Плодовете и цветовете от sambucus nigra и sambucus …кислородни...

28 Наука Диететика 3 2013

Резюме

Тритерпените олеанолова и урсолова киселина са широко разпространени в редица лечебни растения и са неразделна част от хранителния режим на човека поради техния противовъзпа-лителен ефект. В настоящото изследване са представени данни за количеството на олеанолова и урсолова киселина в плодове и цветове от Sambucus nigra и Sambucus ebulus, разпространени в различни райони на планината Родопи (с. Равногор, х. „Здравец“, с. Скобелево, с. Павелско и с. Хвойна). Количеството на тези киселини в плодовете и цветовете на изследваните видове са определени чрез високоефективна течна хроматография. От изследваните плодове с най-високо съдържание на олеанолова и урсолова киселина са тези от с. Скобелево, съответно – 0.53 mg/g суха маса и 1.46 m/g суха маса. Количеството на изследваните киселини в цветове от с. Скобелево също е най-високо, олеанолова киселина – 2.25 mg/g суха маса и урсолова кисе-лина – 5.96 mg/g суха маса. Оценена е и антиоксидантната активност на екстрактите от плодове и цветове посредством четири различни метода – DPPH, ABTS, FRAP, CURPAC. Най-висока антиоксидантна активност е отчетена при пробата от цветовете на черен бъз от с. Равногор. Нап равените изследвания дават възможност да се оцени използването на плодо-вете и цветовете от род Sambucus за получаване на нови функционални храни, лекарства и козметични продукти.

Ключови думи: Sambucus nigra, Sambucus ebulus, урсолова киселина, олеанолова киселина, тритерпени, антиоксидантна активност

Плодовете и цветовете от Sambucus nigra и Sambucus ebulus – богат източник на биоактивни тритерпеноиди с антиоксидантна и анти-инфламаторна активност

Андрей Марчев1, ас. Даниела Сейменска2, гл. ас. д-р Петко Денев3, проф. д.т.н. Атанас Павлов1, доц. д-р Мария Крачанова3

1Отдел „Приложна микробиология“, Лаборатория по приложни биотехнологии – Пловдив, Институт по микробиология „Стефан Ангелов“ – БАН2Фармацевтичен факултет, Медицински университет, Пловдив3Институт по органична химия с център по фитохимия – Българска академия на науките, Лаборатория по биологично активни вещества, Пловдив

Нутриенти и здраве

29Наука Диететика 3 2013

Fruit and flowers of Sambucus nigra and Sambucus ebulus – a rich source of biologically active triterpenoids with antioxidant and anti-inflammatory activities.

Andrey Marhev1, assist. Prof. Daniela Seimenska2, assist prof. Petko Denev, PhD3, prof D.Sci, Atanas Pavlov, PhD1, assoc. prof. Maria Kratchanova, PhD3

1Laboratory of Applied Biotechnologies Plovdiv, The Stephan Angeloff Institute of Microbiology, Bulgarian Academy of Science, Plovdiv. 2Faculty of Pharmacy, Medical University of Plovdiv3Institute of Organic Chemistry with Centre of Phytochemistry – Bulgarian Academy of Sciences, Laboratory of Biologically Active Substances, Plovdiv

Abstract

The triterpenes oleanolic and ursolic acids are widely distributed in a number of medicinal plants and are an integral part of the human diet due to their anti-inflammatory effect. The current study presents data on the amount of oleanolic and ursolic acids in the fruits and flowers of Sambucus nigra and Sambucus ebulus, distributed in various regions of the Rhodope Mountains (v. Ravnogor, Zdravets hut, v. Skobelevo, v. Pavelsko and v. Hvoina). The amount of these acids in fruit and flowers of the tested species were identified by HPLC. The studied fruits with the highest content of oleanolic and ursolic acid are those from Skobelevo, respectively – 0.53 mg/g dry mass and 1.46 mg/g dry mass. The amount of the studied acids in the flowers from Skobelevo was also the highest – oleanolic acid – 2.25 mg/g dry mass and ursolic acid – 5.96 mg/g dry mass. The antioxidant activity of the extracts from fruits and flowers was assessed through four different methods – DPPH, ABTS, FRAP and CURPAC. The highest antioxidant activity was observed for sample flowers from Ravnogor. The performed study allows evaluating the use of fruits and flowers of Sambucus genus for the preparation of novel func-tional food, medicines and cosmetics

