validacion del proceso de limpieza y sanitizacion de …

VALIDACION DEL PROCESO DE LIMPIEZA Y SANITIZACION DE UN AREA DE ENVASE DE

PRODUCCION DE VACUNAS BIOLOGICAS

Jenny Carolina Gutiérrez Arcila

TRABAJO DE GRADO

Presentado como requisito parcial

Para optar al título de

MICROBIOLOGA AGRICOLA Y VETERINARIA

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

FACULTAD DE CIENCIAS

CARRERA DE MICROBIOLOGIA AGRICOLA Y VETERINARIA

BOGOTA D.C

MAYO DE 2013

Nota de advertencia:

Artículo 23 de la resolución No 13 de julio de 1946

“la Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus trabajos de tesis. Sólo

velara porque no se publique nada contrario al dogma y a la moral católica y porque las tesis no contengan ataques

personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y la justicia”




APROBADO

_______________________ ________________________

Diana Marcela Moreno José Manuel Granados

Microbióloga industrial Químico Farmacéutico

Directora Codirector

_____________________________

Janeth Arias Palacios

Bacterióloga M.Sc.- M ed

Jurado




APROBADO

________________________ _______________________

Ingrid Schuler Janeth Arias Palacios

Biologa Ph.D. Bacterióloga M.S.- M. ed

Decana académica directora de carrera

Este trabajo de grado está dedicado a mis padres y hermanos, por su amor y apoyo incondicional y por brindarme su ayuda para

culminar este proyecto

AGRADECIMIENTOS

Quiero agradecer primero a Dios por darme la vida, la salud y la oportunidad de poder culminar mis estudios, a mis

padres y hermanos por su gran apoyo en la realización de este trabajo de grado, a la empresa colombiana de

productos veterinarios VECOL S.A por darme la oportunidad de colaborarles, Diana Moreno por su amistad y

ayuda en el cumplimiento de este objetivo, Fabio Gonzales por su confianza en mí para este trabajo.

Y para terminar a todo el personal de Vecol, que de una u otra forma aportó su experiencia en mi carrera para

haber alcanzado esta meta, de todo corazón muchas gracias.

TABLA DE CONTENIDO

1. INTRODUCCION…………………………………………………………………1

2. MARCO TEÓRICO……………………………………………………………….2

2.1 CONTROL DE CALIDAD Y BUENAS PRÁCTICAS DE MANUFACTURA EN EMPRESAS

FARMACÉUTICAS……………………………………………………………………….2

2.2 SANITIZACION Y LIMPIEZA……………………………………………………....2

2.2.1 DESINFECTANTES UTILIZADOS EN LA INDUSTRIA FARMACEUTICA SOBRE

SUPERFICIES……………………………………………………………………………...3

2.2.2 HIPOCLORITO DE SODIO………………………………………………………...3

2.2.3 SANIVEC…………………………………………………………………………….3

2.2.4 DESINFLOR…………………………………………………………………………3

2.3 DESINFECTANTES UTILIZADOS EN LA INDUSTRIA FARMACEUTICA- VECOL……..4

2.3.1 TERMINEX 6………………………………………………………………………..4

2.3.2 CONTINUEX 10……………………………………………………………………..4

2.3.3 PERSON UVI………………………………………………………………………..4

2.4 EQUIPO UTILIZADO PARA LA DESINFECCION DE AREAS DE ENVASE…….5

2.4.1 MICRODIFUSOR ELECTROTÉRMICO “MICRO-TERMIC”……………………...5

2.5 MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS PARA LA EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN DE

SUPERFICIES……………………………………………………………………………….5

2.5.1 PLACAS DE CONTACTO- PETRIFILM……………………………………………..5

2.5.2 HISOPOS QUICK SWAP……………………………………………………………...8

2.6 MEDIOS DE CULTIVO………………………………………………………………....8

PAG.

2.6.1 AGAR PLATE COUNT………………………………………………………………..8

2.6.2 CALDO LETHEEN……………………………………………………………………8

2.7 EQUIPO UTILIZADO PARA EL MUESTREO AMBIENTAL………………………...9

2.7.1 MAS-100 MERCK……………………………………………………………………...9

2.8 CUARTOS LIMPIOS……………………………………………………………………..9

2.8.1 ÁREA CRÍTICA - CLASE 100 (ISO 5)…………………………………………….......11

2.8.2 ÁREAS LIMPIAS DE APOYO………………………………………………………12

2.9 VALIDACION………………………………………………………………………......12

2.9.1 TIPOS DE VALIDACION……………………………………………………………13

2.9.1.1 VALIDACION RETROSPECTIVA…………………………………………………13

2.9.1.2 VALIDACION PROSPECTIVA…………………………………………………......13

2.9.1.2 VALIDACION CONCURRENTE…………………………………………………...13

2.9.1.3 PARAMETROS DE VALIDACION…………………………………………………13

2.9.1.3.1 REPRODUCIBILIDAD…………………………………………………………….13

2.9.1.3.2 REPETIBILIDAD………………………………………………………………......13

2.9.1.3.3 ROBUSTEZ……………………………………………………………………… ...13

3. JUSTIFICACION Y PROBLEMA DE INVESTIGACION……………………………….15

4. OBJETIVO GENERAL……………………………………………………………………16

4.1 OBJETIVOS ESPECIFICOS………………………………………………………….......16

5. METODOLOGIA………………………………………………………………………….17

5.1 METODOLOGIA MUESTREO DE AMBIENTES…………………………………...19

5.1.2 METODOLOGIA MUESTREO DE SUPERFICIES………………………………...19

6. PROCEDIMIENTO DE RECONSTITUCION DE PETRIFILM……………………....20

6.1 PROCEDIMIENTO MANEJO DE MUESTRAS CON HISOPOS QUICK SWAB…...21

7. METODOLOGIA DE PROMOCION DE CRECIMIENTO………………………….22

8. PRUEBA DE ESTERILIDAD…………………………………………………………..22

9. RESULTADOS OBTENIDOS…………………………………………………………..24

9.1 RESULTADOS OBTENIDOS PROMOCION DE CRECIMIENTO………………...30

9.2 RESULTADOS OBTENIDOS PRUEBAS DE ESTERILIDAD………………………31

10. DISCUSION…………………………………………………………………………….32

10.1 PROCESO DE MUESTREO………………………………………………………….32

10.2 PRUEBAS DE PROMOCION DE CRECIMIENTO…………………………………37

10.3 PRUEBAS DE ESTERILIDAD………………………………………………………..37

11. CONCLUSIONES………………………………………………………………………39

12. RECOMENDACIONES………………………………………………………………..40

13. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS…………………………………………………..41

14. CONSULTAS EN LINEA……………………………………………………………....44

15. ANEXOS………………………………………………………………………………...47

RESUMEN

La limpieza y la sanitizacion de áreas de envasado de productos farmacéuticos son fundamentales para reducir los

riesgos de contaminación en el producto terminado y de esta manera asegurar su inocuidad, confiabilidad y

seguridad, manteniendo un control en los índices microbiológicos los cuales pueden llegar a afectar la calidad del

producto terminado.

