Validacion Métodos Analíticos-FM

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<p>1 GUSTAVO DELGADO Len, JULIO del 2007 Consultora FARMAMUNDI MDULO 4 LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD DE MEDICAMENTOS PROYECTO FARMAMUNDI/UNAN-LEN 2 OBJETIVOS ESPECIFICOS Entrenarapersonaldelaboratorioenelusodelastcnicas quimiomtricasaplicadasalavalidacindelosmtodos analticos. Entrenaralpersonalenlaaplicacindelavalidacinconeluso de calculadoras con funciones de estadstica bsica Aplicarlavalidacindemtodosanalticosutilizadosenanlisis farmacuticos. OBJETIVO GENERAL Entrenar a personal de laboratorio en la evaluacin de los diferentes parmetros que caracterizan el desempeo de un mtodo analtico. 3 CONTENIDO INTRODUCCIN:RequisitosdelasnormasISO/IEC17025. Procedimientonormalizado..Definicindevalidacin.Parmetros quecaracterizaneldesempeodelmtodo.Reglasparala validacin. Plan de la validacin. TCNICASDELAVALIDACINATRAVSDEEJEMPLOSEN ANLISISDEAGUAS:Evaluacindelaprecisin(repetibilidady precisinintermedia).Linealidadyrango.Controldecalidaddela linealidad (elaboracin de carta de control bidimensional). Lmite de deteccinydecuantificacin.Evaluacindelaexactitud (evaluacindelbiasosesgo,efectodematriz,recobro,correccin de resultados). Sensibilidad, robustez. ESTUDIO DE CASOS: Resolucin de problemas. 4 INTRODUCCION 5 Evaluacin de la conformidad ISO 17000-11 1. Enfoque funcional - I La evaluacin de la conformidad es una serie de tres funciones que satisfacen una necesidad, o una solicitud, de demostrar que se cumplen los requisitos especificados: seleccin; determinacin, y revisin y atestacin.6 Enfoque funcional - I La evaluacin de la conformidad se puede aplicar a productos (definido de modo que incluye servicios), procesos, sistemas y personas, y tambin a aquellos organismos que prestan servicios de evaluacin de la conformidad. Por comodidad en esta norma se utiliza la expresin objeto de evaluacin de la conformidad para referirse en conjunto a cualquiera o a todas estas entidades.7 Requierevigilancia? Selecin Determi- nacin Revisin yattestacin Informacin sobre elementos seleccionados Informacin sobreel cumplimiento de requisitos especificados Cumplimiento demostrado de losrequisitos especificados Necesidad de demostrar cumplimiento de requisitos especificados S No Final A: funcin EC B: salida Clave: Evaluacin de conformidad: Enfoque funcional 8 2. SeleccinActividades de planificacin y preparacin para Recopilar o producir informacin para la funcin de determinacin Caracteristicas del organismo de EC,MuestreoRequisitos especificados(por ejemplo estandares) Procedimientos (mtodos de prueba e inspeccin)9 3. Determinacin - I Las actividades de determinacin se llevan a cabo con el fin de obtener informacin completa relativa al cumplimiento de los requisitos especificados por el organismo de evaluacin de la conformidad o su muestra. Ensayo/prueba (4.2) Inspeccin (4.3) Auditora (4.4) Evaluacin entre pares (4.5) 10 Ensayo/prueba (17000:2004, 4.2) determinacin de una o ms caractersticas de un objeto de evaluacin de la conformidad, de acuerdo con un procedimiento (3.2). NOTA El trmino ensayo/prueba se aplica en general a materiales, productos o procesos.11 Objeto y alcance de ISO17011 Para los propsitos de esta norma internacional, los OEC proveen los siguientes servicios: 1. Ensayo/prueba. 2. Inspeccin 3. Certificacin de sistemas de gestin. 4. Certificacin de productos 5. Calibracin. 