植 物 组 织 培 养 实 验植 物 组 织 培 养 实 验

之一： 培 养 基 配 制

一、实验目的一、实验目的 掌握培养基的配制方法，为烟草组织培养准备好培养基二、实验内容二、实验内容

配制： MS + NAA 0.1mg/L + 6-BA 1.0mg/L

三、实验步骤三、实验步骤 （一）母液配制 （参照 MS 培养基配方）

大量元素—— N 、 P 、 K 、 Ca 、 Mg 、 S 微量元素—— I 、 B 、 Mn 、 Zn 、 Mo 、 Cu 、 Co 铁盐—— Fe 有机化合物——肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇 、盐酸硫胺素、甘氨酸 植物生长调节剂—— NAA 、 6-BA

（二）每 L 用量及配制方法1 、先在搪瓷量杯中加入约 700ml 蒸馏水，依次加入下列组

份并搅拌溶解： 大量元素 10X 100ml CaCl2 100X 10ml

微量元素 100X 10ml 铁盐 100X 10ml

肌醇 100X 10ml 烟酸 0.5mg /ml 1ml

盐酸吡哆醇 0.5mg /ml 1ml 盐酸硫胺素 0.1mg /ml 1ml

甘氨酸 2.0mg /ml 1ml

NAA 0.1mg /ml 1ml 6-BA 1.0mg /ml 1ml

蔗糖 30.0g

（要求每个大实验台上的 8 名同学共配 500ml ，注意用量减半）

2 、定容到 1000ml 。3 、测 pH 并调到 5.8 。4 、加琼脂 7.0g ，加热熔化 ( 煮沸 2 次 ) ，

补充蒸馏水至 1000ml 刻度液面。5 、分装到试管。每人共分装 2 管，每管

培养基液面高度 2-3cm 。拧盖密封。6 、高压蒸汽灭菌。 121 15-20 min ℃ 。

本灭菌锅从进到出 2 hr 。7 、冷却凝固， 4 － 10 ℃下贮存，为下次

备用。

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之二： 烟草组织培养

一、实验目的一、实验目的 掌握无菌操作方法和烟草组织培养中的快繁技术

二、实验内容二、实验内容 烟草叶片愈伤组织的转接与培养

三、实验原理三、实验原理 全能性 激素调控

四、实验步骤四、实验步骤 1 、本无菌室的设计及仪器使用介绍 2 、本实验的几种灭菌法介绍 3 、本实验所用的培养基： MS + NAA 0.1mg/L + 6-BA 1.0mg/L 4 、外植体：从烟草种子经无菌培养获得的烟草叶片愈伤组织

5 、进入无菌室和操作前的准备。冼手、鞋套、酒精棉花擦手和桌面。

6 、取材和接种。在超净台上按无菌操作法从培养皿中钳取 1 块带叶片的愈伤组织到置于台面上的已预先灭菌的滤纸上，用解剖刀切分成约 0.5cm 见方的小块，用镊子放入琼脂固体培养基上的中部。每人接种 1 管。软木塞封口，加盖。

7 、培养。置培养架上 26 4000 lux ℃ 日光灯下培养。用记号笔在试管玻壁上方写上名字和日期。拍照。培养时间 2 周。 2 周后将试管带走。挂或置于有光的寝室窗台上继续培养观察。

五、结果和讨论五、结果和讨论 每周观察培养物的生长发育和污染状况，拍照和文字记录。与其他组的结果对比。 来培养室的观察时间选在每周二到周四（白天有人）。

六、报告提交 六、报告提交

起始对照