En el presente trabajo se realizo la validación de los procesos de limpieza y sanitizacion del área de envase de

vacunas biológicas de la empresa colombiana de productos veterinarios VECOL S.A, para esto se realizaron

muestreos del área y de las superficies de envase de productos biológicos durante tres (3) semanas, antes de las

actividades de llenado, el volumen de muestreo para el área de flujo laminar con el equipo MAS-100 es de 500L y

para las áreas circundantes al flujo laminar es de 700L, las superficies fueron muestreadas con la metodología de

petrifilm, estos muestreos se realizaron para bacterias mesofilas y hongos-levaduras. Con los datos obtenidos se

determinó límites de acción, esperando que los procedimientos de limpieza y sanitizacion sean adecuados para el

envasado de vacunas estérilmente.

ABSTRACT

The cleanliness and the sanitizacion of areas of packaging of pharmaceutical products are fundamental to reduce the

risks of pollution in the finished product and hereby to assure its innocuousness, reliability and safety, supporting a

control in the microbiological indexes which can manage to affect the quality of the finished product.

In the present work I realize the validation of the processes of cleanliness and sanitizacion of the area of

packing(package) of biological vaccines of the Colombian company of veterinary products VECOL S.A, for this

there were realized samplings of the area and of the surfaces of packing(package) of biological products for three (3)

weeks, before the activities of filling, the volume of sampling for the area of flow to laminate with the

equipment(team) MORE 100 is of 500L and for the surrounding areas to the flow laminating is of 700L, the

surfaces were sampled by the methodology of petrifilm, these samplings were realized for bacteria mesofilas and

fungi - yeast. With the obtained information action limits was realized waiting that the procedures of cleanliness and

sanitizacion are adapted for the packaging vaccine.

1

1. INTRODUCCION

Dentro del concepto de garantía de la calidad, las Buenas Prácticas de Manufactura constituyen el factor que

asegura que los productos se fabriquen en forma uniforme y controlada, de acuerdo con las normas de

calidad adecuadas al uso que se pretende dar a los productos, y conforme a las condiciones exigidas para su

comercialización. Las reglamentaciones que rigen las BPM tienen por objeto principal disminuir los riesgos

inherentes a toda producción farmacéutica que no pueden prevenirse completamente mediante el control

definitivo de los productos. Esencialmente, tales riesgos son de dos tipos: contaminación cruzada (en

particular, por contaminantes imprevistos) y confusión (causada por la colocación de etiquetas equivocadas

en los envases).

El control de calidad es la parte de las BPM que se refiere al muestreo, especificaciones, y ensayo, como

también a los procedimientos de organización, documentación, y autorización que aseguren que los ensayos

necesarios y pertinentes realmente se efectúan; y que no se permita la circulación de los materiales, ni se

autorice la venta o suministro de los productos, hasta que su calidad haya sido aprobada como satisfactoria.

El control de calidad no se limita a las operaciones de laboratorio, sino que debe estar presente en todas las

decisiones concernientes a la calidad del producto incluyendo la parte de evaluación de áreas estériles para

garantizar un ambiente estéril en el momento de envasar ya sea una vacuna como un producto farmacéutico.

Cada uno de los aspectos de la fabricación de productos farmacéuticos debe ir acompañado de un elevado

nivel de saneamiento e higiene, el cual debe abarcar al personal, instalaciones, equipos y aparatos, materiales

y recipientes para la producción, productos de limpieza y desinfección, y todo aquello que puede ser fuente

de contaminación del producto.

Para ello los estudios de validación constituyen una parte esencial de las BPM y deben efectuarse conforme

a protocolos definidos de antemano. Debe prepararse y archivarse un informe escrito que resuma los

resultados y las conclusiones. Deben establecerse procesos y procedimientos sobre la base de un estudio de

validación, los cuales se sometan periódicamente a una revalidación para asegurar que con ellos se puedan

seguir obteniendo los resultados deseados.

(http://apps.who.int/medicinedocs/documents/s18835es/s18835es.pdf)

2

2. MARCO TEÓRICO

2.1 CONTROL DE CALIDAD Y BUENAS PRÁCTICAS DE MANUFACTURA EN EMPRESAS

FARMACÉUTICAS

El control de calidad y las buenas prácticas de manufactura (BPM) son aspectos relacionados, muy importantes

para la producción y control de farmacéuticos, con estos se busca el cumplimiento de requerimientos tales como

identidad concentración, esterilidad, inocuidad y potencia (Norma técnica de las buenas prácticas de manufactura.

2010).

El control de calidad son todas aquellas acciones o mecanismos existentes que son utilizados para detectar errores

humanos y así prestar asistencia al departamento de producción. El control de calidad tiene la responsabilidad de

hacer cumplir todos aquellos requerimientos necesarios para que un producto satisfaga las necesidades de calidad,

entre estas tenemos su comercialización y posterior uso en animales de producción.

En cuanto a las normas que componen las buenas prácticas de manufactura BPM, son necesarias para las empresas

farmacéuticas ya que las empresas certificadas en BPM aseguran que las instalaciones donde se fabrican los

productos son aptas y están siendo inspeccionadas para comprobar si el fabricante cumple con las normas de las

BPM y de control de calidad (Norma técnica de las buenas prácticas de manufactura, 2010).

De esta forma las buenas prácticas de manufactura se basan principalmente en disminuir considerablemente los

riesgos implicados en la fabricación de medicamentos, como la contaminación y mezclas de materiales. Por esta

razón es necesario que cada empresa farmacéutica cumpla con los requerimientos de las BMP para mantener un

control y garantizar la calidad del producto terminado y de esta forma brindar seguridad y confiabilidad a sus

usuarios (Norma técnica de las buenas prácticas de manufactura, 2010)

2.2 SANITIZACION Y LIMPIEZA

El termino sanitizacion a nivel de industria farmacéutica se define como la aplicación de productos químicos, para

reducir el número de microorganismos existentes, hasta lograr la inocuidad (Vecol PRO-FC1-022), lo cual debe

incluir la sanitizacion de equipos, recipientes, materiales entre otros elementos los cuales sean un potencial peligro

de contaminación para el producto en proceso.

El proceso de limpieza se define como la acción de remover la suciedad mediante métodos mecánicos, con lo que se

pretende reducir concentración de contaminantes existentes en el área (Quiles, 2008), de este modo se evita la

acumulación de microorganismos sobre las superficies y se previene posibles alteraciones sobre el producto que está

siendo procesado.

3

2.2.1 DESINFECTANTES UTILIZADOS EN LA INDUSTRIA FARMACEUTICA SOBRE

SUPERFICIES

2.2.2 Hipoclorito de sodio

Forma de uso: contacto directo sobre la superficie a desinfectar durante 5 minutos

El hipoclorito de sodio es efectivo contra bacterias gram positivas y gram negativas, las proteínas que el hipoclorito

ataca terminan siendo esenciales para el crecimiento microbiano ,actuando como solvente de materia orgánica como

lo son los ácidos grasos, convirtiéndolos en jabones y glicerol (Minambiente www.minambiente.gov.co), además el

mecanismo fundamental del hipoclorito de sodio es su acción oxidativa, produciendo la liberación de radicales libres

e inactivando los microorganismos presentes en cualquier superficie ocasionando la degradación de los aminoácidos

(www.consumer.es)

2.2.3 Sanivec

A base de amonio cuaternario (benzalconio cloruro).Se debe usar en solución acuosa. Efectivo contra bacterias,

hongos y virus. Indicado para desinfección de equipos de laboratorio (Sanivec- Vecol, www.plmconnection.com)

Su acción principal es sobre la membrana celular donde los compuestos son absorbidos provocando cambios en la

permeabilidad y ruptura de la membrana celular (Benzalconio- EcuRed www.ecured.cu).