Key words: Sambucus nigra, Sambucus ebulus, ursolic acid, oleanolic acid, triterpenes, antioxidant activity

Увод

Възпалението се счита за основен физиологичен защитен механизъм, който предпазва организма от инфекции, токсични химични вещества, алергени и други вредни стимули, т.е. то е етиологичен фак-тор за много хронични заболявания13. Стероидните и нестероидните противовъзпалителни средства се използват за лечение на остро възпаление и не са особено подходящи при лечението на хронични въз-палителни нарушения. Основен проблем при лечение с противовъзпалителни лекарствени средства се явяват страничните им ефекти. Поради тази при-чина е необходимо разработването и получаването на нови и по-мощни противовъзпалителни средства от растителен произход, характеризиращи се с по-малко странични ефекти. През последните години има нарастващ интерес към алтернативна терапия и използване на природните продукти, особено на тези, получени от растения. В народната медици-на се прилагат екстракти от различни медицински растения за лечение на широк спектър заболява-ния, включващи остро и хронично възпаление15. Ре-активните форми на кислорода, като супероксидни

аниони, хидроксилни радикали и др., играят важна роля при възпалителните процеси и патогенезата на различни заболявания, като невродегенеративни нарушения, рак, сърдечно-съдови заболявания, ате-росклероза и др. Възпалителното увреждане на тъ-каните се дължи на освобождаването на реактивни кислородни форми от фагоцитите13, които предиз-викват увреждане на различни биомолекули – про-теини, липиди, липопротеини, нуклеинови киселини1. Вродената защитна система на човешкия организъм от антиоксиданти често пъти е недостатъчна за преодоляване на заболяванията, причинени от про-дължителния оксидативен стрес. Ето защо е необ-ходимо екзогенно да се приемат антиоксиданти с цел балансиране на тяхното ниво в организма.

Цветовете от черен (Sambucus nigra) и тре-вист бъз (Sambucus ebulus) са познати отдавна в народната медицина като средство за лечение на възпалителни заболявания, като болки в ставите, отоци, ревматични болки, гърлобол, простуда, грип и др. Основните компоненти в цветовете от черен бъз са флавоноидите – кемпферол, кверцетин, ру-тин, хиперозид, изокверцитрин; тритерпените – α- и β-амирин, олеанолова (ОК) и урсолова киселина (УК);


стеролите – β-ситостерол, кампестерол, стигмас-терол; фенолните киселини – хлорогенова, кафеена, р-кумарова. Екстракти от плодове на черен и тре-вист бъз се използват предимно като антивирусни, противовъзпалителни и имуностимулиращи сред-ства при настинка, грип и херпес вирусни инфекции. Основните биологично активни компоненти в пло-довете са флавоноидите, включително антоциани-ни и тритерпеноидите олеанолова и урсолова кисе-лина. Олеаноловата киселина е биологично активен пентацикличен тритерпеноид, изолиран от много растителни видове, и често тя се открива в рас-тенията заедно с нейния изомер, урсолова киселина10. Двете киселини притежават силно изразена проти-вовъзпалителна, антитуморна и антиоксидантна активност. Те участват в преки химични реакции с реакривните форми на кислорода и така изпълняват ролята на акцептор на свободните радикали.

В настоящата публикация представяме данни за съдържанието на олеанолова и урсолова киселина и за антиоксидантната активност на ацетонови екс-тракти от плодове и цветове на Sambucus nigra и Sambucus ebulus от различни находища в България. Приложени са четири допълващи се метода за анти-оксидантната активност, които се различават по механизма на деактивиране на свободните радикали: DPPH и ABTS – методитe се основават на водороден трансфер, а FRAP и CUPRAC – на електронен трансфер.

