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Vall d’Hebron Institut de Recerca (VHIR)Hospital Universitari Vall d’Hebron (HUVH)

Instituto de Investigación Sanitaria del Instituto de Salud Carlos III (ISCIII)

Josep Quer SivilaLab. Malalties Hèpàtiques 006. VHIR-HUVH.

Universitat Autònoma de Barcelona.

Ciber Enfermedades Hepáticas y Digestivas (Ciberehd) del Instituto de Salud Carlos III. Madrid.

Sociedad Española de Virología (SEV).

El VIRUS de la HEPATITIS C (VHC)

Molina de Segura (MURCIA).12 Marzo 2015

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Virus que infectan al Higado (Hepatotrópicos)

-Epstein Barr virus (Herpesviridae) dsDNA 185kb-Citomegalovirus (Herpesviridae) dsDNA 229kb-Yellow fever virus (Flaviviridae) ssRNA 11kb-Varicela Zoster (Herpesviridae) dsDNA 125kb-Herpes Simplex (Herpesviridae) dsDNA 152kb-Coxsackie virus (Picornaviridae) ssRNA+ 7.5kb-Lassa fever (Arenaviridae) ssRNA bisegm (7.2kb and 3.5kb).-Marburg (Filovirus) ssRNA- 19.1kb-Ebola (Filovirus) ssRNA- 18.9kb-Rift valley fever (Bunyaviridae) ssRNA- trisegmented-Measles (Paramyxovirus) ssRNA- 16kb

-HEPATITIS A (HAV)-HEPATITIS B (HBV)-HEPATITIS C (HCV)-HEPATITIS delta D (HDV)-HEPATITIS E (HEV)

Virus que infectan al Hígado de manera primaria causando una lesión ampliamenteextendida y clínicamente relevante :VIRUS DE HEPATITIS

3

VIRUS DE LA HEPATITIS

A B C D EHeces Sangre y

derivadosHeces¿Dónde se

localizan?Sangre y

derivadosSangre y

derivados

Fecal-OralAgua y

alimentosinfectados

Rutas de transmisión

Fecal-OralAgua y

alimentosinfectados

Percutanea.Sexual. Vertical.

Percutanea.Lesión en mucosas

Percutanea.Lesión en mucosas

¿Cronifica? NO SI NO excepto Tx

SI SI

¿Vacuna? SI SI En procesoNO BDEPENDIENTE

¿Tiene envuelta? NO SI NOSI SI del B

4

RUTAS deTRANSMISIÓN del VHC

A. PARENTERAL (PARA= diferente de… + ENTERON=intestino):

1. Percutanea:

2. Nosocomial

3. Uso de Drogas Intravenosas

•Receptores de transfusiones

B. Transmisión parenteral no-aparente:1. Tatuajes2. Acupuntura3. Piercings

C. No PARENTERAL:1. Vertical2. Sexual 3. Household

5

Viral agent Window period (days) Risk per unit of red blood cellconcentrate

HBV 45 1 : 200,708HCV 10 1 : 31,717,888HIV 11 1 : 1,602,995

Riesgo estimado de transmisión de VHB, VIH y VHC por transfusión asociado al uso de test de rutina de detección de ácido nucleico

Sauleda S et al International Society of Blood Trnasfusion ISBT meeting (Lisboa 2011)

6



1. Percutanea:

2. Nosocomial


•Receptores de transfusiones. Riesgo actual prácticamente 0

• Receptores de derivados sanguíneos (factores de coagulación para hemofílicos, concentrados de plaquetas, Inmunoglobulinas Intravenosas). Riesgo actual prácticamente 0

•Hemodiálisis. No seguir las recomendaciones

•Trasplante de órganos. En caso de donantes de órganos VHC+


C. No PARENTERAL:1. Vertical2. Sexual 3. Doméstico

7



1. Percutanea:

2. Nosocomial (Noso =enfermedad + Komeo = tener cuidado de)



C. No PARENTERAL:1. Vertical. Raro. Asociado a títulos de virus muy altos en la madre (>10 copias/mL y en

madres VIH+). 2. Sexual. Asociado a lesiones en mucosa. 3. Doméstico. Compartir material cortante.