2.2.4 Desinflor

Uso en solución acuosa a pH 6,5 ± 0.2. Efectivo contra bacterias, hongos y virus también tiene efecto sobre

esporas bacterianas presentes sobre superficies, en caso de presencia de residuos sólidos se recomienda realizar

limpieza previa a la desinfección (Muñoz et al. 2009).

Actúa alterando el ADN y la síntesis de proteínas de los microorganismos ya que provoca la alquilación de los

grupos sulfhidrilo, hidroxil, carboxil y amino (Manual de limpieza y desinfección hospitalaria es.scribd.com).

4

2.3 DESINFECTANTES AMBIENTALES UTILIZADOS EN LA INDUSTRIA FARMACEUTICA-

VECOL

2.3.1 TERMINEX 6

Debe ser manipulado por personal entrenado y usarse puro mediante microdifusor, siempre en ausencia de

personas, durante 10 minutos, a un pH de 7.9 con un plazo de seguridad de 6 a 8 horas.

Presenta elevada actividad antimicrobiana, contra bacterias, hongos, levaduras y virus disminuyendo

considerablemente las esporas.2 Afecta las lipoproteínas de la membrana celular y citoplasma de las bacterias,

facilitando la salida de líquidos intracelulares y la entrada del desinfectante al citoplasma. (www.ramosmejia.org)

2.3.2 CONTINUEX 10


personas, durante 10 minutos, a un pH de 8.0 ± 0.5

Elevada actividad antimicrobiana, sus componentes se adsorben a la pared celular de los microorganismos y luego

son difundidos dentro de la célula provocando la precipitación de las proteínas por lo tanto el crecimiento

microbiano es inhibido. Pero su acción es prácticamente nula contra esporas (Biocidas- Lenntech

www.lenntech.es/biocidas.htm)

2.3.3 PERSON UVI


personas, durante 10 minutos, a un pH de 5 ± 0.5. Con un plazo de seguridad de 3 horas

Contiene elevada actividad antimicrobiana, principalmente contra bacterias Gram positivas y hongos, por su pH

cercano al neutro es un buen inhibidor de estos microorganismos, debido a que contiene un grupo fenol en su

composición se une a las proteínas emulsionantes y provoca su inactivación, el éster propílico es de importante

acción contra bacterias esporuladas causantes de infecciones (Echeverry. et al 2007).

5

2.4 EQUIPO UTILIZADO PARA LA DESINFECCION DE AREAS DE ENVASE

2.4.1 Microdifusor Electrotérmico “MICRO-TERMIC”

Aparato diseñado para la desinfección de áreas, ampliamente utilizado en el sector clínico e industrial, por medio de

este aparato el desinfectante puede extenderse por toda el área llegando a zonas de difícil acceso ya que está basado

en el principio de la microdifusión molecular, el cual se basa en la emisión del sanitizante en forma de partículas al

ambiente y así lograr llegar a los rincones. Además de esto reduce las partículas de 0.5 a 2 micras (Desinfección por

vía aérea- Mark SRL www.marksrl.com.ar/productos.php)

Figura No 1 Tomado de: http://www.empresario.com.co/fagesa/info/dva.html

2.5 MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS PARA LA EVALUACIÓN DE LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN

DE SUPERFICIES

2.5.1 Placas de contacto- petrifilm

Lamina usada para el muestreo de superficies, compuesta por una lámina de polipropileno, sobre el cual se

encuentra el medio de cultivo para el crecimiento de hongos y bacterias.

Las placas para el recuento de aerobios (AC) Contienen tetrazolium como indicador (Muñoz et al. 2009), Este

indicador colorea las colonias de bacterias y de este modo facilita el recuento de cada una de ellas.

http://www.marksrl.com.ar/productos.php

http://www.empresario.com.co/fagesa/info/dva.html

6

Figura No. 2 Placa petrifilm para el recuento de aerobios (AC)

Tomado de: http://www.microlabscr.com/resources/rta.pdf

Las placas usadas para el recuento de mohos y levaduras consisten en la reacción de la fosfatasa con el tinte

indicador rojo, ya que todas las células contienen fosfatasa, en presencia de esta, el tinte de las placas se activa y las

colonias son coloreadas de azul.

Por lo general las levaduras son pequeñas, de color rosa, cremosas, levantadas y de bordes definidos a diferencia de

los mohos los cuales no tienen bordes definidos, las colonias son planas y grandes, presentan variabilidad de colores

ya que los mohos pueden producir sus propios pigmentos (3M guía de interpretación, petrifilmTM levaduras y

mohos http://multimedia.3m.com) los hongos se pueden reconocer porque son grandes, de colores entre verde y

azul además poseen un centro oscuro (3M placas petrifilm MR para el recuento de mohos y levaduras

http://www.chemicalcenter.com.ar)

http://www.microlabscr.com/resources/rta.pdf

http://multimedia.3m.com/mws/mediawebserver?mwsId

7

Figura No. 3 Petrifilm (YM) crecimiento de levaduras Figura No. 4 petrifilm (YM) Crecimiento de mohos

Tomado de: multimedia.3m.com/mws/mediawebserver

Figura No. 5 petrifilm (YM) crecimiento de hongos

Tomado de: multimedia.3m.com/mws/mediawebserver

8

2.5.2 Hisopos quick swab

Hisopo usado en el muestreo de superficies, contiene 1mL de caldo letheen en un envase plástico estéril (Muñoz et

al. 2009)

Figura No. 6 hisopos quick swap

Tomado de: http://www.distribucionesbiotecnologicas.com.mx/files/quick_swab_para_1_2_3_4_placas_petrifilm.pdf

2.6 MEDIOS DE CULTIVO

2.6.1 Agar plate count

Medio de cultivo libre sustancias inhibidoras y de indicadores, diseñado para la cuantificación de microorganismos

presentes en agua, productos lácteos y otros materiales (www.solabia.com).

2.6.2 Caldo letheen

Este medio tiene la propiedad de inactivar desinfectantes ya que contiene lecitina de soya, la peptona de carne,

extracto de carne aportan los nutrientes necesarios para el adecuado crecimiento bacteriano y, el cloruro de sodio

ayuda a mantener el balance osmótico (www.britanialab.com.ar)

http://www.distribucionesbiotecnologicas.com.mx/files/quick_swab_para_1_2_3_4_placas_petrifilm.pdf

9

2.7 EQUIPO UTILIZADO PARA EL MUESTREO AMBIENTAL

2.7.1 MAS-100 DE MERCK

Equipo utilizado para el muestreo ambiental de áreas basado en el principio de muestreador de Andersen, este

equipo realiza la aspiración de aire a través de una placa perforada, las partículas de aire contienen microorganismos

y estos caen en una placa de agar.

El MAS-100(Merck Air Sampler) funciona por medio de un dispositivo de succión el cual se puede configurar para

diferentes volúmenes de aire dependiendo del área a muestrear permitiendo un máximo 1000 L.