Материали и методи

Растителен материалРастителният материал беше събиран от някол-

ко находища в Българя: с. Равногор (1350 м н.в); хижа „Здравец“ (1200 м н.в); с. Скобелево (1300 м н.в) и с. Павелско (1000 м н.в). Цветовете са събирани в пери-ода 15–20 юни, а плодовете – около 10–15 септември.

Екстракция на тритерпениЗа получаване на тритерпеновите екстракти рас-

тителният материал е лиофилизиран (Alpha-1-2, Mar-tin Christ, Germany) и стрит до прахообразна маса. Претеглят се приблизително 0.2–0.3 g от нея като се осъществява трикратна екстракция на ултра-звукова вана при 45°C с ацетон при хидромодул 1:20. Всяка екстракция трае 30 min. Обединените екстракти се изпаряват на ротационен вакуум изпарител до сухо и се разтварят в метанол преди съответните анализи.

Анализ на тритерпените чрез високоефективна течна хроматография (ВЕТХ)Анализът на тритерпеновите киселини е опи-

сан от Marchev et al. (2012)8. Използвана е Waters HPLC система (Waters, Milford, MA, USA), състояща се от бинарна помпа (Waters 11525) и UV-VIS детектор

(Waters 2487 Dual λ Absorbance detector), управлявани от Breeze 3.30 SPA софтуер. Разделянето се осъщест-вява на колона SUPELCO Discovery HS C18 (25 cm x 4.6 mm, 5 μm) при 26°C. Използва се изократно елюиране с подвижна фаза: метанол: 0.1% мравчена киселина = 92:8 и скорост на потока от 0.4 ml/min. Преди анали-за пробата се разрежда подходящо и филтрира през филтър с размер на порите 22 μm.

Методи за определяне на антиоксидантна активност

1) 1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl радикал ула-вяща активност (DPPH метод). Анализът е проведен съгласно процедура, описана от Thaipong et al. (2006), с някои модификации17. Изследваната про-ба (150 μl) се смесва с 2850 μl свеж разтвор на DPPH радикал (DPPH•+), който е в концентрация 0.1 mM, раз-творен в метанол. Реакцията протича за 15 min при 37°C на тъмно и се измерва абсорбцията при 517 nm (Shimadzu UV/Vis mini 1240, Japan) спрямо контролна проба, разработена по същия начин, но с използване на метанол вместо екстракт. Контролната и ра-ботната проба се измерват спрямо метанол. Анти-оксидантната активност се изчислява спрямо стан-дартна права, построена с концентрации на Trolox от 0.05 до 1.0 mM. Резултатите се представят като mM Trolox еквиваленти (TE) за g суха маса.

2) 2.2‘-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) радикал улавяща активност (ABTS метод). Анализът е проведен съгласно про-цедура, описана от Re et al. (1999), с някои модифи-кации12. ABTS радикалът се генерира чрез смесване на ABTS (7.0 mM в ddH

2O) и калиев персулфат (2.45

mM в ddH2O) в равни количества. Реакцията про-

тича за 16 h при стайна температура, на тъмно. Преди анализа 2.0 ml от генерирания радикал (ABTS•+) се разреждат в метанол (1:30; v/v) до достигане на крайна абсорбция от 1.1÷1.2 при 734 nm. Анализът протича чрез смесване на 2850 μl ABTS•+ разтвор със 150 μl от изследвания екстракт. Времето за ре-акция е 15 min при 37°C на тъмно, след което се измерва абсорбцията при 734 nm (Shimadzu UV/Vis mini 1240, Japan) спрямо контролна проба, разрабо-тена по същия начин, но с използване на метанол вместо екстракт. Контролната и работната проба се измерват спрямо метанол. Антиоксидантната активност се изчислява спрямо стандартна права, построена с концентрации на Trolox от 0.05 до 1.0 mM. Резултатите се представят като mM Trolox еквиваленти (TE) за g суха маса.