6

8

VHC NO SE TRANSMITE

AGUA

COMIDA

BESOS

ABRAZOS

SUDOR

ESTORNUDOS

LECHE MATERNA

COMPARTIR UTENSILIOS NO CORTANTES

BEBER DEL MISMO VASO

CONTACTO CON SANGRE SIN LESIÓN

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VHC es un virus con ENVUELTA

Catanese et al. PNAS 2013

• Las partículas de VHC son esféricas (50 a 80 nm de diámetro)• En plasma las vemos de múltiples formas.

Cryo-EM analysis

¿CÓMO es una PARTÍCULA de VHC?

Partícula con Envuelta

Cápsida

Envuelta

CápsidaGenoma viral (VHC= ARN de simple cadena )

¿CÓMO ES EL GENOMA del VHC?

1 190

191-383 384-746

747-809

810-1026

1027-1657

1658-17111712-1972

1973-24202421-3011

Core protein

Envelope glycoprotein 1

Envelope glycoprotein 2

Putative ion channel

Autoprotease

Helicase and Serine protease

NS3 co-factor

RNA-dependent RNA polymeraseFormation of

replication complex

Phosphoprotein. Regulation replication

PARTICULA DE VHC circula en plasma dentro o asociada a una gota de grasa (Caballo de Troya?)

13

Tightjunctions

Canalículo biliar

HepatocitosMembrana Basal

Membrana Lateral

Membrana Apical

INFECCIÓN DEL HEPATOCITO

Célula endotelial

Endotelio con ventanas

Célula de Kupffer

Célula estrellada

Célula Dendrítica Espacio de Disse

SINUSOIDE

CICLO DE VIDA DEL VHC

Tellinghuisen T L et al. J. Virol. 2007;81:8853-8867

Receptores de entrada: SRB1, CD81, CLDN1, OCLN.Cofactores y otros receptores involucrados en entrada: Tyrosin kinase receptors EphA2, EGFR // NPC1L1

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¿Cuál es la principal diferencia entre los virus clínicamente más relevantes?

16Adaptado de US Food and Drug Administration, Antiviral Drugs Advisory Committee Meeting, April 27-28, 2011, Silver Spring, MD.

IFN6 mos

PegIFN/ RBV

12 mos

IFN12 mos

IFN/RBV12 mos

PegIFN12 mos

2001

1998

2011

StandardIFN

RBV

PegIFN

1991

DAAs

PegIFN/RBV/DAA

IFN/RBV6 mos

6

16

3442 39

55

>70

0

20

40

60

80

100

DAA + RBV

± PegIFN

>90

2015

RVS= Respuesta Virológica SostenidaRNA-VHC neg. 24semanas después de parar el tratamiento.

TASA DE RESPUESTA VIROLÓGICA SOSTENIDA = CURACIÓN

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DIANAS TRATAMIENTO anti-VHCDAA = Direct Acting Antivirals

3‘UTR5‘NCR

STRUCTURAL NO STRUCTURAL

Inhibidores PROTEASA (PI)Bloqueo centro activo proteasa

-PREVIR

NS5A Inhibidores (NS5AI)Bloqueo Complejo Replicación, ensamblaje y liberación de la

partícula viral-ASVIR

NS5B Inhibidor Nucloes(t)idico

(Nucs or NI)Bloqueo centro activoInhibe elongación RNA

-BUVIR

NS5B Inhibidor Non-Nucloes(t)idico

(Non-Nucs or NNI)Centro Alostérico.