Figura No.7 equipo MAS-100

Tomado de: Merck, 2004

2.8 CUARTOS LIMPIOS

Un cuarto limpio es un ambiente controlado en el cual todo el aire, agua y químicos que entran son procesados para

cumplir altos estándares de pureza. Además, del control de la temperatura, humedad y presión, el elemento clave es

la filtración de aire, la cual se logra por el uso de filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air). El número de la

clase (100 000, 10 000, 1 000 y 100) es determinado por el número de partículas por metro cúbico de aire mayores a

0.5μm. La clase 100 es aquella en el cual el cuarto está diseñado para operaciones de llenado aséptico (Agalloco,

1998).

Los parámetros de control de áreas limpias se deben apoyar por datos microbiológicos y de partícula obtenidos

durante los estudios de calificación. La calificación inicial del área limpia incluye, en parte, un consolidado de la

calidad del aire bajo condiciones estáticas (Como se construyó). Es importante para la calificación y la clasificación

del área poner mayor énfasis en los datos generados bajo condiciones dinámicas (es decir, con el personal que labora

10

en ella, el equipo en el lugar de uso, y operaciones en curso). Un adecuado programa de monitoreo de un área de

proceso aséptico también determinará conformidades con las especificaciones de clasificación de las áreas limpias

bajo condiciones dinámicas sobre una base de rutina (FDA, 2004). La tabla siguiente (Tabla No.1) resume

clasificaciones limpias del aire del área y niveles recomendados de la acción de la calidad microbiológica.

Tabla Nº 1. Clasificación de áreas según ISO

Fuente: ISO 14644-1: Cleanrooms and Associated Controlled Environments, Classification of Air Cleanliness.

Clasificación Áreas

limpiasC

Designación

ISO b

Partículas/m3

0, 5 µm

10 5 3 52

1000 6 35 200

10 000 7 352 000

100 000 8 3 520 000

b Las designaciones de ISO 14644-1 proporcionan valores de concentración uniformes de partículas para las áreas limpias en industrias

múltiples. Una concentración de partícula ISO 5 es igual a la clase 100 y aproximadamente igual el grado A de la UE.

c Esta clasificación es máximo número de partículas de tamaño 0, 5 µm/pie3

Tabla Nº 2 Clasificación de áreas según USP XXVIII

Nombre de la clase Partículas 0, 5 µm

SI US Customary (m3)

(pie3)

M 3.5 100 3 530 100

M 5.5 10 000 353 000 10 000

Dos áreas limpias son de particular importancia para la calidad de los medicamentos estériles: El área crítica y las

áreas limpias de soporte asociadas con ella.

11

2.8.1 Área crítica - clase 100 (ISO 5)

Un área crítica es aquella en la cual el producto, los envases, y los tapones o cierres esterilizados se exponen a

condiciones ambientales que deben diseñarse para mantener la esterilidad del producto. Las actividades realizadas en

tales áreas incluyen las manipulaciones (ej. Conexiones asépticas, adiciones estériles de ingredientes) de materiales

estériles antes y durante las operaciones de llenado y taponado (FDA, 2004).

Esta área es crítica porque un producto expuesto es vulnerable a la contaminación y no será esterilizado

posteriormente en su envase inmediato. Para mantener la esterilidad del producto, es esencial que el ambiente en el

cual se realizan las operaciones asépticas (ej., alistamiento del equipo, llenado) sea controlado y mantenido en una

calidad apropiada. Un aspecto de la calidad ambiental es el contenido de partículas en el aire (Tabla Nº 2). Las

partículas son significativas porque pueden entrar en un producto como contaminante extraño, y pueden también

contaminarlo biológicamente actuando como vehículo para los microorganismos. Los sistemas de manejo de aire

apropiadamente diseñados reducen al mínimo el contenido de partículas de un área crítica (FDA, 2004).

Por otra parte un nivel de acción en monitoreos ambientales microbiológicos, se refiere al nivel de

microorganismos que cuando están en exceso requiere un seguimiento inmediato y si es necesaria, una acción

correctiva. Los niveles de alerta están usualmente basados en información histórica obtenida de las operaciones

de rutina del proceso en un ambiente controlado específico (USP XXVIII, 2005)

Tabla No. 3 Formula para la determinación de límites de acción

Se reemplazó en la fórmula:

En donde:

= media

= grados de libertad

= Desviación estándar / raíz de n (número de datos)

12

2.8.2 Áreas limpias de Apoyo

Las áreas de soporte o de apoyo pueden tener varias clasificaciones y funciones. Muchas áreas de soporte funcionan

como zonas en las cuales los componentes no estériles, los productos formulados, los materiales en proceso, el

equipo, y envases/tapones son preparados, sostenidos, o transferidos. Estos ambientes se diseñan a fondo cuando

minimizan el nivel de partículas contaminantes en el producto final y controlan el contenido microbiológico

(biocarga) de los artículos y de los componentes que se esterilizan posteriormente. La naturaleza de las actividades

realizadas en un área limpia de apoyo determina su clasificación (FDA, 2004).

La FDA recomienda que el área inmediatamente adyacente para la línea que cumple el procesado aséptico, debe ser

como mínimo, clase 10 000 (ISO 7) bajo condiciones dinámicas. Los fabricantes pueden también clasificar esta área

como clase 1 000 (ISO 6) o mantener la totalidad del cuarto de llenado aséptico en la clase 100 (ISO 5). En un área

clasificada como clase 100 000 (ISO 8) el nivel de limpieza del aire es apropiado para actividades menos críticas (ej.,

Limpieza del equipo) (FDA, 2004).

2.9 VALIDACIÓN

Validación es demostrar con un alto grado de confianza, por medio de evidencia documentada que proporciona un

alto grado de seguridad que un proceso determinado cumple con los requerimientos de calidad predeterminados en

forma permanente y consistente (González 2005). La validación hace parte de las buenas prácticas de manufactura

(BPM) y es parte esencial para asegurar la calidad de un producto o procesamiento en particular

(http://www.minsal.gob.cl/portal/url/item/pdf).

Otro alcance de la validación es el establecimiento de pruebas documentadas que aportan un alto grado de seguridad

de que un proceso planificado se efectuará uniformemente en conformidad con los resultados previstos

especificados. (Rey, 2004). Los estudios de validación son aplicables a las pruebas analíticas, los equipos, los

sistemas y sistemas de apoyo crítico (como aire, agua, vapor) y procesos (como el de fabricación, limpieza,

esterilización, llenado estéril, etc.). Se hará una calificación para el liofilizador como equipo y otra para el proceso de

http://www.minsal.gob.cl/portal/url/item/pdf

13

liofilización; una para la limpieza del material de vidrio y otra para la limpieza del establecimiento; y una para el

proceso de esterilización y otra para las pruebas de esterilidad. Es preciso demostrar que cada paso del proceso de

fabricación de un medicamento se efectúa según lo previsto. (OMS, 1998)

2.9.1 TIPOS DE VALIDACIÓN

2.9.1.1 Validación retrospectiva: Recopilación de la mayor cantidad de datos experimentales históricos

disponibles, para organizarlos y seleccionarlos y evaluar si los resultados obtenidos son aceptables (Validación de

métodos y determinación de la incertidumbre de la medición, 2010).

2.9.1.2 Validación prospectiva: En caso de ser un método nuevo se crea evidencia documentada en donde se

demuestra que un procedimiento cumplirá con su propósito, generando a través de análisis datos experimentales

(Validación de métodos y determinación de la incertidumbre de la medición, 2010).

