a 72°C por 4 minutos. Para verificar la
amplificación del producto deseado, las reacciones se corrieron en un gel de agarosa al 1%
por 20 minutos a 50V. Una vez verificado el producto, se mandaron a secuenciar a
MACROGEN http://dna.macrogen.com/eng/ en Corea los amplificados correspondientes a
los tres exones de mis padres y míos. Cuando se obtuvieron las secuencias, se realizó un
alineamiento manual entre ellas en el caso del exón I y luego, todas se alinearon también
de forma manual con la secuencia referencia del gen TYR de los tres exones para
encontrar mutaciones. De igual forma, se observaron los picos de la secuencias para
confirmar los resultados dudosos obtenidos mediante la comparación. Para ello se empleó
el programa BioEdit (disponible en http://www.mbio.ncsu.edu/BioEdit/bioedit.html).
3.2 OPTOMETRÍA
3.2.1 LENTES COSMOPROTÉSICOS
Esta parte del trabajo de grado se elaboró en conjunto con el doctor Julio Guzmán Vargas.
Los lentes cosmoprotésicos son lentes de contacto con máscara opaca que se diseñan o
aprovechan para funciones más específicas (Figura 8) y que se pueden resumir en:
• Disminuir el deslumbramiento: Existen muchas alteraciones oculares que conllevan o
provocan cierto grado de deslumbramiento y/o fotofobia como lo es el albinismo. La
utilización de una máscara protectora actúa como barrera a la luz igual que los anteojos
de sol, pero con la ventaja de ser menos llamativos y permitir la combinación con fórmula
correctiva de errores de refracción (miopía e hipermetropía únicamente) además de
anteojos u otro tipo de suplementos (Gauthier et al., 1992).
31
Figura 8: a) Lentes de contacto cosmoprotésicos. b) ojos sin lentes de contacto cosmoprotésicos. c) Ojos con lentes de contacto cosmoprotésicos.
• Filtros específicos: Aunque con serias dificultades para conseguir un tintado homogéneo
y reproducible, constituyen uno de los apartados con mayor proyección de futuro ya que
al poder combinar el filtro de la lentilla con otros externos montados en anteojos,
permiten jugar con varias combinaciones, dependiendo de la luminosidad ambiental. Son
de gran ayuda en las patologías degenerativas retinianas hereditarias y en casos de baja
visión (Velez Lasso, 1994), compensando por una parte el deslumbramiento y la fotofobia
que suelen padecer estos pacientes, y por otra proporcionando un aumento en el
contraste de la imagen (Niwa, 1996). Todo ello contribuye a atenuar el nystagmus (cuando
está presente) y mejorar la agudeza visual.
En mi caso, se implementó la fórmula de corrección de la miopía en adaptación de lentes
de contacto blandos cosmoprotésicos de la casa comercial Keratos para ambos ojos,
simulando la presencia de un iris opaco con pupila transparente, en la cara posterior,
intentando suplementar la ausencia de pigmento en el epitelio pigmentario de la retina y
en la zona uveal del ojo. En anteojos con protección UV, se implementó la fórmula para
corregir el astigmatismo.
32
4. RESULTADOS
4.1 GENÉTICA
Al realizar las comparaciones de las secuencias amplificadas con la secuencia referencia y al
observar los picos de la secuenciación, a partir del codón de inicio (ATG) a la altura del
nucleótido 140 (exón 1), se encontró una sustitución de Guanina por Adenina y un patrón
de dos picos solapados casi a la misma altura tanto en mi secuencia como en la de mi papá
(Figura 9). En la secuencia de mi mamá, en esta misma posición se observa un pico muy
bien definido que indica la presencia de una Guanina como en la secuencia de referencia.
Revisando el resto de las secuencias, no se encontraron otras diferencias con respecto a
la secuencia referencia.
