vibrio vulnificus m2799 株の鉄欠乏ストレスに関与する...
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目的. Vibrio vulnificus M2799 株の鉄欠乏ストレスに関与する タンパク質を網羅的に解析する. ☆ Vibrio vulnificus とは・・・ ① 好塩性のグラム陰性桿菌 ② 感染経路は経口感染および経皮感染の 2 通り ③ 健康な人が感染した場合→下痢や腹痛で済む 肝疾患、糖尿病患者が感染した場合→敗血症により急激な経過で死に至る. ☆ 病原菌と鉄との関係について ① 病原菌が生存・増殖するためには鉄が必要 ② 生体内に侵入した病原菌は、生体内の鉄を利用できない - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
目的 Vibrio vulnificus M2799 株の鉄欠乏ストレスに関与する
タンパク質を網羅的に解析する
☆ Vibrio vulnificus とは・・・① 好塩性のグラム陰性桿菌② 感染経路は経口感染および経皮感染の 2 通り③ 健康な人が感染した場合→下痢や腹痛で済む 肝疾患、糖尿病患者が感染した場合→敗血症により急激な経過で死に至る
☆ 病原菌と鉄との関係について① 病原菌が生存・増殖するためには鉄が必要② 生体内に侵入した病原菌は、生体内の鉄を利用できない③ 病原菌は生体内のような鉄がない条件でも生き残るために、鉄欠乏ストレス に対するシステムを持っている
黄色のスポット;変動しないタンパク質
赤色のスポット;鉄欠乏条件下で発現が促進 されるタンパク質
緑色のスポット;鉄欠乏条件下で発現が抑制 されるタンパク質
鉄がある培地
鉄がない培地
菌体内タンパク質を回収
菌体内タンパク質を回収
緑色に光る色素で標識
赤色に光る色素で標識
二次元電気泳動法でタンパク質を分離する
方法 1
Ettan SpotPicker
Voyager DE-STR
方法 2
トリプシン消化
結果
対数増殖前期 ; 49 スポット対数増殖中期 ; 61 スポット対数増殖後期 ; 47 スポット
① 鉄過剰および鉄欠乏条件下で発現量が 2 倍以上変動したタンパク質は
② そのうち同定できたスポットは対数増殖前期 ; 32 スポット対数増殖中期 ; 40 スポット対数増殖後期 ; 39 スポット
これら同定したタンパク質をまとめる必要がある
鉄欠乏条件下で発現が促進されるタンパク質の機能別分類 1
緑; 対数増殖前期で顕著に発現差異が認められるタンパク質青; 対数増殖中期で顕著に発現差異が認められるタンパク質赤; 対数増殖後期で顕著に発現差異が認められるタンパク質
Information storage and processing
VV11338Translation, ribosomal structure and biogenesis
Translation elongation factor
Unknown
VV12334
VV10431VV10889VV12326VV20364VV21399 Hypothetical protein
UnknownGlutamine synthetase
Flp pilus assembly protein TadA
OtherAminopeptidase B
Chromosome segregation ATPase
Intracellular trafficking and secretion
Cellular processes
VV11449
VV10453VV21134
VV20578VV21529
VV11252
VV11660
VV11661
VV12968VV20837
VV20842
VV20843
VV21012
VV21337
ABC-Type Fe3+ transport system, periplasmiccomponent
MnSOD
Outer membrane receptor protein
Outer membrane receptor protein
ABC-Type Fe3+ transport system, periplasmiccomponent
Uncharacterized iron-regulated proteinSiderophore-interacting proteinABC-Type enterochelin transport system,periplasmic component
ABC-Type Fe3+-hydroxamate transportsystem, periplasmic component
Outer membrane proteinHypothetical protein
Inorganic ion transport and metabolism
Posttranslational modification, protein turnover,chaperones
Chaperonin GroELPeroxiredoxin
Cell envelope biogenesis, outer membrane
Cell division and chromosome partitioningActin-like ATPase involved in cell morphogenesis
鉄欠乏条件下で発現が促進されるタンパク質の機能別分類 2
Metabolism
VV12098VV12200VV20211
VV11541VV20569
VV21400VV21548
VV11465
VV12200VV20835
VV11237
VV20835
Acyl-coenzymeA synthase/AMP-(fatty) acid ligases
Secondary metabolites biosynthesis, transport andcatabolism
Isochorismate synthase
Coenzyme metabolism
Isochorismate synthaseD-Lactate dehydrogenase
Lipid metabolism
ProteaseⅡOligoendopeptidase F
Nucleotide transport and metabolismAspartate carbamoyltransferase, catalytic chain
Carbohydrate transport and metabolism
PhosphomannomutaseFructose/tagatose bisphosphate aldolase
Amino acid transport and metabolism
Energy production and conversion
Uncharacterized oxidoreductase
Formate acetyltransferaseD-Lactate dehydrogenase
Poorly characterized
VV20260
VV20985
VV21529Function unknown
Hypothetical protein