2.9.1.2 Validación concurrente: Es la que se lleva a cabo durante la producción normal en la cual se establece una

evidencia documentada, donde se busca que el proceso o procedimiento haga lo que se espera que haga (Montoya,

2001).

2.9.1.3 PARÁMETROS DE VALIDACIÓN

2.9.1.3.1 Reproducibilidad: uso del mismo procedimiento analítico en diferentes laboratorios, la cual expresa la

variabilidad del método en diferentes condiciones (Dirección nacional de laboratorios)

2.9.1.3.2 Repetibilidad: uso de un procedimiento durante cierto tiempo, usando la misma muestra, los mismos

implementos y el mismo analista, que busca encontrar similitudes del método analítico (Dirección nacional de

laboratorios)

2.9.1.3.3 Robustez: Grado de precisión de los resultados obtenidos, para las mismas muestras, bajo variaciones del

método. (Dirección nacional de laboratorios)

14

Una validación apropiada es beneficiosa para el fabricante por varias razones:

Permite profundizar en el conocimiento de los procesos, disminuyendo el riesgo de problemas de

procesamiento.

Reduce el riesgo de costos por defectos.

Reduce el riesgo de incumplimiento de la reglamentación.

Puede tener como consecuencia menos controles durante el proceso y menos pruebas en el producto final.

(Dellepiane,2000)

15

3. JUSTIFICACION Y PROBLEMA DE INVESTIGACION

Las buenas prácticas de manufactura (BPM), son un conjunto de normas que buscan reducir al máximo los errores

humanos en procesos tales como la fabricación de medicamentos. También aseguran que los productos que se

fabrican cumplan con los requerimientos de identidad, concentración y eficacia, lo cual garantiza que es un producto

confiable para su uso. La implementación de las BPM implica varios componentes, como la capacitación del

personal que labora en el área y la sanitizacion que se debe realizar en esta, además de llevar una documentación de

la limpieza para mantener un control y establecer límites microbiológicos (BPM, 2010) y así reducir los riesgos de

contaminación por parte del personal involucrado en el área de envasado. Es por esta razón cada empresa

farmacéutica debe implementar las BPM para así asegurar que sus procedimientos están siendo controlados (PRO-

FC1-022. Vecol) y contar con un departamento de control de calidad el cual tiene la responsabilidad de realizar los

procedimientos requeridos para asegurar que la producción está bajo control (www.fda.gov/Drugs/). Por lo tanto

la EMPRESA COLOMBIANA DE PRODUCTOS VETERINARIOS (VECOL S.A), busca la certificación en

BPM en el área de envase de vacunas biológicas, para aumentar la confiabilidad de sus productos. Se valida el

proceso de limpieza y sanitizacion en el área de envase de producción de vacunas biológicas, para evitar posibles

alteraciones en los productos y de esta manera asegurar la inocuidad, confiabilidad y seguridad del producto

terminado (Muñoz et al. 2009).

16

4. OBJETIVO GENERAL

Validar el proceso de limpieza y sanitizacion del área de envase de vacunas biológicas de la empresa colombiana de

productos veterinarios (VECOL S.A)

4.1 OBJETIVOS ESPECIFICOS

Realizar un monitoreo microbiológico de superficies, equipos y ambientes, antes de empezar el proceso de

envase de vacunas biológicas con el fin de determinar la calidad microbiológica antes del proceso de envase.

Evaluar la eficiencia de la limpieza y sanitizantes empleados en el área de envase de vacunas biológicas de la

empresa colombiana de productos veterinarios

Modificar el procedimiento de limpieza y sanitizacion de acuerdo a lo que se realiza en el área de Aftosa

formulación, según el instructivo de limpieza y sanitizacion de áreas y equipos de llenado aséptico PRO-

FC1-022

17

5. METODOLOGIA

Para el muestreo microbiológico del área de envase de vacunas estériles de Aftosa, se tuvieron en cuenta estos

puntos:

Puntos de muestreo de aire: Ver figura No. 8

o Área de esclusa de personal

o Área Total

o Área de Flujo laminar

o Área de grafado.

Puntos de muestreo de superficies: Ver figura No. 8

o Cortina área estéril

o Piso área estéril

o Tornamesa área estéril

o Uniforme área estéril

o Guantes área estéril.

o Agujas área estéril

o Pared área total

o Cortina área de grafado.

18

11600.00

64

00

.00

20500.00

15

06

9.6

6

7000.00

56

73

.50

27500.00

20

74

3.1

61

52

5.0

0

AREA TOTAL DE ENVASE

56

73

.50

15

00

.00

14

50

.00

AREA DE FLUJO LAMINAR

ESCLUSA DE PERSONAL

AREA DE GRAFADO

1. Tornamesa de entrada

2. Piso

3. Cortina

4. Pared

5. Cortina

grafado

Figura No. 8 Diagrama del área de envase estéril de aftosa formulación.

19

5.1 Metodología de muestreo de ambientes (basado en INS-CC1-029, manejo y limpieza del muestreador

de aire para microbiología. MAS 100)

Se realizó durante tres (3) semanas el siguiente procedimiento:

El volumen de muestreo del MAS-100 para áreas de flujo laminar de envases se manejó de 500L de aire, para las

áreas circundantes al flujo laminar se manejó 700L de aire.

El muestreo ambiental se realizó de la siguiente manera: se hizo recorridos en toda el área sin movimientos bruscos y

se enfatizó en los rincones. Una vez terminado los muestreos se incubaron las cajas agar plate count y petrifilm a

32.5 °C ±2.5°C y 22.5°C ± 2.5°C para bacterias y hongos respectivamente. La lectura de las cajas de agar plate

count que se incubaron a 32.5 °C ±2.5°C se leyeron a los a los 5 días de incubación y del petrifilm de mesofilos

aerobios a los 3 días de incubación. Las cajas que se incubaron a 22.5°C ± 2.5°C se leyeron a los 7 días de

incubación y del petrifilm de hongos y levadura a los 5 días de incubación para realizar el informe final.

5.1.2 Metodología muestreo de superficies tomado de (basado en INS-CC1-029, manejo y limpieza del

muestreador de aire para microbiología. MAS 100)

El muestreo de las superficies se realizó de la siguiente manera:

Se ingresó al área estéril de envasado y se procedió a levantar la lámina semitransparente superior del petrifilm y se

colocó sobre la cortina del área estéril realizando una leve presión, luego de esto se retira el petrifilm de la superficie

y, esta se limpia con una esponja estéril humedecida con el sanitizante de rotación. Este mismo procedimiento se

realizó con las demás superficies muestreadas como la cortina del área de grafado, área envase: cortina, tornamesa,

piso, pared y uniforme.

Las agujas de envasado fueron muestreadas mediante la metodología Quick swab, el cual es un tubo que contiene

un bulbo con 1 mL de caldo letheen y un hisopo para el muestreo de superficies, al momento del muestreo se debe

presionar el bulbo hacia los lados derecho e izquierdo para permitir que el caldo letheen humedezca el hisopo. Para

muestrear la superficie se retira el hisopo realizando movimientos circulares contra las paredes del tubo para evitar

que este gotee, a continuación se frota la superficie deseada y se procede a guardar nuevamente este hisopo en el

tubo agitándolo para así desprender los microorganismos contenidos en el hisopo, ya en el laboratorio se vierte el

caldo letheen contenido en el quick swab sobre el petrifilm correspondiente para hongos y levaduras y el petrilm

20

correspondiente para bacterias, cada uno se debe incubar a 32,5 ± 2.5 ºC Petrifilm de mesófilos y a 22,5 ± 2.5 º C

Petrifilm de Hongos-levaduras.

