林洁南方医科大学基础医学院病理学系南方医科大学南方医院病理科

Southern Medical University

南方医科大学病理学系

结直肠癌 Tiam1 高表达与其启动子低甲基化相关

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背景

Tiam1: T 淋巴瘤侵袭转移诱导因子 1

Tiam1 与肿瘤的增殖、侵袭和转移

Tiam1 的表达调控机制尚未完全阐明

表观遗传学： DNA 异常甲基化



蓝色区域为 CpG 岛，该 CpG 岛长 2183bp ，跨越启动子和第一外显子，存在 256 个 CpG 位点

Tiam1 基因 5’ 端 CpG 岛预测



去甲基化药物处理 HT29 细胞前后 Tiam1 mRNA 表达

1.SW620 2.HT29(5-aza-dC ) 3.HT29( 对照 ) C. 空白对照

GAPDH(580bp)

Tiam1(252bp)

marker 1 2 3 c



Ⅰ. 116 例配对结直肠癌组织中

Tiam1 蛋白的表达



Tiam1 蛋白在结直肠癌配对组织中的表达分布

* Z= -4.608 ， P ＝ 0.000 # Z ＝ -3.115 ， P ＝ 0.002

0

10

20

30

40

50

normal mucosa cancerStai ni ng i ntensi ty

Numb

ers

of s

peci

men

-++++++

05

1015202530

pri mary foci LN metastati ccancer

Stai ni ng i ntensi ty

Numb

ers

of s

peci

men

-++++++



Z ＝ -2.584 ， P ＝ 0.01

05

1015202530

cancer no LN（metastasi s）

cancer wi th LN（metastasi s）

Stai ni ng i ntensi ty

Numbers of specimen

-++++++

Tiam1 蛋白表达与结直肠癌转移的关系



Tiam1 蛋白在癌组织中的表达与临床病理资料之间的关系



Ⅱ. 结直肠癌组织中

Tiam1 基因异常甲基化的研究



MSP 原理



C M U 2n 2t 12n 12t 31n 31t 48n 48t 83n83t116n116t

m

u

2 12 31 48 83 116

n

t

部分配对组织中 Tiam1 DNA 甲基化及其蛋白表达情况



MSP 扩增产物测序部分结果

u

mo

o. 未转化的原始序列 m. 甲基化引物扩增产物 u. 未甲基化引物扩增产物



Z= -2.244, P=0.025

r=-0.494, P<0.001

116 例配对组织中 Tiam1 基因的甲基化状况

232 例组织中 Tiam1 蛋白表达与甲基化之间的相关性



肿瘤组织 Tiam1 甲基化状态与临床病理资料之间的关系



Ⅲ. 结直肠癌细胞株中

Tiam1 基因异常甲基化的研究



Tiam1 高表达结直肠癌细胞株： LoVo 细胞、 SW620 细胞

Tiam1 低表达结直肠癌细胞株： LS174T 细胞

Tiam1 不表达结直肠癌细胞株： HT29 细胞



5-aza-dC 处理对 Tiam1 mRNA 在 HT29 及 LS174T 中表达的影响

GAPDH(580bp)

Tiam1(252bp)

1 2 3 4 c marker

LS174T

(+)

LS174T

(-)

HT29

(+)

HT29

(-)5-aza-dC



5-aza-dC （ + ） X2005-aza-dC （ - ） X200

免疫细胞化学检测 5-aza-dC 处理对 HT29 细胞中 Tiam1 蛋白表达的影响



免疫细胞化学检测 5-aza-dC 处理对 LS174T细胞中 Tiam1 蛋白表达的影响

5-aza-dC （ - ） X200 5-aza-dC （ + ） X200



1.SW620 2.HT29 3. HT29(5-aza-dC)

4.SW620 5.LS174T 6.LS174T (5-aza-dC)

1 2 3 4 5 6

GAPDH

Tiam1

Western blot 法检测 5-aza-dC 处理对 HT29 、 LS174T 细胞中 Tiam1 蛋白表达的影响



结论1. Tiam1 是一种促进结直肠癌增殖及转移的重

要基因

2. DNA 异常甲基化可能是结直肠癌 Tiam1 基因表达改变的重要调控机制之一



致谢：丁彦青教授李建明教授金贺博士张香梅博士李婷婷硕士

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