Cambio en la estructura tridimensional

-BUVIR

BAJA BR1a Gen./1a ola(G1):TELAPREVIR (TVR) *BOCEPREVIR (BOC) *1a Gen./2a.ola (todos G excepto 3)SIMEPREVIR (SMV) *ASUNAPREVIR &

FALDAPREVIR (FDV) #

PARITAPREVIR/ritonavir *VANIPREVIR (MK-7009)DANOPREVIRMAS ALTA BR2a. Generación. Pangenotípico(poco efectivo para G3):MK-5172 #

ACH-2684

BAJA BR1st Gen. (G1 Y G4. Variable para otros genotipos)DACLATASVIR (DCV) *LEDIPASVIR *OMBITASVIR (ABT-267) *

Ligeramente ALTA BR2a.Gen. (Pangenotipico) MK-8742 #

GS-5816ACH3102SAMATASVIR (IDX719)

ALTA BRPangenotípico (poco efectivo G3)SOFOSBUVIR (SOF) *MERACITABINE #

ACH-3422IDX21437IDX21459

BAJA BREscasa cobertura de genotiposDASABUVIR (ABT-333) *DELEOBUVIR #

BMS-791325 #

PPI-383GS-9669TMC647055

BR= barrera de resistencia. * Aprobado. & Sometido FDA # Fase III. Prevision aprobación 2015-16.

http:www.hepmag.com

10 Octubre 2014 FDA / 15 diciembre 2014 AEMPSTratamiento ORAL libre de IFN.HARVONI: LEDIPASVIR+SOFOSBUVIR(1comprimido).

19 Diciembre 2014 FDA / Marzo 2015 AEMPSTratamiento ORAL libre de IFN (+/- Ribavirina). VIEKIRAX: OMBITASVIR-PARITAPREVIR-ritonavir (2c/1vez /día)+EXVIERA: DASABUVIR (1comprimido dos veces al dia)

18

¿DÓNDE ESTÁ EL PROBLEMA?

19

A nivel mundial HCV

Infectados 185 millones (2,8%)

Infección crónica (larga duración) del hígado

160 millones (2,27% )(~15% de los infectados lo saben: 50%USA, 25%EU,<3%China...)

Nuevas infecciones / año150000 USA& Europa Occidental350000 Japón (2002)

500000 Egipto#

Muertes relacionadas / año 350.000 a 500.000 &

Carcinomas hepatocelulares / año^^ ~189000

& WHO sheet 164 April 2014http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs164/enhttp://www.who.int/csr/disease/hepatitis/Hepc.pdf (2002)^^ El-Serag H Gastroenterol 2012: 142:1264-1273Wei L & Lok ASF Gastroenterology 2014;146:1145-1150#DeWolfe Miller & Abu-Raddad PNAS 2010; 107:14757-14762

1.- CARGA DE LA INFECCIÓN CRÓNICA POR VHC

http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs164/en

http://www.who.int/csr/disease/hepatitis/Hepc.pdf

20

Estimación personas infectadas

Mundo (2,27%) 160 millones(~15% conscientes de la infección)

Europa (1,87%)13,8 millones

(25% conscientes de la infección)

España (2,5%) ~1,180.000(30% conscientes de la infección)

1.- CARGA DE LA INFECCIÓN CRÓNICA POR VHC

21

InfecciónAguda

(%pacientes)

COSTE PPPA(por

paciente y por año)

InfeccióncrónicaF0-F3(70%)

308€

Cirrosis Compensada

F4(15%)

1831 €

Cirrosis Descompensada

(10%)

21688 €

Hepatocarcinoma (3%)34595€

Varices Hemorrágicas21688 €

EncefalopatíaHepática21688 €

Ascitis21688 €

6 semanas 1-2 años a 10-20 años 20-30 años

Seguimiento Post-Trasplante

29911 €

COSTE DE NO TRATAR y/o en caso de FALLO al TRATAMIENTO.