3) Ferric Reducing Antioxidant Power – FRAP. Анализът е проведен съгласно процедура, описана от Benzie et al. (1996), с някои модификации3. Реакцион-ната смес се приготвя чрез смесване на ацетатен


буфер (300 mM) : разтвор на 2, 4, 6-tripyridyl-s-triazine (TPTZ) (10 mM) : разтвор на FeCl

3x6H

2O (20 mM) (в

съотношение 10:1:1; v/v/v). 100 μl от изследваните екстракти се прибавят към 3000 μl от реакцион-ната смес. Реакцията протича за 4 min при 37°C на тъмно. Измерва се абсорбцията на образувалия се цветен продукт при 593 nm (Shimadzu UV/Vis mini 1240, Japan) и се изчислява концентрацията му спря-мо стандартна права, построена с концентрации на Trolox от 0.05 до 1.0 mM. Резултатите се предста-вят като mM Trolox еквиваленти (TE) за g суха маса.

4) Cupric ion Reducing Antioxidant Capacity – CUPRAC. Анализът е проведен съгласно процедура, описана от Apak et al. (2004), с някои модификации2. Реакцията се стартира при смесването на 1.0 ml Cu-Cl

2x2H

2O (10 mM в ddH

2O), 1.0 ml Neocuproine (7.5 mM в

етанол), 1.0 ml ацетатен буфер (0.1 M; pH 7.0), 100 μl от изследвания екстракт и 1.0 ml метанол. Време-то на реакция е 20 min при 50°C. След охлаждане се измерва абсорбцията при 450 nm (Shimadzu UV/Vis mini 1240, Japan) срещу контролна проба, разрабо-тена по същия начин, но с използване на метанол вместо екстракт. Антиоксидантната активност се изчислява спрямо стандартна права, построена с концентрации на Trolox от 0.05 до 1.0 mM. Резулта-тите се представят като mM Trolox equivalents (TE) за g суха маса.

Резултати и обсъждане

В литературата са налични оскъдни данни за съ-държанието на тритерпенови киселини във видовете S. nigra и S. ebulus. Съществуват данни, че S. nigra съдържа тритерпени като α- и β-амирин, урсолова и олеанолова киселина, изолирани от етилацетатна-

та фракция на метанолен екстракт от S. nigra от района на Куйото, Япония6. От листа на S. ebulus, култивиран в Австрия, е изолирана урсолова кисели-на като основна противовъзпалителна субстанция14. Резултатите, получени в настоящото изследване, потвърждават наличието на УК и ОК и в проби от цветове и плодове на дървесен и тревист бъз, до-ставени от различни находища в България. Данните от количествения анализ на тритерпенови киселини са представени в таблица 1. Съдържанието на олеа-нолова и урсолова киселина се различава значително при цветовете и плодовете от различните находи-ща. Като цяло, цветовете от изследваните проби се характеризират с най-високо съдържание на тритер-пенови киселини, следвани от плодове на дървесен бъз и плодове на тревист бъз. Най-високо е съдържание-то на тритерпени в находището от с. Скобелево, като съдържанието на ОК и УК в цветовете е 2.25 и 5.96 mg/g сухи цветове, а в плодовете – 0.53 и 1.46 mg/g лиофилизирани плодове, съответно. Най-ниско е съдържанието на тритерпени в плодовете от тре-вист бъз от с. Равногор (0.16 mg/g), а количеството на ОК и УК в цветовете от с. Равногор и х. „Здравец“ е сходно и варира от 1.56 до 1.60 и 3.93 до 4.02 mg/g, съответно. Представените данни свидетелстват за влиянието на находището, климатичните, сезонните и почвените фактори върху биосинтеза и натрупва-нето на тритерпени в род Sambucus.

