موضوع :

آنتی بادی منوکلونال

استاد : مهندس بهشتی مآل

نام تهیه کننده : مهناز غیور

Ab : مونوکلونال

وقتی یک آنتی ژن وارد دستگاه گردش خون شود ، لنفوسیت ها را تحریک می کند تا آنتی بادی تولید

کنند . آنتی بادی به طور اختصاصی با آنتی ژن ترکیب می شود . هنگامی که سیستم ایمنی با یک آنتی ژن مواجه می شود فقط به شاخص های ویژه ای از آن

آنتی ژن واقع در نواحی مشخصی از سطح آن که اپی توپ نامیده می شود پاسخ می دهد .

Abتوانایی تولید مقادیر نامحدود آنتی بادی مونوکلونال : یکسان ویژه ی یک آنتی ژن خاص یا به عبارت دیگر

تولید Abیک جمعیت لنفوسیستی قادر باشند یک نوع کنند .

.

آنتی بادی مونوکلونال

مونوکلونال از تومور تولید پادتن های های هیبریدوما

a مونوکلونال:سلول مناسب تولید کننده آنتی بادیپادتن ها توسط دسته ای از لنفوسیت ها به نام MABپالسما سلها تولید می شود به منظور تولید

ها باید به ترتیب : . کشت آنها در محیط 2جدا سازی لنفوسیت ها 1.

. خارج کردن کلن مربوط 3خارج از موجود زنده به تولید پادتن را انجام داد . البته دو مشکل وجود

B. کشت سلولهای طبیعی لنفوسیت 1دارد : . جهت تهیه پادتن به 2موفقیت آمیز نیست

صورت نامحدود ، دودمان سلولی نامیرا به تولید پادتن نیاز است .

در وضعیت بیماری میلومای چندگانه سلول نامیرا وجود دارد .

Bسلول

: در محیط کشت به طور خودبخودی نکتهمی توان سلولها را با یکدیگر مرتبط و در

هم آمیخت . این فرآیند با موادی مانند پلی اتیلن گلیکول افزایش داد.فرآورده آن

ناجورهسته است.دو دانشمند )کولر و میلستین( لنفوسیت های

طبیعی تولید کننده پادتن موش را با دودمان سلولی میلومای این جانور ترکیب نمودند و

حاصل آن تولید سلول هیبریدوما بود که قادر به رشد دائمی در محیط کشت بود ،

شد .

مونوکلونال از تومور تولید پادتن های های هیبریدوما

b: خصوصیات سلول میلومای مورد استفاده:. دودمان 1سلول میلوما باید واجد دو ویژگی باشد :

سلولی میلومای بکار رفته نباید قادر به ترشح پادتن باشد . )مواردی از بیماری میلومای چندگانه وجود دارد که در آن لنوسیت ویژه ای بدون تولید پادتن ، به گونه ای کنترل نشده تکثیر می یابند . (

. سلولهای میلوما به طور اختصاصی در محیط دارای 2-آزاگوانین(8)

انتخاب می شوند . )تنها سلولهایی زنده می مانند که دچار نقص هستند . (HPRTدر آنزیم

مونوکلونال از تومور تولید پادتن های های هیبریدوما

کشت کشت محیط HATHATمحیط

در محی]ط HPRTهنگ]امی ک]ه س]لولهای ب]دون هیپوگزان]]تین، HATکش]]ت از )مخل]]وطی

ب]ه ، تیمی]دین( رش]د داده ش]وند و آمینوپ]ترین می میرند .DNAدلیل عدم توانایی سنتز

دلی]ل آن این اس]ت ک]ه آمینوپ]ترین مس]یر را پیریمی]دین و پ]ورین بیوس]نتز عم]ده مس]دود می کن]د . ام]ا س]لولهای ط]بیعی ب]ا اس]تفاده از تیمی]دین ، ب]ه س]نتز پیریمی]دین آن]زیم گ]یری بک]ار ب]ا و پ]ردازد می ه]ا

HPRT قادرن]د از هیپوگزان]تین پ]ورین ه]ا را بسازند .

مبانی انتخاب برای استفاده از مبانی انتخاب برای استفاده از HATHATمحیط کشت محیط کشت

محی]ط در هیبری]دوما س]لولهای تنه]ا می HATکش]ت رش]د م]وفقیت ب]ا

کنند . زیرا :محی]ط در رش]د توان]ایی س]ویی از از را زن]ده موج]ود از خ]ارج کش]ت س]لولهای میلوم]ا و از س]وی دیگ]ر ژن آن]]زیم س]]نتز ب]]ه مرب]]وط ط]]بیعی

HPRT کس]ب ه]ا لنفوس]یت از را کرده اند .