TRASPLANTE HIGADO

(2%)

104542 €

HISTORIA NATURAL VHC

1.- CARGA INFECCIÓN CRÓNICA por VHC. NECESIDAD DE TRATAMIENTO.

23

HAV

HBV

HCV

HDV

37bp

5’ 3’27bp 68bp

1 7194ORF3(328)ORF1(5079) ORF2(1980)

CAPSIDAPEPTIDO SEÑALMT Proteasa Helicasa Replicasa

NO ESTRUCTURAL ESTRUCTURAL

ESTRUCTURAL

p73‘NCR5‘NCR

ESTRUCTURAL NO ESTRUCTURAL

C E1 E2 2 3 4B 5A 5B4Ap7

NO ESTRUCTURALVP2 VP3VP45‘NCRVpg

VP1 2A 2B 2C 3Cpro 3Dpol3A 3B3‘NCR

AAAA

HEV

GENOMES. High level of variation in natural isolates.

Cellular RNA polimerase II

Polymerase with Reverse Transcriptase activity

HCV RNA Dependent RNA Polymerase

HIV Reverse Transcriptase

24

High level of replication: HBV 1011 // HCV 1012 // HIV 1.03x1010 particles/day

LACK OF PROOFREADING MECHANISMS.

Rate of accumulation (fixation) of mutations (rate of evolution) = substitutions/base/year

HAV: 1x10-3 -10-4

HBV: 1.4-7.9×10−5

HCV: 1.5x10-3

HDV: 3.0–5.0x10-3

HEV: 1.40–1.72x10-3

Mutation rate =substitution/base/replication cycle

HIV 3.4 x 10-5

~106-fold higher than for cellular

DNA

DNA VIRUS

10-7 to 10-9

Human Herpesvirus (HHV): 1,58x10-8

Mean: 0,003 mutations per genome (Drake&Hwang Genetics2005:170:969-970)

VARIABILITY

25

CONSENSO

ESPECTROMUTANTES

**

* ** *

** *

**

*

* **

* *

**

*

*

*

*

QUASIESPECIES

Holland JJ et al. Science 1982; 215(4540):1577-1585Domingo E & Holland JJ. Evolutionary biology of viruses. 1994 Martell et al. J.Virol. 1992; 66(5):3225-3229Vignuzzi Nature 2006; 439:344-348Vignuzzi M, et al. Nature 2005.

DE LEJOS TODOS PARECEN IGUALES

PERO DE CERCA LAS COSAS CAMBIAN

2. NATURALEZA EN QUASISPECIES DELVHC.

GRAN CAPACIDAD PARA VARIAR yGENERAR MUTACIONES DERESISTENCIA O ESCAPE A VACUNA.

29

Smith D, Bukh J, et al. “Expanded classification of HCV 7 genotypes and 67 subtypes, updated criteria andassignment web source.” Hepatology 2013 Oct 1. doi: 10.1002/hep.26744.

Genotipos30-35% divergencia

Subtipos20-25% divergencia

Diversidad Inter-individual

Quasispecies1-10% divergencia

Diversidad Intra-individual

Aprobado Febrero 2015 VHC

Genotipos 7Subtipos 67

VHC. CLASIFICACIÓN

30

DISTRIBUCIÓN de los GENOTIPOS en ESPAÑA

2006*

1a 24,1%1b 41,3%2 3,1%3 19,6%4 11,6%5 0,3%

*Echevarria et al Enferm.Infecc.Microbiol.Clin 2006;24:20-25

RVS (en no cirróticos) G1 G2,3,5,6 G4

pegIFN+RBV (24semanas) 38% 75-80% 38%

pegIFN+RBV (48semanas) 42% 70%

TRATAMIENTO ESTÁNDAR de la Infección Crónica por VHC INTERFERON pegilado alfa 2a/2b + RIBAVIRINA

El GENOTIPO influye en la decisión de tratamiento: Cómo, Cuándo y la Duración

Campos-Varela I et al HCV influences Post-Liver Transplantoutcomes Transplantation. 2014 Sep 10 PMID: 25211520