Неконтролируемото продуциране на свободни радикали в организма и небалансираният механизъм на антиоксидантна защита водят до проявата на различни заболявания и процеси на ускорено старе-ене. Съществена роля в защитата от действието на свободните радикали играят полифенолните съ-единения. Тяхната антиоксидантна активност се

Анализирана проба Олеанолова киселина, mg/g суха маса Урсолова киселина, mg/g суха масаПлодове (Sambucus nigra)

с. Равногор 0.24±0.01 1.26±0.02

х. „Здравец“ 0.43±0.01 1.06±0.03

с. Скобелево 0.53±0.02 1.46±0.03

Плодове (Sambucus ebulus)

с. Равногор 0.16±0.01 1.02±0.02

с. Павелско 0.22±0.01 0.69±0.01

с. Хвойна 0.29±0.01 0.82±0.01

Цветове (Sambucus nigra)

с. Равногор 1.60±0.03 3.93±0.05

х. „Здравец“ 1.56±0.04 4.02±0.06

с. Скобелево 2.25±0.05 5.96±0.05

Резултатите са представени като средна стойност от трикратни измервания

Табл. 1. Данни от високоефективна течна хроматография за съдържанието на олеанолова и урсолова киселина в ацетонови екстракти на плодове и цветове от Sambucus nigra и Sambucus ebulus


проявява по различни механизми: чрез отдаване на електрони или водородни атоми, хелатиране на метални йони и др.9 Може би това е причината в достъпната литература да бъдат открити данни за антиоксидантна активност само на полифенолни екстракти от Sambucus nigra и Sambucus ebulus. Най-често изследваните екстракти за антиоксидантна активност са воден, водно-етанолен7, 16, метанолен5, 8 и 70%-ен ацетонен9. Често се установява силна зависи-мост между антиоксидантната активност и съдър-жанието на общи феноли, общи флавоноиди, фенолни киселини или антоцианини7, 9, 16. В настоящото изслед-ване е оценена антиоксидантната активност на аце-тонов екстракт от плодове и цветове на Sambucus nigra и Sambucus ebulus, като са използвани четири допълващи се методи, които се различават по своя механизъм на действие – DPPH и ABTS методите са основават на водороден трансфер, а FRAP и CUPRAC – на електронен трансфер. DPPH е свободен стабилен радикал и може да приема електрони или водородни радикали. Методът се основава на радикал улавящата активност на антиоксидантите спрямо DPPH радика-ла. Радикал улавящата активност на екстрактите е представена в таблица 2. Стойностите на антиокси-дантната активност при плодовете варират между 1.38 до 4.41 mM Тролокс еквиваленти/g суха маса, а инхибирането на радикала е между 20.37 до 30.19%. При цветовете тези стойности са по-високи: меж-ду 6.88 и 14.69 mM Тролокс еквиваленти/g суха маса и 45.46 до 79.89% инхибиране на радикала. Най-висо-ка антиоксидантна активност имат цветовете от с. Равногор, а от плодовете – от находището в с. Павелско. ABTS методът се основава на инхибира-

нето на ABTS радикала от съответните антиокси-данти, което води до неговото обезцветяване11. Най-високи стойности на антиоксидантна активност са отчетени при цветовете от с. Равногор – 20.97 mM Тролокс еквиваленти/g суха маса и 72.60% инхибиране на ABTS радикала, а плодовете от с. Павелско имат 10.42 mM Тролокс еквиваленти/g суха маса и 75.20% инхибиране на радикала. FRAP методът протича в кисело рН (3.6) и се основава на редуцирането на Fe (III) до Fe (II) и не може да отчете активността на антиоксиданти, чийто механизъм на действие е свързан с отдаване на водородни атоми. Анализите показват много близки стойности на антиоксидант-ната активност, измерена по FRAP метода и ABTS. Най-висока е отново при цветовете от с. Равногор (31.29 mM Тролокс еквиваленти/g суха маса) и съпос-тавима активност при плодовете от с. Скобелево и с. Павелско (15.18 и 14.43 mM Тролокс еквиваленти/g суха маса съответно). CUPRAC методът е производен на FRAP, но протича при различни условия. Основа-ва се на редукцията на Cu (II) до Cu (I) при алкално рН (7.0). Това рН е по-благоприятно за редокс потен-циала, което улеснява електронният трансфер и го прави подходящ за хидрофилни и хидроксилни анти-оксиданти.11 Цветовете от х. „Здравец“ и с. Равногор имат най-висока активност (108.54 и 97.28 mM Тролокс еквиваленти/g суха маса), а от плодовете най-актив-ни са тези от с. Равногор и с. Скобелево (66.51 и 65.80 mM Тролокс еквиваленти/g суха маса).