12 REQUISITOS DE LA NORMA ISO/IEC 17025:2005 Diagrama de Ishikawa aplicado al items 5.4. Mtodos de ensayo y de calibracin y validacin mtodos G. Delgado 5.4. Mtodos y ValidacinMtodos de ensayo GeneralidadesEstimacin incertidumbre Validacin MtodosControl de datosSeleccinDesarrolladosNo NormalizadosMtodos y proc. apropiadosIncertidumbreInstructivos, normas, man., actualizadosVerificaciones Sofware validadosProc. Proteccin Mantenimimiento computadorasCalibracionesMedicionesTomar todos componentesNo normalizadosDiseadosNormalizados modificadosNormalizados, previa verificacinApropiado, validados13 5.4.1.Generalidades.Ellaboratoriodebeaplicarmtodosyprocedimientos apropiados para todos los ensayos o las calibraciones dentro de su alcance. Estos incluyenelmuestreo,lamanipulacin,eltransporte,elalmacenamientoyla preparacindelostemsaensayaroacalibrary,cuandocorresponda,la estimacin de la incertidumbre de la medicin as como tcnicas estadsticas para el anlisis de los datos de los ensayos o de las calibraciones. El laboratoriodebetenerinstruccionesparaelusoyelfuncionamientodetodoel equipamientopertinente,yparalamanipulacinylapreparacindelostemsa ensayar o a calibrar, o ambos, cuando la ausencia de tales instrucciones pudieran comprometerlosresultadosdelosensayosodelascalibraciones.Todaslas instrucciones, normas, manuales y datos de referencia correspondientes al trabajo dellaboratoriosedebenmanteneractualizadosydebenestarfcilmente disponiblesparaelpersonal(vase4.3).Lasdesviacionesrespectodelos mtodosdeensayoydecalibracindebenocurrirsolamentesiladesviacinha sido documentada, justificada tcnicamente, autorizada y aceptada por el cliente. REQUISITOS DE LA NORMA ISO/IEC 17025:2005 5.4 Mtodos de ensayo y de calibracin y validacin de los mtodos 14 5.4.2. Seleccin de los mtodos Ellaboratoriodebeutilizarlosmtodosdeensayoodecalibracin,incluidoslosde muestreo, que satisfagan las necesidades del cliente y que sean apropiados para los ensayos o las calibraciones que realiza. Se deben utilizar preferentemente los mtodospublicadoscomonormasinternacionales,regionalesonacionales.El laboratorio debe asegurarse de que utiliza la ltima versin vigente de la norma, a menos que no sea apropiado o posible. Cuando sea necesario, la norma debe ser complementada con detalles adicionales para asegurar una aplicacin coherente. Cuandoelclientenoespecifiqueelmtodoautilizar,ellaboratoriodebeseleccionar losmtodosapropiadosquehayansidopublicadosennormasinternacionales, regionalesonacionales,pororganizacionestcnicasreconocidas,oenlibroso revistascientficasespecializados,oespecificadosporelfabricantedelequipo. Tambinsepuedenutilizarlosmtodosdesarrolladosporellaboratorioolos mtodosadoptadosporellaboratoriosisonapropiadosparaelusoprevistoysi hansidovalidados.Elclientedebeserinformadodelmtodoelegido.El laboratoriodebeconfirmarquepuedeaplicarcorrectamentelosmtodos normalizadosantesdeutilizarlosparalosensayosolascalibraciones.Siel mtodo normalizado cambia, se debe repetir la confirmacin.Sielmtodopropuestoporelclienteseconsiderainapropiadoodesactualizado,el laboratorio debe informrselo. 15 5.4.3. Mtodos desarrollados por el laboratorio Laintroduccindelosmtodosdeensayoydecalibracindesarrolladosporel laboratorioparasupropiousodebeserunaactividadplanificadaydebeser asignada a personal calificado, provisto de los recursos adecuados. Losplanesdebenseractualizadosamedidaqueavanzaeldesarrolloysedebe asegurar una comunicacin eficaz entre todo el personal involucrado. 5.4.4. Mtodos no normalizados Cuandoseanecesarioutilizarmtodosnonormalizados,stosdebenseracordados con el cliente y deben incluir una especificacin clara de los requisitos del cliente y del objetivo del ensayo o de la calibracin. El mtodo desarrollado debe haber sido validado adecuadamente antes del uso. 16 Mtodo No Normalizado (cont) Nota:Paralosmtodosdeensayoodecalibracinnuevosesconveniente elaborarprocedimientosantesdelarealizacindelosensayosolas calibraciones,loscualesdeberancontener,comomnimo,lainformacin siguiente: *una identificacin apropiada; *el alcance; *la descripcin del tipo de tem a ensayar o a calibrar; *los parmetros o las