Figura 9: Resultados de la secuenciación de los exones 1, II y III del gen TYR de mis padres y mío. En el recuadro azul de la izquierda se observa una comparación entre el patrón de secuenciación de un individuo homocigoto silvestre para la posición nucleotídica 140 señalada con la flecha negra y para un heterocigoto portador de la mutación 140 G>A. Nótese una disminución en la intensidad del pico G en este último caso (pico negro), y la presencia de un pico correspondiente a A (pico verde). A la derecha se encuentran los patrones de secuenciación de mis padres y mío para esta posición.
33
4.1.1 BÚSQUEDA DE LA MUTACIÓN 140 G>A MEDIANTE POLIMORFISMOS DE
FRAGMENTOS DE RESTRICCIÓN (RFLPS)
Para confirmar que efectivamente mi papá y yo somos portadores de esta mutación,
además buscar qué otro miembro de la familia la porta, se llevó a cabo una prueba de
Polimorfismos de Fragmentos de Restricción (RFLPs) que consiste en emplear enzimas de
restricción de bacterias que reconocen y cortan el ADN en una secuencia específica
(secuencia de reconocimiento y de corte). Sin embargo si hay una variación en dicha
secuencia (polimorfismo) la enzima ya no realizará el corte (Brown, 2007).
En este caso, se empleó la enzima HaeIII de la bacteria Haemophilus aegyptius que tiene
corte de restricción en el nucleótido 140 para el alelo silvestre como se observa en la
Figura 10. Para realizar los cortes de restricción se llevó a cabo una PCR bajo las mismas
condiciones que se aplicaron para la secuenciación, esta vez utilizando los primers I-AF y I-
BR, generando un amplificado de 589pb. Luego los productos se corrieron en un gel de
agarosa al 3.5% durante 30 minutos a 90 Volteos.
Figura 10: Fragmentos de Restricción para las dos primeras fracciones del exón I del gen TYR con la enzima HaeIII. A la izquierda se encuentra la secuencia de reconocimiento de esta enzima y su corte en el alelo silvestre. En el centro se encuentra un esquema de un gel hipotético con los fragmentos de restricción generados por el corte con HaeIII. El pozo 1 corresponde a la escalera o al marcador de peso molecular denotado en número de nucleótidos. El pozo 2 corresponde a un individuo silvestre y el pozo 3 a un heterocigoto portador de la mutación 140 G>A. El pozo 4 corresponde a un mutante homocigoto recesivo para la mutación. En este caso, solo es de interés los patrones de restricción de los pozos 2 y 3. La banda resaltada en rojo corresponde a un fragmento largo característico de portadores de la mutación. Finalmente a la derecha se observa un gel experimental donde se puede diferenciar la ausencia y presencia de la banda de 145pb.
34
En el gel hipotético (figura 10) se encuentran los patrones de restricción para un
homocigoto silvestre, un heterocigoto portador de la mutación y un homocigoto recesivo.
Aunque solo son de interés los dos primeros cuyo patrón de bandeo es muy similar, a
excepción de la banda señalada en rojo de 145 pares de bases que es donde se encuentra
el sitio de restricción. Esta banda en el homocigoto silvestre se divide en dos fragmentos:
uno de 87 pb y otro de 58 pb. Ambos fragmentos también aparecen más tenues en el
heterocigoto, puesto que la mitad del material genético comprometido no tiene la
mutación, por ende formará las dos bandas anteriormente descritas, mientras que la otra
mitad que si presenta la mutación formará la banda de 145 pb. Aunque en el gel
experimental no se resuelven las dos bandas grandes se ven como una sola, salta a la vista
la presencia o ausencia de la banda de interés.
Figura 11: Árbol genealógico de la Familia Sanabria Lozano. De acuerdo con los resultados de los RFLPs, la mutación 140G>A está presente
En consistencia con los resultados encontrados en la secuenciación, al realizar los RFLPs
esperaría encontrar esta mutación en familiares de mi línea paterna, más no de mi línea
materna. No obstante tuve en cuenta a todos los participantes para efectuar esta prueba.