مبانی انتخاب برای استفاده از مبانی انتخاب برای استفاده از HATHATمحیط کشت محیط کشت

ساختن هیبریدوماساختن هیبریدومانقطه آغاز ساختن سلولهای هیبریدوما که قادر به ترشح پادتن مونوکلرونال خاص باشند ایجاد ایمنی

مناسب است . Agدر جانوری مثل موش بوسیله به این منظور :

به همراه ماده کمکی زیر پوست یا Ag.تزریق 1. شستن طحال و 3.کشتن جانور2صفاق جانور

. سانتریفوژ 5. تکان دادن آن 4خرد نمودن آن . مخلوط کردن لنفوسیت 7.شستشو 6کردن آن

. قرار 8 منفی میولما HPRTها با سلولهای .تعلیق در 9گرفتن در معرض پلی اتیلن گلیکول .

محیط کشت تازه.انتخاب سلولهای هیبریدوما 11 . شستشو 10

HATبوسیله محیط کشت

مراحل مربوط به تولید هیبریدومامراحل مربوط به تولید هیبریدوما

سلولهای شسته شده شامل : مخلوطی از هیبریدوما ، سلولهای میلومای منفرد و سلولهای لنفوسیتی الحاق نیافته

است . از آنجایی که تمام سلولهای هیبریدومای به

دست آمده پس از ترکیب با هم رشد داده های پلی کلونال Abشده اند مخلوطی از

ها MABبدست می آید اما ما به دنبال هستیم . بنابراین سلولهای هیبریدومای

تولید کننده پادتن منفرد جدا می نماییم و به طور انفرادی کشت می دهیم .

ساختن هیبریدوماساختن هیبریدوما

آنتی بادی کایمریک به ما این امکان را Abطبیعت عملکردهای

Ab مونوکلونال موش را به Abمی دهد که تبدیل کنیم که در برخی جاها قطعات

هیبرید ، Abانسانی داشته باشد . به این آنتی بادی کایمریک یا نیمه انسانی می

مونوکلونال Abگوییم .اولین بخش ازموش که قرار بود جایگزین توالی انسانی

آنتی بادی موش بود .بنابراین FCشود ، قطعه FVرا که مناطق DNAمحققان توالی هایی از

ایمونو گلوبولین انسانی را کد Hو Lزنجیره های مربوط به FV DNAمی کرد ، با توالی های

مونوکلونال خاصی در Ab از L ,Hزنجیره های موش جایگزین نمودند .

1 تولید و کنترل کیفی.Ab مونوکلونال نشان دار با تکنسیم 99mعلیه سلولهای سرطانی کولون

2 استفاده از .Abمونوکلونال جهت درمان تومورها 3 استفاده از.Ab مونوکلونال جهت درمان ترومبوز

سیاهرگها4 تعیین خصوصیات .Ab مونوکلونال برعلیه تومور

Her2مارکر5 تولید و بررسی خصوصیات.Ab مونوکلونال موشی علیه

(hcGاپی توپهای فضایی هورمون )6.Ab مونوکلونال دارای اتصال شیمیایی 7 تولید.Ab مونوکلونال علیه پروتئین پوششی نو ترکیب

ویروس عامل بیماری ریزومانیای چغندرقند 8 در بیماری قلبی عروقی ، بیماری التهابی ، بیماری های.

، آلرژی و ...MSخود ایمنی، بیماری

کاربردها ی آنتی بادی کاربردها ی آنتی بادی مونوکلونال مونوکلونال

مونوکلونال نشان Abتولید و کنترل کیفی علیه سلولهای 99mدار با تکنسیم

سرطانی کولونAb های مونوکلونال امروزه به عنوان عوامل تشخیصی بهسازی

مونوکلونال برعلیه سلولهای سرطان Abمی شوند . در اینجا روده تهیه شده و نشان دار سازی آنها با رادیو ایزوتوپ

صورت گرفته است . 99mتکنسیم این پژوهش در سه مرحله صورت گرفته که شامل : روش ها :

. تهیه سلولهای هیبریدوما علیه سلولهای سرطانی روده 1(HT29)

مونوکلونال با رشد هیبریدوما در محیط کشت Ab. تولید 2. بدست آوردن خصوصیات آن و نشان دار سازی آن با تکنسیم 3

99m Ab مونوکلونال تولید شده قادر به شناسایی Ag رویانی سرطان

می باشد . Ab پروتئینی غشایی با گلیکوزیالسیون زیاد است . این Agاین

به غربالگری سرطان در میان افراد جمعیت ، تشخیص سرطانهای بدخیم دستگاه گوارش ،تشخیص جایگاه تومور و

درمان سرطان به کار می رود

carcinoembryonic antigen )CEA(

مونوکلونال جهت درمان تومورهاAbاستفاده از

Ab نشان دار شده توسط رادیو ایزوتوپها را می توان برای درمان سرطان و همچنین به منظور

تشخیص مراحل معینی از بیماری ها از جمله سرطان به کار برد .