magnitudes y los rangos a ser determinados; *los aparatos y equipos, incluidos los requisitos tcnicos de funcionamiento; *los patrones de referencia y los materiales de referencia requeridos; *lascondicionesambientalesrequeridasycualquierperodode estabilizacin que sea necesario. *la descripcin del procedimiento, incluida la siguiente informacin: -lacolocacindelasmarcasdeidentificacin,manipulacin,transporte, almacenamiento y preparacin de los tems; -las verificaciones a realizar antes de comenzar el trabajo; -laverificacindelcorrectofuncionamientodelosequiposy,cuando corresponda, su calibracin y ajuste antes de cada uso; -el mtodo de registro de las observaciones y de los resultados; -las medidas de seguridad a observar. *los criterios o requisitos para la aprobacin o el rechazo; *los datos a ser registrados y el mtodo de anlisis y de presentacin; *la incertidumbre o el procedimiento para estimar la incertidumbre. 17 5.4.5. Validacin de los mtodos Lavalidacineslaconfirmacin,atravsdelexamenyelaportedeevidencias objetivas,dequesecumplenlosrequisitosparticularesparaunusoespecfico previsto. Ellaboratoriodebevalidarlosmtodosnonormalizados,losmtodosquediseao desarrolla,losmtodosnormalizadosempleadosfueradelalcanceprevisto,as comolasampliacionesymodificacionesdelosmtodosnormalizados,para confirmarquelosmtodossonaptosparaelfinprevisto.Lavalidacindebeser tanampliacomoseanecesarioparasatisfacerlasnecesidadesdeltipode aplicacin o del campo de aplicacin dados. Ellaboratoriodeberegistrarlosresultadosobtenidos,elprocedimientoutilizadopara la validacin y una declaracin sobre la aptitud del mtodo para el uso previsto. La gama y la exactitud de los valores que se obtienen empleando mtodos validados (porejemplo,laincertidumbredelosresultados,ellmitededeteccin,la selectividaddelmtodo,lalinealidad,ellmitederepetibilidadode reproducibilidad,larobustezanteinfluenciasexternasolasensibilidadcruzada frente a las interferencias provenientes de la matriz de la muestra o del objeto de ensayo)talcomofueronfijadasparaelusoprevisto,debenresponderalas necesidades de los clientes. 18 Validacin de mtodos (cont) NOTA 2: Es conveniente utilizar una o varias de las tcnicas siguientes para la determinacin del desempeo de un mtodo:*calibracin utilizando patrones de referencia o materiales de referencia; *comparacin con resultados obtenidos con otros mtodos; *comparaciones interlaboratorios; *evaluacin sistemtica de los factores que influyen en el resultado; *evaluacindelaincertidumbredelosresultadosbasadaenelconocimientocientficodelos principios tericos del mtodo y en la experiencia prctica. Estimacin de la incertidumbre de la medicin Unlaboratoriodecalibracin,ounlaboratoriodeensayoquerealizasuspropias calibraciones,debetenerydebeaplicarunprocedimientoparaestimarla incertidumbredelamedicinparatodaslascalibracionesytodoslostiposde calibraciones. Los laboratorios de ensayo deben tener y deben aplicar procedimientos para estimar laincertidumbredelamedicin.Enalgunoscasoslanaturalezadelmtodode ensayopuedeexcluirunclculoriguroso,metrolgicamenteyestadsticamente vlido, de la incertidumbre de medicin. En estos casos el laboratorio debe, por lo menos, tratar de identificar todos los componentes de la incertidumbre y hacer unaestimacinrazonable,ydebeasegurarsedequelaformadeinformarel resultado no d una impresin equivocada dela incertidumbre. Unaestimacin razonable se debebasaren un conocimiento del desempeo delmtodo y en el alcancedelamedicinydebehaceruso,porejemplo,delaexperiencia adquirida y de los datos de validacin anteriores. 