Cuando se reveló el gel, se encontró portadores de la mutación por mi lado paterno
35
(Figura 11), en mi papá, mi abuela paterna, su sobrina y en mi primo con albinismo
oculocutáneo tipo IB. De acuerdo con lo anterior se puede afirmar que hay una alta
probabilidad de que el hermano de mi abuela también fuera portador de la mutación.
Asimismo es curioso encontrar que mi primo que es tirosinasa positivo y yo, siendo
tirosinasa negativo seamos portadores de la misma mutación. En este sentido Oetting y
colaboradores (2003) concluyen en su trabajo que la mutación que menos altera la
actividad de la enzima es la que va a determinar el fenotipo. Muy posiblemente, su
mutación de origen paterno no compromete del todo la transcripción o el funcionamiento
de la tirosinasa.
4.2 OPTOMETRÍA
Para evaluar la eficacia de la implementación del sistema óptico simple, se llevaron a cabo
el listado de pruebas que se mencionan a continuación con sus respectivos resultados, sin
implementar el sistema y al implementar el sistema.
- Sin implementar el sistema oftálmico correctivo:
1. Miradas: Tanto en la mirada frontal como en las laterales se evidencia la existencia de un nistagmus espontáneo con dos fases muy semejantes. Durante la mirada en la oscuridad, parece incrementarse discretamente.
2. Sacadas: Eumétricas, con latencia y velocidad normales, pero parasitadas por el nistagmus referido.
3. Rastreo pendular: Curvas de aspecto y ganancia normales, igualmente parasitadas por el nistagmus.
4. Pruebas optocinéticas: Nistagmus optocinético presente, algo artefactado por la presencia de algunos nistagmus espontáneos. Tanto el NOC derecho como el izquierdo apresen invertidos, sin estarlo los verticales.
5. Pruebas calóricas: Resultados simétricos, dentro de la normalidad.
La corrección provista por el lente de contacto corresponde al defecto esférico. La
fracción cilíndrica correspondiente al valor del astigmatismo se corrigió con lentes
fotocromáticos en alto índice, logrando una agudeza visual final de 20/60 en ambos
ojos, controlando el nystagmus en un 60% con los siguientes resultados:
- Implementando el sistema oftálmico correctivo:
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1. Miradas: Tanto en la mirada frontal como en las laterales ausencia de nistagmus espontáneo. Durante la mirada en la oscuridad, no se evidencia incrementarse discretamente.
2. Sacadas: simétricas, con latencia y velocidad normales.
3. Rastreo pendular: Curvas de aspecto y ganancia normales.
4. Pruebas optocinéticas: Nistagmus optocinético presente.
5. Pruebas calóricas: Resultados simétricos, dentro de la normalidad. El estudio de imagen mediante RMN cerebral no evidenció datos fuera de la normalidad.
5. DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES
5.1 GENÉTICA
5.1.1 MUTACIÓN 140 G>A (G47D)
Realizando una búsqueda de trabajos sobre albinismo en Colombia, se encontraron varios
reportes de casos en poblaciones indígenas. Sin embargo, no se halló un trabajo previo
donde se haya estudiado el gen TYR con técnicas de biología molecular. Por esta razón
una de las grandes expectativas del trabajo presente era encontrar mutaciones que no
hayan sido reportadas aún en la literatura científica internacional, o si ya lo son, permitan
comprobar si se trata de mutaciones fundadoras. En tal caso, se esperaría encontrar una
alta frecuencia de reportes de una determinada mutación en cierta población humana, o
en poblaciones humanas cercanas en la actualidad, o que hayan sido cercanas alguna vez.