General function prediction onlyIsopenicillin N synthaseTRAP-Type uncharacterized transportsystem, periplasmic component
緑; 対数増殖前期で顕著に発現差異が認められるタンパク質青; 対数増殖中期で顕著に発現差異が認められるタンパク質赤; 対数増殖後期で顕著に発現差異が認められるタンパク質
鉄欠乏条件下で発現が抑制されるタンパク質の機能別分類
Information storage and processing
VV11339 Elongation factor TuTranslation, ribosomal structure and biogenesis
Metabolism
VV13111
VV20733
VV21585
VV10565
VV11001
VV20816
VV10418
VV10565
VV21484
Alcohol dehydrogenase
Coenzyme metabolism2-Amino-3-ketobutyrate coenzyme A ligase
ABC-Type amino acid transport/signaltransduction system
Nucleotide transport and metabolism
Carbamoylphosphate synthase large subunit
Bifunctional GMP synthase/glutamineamidotransferase protein
TRAP-Type C4-dicarboxylate transportsystem, periplasmic component
Amino acid transport and metabolismCarbamoylphosphate synthase large subunitABC-Type amino acid transport/signaltransduction system
Energy production and conversion
Carbohydrate transport and metabolism
Periplasmic maltose-binding protein
Unknown
VV11090VV20196VV21227VV21585 Periplasmic maltose-binding protein
Outer membrane protein
Other
Maltoporin
Hypothetical protein
Cellular processes
VV11260
VV11811VV20559
VV13107
VV11001
VV20816
Outer membrane protein OmpKOuter membrane protein
Inorganic ion transport and metabolism
Posttranslational modification, protein turnover,chaperones
Chaperonin GroEL
Cell envelope biogenesis, outer membrane
FeSOD
Signal transduction mechanismsABC-Type amino acid transport/signaltransduction systemABC-Type amino acid transport/signaltransduction system
緑; 対数増殖前期で顕著に発現差異が認められるタンパク質青; 対数増殖中期で顕著に発現差異が認められるタンパク質赤; 対数増殖後期で顕著に発現差異が認められるタンパク質
臨床および環境分離株由来菌体内タンパク質の 2D-DIGE 解析
M2799 株(臨床分離株) JCM3731 株(環境分離株)
黄色のスポット; 変動しないタンパク質赤色のスポット; 鉄欠乏条件下で発現が促進されるタンパク質緑色のスポット; 鉄欠乏条件下で発現が抑制されるタンパク質
臨床および環境分離株で発現差異が認められたタンパク質
臨床分離株のみに発現差異が認められるタンパク質
VV11465 Aspartate carbamoyltransferase, catalyticchain
VV20211 Uncharacterized oxidoreductaseVV20364 Chromosome segregation ATPaseVV20578 Outer membrane proteinVV20835 Isochorismate synthase
VV20842ABC-type enterochelin transport system,periplasmic component
VV11811 Outer membrane protein OmpKVV20559 Outer membrane protein
VV20816 ABC-Type amino acid transport/signaltransduction system
VV21227 Maltoporin
鉄欠乏条件下で発現が促進されるタンパク質
鉄欠乏条件下で発現が抑制されるタンパク質
両菌株で発現差異が認められるタンパク質
VV11252 MnSODVV11338 Translation elongation factor
VV11660 ABC-Type Fe3+ transport system, periplasmiccomponent
VV11661 ABC-Type Fe3+ transport system, periplasmiccomponent
VV12968 Uncharacterized iron-regulated proteinVV20569 PhosphomannomutaseVV20837 Siderophore-interacting proteinVV20843 Outer membrane receptor protein
VV21012 ABC-Type Fe3+-hydroxamate transportsystem, periplasmic component
VV21548 ProteaseⅡ
VV10030 TRAP-Type C4-dicarboxylate transportsystem, periplasmic component
VV13107 FeSODVV21585 Periplasmic maltose-binding protein
鉄欠乏条件下で発現が促進されるタンパク質
鉄欠乏条件下で発現が抑制されるタンパク質
緑; 対数増殖前期で顕著に発現差異が認められるタンパク質青; 対数増殖中期で顕著に発現差異が認められるタンパク質赤; 対数増殖後期で顕著に発現差異が認められるタンパク質
現在の状況
臨床分離株では・・・・
残りのスポット数対数増殖前期: 16 スポット対数増殖中期: 21 スポット対数増殖後期: 7 スポット
環境分離株では・・・・
残りのスポット数: 22 スポット
・未同定のタンパク質を同定する・同定されたタンパク質をまとめる