MAB های اختصاصی تومور برای محل یابی سرطان های اولیه یا متاستازداده بکار می رود

MAB مناسب از طریق سیاهرگ وارد می شود و مجتمع می گردد . Agدر محل های تراکم

و این نقاط به کمک ابزارهایی مانند دوربین گاما شناسایی می شود . ایزوتوپ مناسب آن تکنسیم

99m.است

تومور

تومور کبدیتومور رحم

مورد هدف و سلولهای بیان Agموارد مصرف بالینی Agکننده

MoAb

B-cell NHLCD20بتا لنفوسیت های طبیعی و بدخیم

ریتوکسی مب

سرطان سینه متاستاتیک (Her2/neu با بیان

مفرط (

Her2/neu% از سرطان 30% تا 25در بیش از

سینه های اولیه بیان مفرط دارد

تراستوزومب

CD52لوسمی لنفوسیتیک بتالنفوسیت های طبیعی و بدخیم ،سلول

، مونوسیت ها ، Nk، سلول های Tهای ماکروفاژها ،پالکت ها )نه سلول های

بنیادی هماتوپوئتیک(

آلمتوزومب

AMLCD33سلولهای میلوئید نابالغ و سلولهای

لوسمی ) نه سلولهای بنیادی هماتوپوئتیک(

جمتوزومب

ازوگامیسین

مونوکلونال برعلیه تومور Abتعیین خصوصیات Her2مارکر

پیشگیری از سرطان پستان که شایع ترین سرطان در میان زنان محسوب می شود ، غالباً امکان پذیر

نیست . تشخیص سریع بهترین راه حل است و یکی از مهم ترین راههای تشخیصی ، بررسی تومور مارکرهای

در Her2سرطان پستان و در رأس آن بررسی بیان بافت سرطان است .

Her2 یک پروتوآنکوژن است که بر روی کروموزوم به طور وسیع در Her2 مونو ضد Ab قرار دارد .17

آزمونهای تشخیصی و همچنین درمان این سرطان مورد استفاده قرار می گیرد .

را به موش Her2 P2 وP1 Her2در این تکنیک دو پپتید مونوکلونال ضد این پپتیدها را Abتزریق می کنند و

جهت درمان سرطان استفاده می کنند .

مونوکلونال برعلیه تومور Abتعیین خصوصیات Her2مارکر

مونوکلونال موشی Abتولید و بررسی خصوصیات (hcGعلیه اپی توپهای فضایی هورمون )

تنها عضو خانواده هورمون ها hcGهورمون گلیکوپروتئینی است که توسط جفت ترشح می شود . سایر هورمون های این خانواده

از غده هیپوفیز ترشح LH، FSH، TSHشامل : می شود و اعضای این خانواده از دو زیر واحد

آلفا)یکسان( و بتا)متفاوت( تشکیل شده و بتای hcGاند .با این وجود بین زیرواحد بتای

همولوژی وجود دارد .این دو Hlhهورمون هورمون یک نوع گیرنده دارند.بنابراین

مونوکلونال مشکالت Abبا hcGتشخیص علیه Abزیادی دارد راه حل این مشکل تولید

اپی توپهای اختصاصی این هورمون هاست

hCGهورمون

مونوکلونال Abتولید و بررسی خصوصیات موشی علیه اپی توپهای فضایی هورمون

(hcG)

طبیعی و hcG فقط با فرم دایمر Abاین نوترکیب واکنش قوی دارد .

در hcGهای مونوکلونال علیه Abاز تشخیص بارداری ، بیماری های تروفوبالستینگ و تشخیص انواع

سرطانها و تومورهای غیر تروفوبالستینگ و تشخیص به موقع بارداری های نابه جا ، سندروم دان

استفاده می شود .

مونوکلونال جهت درمان Abاستفاده از ترومبوز سیاهرگها

های مربوط به MABدر این روش فیبرین را می توان برای تعیین محل

انعقاد خون به کار برد . مناسب از طریق MABدر اینجا نیز

سیاهرگ وارد می شود و در محل های قرار می گیرد . این نقاط به Agتراکم

کمک دوربین گاما شناسایی می شود .