Направените анализи ясно подчертават антиок-сидантния капацитет на ацетоновите екстракти от Sambucus nigra и Sambucus ebulus. С най-ви-сока антиоксидантна активност се характеризи-

DPPH метод ABTS метод FRAP метод CUPRAP метод

Анализирана проба

mM Тролокс еквиваленти/g суха маса

Инхибиране на радикала, %


Инхибиране на радикала, %



Плодове (Sambucus nigra)

с. Равногор 1.38±0.07 20.37±0.31 9.67±0.32 66.37±2.08 8.96±0.10 57.74 ± 0.76

х. „Здравец“ 1.52±0.57 21.24±2.63 8.15±0.13 58.58±0.90 8.17±0.05 61.00 ± 0.61

с. Скобелево 3.11±0.50 28.03±2.20 10.02±0.15 68.82±0.97 15.18±0.14 65.80 ± 0.76

Плодове (Sambucus ebulus)

с. Равногор 2.97±0.22 28.50±1.04 9.92±0.07 73.58±0.49 11.55±0.22 66.51 ± 0.70

с. Павелско 3.41±0.29 30.19±1.35 10.42±0.10 75.20±0.69 14.43±0.09 44.71 ± 0.36

с. Хвойна 2.17±0.60 24.05±2.69 8.61±0.13 60.59±0.83 9.00±0.10 37.99 ± 0.87

Цветове (Sambucus nigra)

с. Равногор 14.69±0.10 79.89±0.43 20.97±0.06 72.60±0.21 31.29±0.37 97.28 ± 1.62

х. Здравец 8.93±0.32 55.88±1.47 13.75±0.36 50.78±1.25 17.11±0.14 108.54 ± 1.43

с. Скобелево 6.88±0.88 45.46±3.98 11.78±0.12 42.94±0.42 13.58±0.10 49.88 ± 1.23

Резултатите са представени като средна стойност от трикратни измервания

Табл. 2. Антиоксидантна активност на ацетонови екстракти от Sambucus nigra и Sambucus ebulus


рат екстрактите от цветове (находище с. Равно-гор) в сравнение с тези от плодове (с. Павелско и с. Равногор). Не е намерена пряка зависимост между съдържанието на тритерпени и антиоксидантната активност, което показва, че е необходимо провеж-дане на допълнителни анализи за съдържанието на други компоненти, които проявяват антиоксидант-на активност в изследваните екстракти.

Заключение

Ацетоновите екстракти от Sambucus nigra и Sambucus ebulus показват високо съдържание на тритерпенови киселини. Тези екстракти инхибират ефективно свободните радикали (DPPH и ABTS), а също така имат и голям капацитет при формира-нето на комплекси и редуцирането на Fe (III) и Cu (II). Тези данни предполагат големия потенциал на тези видове от род Sambucus като източник на биологично активни тритерпени с важни фармако-логични активности и с това се обяснява ефектив-ността им като успешно терапевтично средство при възпалителни заболявания и оксидативен стрес.

Признателност

Работата бе осъществена с финансовата под-крепа на Оперативна програма „Развитие на конкурентноспособността на българската ико-номика 2007–2013“, съфинансирана от Европей-ския съюз чрез Европейския фонд за регионално развитие и проект № НО-16/2012 (Фонд „Науч-ни изследвания“ на МУ – Пловдив).

Книгопис1. Afsar V, Reddy YM, Saritha KV. In vitro antioxidant activity and anti-inflam-

matory activity of mathanolic leaf extract of Boswellia serrata. – Int. J. LifeS c. Bt & Pharm. Res. 2012;1(4):15-23.