6. PROCEDIMIENTO DE RECONSTITUCION DE PETRIFILM

Figura Nº 9. Procedimiento para la Reconstitución de Petrifilm® de Mesófilos, Hongos y Levaduras, y Recuento.

Fuente. Placas para el recuento de Aerobios AC. 3M México

1 ml

Caldo

Letheen

21

6.1 PROCEDIMIENTO MANEJO DE MUESTRAS CON HISOPOS QUICK SWAB

Figura Nº 10 Procedimiento para el manejo de muestras con hisopos Quick Swab 3M.

Fuente: Placas para el recuento de Aerobios AC. 3M México

1 Petrifilm® de mesófilos y

1 de hongos-levaduras

a 32,5 ± 2.5 ºC Petrifilm® de mesófilos y a 22,5 ± 2.5 º C Petrifilm® de Hongos-levaduras

22

7. METODOLOGIA PROMOCION DE CRECIMIENTO (Tomado de VECOL S.A. Procedimiento No.

PRO-CC1-056)

El Agar Plate count y los Petrifilm de mesofilos aerobios y hongos de levaduras se les realizo la prueba de

promoción de crecimiento, con el fin de saber si contenían todos los nutrientes necesarios para promover el

crecimiento de microorganismos, se siguió esta metodología:

Se descongelaran las cepas ATCC (-70C) durante 24 horas, se sembraron en agar sangre de forma masiva y por

duplicado los siguientes microorganismos: Candida albicans, Staphylococus aureus, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa,

Clostridium sporogenes, se incubaron a 37C ± 2.5 C durante 24 horas. En el caso de Clostridium sporogenes su incubación

se realizó en cámara de anaerobisis, por ser un microorganismo anaerobio.

Luego de las 24 horas de incubación se observara el crecimiento de cada microorganismo en agar sangre y se

procedió hacer una suspensión de cada microorganismo, según el patrón No. 4 de Mac Farland para Clostridium

sporogenes y para el resto de microrganismo con el patrón No. 3 de Mac Farland. Se hicieron 6 diluciones base 10

(4.5ml del solución salina fisiología 0.85% + 0.5 suspensión del microorganismo) para el caso de Clostridum sporogenes

solo se realizan 4 diluciones. De la última dilución se tomó 0.1 ml para inocular en el agra Plate count y petrifilm

aerobios comunes y en el caso de hongos y levaduras solo Candida albicans.

El agar plate count fue inoculado con Staphylococus aureus, Clostridum sporogenes (cámara de anaerobiosis), Candida

albicans, Bacillus subtilis, y Pseudomonas aeruginosa, los petrifilms de mesofilos aerobios fueron inoculados con Candida

albicans, Bacillus subtilis, y Pseudomonas aeruginosa, luego incubadas a 32,5 ± 2.5 ºC por 48 horas; mientras los petrifilm

de hongos y levaduras se inocularon con Candida albicans y fueron incubados a 22,5 ± 2,5 ºC. durante 5 días. La

lectura se realizó por crecimiento de colonias y se confirmó con tinción de Gram.

8. Prueba de esterilidad (Tomado de vecol PRO-CC1-002)

Esta prueba se realizó con los medio que se utilizaron en el proyecto de grado para determinar que no fuera una

fuente de contaminación que alterara los resultados de los muestreos.

Los medios Caldo Letheen, solución salina fisiológica 0.85%, agar plate count, petrifilm de mesofilos aerobios y

hongos y levaduras, se les hizo prueba de autocontrol por 14 días de la siguiente manera:

23

La mitad del medio se incubo a 22.5ºC ± 2.5ºC por 14 días PARA HONGOS Y LEVADURAS

La otra mitad del medio se incubo a 32.5ºC ± 2.5ºC por 14 días PARA MESOFILOS AEROBIOS

Diariamente se revisó los medios y el petrifilm .Al día 14 se revisó si presentaba algún tipo de crecimiento y se dio

el Concepto Satisfactorio: no crecimiento y Rechazado: crecimiento.

24

9. RESULTADOS OBTENIDOS

La recopilación de datos y lecturas finales sobre crecimiento de microorganismos fueron realizadas durante septiembre, octubre y parte de noviembre de

2012 obteniendo los siguientes datos:

TABLA No. 4 Resultados de muestreo microbiológico de ambientes (AT REST)

FECHA DE TOMA DE MUESTRA

FECHA DE LECTURA

FINAL

DIA DE ENVASE

NOMBRE DE LA MUESTRA

CLASE FDA

(OMS)

RESULTADOS

DESINFECTANTE AMBIENTAL

LOTE CONCEPTO

MESOFILOS AEROBIOS (UFC/m3)

HONGOS Y LEVADURAS

(UFC/m3)

PR

IME

R E

NV

AS

E

2012-09-11 2012-09-17 2012-09-11

área total 10.000 0 0

Formol

2010335812

Satisfactorio

área de flujo 100 0 0 Satisfactorio

área esclusa 10.000 0 7 Satisfactorio

área grafadora 100 0 0 Satisfactorio

2012-09-12 2012-09-17 2012-09-12


Formol

2010335812

Satisfactorio




2012-09-13 2012-09-19 2012-09-13


Formol

2010335812

Satisfactorio




2012-09-14 2012-09-20 2012-09-14


Formol 2010335812

Satisfactorio




25

SE

GU

ND

O E

NV

AS

E 2012-10-23 2012-10-30 2012-10-23


Terminex 0, 11111

Satisfactorio




2012-10-24 2012-10-31 2012-10-24


Terminex 0, 11111

Satisfactorio




2012-10-25 2012-11-01 2012-10-25


Terminex 0, 11111

Satisfactorio




2012-11-06 2012-11-13 2012-11-06


Terminex 0,11111

Satisfactorio




2012-11-07 2012-11-14 2012-11-07


Terminex 0, 11111

Satisfactorio




2012-11-08 2012-11-15 2012-11-08


Terminex 0, 11111

Satisfactorio




2012-11-09 2012-11-16 2012-11-09


Terminex 0, 11111

Satisfactorio




26

TABLA No. 5 Resultados de muestreo microbiológico de superficies (AT REST):

FECHA DE TOMA DE MUESTRA

FECHA DE LECTURA

FINAL

DIA DE ENVASE

NOMBRE DE LA MUESTRA

CLASE FDA (OMS)

RESULTADOS

DESINFECTANTE USADO

LOTE CONCEPTO

MESOFILOS AEROBIOS (UFC/PTF)

HONGOS Y LEVADURAS

(UFC/PTF)