19 VALIDACION:Verificacionesnecesariasparaasegurarlas caractersticasdeldesempeoylimitacionesdeunmtodoy demostrar que ste est cientficamente regido bajo las condiciones paralascualesdebeseraplicado.Secomparanlosparmetrosdel desempeodelmtodoconlosrequerimientosnecesariosdelos datos analticos. TECNICA: Principio cientfico til para proveer informacin sobre la composicin de una sustancia. METODO: Adaptacin de una tcnica para mediciones de parmetros analticos seleccionados. PROCEDIMIENTO: Direcciones generales escritas necesarias para utilizar un mtodo. Ejemplos: Mtodos estndares de aguas, AOAC, EPA, etc PROTOCOLO: Serie de direcciones definitivas que un laboratorio debe seguir sin excepcin para utilizar un mtodo. DEFINICIONES 20 CRITERIOS DEL DESEMPEO DE UN METODO a) Primarios: precisin, exactitud, lmite de deteccin. b) Secundarios: Linealidad, rango, lmite de cuantificacin, selectividad, sensibilidad, robustez o fortaleza del mtodo. Tipos de validacin Interna Dentro del laboratorio. Se realiza cuando se ha desarrollado nuevo mtodo o cuando se adapta o se modifica el mtodo Externa Entre laboratorios. Comparacin con al menos 8 laboratorios 21 REGLAS FUNDAMENTALES PARA LA VALIDACIN 1. Validar el mtodo completo. Desde la etapa preparatorio hasta la medicin final.2. Validar en un intervalo de concentraciones. Precisin del mtodo depende de la concentracin del analito en la solucin muestra. 3. Validar sobre una amplia gama de matrices. Probar un mtodo dado en aguas, suelos, alimentos, muestras biolgicas, etc. 22 Especificaciones requeridas por el clienteSeleccin del mtodo apropiadoNormalizado y verificado?Planificacin de tareasExperimentos de validacin/estimacin incert.Evaluacin de informacindisponible sobrevalidacin del mtodo OK?Evaluacin de los resultados, segn especificaciones Realizar ajustesDocumentar mtodo y su validacinUtilice el mtodo con confianzaProcedimiento normalizado y reporte validacinFININICIOFlujo para la seleccin y validacin de un mtodo23 Qu es un procedimiento normalizado? Unprocedimientonormalizadoeselprotocoloestablecidoporellaboratorio, optimizado,validado,revisado,aprobadoporla(s)persona(s)autorizada(s). Tieneunaidentificacinnica.Debenespecificarselosparmetrosque caracterizaneldesempeodelmtodoatravsdelaconfirmacino verificacin (o validacin si el mtodo ha sido desarrollado en el laboratorio, si esnonormalizadoosielmtodonormalizadohasidomodificado)dequeel mtodo es apto para el ensayo requerido por el cliente.Elprocedimientonormalizadodebeserimplementadoenellaboratorioporel personalautorizado,competente,conelinstrumentaldemedicincalibradoy las condiciones ambientales ptimas. Existe mucha confusin entre validar o no un mtodo normalizado. Se supone queelmtodonormalizadoyaestvalidado,especificalosparmetrosque caracterizansudesempeo.Siunmtodonormalizadovaaseraplicadopor primeravezenellaboratorio,previamentesedebenrealizarlosprocesos correspondientesconelfindeverificaroconfirmarqueelmtodocumplecon las especificaciones que caracterizan el desempeo del mtodo. 24 FLUJOGRAMA DE NORMALIZACION DE UN PROCEDIMIENTO Definicin de parmetros analticosDiseo experimentalOptimizacinEmprica?Experiencias iterativasprogramas en computadorasModeloEvaluacin de resultadosOK?Planificacin de validacinModelo de calibracin, rango, linealidad, LD, LCPrecisin y exactitudEstabilidad del analitoProcesamiento de resultadosInforme validacin/ proc. normalizadoAnlisis de rutinaDESARROLLO DEL METODOINICIOVALIDACION DEL METODOSINOSINODocumentacin/normalizacin25 Recomendaciones (I) Mtodo por prioridad: 1. Mtodos de prueba internos y modificados 2.Mtodos de prueba con alto potencial de riesgo 3.Mtodos de prueba o productos con alto nivelde utilizacin 4.Validar primero los puntos crticos en losprocedimientos. 26 ACTIVIDADADES Ejecutor 1 2 3 4 5 6 7 8 9Diagnstico del laboratorio (recursos, disponibilidad) DT, AEnsayo de pureza de reactivos y referencias A1Verificacin de calibraciones A2Repetibiliad en mediciones (tr, f) A2Repetibilidad del mtodo (conteni...</p>