2. Apak R, Güçlü K, Özyürek M, Karademir S. Novel total antioxidant capacity index for dietary polyphenols and vitamins C and E, using their cupric ion reduction capability in the presence of neocuproine: CUPRAC method. – J. Agric. Food Chem, 2004, 52, 7970-7981.

3. Benzie I and Strain J. The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of “antioxidant power”. The FRAP assay. – Anal. Biochem. 1996;239:70-76.

4. Ebrahimzadeh MA, Nabavi SF, Nabavi SM. Antioxidant activites of methanol extract of Sambucus ebulus L. flower. – Pak. J. Biol. Sci. 2009;12(5):447-450.

5. Hosseinimehr S, Pourmorad F, Shahabimajd N, Shahrbany K, Hosseinzadeh R. In vitro antioxidant activity of Polygonium hyrcanicum, Centaurea depres-sa, Sambucus ebulus, Mentha spicata and Phytolacca americana. – Pak. J. Biol. Sci. 2007, 10 (4), 637-640.

6. Inoue T and Sato K. Triterpenoids of Sambucus nigra and S. canadensis. Phy-tochem. – Reports. 1975;14:1871-1872.

7. Kiselova Y, Ivanova D, Chervenkov T, Gerova D, Galunska B, Yankova T. Cor-relation between the in vitro antioxidant activity and polyphenol content of aqueous extracts from Bulgarian herbs. – Phytotherapy Res. 2006;20:961-965.

8. Marchev A, Ivanov I, Georgiev V, Pavlov A. Determination of di- and triter-penes in Salvia tomentosa Mill. cell suspension culture by high-performance liquid chromatography. Scientific Works of UFT, 2012. V. 59.

9. Pilluza G and BullittaS. Correlation between phenolic content and antioxi-dant properties in twenty-four plant species of traditional ethnoveterinary use in the Mediterranean area. – Pharm. Biol. 2011;49(3):240-247.

10. Pollier J and Goossens A. Oleanolic acid. Phytochemistry. 2011;77:10-15.

11. Prior R, Wu X, Schaich K. Standardized methods for the determination of antioxidant capacity and polyphenolics in foods and dietary supplements. – J. Agric. Food Chem. 2005;53:4290-4302.

12. Re R, Pellegrini N, Proteggente A, Pannala A, Yang M, Rice-Evans C. Antioxi-dant activity applying and improved ABTS radical cation decolorization as-say. – Free Rad. Biol. Med. 1999;26(9,10):1231-1237.

13. Sati SC, Sati MD, Raturi R, Badoni P, Singh H. Anti-inflammatory and antioxi-dant activities of Zanthoxylum armatum stem bark. – Global Journals Inc. (US). 2011;11(5):19-21.

14. Schwaiger S, Zeller I, Pölzelbauer P, Frotschnig S, Laufer G, Messener B, Pieri V, Sttupner H, Bernhard D. Identification and pharmacological characteriza-tion of the anti-inflammatory principal of the levels of dwarf elder (Sambu-cus ebulus L.). – J. Ethnopharmacol. 2011;113:704-709.

15. Sunita P, Jha S, Pattanayak SP. Anti-inflammatory and in-vivo antioxidant ac-tivities of Cressa cretica Linn., a halophytic plant. – Middle-East J. Sci. Res. 2011;8(1):129-140.

16. Tasinov O, Kiselova-Kaneva Y, Ivanova D. Antioxidant activity, total polyphe-nol content and anthocyanins content of Sambucus ebulus L. aqueous and aqueous ethanolic extracts depend on the type and concentration of extra-gent. – Sci. Technol., 2012, 2(1), 37-41.

17. Thaipong K, Boonprakob U, Crosby K, Cisneros-Zevallos L, Byrne D. Com-parison of ABTS,. DPPH, FRAP, and ORAC assays for estimating antioxidant activity from guava fruit extracts. – J. Food Comp Anal. 2006;19:669-675.

Плодовете и цветовете от sambucus nigra и sambucus …кислородни...

Documents