32

El TRATAMIENTO con nuevos INHIBIDORES ES SUBTIPO-DEPENDIENTE

Subtipo 1g presenta la mutación de resistencia T54S (+ P131S+L135F) de manera natural. Este subtipo es resistente a Telaprevir, Boceprevir y Narlaprevir

Cento et al Antiviral Therapy 2013; 18:645-648

Sarrazin et al., Gastroenterology 2010 // Sullivan, et al. EASL 2011 // Jacobson et al., NEJM 2011 // Poordad et al., NEJM 2011 // Manns et al., EASL 2013 // Jacobson et al., EASL 2013 // Ferenci et al., EASL 2013 // Nezam H. Afdhal CCO_2014_AASLD_Satellite // Jensen DM, et al. AASLD 2014. Abstract 45. // Dieterich D, et al. AASLD 2014. Abstract 46.

G1

71

59

7569

58

8079

66

85 84 8792

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Telaprevir Boceprevir Simeprevir Faldaprevir Daclatasvir SOF+SMV+RBVreal world

G1a

G1b

pegIFN+RBV+PI(NS3i) NS5Ai

NS3i +

NS5Bi

Porc

enta

je d

e R

VS

32

33

NO SUBTIPAR LIMITA LA EFICACIA DE LOS TRATAMIENTOS

Lawitz E, et al. N Engl J Med. 2013;368:1878-1887.0

Overall

SVR

12 (

%)

8996

100100

80

60

40

20

0GT1 GT4 GT5,6

261/292 27/28 7/7n/N =

90

295/327

Gane E et al., EASL 2013 and Jacobson I et al. NEJM 2013;368:1867

EFICÀCIA GLOBAL de los Tratamientos con SOFOSBUVIR

77.19%Donaldson EF et al. Hepatology; 2014; Aug 14 doi: 10.1002/hep.27375

SOFOSBUVIR se considera un INHIBIDOR PANGENOTÍPICO

34

VIEKIRA PAK Ttm de cirrosiscompensadas G1

PARITAPREVIR + RITONAVIR+

OMBITASVIR [ABT-267](NS5A)+

DASABUVIR [ABT-333](NS5B)+

Rbv

DASABUVIR [ABT-333](NS5B) no es activo frente a Genotipo 4 (PEARL-I study Hezode et al)

12-week arm

24-week arm

NO SUBTIPAR LIMITA LA EFICACIA DE LOS TRATAMIENTOS

34

3. SUBTIPADO El tratamiento con nuevos DAAs es

SUBTIPO-DEPENDIENTE

G1 probado

Gno-1 se desconoce (no

hay método diagnóstico de subtipado,

hasta ahora)

La infección MIXTA (más de un

Subtipo a la vez) tiene

implicaciones en el tratamiento.

36

Mutaciones de Resistencia a DAAs

NS3

NS5A NS5B

37

SIMEPREVIR (NS3 inhibitor) + pegIFN + Rbv para tratar pacientes naive de G1

Jacobson IM et al The Liver Meeting 2013. Abs 1122FDA AVDAC 10.24.2013Choe SS et al The Liver Meeting 2013 1500

38

SIMEPREVIR (NS3 inhibitor) + pegIFN + Rbv para tratar pacientes naive de G1

4a.- Todas las guías de tratamiento recomiendan analizar Q80K

antes de tratar con SIMEPREVIR.

4b- La detección de otras mutaciones de resistencia:

Antes del tratamiento puede ayudar a decidir la terapia

personalizada más eficiente.

Es una necesidad en pacientes que han fallado a tratamiento con

nuevos inhibidores (DAAs).

DATOS que debemos conocer:

Los pacientes CURADOS pueden ser REINFECTADOS.

Los virus mutantes resistentes pueden transmitirse de paciente a paciente.