En la base de datos Albinism Database, International Albinism Center
(http://albinismdb.med.umn.edu/index.html) de la Universidad de Minesota curada por
William Oetting, esta mutación está reportada con el nombre G47D en caucásicos,
hispánicos, judíos marroquies, personas de Islas Canarias, puerto riqueños, mexicanos,
cubanos, alemanes y americanos nativos. En resumen, esta mutación ha sido reportada en
población en su mayoría latinoamericana, española, caucásica y alemana (Gershoni-Baruch
37
et al., 1994; Hutton and Spritz, 2008; King et al., 2003; Oetting et al., 1991; Oetting et al.,
1993; Opitz et al., 2004; Santiago Borrero et al., 2006). Teniendo en cuenta la historia, la
dinámica y la diversidad de la mayoría de estas poblaciones, se puede plantear la hipótesis
de que esta mutación se expandió en alguna que en dado momento haya interactuado con
estas poblaciones, como lo podría ser España, y pudo haber surgido antes en el pueblo
judío-sefardita en Marruecos (Gershoni-Baruch et al., 1994; Oetting et al., 1993; Santiago
Borrero et al., 2006). Sin embargo es necesario tener más reportes de la misma mutación
para poderla comprobar.
La mutaciòn G47D se encuentra ubicada en el primer exón del gen TYR. Es una mutación
missense o “sin sentido” que ocasiona un cambio de una glicina (gly) por ácido aspártico
(asp) en el codón 47 (Oetting et al., 1991). Las mutaciones en el gen TYR que causan
albinismo oculocutáneo tipo I pueden estar relacionadas con la maduración de la proteína
como las que se encuentran ubicadas cerca o en residuos que son críticos para el
plegamiento y la maduración como en los puentes disulfuro (sitios ricos en cisteína), en
los sitios de glicosilación, o en los sitios activos de la enzima. Según la falla que ocasione la
mutación, la tirosinasa puede tomar dos caminos, bien sea continuar al aparato de Golgi y
finalizar su maduración, pero tener una actividad deficiente, o ser retenida en el retículo
endoplásmico o en el mismo aparato de Golgi por la maquinaria de control de calidad. En
los sitios ricos en cisteína, una mutación que altere las propiedades químicas necesarias
para la formación correcta de puentes disulfuro, puede modificar el plegamiento de la
proteína. En ausencia de sitios de glicosilación, se forman agregados proteícos que
contienen puentes disulfuro no nativos, que solo se rompen con ATP. Si hubiera más
sitios, se aceleraría el proceso de glicosilación y en consecuencia la calnexina la
mantendría retenida. Y en caso de que la mutación se encuentre en el sitio activo, la
proteína será retenida en el aparato de Golgi y posteriormente degradada, dado que la L-
tirosina y la L-DOPA ayudan a activarla y le confieren estabilidad. Cabe anotar que aún no
se conoce por completo cuales son los requisitos mínimos que debe reunir la proteína
recién procesada para no ser retenida (Olivares et al., 2003).
38
La mutación G47D se encuentra ubicada antes del final de la primera región rica en
cisteína. En este caso el cambio de un aminoácido neutro de dos carbonos a uno polar de
cuatro carbonos hace que el balance de cargas cambie (Oetting et al., 1991). Teniendo en
cuenta el proceso de plegamiento de la tirosinasa descrito en el Marco Teórico, y dado
que las regiones ricas en cisteína son claves para la formación de puentes disulfuro, lo más
probable que ocurra es que se altere el plegamiento de la proteína, por tanto será
retenida en el retículo endoplásmico y conducida a vía de degradación por la chaperona
BiP. Para confirmar esta especulación, aún falta por llevar a cabo trabajos que evalúen lo
que sucede durante el proceso de formación de la tirosinasa en presencia de la mutación
G47D específicamente.