PR

IME

R E

NV

AS

E

2012-09-11 2012-09-17 2012-09-11

Cortina grafadora 100 0 0

Desinflor 2% 149001

SATISFACTORIO

Cortina 100 0 0 SATISFACTORIO

Tornamesa 100 0 0 SATISFACTORIO

Piso 100 0 0 SATISFACTORIO

Uniforme 100 0 0 SATISFACTORIO

Guantes 100 0 0 SATISFACTORIO

Agujas 100 0 0 SATISFACTORIO

Pared 10000 0 0 SATISFACTORIO

2012-09-12 2012-09-17 2012-09-12

Cortina grafadora 100 0 0 SATISFACTORIO








2012-09-13 2012-09-19 2012-09-13




Piso 100 23 0 DEFICIENTE

27





2012-09-14 2012-09-20 2012-09-14









SE

GU

ND

O E

NV

AS

E

2012-10-23 2012-10-30 2012-10-23


Desinflor 2% 149001

SATISFACTORIO








2012-10-24 2012-10-31 2012-11-24









28

2012-10-25 2012-11-01 2012-10-25









TE

RC

ER

EN

VA

SE

2012-11-06 2012-11-13 2012-11-06


Sanivec 1% SNV 092

SATISFACTORIO




Uniforme 100 0 0

SATISFACTORIO




2012-11-07 2012-11-14 2012-11-07









2012-11-08 2012-11-15 2012-11-08






29




2012-11-09 2012-11-16 2012-11-09









30

9.1 RESULTADOS OBTENIDOS PROMOCION DE CRECIMIENTO

La promoción de crecimiento fue realizada a cada uno de los medios usados para el muestreo de las áreas y las

superficies del envase. Con este procedimiento se pretende evaluar que cada medio de cultivo utilizado provea a los

microorganismos de los nutrientes necesarios, para su adecuado crecimiento.

Estos datos fueron recopilados durante las semanas de muestreo del envase, obteniendo un buen resultado en el

crecimiento de microorganismos.

TABLA NO. 6 Promoción de crecimiento, medios de cultivo

MEDIO

DE

CULTIVO

LOTE FECHA

ANALISIS

FECHA

DE

LECTURA

MICROORGANISMO

UTILIZADO

DILUCION

DE USO RESULTADO CONCEPTO

Agar Plate Count

151

2012-09-11 2012-09-13

Staphylococus aureus

10 -6

MNPC SATISFACTORIO

Pseudomona aeruginosa

MNPC SATISFACTORIO

Bacillus subtilis MNPC SATISFACTORIO

Candida MNPC SATISFACTORIO

Clostridium sporogenes

10 -4 MNPC SATISFACTORIO

Agar Plate Count

152

2012-09-21 2012-09-24


10 -6

MNPC SATISFACTORIO


MNPC SATISFACTORIO




10 -4 MNPC SATISFACTORIO

Agar Plate Count

155

2012-10-12 2012-10-16

Staphylococus aureus 10- 6 MNPC SATISFACTORIO


MNPC SATISFACTORIO




10- 4 MNPC SATISFACTORIO

Agar Plate Count

159

2012-11-09

2012-11-13

Staphylococus aureus 10 -6 MNPC SATISFACTORIO


MNPC SATISFACTORIO




10- 4 MNPC SATISFACTORIO

Petrifilm 2012- 2012-09-11 2012-09-13 Staphylococus aureus 10- 6 MNPC SATISFACTORIO

31

04 TO Pseudomona aeruginosa

MNPC SATISFACTORIO

Bacillus subtilis MNPC SATISFACTORIO 2013-04

KH Candida MNPC SATISFACTORIO

Petrifilm

2012-04 TO

2012-10-12 2012-10-16


10- 6

MNPC SATISFACTORIO


MNPC SATISFACTORIO

Bacillus subtilis MNPC SATISFACTORIO 2013-04

KH Candida MNPC SATISFACTORIO

Petrifilm

2012-04 TO

2012-11-09 2012-11-13


10- 6

MNPC SATISFACTORIO


MNPC SATISFACTORIO

Bacillus subtilis MNPC SATISFACTORIO 2013-04 KH


9.2 RESULTADOS OBTENIDOS PRUEBAS DE ESTERILIDAD

TABLA No. 7 Pruebas de esterilidad, medios de cultivo

PRODUCTO LOTE FECHA DE

ANALISIS

FECHA DE

CONCEPTO

CONCEPTO

Caldo letheen Letheen broth

0054332

2012-09-05 2012-09-19 APROBADO

Agar plate count VM337153

(151)

2012-09-07 2012-09-21 APROBADO

Petrifilm mesófilos

aerobios (AC)

2011-11TO 2012-09-10 2012-09-24 APROBADO

Solución salina 0.85% 4102531002 2012-09-10 2012-09-24 APROBADO

Petrifilm hongos y

levaduras (YM)

2013-04 KH 2012-09-10 2012-09-24 APROBADO


(152)

2012-09-14 2012-09-28 APROBADO

32


(155)

2012-10-09 2012-10-23 APROBADO


(159)

2012-11-02 2012-11-10 APROBADO

10. DISCUSION

10.1 Proceso de muestreo.

Para la selección de los puntos de muestreo se tuvo en cuenta lo establecido en la USP 32 NF 27,2009. Que

corresponde a la Farmacopea de Estados Unidos (en inglés United States Pharmacopeia, USP) la cual es la

farmacopea oficial de los Estados Unidos, publicada junto con el National Formulary (formulario nacional de

medicamentos) como la USP-NF. En donde se establece. USA. que los puntos de control deben ser aquellos que

entran en contacto con el producto y los lugares donde el aire y las superficies podrían entrar en contacto con el

producto terminado. Para el muestreo de superficies planas, el petrifilm es el método más adecuado, en cambio el

método de hisopo o quick swab es usado para el muestreo de superficies irregulares como es el caso de las agujas de

inyección. Para el muestreo de áreas fue utilizado el método MAS 100 el cual es un equipo diseñado para alojar una

placa de Petri con agar plate count. La tapa contiene perforaciones las cuales permiten el ingreso de partículas de

diferentes tamaños gracias a una bomba de vacío que aspira una cantidad determinada de aire, estas partículas que

contienen microorganismos caen en la superficie del agar (USP 32, 2009)

Los resultados obtenidos durante tres (3) semanas de muestreo, antes del envasado. Fueron graficados de forma

independiente por punto de muestreo. Se tuvo en cuenta que los días de muestreo también se realizaron la

sanitizacion de áreas y superficies, de esta manera fue posible demostrar la acción bactericida o bacteriostática del

sanitizante empleado en dichas áreas y superficies según el programa de rotación semanal.

Para llevar a cabo la validación de los procesos de limpieza y sanitización del área de llenado aséptico, se realizó

una validación concurrente, en la cual se establece una evidencia documentada, basada en la información recopilada

durante la implementación del proceso, en la cual se busca que el proceso o procedimiento haga lo que se espera

que haga (Montoya, 2001). Para tal fin se evaluaron los siguientes sanitizantes utilizados en áreas: Formol (se emplea

para la sanitizacion de ambiente antes de empezar un lote nuevo de producto INICIAL), y Terminex® (se emplea

para los diferentes días de un envase de un mismo lote ) y para las superficies fueron: Desinfloor 2% y sanivec 1%,

33

en la tabla de graficas 1 (ver anexo 1) se puede observar el comportamiento de mesófilos aerobios y el de hongos y

levaduras en unidades formadoras de colonia (UFC/m3) y (UFC/PTF) para áreas y superficies respectivamente.