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PERSONALIZACION DE LOS TRATAMIENTOS. DATOS OBJETIVOS

VIRUSPACIENTEINHIBIDORES (Combinaciones)ACCESO

VIRUS:SUBTIPORESISTENCIAS

PACIENTE:GRADO DE FIBROSISPRE-TRATAMIENTOINTERACCIONES ENTRE MEDICAMENTOSESTADO PERITRASPLANTE

INFECCIONES MIXTAS

PROYECTO CDTI. Ref. IDI-20110115IP. JUAN IGNACIO ESTEBAN

Estudio de quasiespecies de VHB y VHC, y de polimorfismos genómicos asociados a respuesta al tratamiento antiviral por pirosecuenciación.

CONVENIO PUBLICO / PRIVADO

CDTI (Centro para el Desarrollo Tecnológico Industrial), Spanish Ministry of Economicsand Competitiveness (MINECO)

42

454 / GS-Junior100.000 secuencias(=reads) 500-800nts

SUBTIPADO DE ALTA RESOLUCION DEL VHC

43

MÓ

DU

LOES

PECI

FICO

MÓ

DU

LO

UN

IVER

SAL

HCV genome 3‘UTR5‘UTR

STRUCTURAL NONSTRUCTURAL

NS5B (HCV RNA Dependent RNA

Polymerase)

8254 8707

RT-PCR

Hemi-Nested M13

ReNested MID

M13f M13r

13N5Bo8254

5Bo8254

13N5Bo8641

5Bo8707

C E1 E2 p7 NS2 NS3 NS5A NS5BNS4B4A

M13fOligo A+ TCAG MID 5Bo8254 M13f TCAG+Oligo B MID5Bo8641

Sanger sequencing High-resolution HCV subtyping (454/GS-Junior)

454nts

428nts

M13fMID

Oligo A+ TCAG

M13rMID

TCAG+Oligo B

45 490

M13f

M13UTR146

UTR45 Cor490

M13Core490

M13r

385nts

5’UTR-core

446nts

EU PATENT No. WO2015001068 A1

44

Smith D, Bukh J, et al. “Expanded classification of HCV 7 genotypes and67 subtypes, updated criteria and assignment web source.” Hepatology2013 Oct 1. doi: 10.1002/hep.26744.

Aprobado en Enero 2015: 7 Genotipos y 67 subtipos.

Las referencias son actualizadas de manera continua. Si la clasificación cambia, las secuencias pueden ser fácilmente re-subtipadas.

G1 (7): a,b,c,e,g,h,lG2 (11): a,b,c,d,e,i,j,k,m,q,rG3 (6): a,b,g,h,i,kG4 (17): a,b,c,d,f,g,k,l,m,n,o,p,q,r,t,v,wG5 (1): aG6 (24): a,b,c,d,e,f,g,h,i,j,k,l,m,n,o,p,q,r,s,t,u,v,w,xaG7 (1): a

45


46


Si no difieren en más de un 10% no va a cambiar el subtipo

47G1b


48


49


50G4d


51


52G1a


53

5

Paciente P-IND-32 está infectado por:

G4d (87%) + G1a (13%)

INFECCIÓN MIXTA = Infección por más de un subtipo al mismo tiempo


54

CASO ESPECIAL:

PACIENTE INFECTADO con 1b + 3a + 2c + 4d + 1a.


55

Secuenciación SangerNS5B

Subtipado de Alta Resolución del VHC

GS-Junior

NS5B

Versant HCV Genotype 2.0 LiPA Siemens

5’-core

Real Time HCV Genotype II. Abbott

5’-coreNS5B (1a/1b)

ESTUDIO COMPARATIVO J.Clin.Microb. January 2015; 53(1):219-226

56

Muestras G1 (n=82)

Patient code Direct NS5B sequencing

Versant HCV Genotype 2.0

Abbott Real time HCV genotype II.