5.1.2 Y… ¿QUÉ OCURRIÓ CON LA OTRA MUTACIÓN?
Probablemente esta pregunta se la esté haciendo desde los resultados. Para incrementar
su curiosidad le daré varias respuestas. De acuerdo con lo descrito anteriormente, el
albinismo oculocutáneo se expresa en forma recesiva, es decir que necesariamente debe
haber una mutación que compromete la funcionalidad de la enzima tanto en el alelo que
aporta el padre como el que aporta la madre. Pero aquí es clave dejar en claro un
término: heterocigoto compuesto. Este término se asigna a casos como este donde una
condición recesiva está presente pero al momento de hallar la secuencia del gen implicado
se encuentra en cada alelo una mutación distinta (Nussbaum, 2004). Según estudios
relacionados, es muy usual encontrar heterocigosis compuesta en casos de albinismo
oculocutáneo tipo I (Gronskov et al., 2007; King et al., 2003; Oetting et al., 2003; Oetting
et al., 2005).
Amplificando únicamente los exones I, II y III en este trabajo se encontró mi mutación de
origen paterno, pero aún no se ha encontrado mi mutación de origen materno. En otros
trabajos donde se han buscado mutaciones en genes relacionados con el albinismo
(Gershoni-Baruch et al., 1994; Giebel et al., 1991b; King et al., 2003; Passmore et al., 1999;
Spritz et al., 1997), se han encontrado casos donde solamente una mutación ha sido
39
identificada. King y sus colaboradores (2003) al respecto que lo más probable que estos
pacientes presenten mutaciones en sitios del gen que aún no han sido estudiados. Algunas
posibilidades son el promotor del gen, las zonas reguladoras o las zonas de anclaje de
activadores (enhancers). Aunque en estos dos últimos casos la proteína se estaría
transcribiendo a nivel basal, lo cual estaría más relacionado con OCA1B que con OCA1A.
Otra posibilidad es que la mutación se encuentre en las zonas intrónicas y pueda estar
alterando el patrón de splicing de la secuencia transcrita. En consecuencia, es necesario
que en estudios posteriores se evalúen y/o se busquen dominios de regulación intrónica.
Para ello se pueden emplear técnicas como RT-PCR a partir de biopsias de piel o de
células del folículo piloso para determinar la secuencia de mRNA transcrito. De la misma
forma, los exones IV y V se podrían estudiar mediante esta técnica y especulando más allá,
probablemente se encuentre cualquier tipo de mutación: bien sea una inserción, deleción,
missense, nonssense o frameshift. Aunque en estos dos exones es donde menos se han
reportado mutaciones debido a que no es adecuado estudiarlos mediante PCR y
secuenciación o a que realmente no son muy frecuentes.
Oetting también sugiere que es necesario evaluar si otras proteínas de la biosíntesis de la
melanina también están implicadas en los casos de albinismo y que estén interactuando
con el gen TYR cuando se encuentra en heterocigosis junto con una mutación recesiva.
Se han reportado más de 100 genes cuyos productos son enzimas que están involucradas
en la melanogénesis y en la pigmentación de la piel en sí (Halaban et al., 2001). Estos genes
no solamente codifican para enzimas, sino también para receptores de membrana,
proteínas estructurales, reguladores de expresión génica y factores de crecimiento
(Slominski et al., 2004). Por consiguiente es muy posible que existan más tipos de
albinismo de los que ya se conocen.
5.2 OPTOMETRÍA
En esta última parte del trabajo, quisiera contar mi experiencia personal con el sistema
implementado por el doctor Julio. Cuando utilicé los lentes de contacto por primera vez,
inmediatamente noté que mi calidad visual mejoró significativamente en cuanto a nitidez
40
de las imágenes, y mayor claridad en las formas de los objetos vistos a distancia. Sin
embargo, al salir a la calle, percibí sombras alrededor de mis ojos y una notoria
disminución en el campo visual lateral tal como lo documenta (Insler et al., 1988). A
medida que transcurría el tiempo me fui adaptando al nuevo campo visual, y noté que
disminuyó la sensibilidad a la luz.