مونوکلونالAbدرمان ترومبوز بوسیله

عمده مرگهای طبیعی در امریکای شمالی و اروپا به دنبال ترومبوز یا مسدود شدن یک شریان نخاعی یا کرونری

توسط لخته خون رخ می دهد . ترومبوز از شبکه ای از فیبرین تشکیل شده . فیبرین یک عامل لخته کننده خون

است .در شرایط طبیعی پالسمین که یک سرین پروتئاز می باشد از طریق فعال شدن پالسمینوژن با فعال کننده

پالسمینوژن تولید می شود . فیبرین لخته خون را تجزیه کرده اما اگر این سیستم بیولوژیکی ، لخته های خونی را به

خوبی از بین نبرد ، شریان مسدود می گردد و این امکان طرح شد که شاید بتوان از فعال کننده های پالسمینوژن به

عنوان عوامل درمانی برای تحریک تولید بیشتر پالسمین بهره جست . پالسمین می تواند فیبرینوژن را نیز تجزیه

کند ، بنابراین این روش درمانی به دنبال کاهش در مقدار فیبرینوژن به خونریزی داخلی شدید می انجامد .

مونوکلونالAbدرمان ترومبوز بوسیله

بنابراین عوامل ترومبولیتیک که تنها قادر به تجزیه فیبرین لخته خون باشد ابداع شد .

بدین صورت که : محققان با اتصال یک آنتی بادی از طریق پیوندهای کوواالن به فعال کننده پالسمینوژن قادر خواهند

بود .اوالً : فیبرین را هدف یابی کرده وثانیاً پس از اتصال Ab به لخته با تبدیل پالسمینوژن به پالسمین موجب افزایش

مقدار پالسمین تجمع یافته شوند . جهت این امر محققان فعال کننده پالسمینوژن مختص به بافت را به طور شیمیایی

مونوکلونال ضدفیبرین متصل کرده ، کمپلکس Abبه یک حاصل به لخته خونی متصل و لخته ها را بدون کاهش زیاد

فیبرینوژن تخریب کرد .

مونوکلونالAbدرمان ترومبوز بوسیله

آزاد شدن دارو در مجاورت سلولهای هدف بوسیله Ab مونوکلونال

برای حصول اطمینان از اینکه دارو فقط در مجاورت Abسلولهای هدف آزاد می شود ، آن را به یک

های سطح سلولی خاصی Agمونوکلونال که بر ضد عمل می کند متصل می نماییم .

اگر بخواهیم این شکل از سیستم درمانی موثر باشد مونوکلونال که به یک آنزیم مبدل پیش Abالزم است

� خالص و در مقادیر باال 1دارو متصل شده . به صورت نسبتادر دسترس باشد تا بتواند به یک پروتئین فوق العاده

اختصاصی برای سلول هدف متصل شود . باید در شرایط فیزیولوژیکی پایداری الزم را داشته Ab. این 2

باشد.. هنگام لزوم قادر به 4.به سرعت از جریان خون حذف شود .3

نفوذ در توده های توموری باشدتا تمام سلولها در معرض دارو قرار گیرد .

مونوکلونال علیه پروتئین پوششی نو Abتولید ترکیب ویروس عامل بیماری ریزومانیای

چغندرقند

بیماری ریزومانیا یکی از مهم ترین بیماری های چغندرقند می باشد .عامل این بیماری ویروس

( BNYVVزردی نکروتیک رگبرگ چغندرقند ) PolymyXa betaeاست که ناقل آن شبه قارچ

keskin می باشد . در این پژوهش سلولهای مونوکلونال علیه Abهیبریدومای پایدار مولد

BNYVVپروتئین پوششی نوترکیب ویروس توسط امتزاج سلولهای طحال موش و

سلولهای سرطانی میلوما حاصل های حاصل به خوبی قادر به Abگردیدند.

می BNYVVتشخیص ریشه های آلوده به باشند .

مونوکلونال علیه پروتئین پوششی نو Abتولید ترکیب ویروس عامل بیماری ریزومانیای

چغندرقند

کتاب بیولوژی مولکولی )اصول و کاربردDNA تالیف : برناد آرگیک ، 2 و 1نوترکیب ( جلد،

جک جی پاستونک ، فصلنامه باروری و ناباروری علی اکبر صبوریراقی

(، فاضل شکری M.SC( ، رویاقدس )PHD)دانشجوی (PHD)

( فصلنامه پزشکی اکرم سادات طباطبایی پناهPHD )( و...PHD، امیرحسن زرنانی )

کتاب بیوتکنولوژی ملکولی ، تالیف : دکتر سیدنیپرایمرز

Refrences

با تشکر از توجه شما!