UDPS HCV Subtyping 454/GS-Junior*

P1-P17 1a 1a 1a 1aP18-61 1b 1b 1b 1b

P62 1a 1 1 1aP63 1a 1a 1 1aP64 1a 1 1a 1aP65 1a 1a 1 1aP66 1a 1 1 1aP67 1a 1 1 1aP68 1a 1 1 1aP69 1a 1a 1 1aP70 1b 1 1b 1bP71 1b 1 1 1bP72 1b 1 1b 1bP73 1b 1 1b 1bP74 1b 1 1b 1bP75 1b 1 1 1bP76 1b 1b 1 1bP77 1b 1b 1b 1b (43%)+3a(35%)+1a (22%)P78 1b 1b 1 1bP79 1b 1/1a 1b 1bP80 1b 1 1b 1bP81 1b 1b 1 1bP82 1b 1b 1 1b

Table summary Untyped G1 samplesNumber of patients Versant/Siemens Rt-PCR/Abbott

G1a 25 5 (20%) 7 (28%)G1b 57 8 (14%) 6 (10%)

Total 82 13 (16%) 13 (16%)

16 % de los Genotipo 1 no fueron subtipadas por las técnicas comerciales usadas en lab. de rutina.

57

P-IND-7 4a 4 4 4aP-IND-8 4a 4a/c/d 4 4aP-IND-9 4d 4 4 4d

P-IND-10 4d 4 4 4dP-IND-11 4d 4a/c/d 4 4dP-IND-12 4d 4a/c/d 4 4dP-IND-13 4f 4f 4 + 5* 4fP-IND-14 4f 4f 4 + 5* 4fP-IND-15 4f Ind 4 + 5* 4fP-IND-16 4f Ind 4 + 5* 4fP-IND-17 4f Ind 4 + 5* 4fP-IND-18 4f Ind 4 + 5* 4fP-IND-19 4f Ind 4 + 5* 4fP-IND-20 4f Ind 4 + 5* 4fP-IND-21 4f Ind 4 + 5* 4fP-IND-22 4f Ind 5 4fP-IND-23 4f Ind 5 4fP-IND-24 4f Ind 5 4fP-IND-25 4f Ind 5 4fP-IND-26 4r Ind 1 + 4 4r

P-IND-27 5a 5a 5 5aP-IND-28 6c neg 5 6c

* 4 or 5

Muestras Genotipo

no-1

P-IND-1 2c 2a/c 2 2cP-IND-2 2c 2a/c 2 2cP-IND-3 3a 3 3 3aP-IND-4 3a 3a ND 3aP-IND-5 3a 3a 3 3aP-IND-6 3a 3a 3 3a

gP-IND-29 4d Ind 4 4d (72%)+1a (28%)P-IND-30 2j 2 ND 2j (95%)+4f (5%)P-IND-31 4p Ind 3 + 4 4p (53%)+3a (47%)P-IND-32 4d Ind 1a + 4 4d (87%) +1a (13%)

24%

56%

9% 7% 1% 3%

HCV SUBTYPE PREVALENCE HUVH BARCELONA 2012-13.

1a

1b

3a

4d

4f

Other

Infecciones Mixtas

2,5% - 5,84 %Infecciones Mixtas

59

DETECCION DE MUTACIONES DE RESISTENCIA

HCV genome

3‘NCR5‘NCR


NS3 (HCV RNA protease-helicase)

7602 9377

RT-PCR

Nested M13

ReNested MID (15 cycles)

M13f M13r

M13f M13rMID MID

C E1 E2 p7 NS2 NS3 NS5A NS5BNS4B4A

M13fOligo A+ TCAG MID Up M13f TCAG+Oligo B MIDDown

Massive Sequencing 454/GS-Junior platform

Oligo A+ TCAG TCAG+Oligo B

3426 4036

M13f M13r

Primer N up

Primer up Primer down

611ntsPrimer N down

NS5A (replication

control)

6258 7601

NS5B (HCV RNA Dependent RNA

Polymerase)

M13f M13r

1344 nts

MO

DU

LO E

SPEC

IFIC

O

MÓ

DU

LO

UN

IVER

SAL

Primer up Primer downPrimer up Primer down

Primer N up Primer N down

Primer N up Primer N down

1776nts

61V36A Q80R

Paciente tratado con TELAPREVIR que falló (hace 2 años). ¿Podemos volver a tratarlo con TVR o BOC?