Otro aspecto importante que debo resaltar, es la lectura. Cuando yo usaba corrección de
la miopía y el astigmatismo en anteojos, el incremento de la agudeza visual no era
significativo. Aunque la calidad visual era mejor con anteojos que sin ellos, debía
acercarme bastante a los libros y cuadernos para leer y escribir. Incluso, aún sentándome
en la primera fila en las clases, no alcanzaba a leer al tablero. Cuando comencé a usar los
lentes de contacto junto con los anteojos para corregir el astigmatismo, lograba leer y
escribir a mayor distancia y para mi sorpresa, leía sin ningún problema al tablero, desde la
primera fila claro está, a excepción de la letra muy pequeña. Pero aquí es donde entra a
jugar un papel clave la adaptación del cerebro, porque a medida que fui educándome al
sistema, también noté un conflicto entre mis ojos y la costumbre de acercarme que tuve
desde que aprendí a leer y a escribir. Mis ojos me hacían mantener la distancia de la
lectura, pero mi cerebro me hacía acercarme. Personalmente creo que este conflicto debe
ser manejado con terapias que faciliten la adaptación del cerebro a una nueva condición
visual.
Por otra parte, también note una disminución del nystagmus que es producido tanto por el
bajo desarrollo de las células de la retina, como por la excesiva entrada de luz. Con el
sistema, considero que es posible controlar una de estas dos variables y en consecuencia,
es posible disminuirlo y ganar agudeza visual, teniendo la posibilidad de enfocar mejor los
objetos. Aunque hasta el momento no es posible que las personas con albinismo logremos
una agudeza visual estándar, yo personalmente recomiendo este sistema que brinda más
resultados que usar únicamente corrección para los problemas refractivos. En cuanto al
manejo de los lentes de contacto, algunos oftalmólogos no los recomiendan a sus
pacientes con albinismo por el temor a que no queden fijos dentro del ojo debido al
41
nystagmus. Personalmente no he tenido ningún problema al usarlos, al principio se deben
usar gotas lubricantes para evitar que esto ocurra. Considero que es otro proceso de
adaptación, desde aprenderlos a poner, hasta tener la constancia de usarlos diariamente.
6. AGRADECIIENTOS
Antes que nada quiero agradecer a Dios por mostrarme el camino que me ha traído hasta
aquí y tener la posibilidad de adquirir y compartir mis conocimientos. A mi directora,
Helena Groot de Restrepo por brindarme la oportunidad de ingresar al Instituto de
Genética Humana donde llevé cabo este trabajo, por la financiación y por mi asistencia al
VII Congreso Latinoamericano de Mutagénesis, Carcinogénesis y Teratogénesis Ambiental.
Genes, ambiente, cáncer, prevención y salud, efectuado en Cartagena de Indias en Agosto
del 2007. A mi codirector el doctor Julio, por su alegría y por enseñarme que el
entusiasmo es un importante ingrediente para hacer ciencia, por su confianza y por
reafirmar mi creencia de que nada es imposible en esta vida, y lo que no se logre hacer
aún, se puede inventar la forma, así muchos hayan creído en un principio que no era
posible, y por lo más valioso de este trabajo, mejorar mi visión considerablemente. A mi
asesora María Claudia, por su valioso interés, su paciencia y acompañamiento en el
componente de genética molecular y por sus comentarios y pequeños “tips” que siempre
tendré en cuenta. A mi familia por todo su apoyo, por infundirme el espíritu de lucha y de
trabajo, a mis primos Dieguito y Johanita por ayudarme con la toma de las muestras de
sangre. A mis compañeros del Laboratorio de Genética, por su alegría y compañía, a mis
amigos por sus aportes y ánimo y a todos aquellos que de una u otra forma tuvieron que
ver con este trabajo. Finalmente a usted querido lector, por la curiosidad, el interés o lo
que sea que lo haya movido a leer este documento hasta aquí.
42
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