vettori e clonaggio
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Vettori e clonaggio. Clonaggio di un frammento di DNA = = produzione di molte copie identiche del frammento di DNA. Vettori e clonaggio. Il frammento di DNA viene inserito in una molecola-vettore che può replicarsi quando è inserita in una cellula ospite, di solito un batterio. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
Vettori e clonaggio
Clonaggio di un frammento di DNA=
=produzione di molte copie identiche del frammento di DNA
Vettori e clonaggio
Il frammento di DNA vieneinserito in una molecola-vettore
che può replicarsi quando èinserita in una cellula ospite,
di solito un batterio
Vettori e clonaggio
-Enzimi di restrizione
-DNA ligasi
-Vettori
Vettori e clonaggio
Sistema di restrizione/metilazionedel DNA
Vettori e clonaggio
Frammenti di restrizione del DNAgenomico di adenovirus 2
Vettori e clonaggio
Reazioneligasica di frammenti direstrizione
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Vettori
PlasmidiFagiCosmidiYACBAC
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Plasmide
Molecola circolare di DNA a doppiofilamento, normalmente presentenella cellula batterica, in gradodi replicarsi autonomamente
dal cromosoma.
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Replicazione di un plasmide
Vettori e clonaggio
Clonaggio diun frammentodi DNA in unplasmide
Vettori e clonaggio
Formazionedi un plasmidericombinante
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Il marker di selezione permettepermette di selezionare le
cellule batteriche contenenti il plasmide
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Clonaggio in unplasmide eselezione su unterreno contenenteun antibiotico
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La possibilità di selezionarei batteri trasformati è molto
importante perché la trasformazionebatterica è un processo
poco efficiente
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Clonaggiodi diversiframmenti di DNA in unplasmide
Vettori e clonaggio
Regione di clonaggio (=polylinker):
regione che contiene una copia didiversi siti di restrizione
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Lunghezza massima delDNA clonabile in un plasmide:
circa 20 Kb
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I virus sono piccoli parassitinon in grado di replicarsi.Dopo aver infettato una
cellula-ospite utilizzano i suoisistemi di replicazione e sintesi
delle proteine per riprodursi
Vettori e clonaggio
I batteriofagi (o fagi) sono virus che infettano i batteri.
Vettori e clonaggio
Ciclo litico del fago T4
Vettori e clonaggio
Il fago più utilizzato in biologiamolecolare è il fago
Vettori e clonaggio
Ciclolitico elisogenicodel fago
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Assemblaggiodi un fago
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Mappa del genoma del fago
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Clonaggio diframmenti diDNA nelfago
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Formazione di cloni fagici
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L’infezione dei batteri con il fago è circa 103 volte più efficiente
della trasformazione con un plasmide
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Lunghezza del DNA
clonabile in un fago:
20-25 Kb
Vettori e clonaggio
Un cosmide è un plasmidecontenente la sequenza COS
dal fago
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Vettori e clonaggio
Clonaggio diframmenti diDNA in uncosmide
Vettori e clonaggio
Lunghezza del DNA
clonabile in un cosmide:
circa 45 Kb
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YAC=yeast artificial chromosome
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Dimostrazionesperimentaledegli elementifunzionali diun cromosoma
Vettori e clonaggio
Vettore YAC:sequenze ARS CEN TEL
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Lunghezza del DNA
clonabile in uno YAC:
fino a 1000 Kb
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Approximate Maximum Length of DNA That Can Be Cloned in Vectors
Vector Type Cloned DNA (kb)
Plasmid
λ phage
Cosmid
P1 phage
BAC (bacterial artificial chromosome)
YAC (yeast artificial chromosome)
20
25
45
100
300
1000
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Vettore di espressione
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