62V36A Q80R

Faldaprevir=FDVSimeprevir=SMV

TVRBOC

Paciente tratado con TELAPREVIR que falló (hace 2 años). ¿Podemos volver a tratarlo con TVR o BOC?

63

Subtipar el VHC identificando los 67 subtipos.

Permite la re-clasificación en caso de futuros cambios.

Detectar Infecciones Mixtas.

Detectar Mutaciones de Resistencia.

Estudios de Epidemiologia Molecular.

El Subtipado de Alta Resolución supone una Innovación en el campo de la infección por VHC, permitiendo obtener datos objetivos útiles para

personalizar los tratamientos más efectivos.

USO DE LA SECUENCIACIÓN MASIVA PARA EL ESTUDIO DEL VHC

CONCLUSIONES:

CONSENSO AEEH TRATAMIENTO VHC

65

DIANAS TRATAMIENTO anti-HCVDAA = Direct Acting Antivirals

3‘UTR5‘NCR


Inhibidores PROTEASA (PI)Bloqueo centro activo proteasa

-PREVIR

NS5A Inhibidores (NS5AI)Bloqueo Complejo Replicación, ensamblaje y liberación de la

partícula viral-ASVIR

NS5B Inhibidor Nucloes(t)idico

(Nucs or NI)Bloqueo centro activoInhibe elongación RNA

-BUVIR

NS5B Inhibidor Non-Nucloes(t)idico

(Non-Nucs or NNI)Centro Alostérico.

Cambio en la estructura tridimensional

-BUVIR

BAJA BR1a Gen./1a ola(G1):TELAPREVIR (TVR) *BOCEPREVIR (BOC) *1a Gen./2a.ola (todos G excepto 3)SIMEPREVIR (SMV) *ASUNAPREVIR &

FALDAPREVIR (FDV) #

PARITAPREVIR/ritonavir *VANIPREVIR (MK-7009)DANOPREVIRMAS ALTA BR2a. Generación. Pangenotípico(poco efectivo para G3):MK-5172 #

ACH-2684

BAJA BR1st Gen. (G1 Y G4. Variable para otros genotipos)DACLATASVIR (DCV) *LEDIPASVIR *OMBITASVIR (ABT-267) *

Ligeramente ALTA BR2a.Gen. (Pangenotipico) MK-8742 #

GS-5816ACH3102SAMATASVIR (IDX719)

ALTA BRPangenotípico (poco efectivo G3)SOFOSBUVIR (SOF) *MERACITABINE #

ACH-3422IDX21437IDX21459

BAJA BREscasa cobertura de genotiposDASABUVIR (ABT-333) *DELEOBUVIR #

BMS-791325 #

PPI-383GS-9669TMC647055

BR= barrera de resistencia. * Aprobado. & Sometido FDA # Fase III. Prevision aprobación 2015-16.

http:www.hepmag.com

GENOTIPO Nº ESQUEMAS TTO (F0-F4) TOTAL

1 21

40 combinaciones

2 33 54 11

ESQUEMAS DE TRATAMIENTO SEGÚN DOCUMENTO DE CONSENSO DE LA AEEH contra la HEPATITIS C.

26 Enero 2015.

http://aeeh.es/http://www.hcvguidelines.org/full-report-view

¡MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCION!

vall d’hebron institut de recerca (vhir) hospital universitari vall … · 2015. 3. 13. · 1...

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