Teniendo en cuenta los resultados de los monitoreos realizados durante los tres envases asépticos y bajo las dos

condiciones evaluadas (“AT REST”), se establecieron límites de acción para mesófilos, hongos-levaduras (Delgado,

2004). Un nivel de acción en un monitoreo ambiental microbiológico es aquel nivel de microorganismos que

cuando es excedido requiere un seguimiento inmediato y si es necesario acciones correctivas (USP XXVIIII, 2006),

En cuanto a los resultados obtenidos podemos analizar que los diferentes desinfectantes utilizados en las áreas y

superficies del envase cumplen con los requerimientos de garantizar áreas limpias para el procesamiento de vacunas

asépticamente. Si alguno de estos requerimientos llegase a fallar y el crecimiento de microorganismos excede los

límites permitidos como en el caso del envase del día 2012/09/13 donde se obtuvo una calificación DEFICIENTE

en la superficie del piso con un recuento de 23 UFC/m3se hizo necesario realizar una investigación documentada

(USP 32, 2009), la cual incluyó la identificación del microorganismo por medio de la técnica BBL cristal, en donde

se obtuvo bacilos Gram positivos. Corynebacterium species, con un porcentaje de concordancia del 98.54%. Las

colonias de este microorganismo se caracterizan por ser pequeñas, cremosas y brillantes, no poseen movilidad y no

son esporuladas. Se encuentran en gran cantidad de ambientes, estos incluyen cavidad oral, piel de seres humanos y

animales (Verdaguer, 2008). Por otra parte la técnica BBL.Cristal ID Gram-positivo, es una técnica modificada de

métodos clásicos para la identificación de bacterias Gram positivos aerobios, la cual se fundamenta en la

degradación microbiana de substratos específicos. La hidrolisis enzimática de los substratos fluorogénicos que

contienen derivados cumarínicos del 4-metil-umbeliferona o del 7-amino-4-metilcumarín. Los substratos

cromogénicos, después de su hidrolisis, producen cambios de color que pueden descubrirse a simple vista o mejor

aún con lámpara de fluorescencia (sistemas de identificación BBL-Cristal ID)

El recuento de microorganismos Gram positivos aerobios y su posterior identificación (Corynebacterium species), se

realizó después de la sanitización con Desinfloor 2%. Cabe resaltar que el Glutaraldehido, componente principal de

este sanitizante, actúa alterando el ADN y la síntesis de proteínas, lo cual favorece la lisis celular (Echeverry. et al

2007), también es importante destacar que la sanitización de las superficies fue realizada un (1) día antes del

muestreo, mientras que la sanitización de las áreas fue realizada durante 12 (doce) horas. Esta contaminación

inadvertida pudo deberse a una contaminación cruzada accidental, como la liberación de polvo, residuos de los

equipos (BPM, 2010), el mismo personal operativo se considera como principal fuente de contaminación por la

diseminación de microorganismos presentes en piel y/o mucosas (USP 32, 2009). El piso es uno de los puntos de

muestreo que mayor contacto con el personal presenta y por ende con otras partes del área de envase de vacunas

biológicas, ya que el personal operativo al realizar sus determinadas labores en el área, están en diferentes sectores

del área de envasado, conocidas como zonas de apoyo, sectores en donde no se hace necesario cámara de flujo

34

laminar, posiblemente llevando así contaminación del piso de este tipo de áreas al piso del área de flujo laminar. Sin

embargo se evidencia que el día siguiente 2013/09/14 después de la sanitización que realiza el personal operario se

encontró 1 UFC/PTF demostrando así que se realizó el proceso de limpieza a cabalidad, impidiendo que siguiera

siendo una fuente de contaminación en el área estéril. Es importante decir que para propósitos del establecimiento

de límites en esta área, no se determinaron límites de alerta, únicamente límites de acción, debido a que esta es un

área critica (teniendo en cuenta que se lleva a cabo el envase de vacunas veterinarias) y en este caso específico sólo

aplica el establecimiento de límites de acción que permitan identificar cualquier desviación de las tendencias

normales en el recuento de microorganismos y aplicar las acciones correctivas necesarias para así poder evitar una

contaminación que no pueda ser controlada. Además esta es una excelente herramienta que en el futuro puede ser

de gran importancia para determinar fallas en el proceso que puedan ser determinadas oportunamente y puede ser

de gran ayuda en un en un llenado aséptico para determinar si la sanitizacion ambiental y de superficies se llevó

perfectamente.

Se determinaron los límites de acción por punto de muestreo, obteniendo datos límites de crecimiento de

microorganismos antes del envasado (AT REST). Ver Tabla No 8, 9, 10,11.

Tabla No.8 Límites de acción para ambientes- Aerobios comunes

LIMITES DE ACCION

ÁREAS (AMBIENTES)

Área esclusa 0,603

Área de flujo 0,245

Área total 0

Área grafado 0,245

35

Tabla No.9 Límites de acción para ambientes- Hongos

LIMITES DE ACCION

ÁREAS (AMBIENTES)

Área esclusa 2,162

Área de flujo 0,245

Área total 0

Área grafado 0,490

Tabla No.10 Límites de acción para superficies- Aerobios comunes

LIMITES DE ACCION

SUPERFICIES

Cortina de grafado 0,252

Cortina 0

Tornamesa 0,859

Piso 6,045

Uniforme 0,252

Guantes 0

Agujas 0

Pared 0

36

Tabla No.11 Límites de acción para superficies-Hongos

LIMITES DE ACCION

SUPERFICIES

Cortina grafado 0,252

Cortina 0

Tornamesa 0,252

Piso 0,090

Uniforme 0

Guantes 0

Agujas 0

Pared 0

En general el crecimiento de microorganismos antes del envasado debe ser nulo (0), ya que se ha realizado la

sanitizacion de las áreas y superficies y, no ha ingresado el personal encargado del envasado solamente está presente

la persona encargada de los muestreos. En cuanto al formol usado como sanitizante rotado para los ambientes es

importante resaltar que este compuesto es comúnmente empleado en la industria farmacéutica y a nivel hospitalario

para obtener una desinfección de alto nivel, en la cual son eliminados bacterias, hongos y virus incluyendo

Mycobacterium tuberculosis (Fuller, 2007), al igual que el formol, Terminex es empleado para aquellas áreas donde es

necesario una desinfección de alto nivel (Desinfeccion terminal). Por sus componentes sinérgicos de aldehído y

fenoles (Muñoz et al. 2009), posee una acción bactericida de alto espectro, eliminando bacterias incluyendo esporas,

hongos y virus.

Se destaca el efecto bactericida de estos dos compuestos usados en las áreas de envase, como lo son el área de flujo

y área total donde el crecimiento bacteriano es considerablemente bajo o nulo y de esta forma se demuestra la

37

acción bactericida del formol y terminex, manteniendo dichas áreas en condiciones asépticas para el envasado de

vacunas. En cambio, las áreas que presentan mayor frecuencia de conteo de colonias (UFC/m3), las cuales son área

grafado y área esclusa no son sanitizadas con ninguno de estos compuestos, pero se evidencia que el conteo de

colonias no sobrepasa los límites permitidos.

10.2 Prueba promoción de crecimiento

La prueba de promoción de crecimiento se considera importante en la farmacopea (USP), ya que el propósito de

este procedimiento es evaluar que cada medio de cultivo debe ser capaz de favorecer el crecimiento de los

microorganismos desafío con una inoculación mínima conocida. Esta prueba debe llevarse a cabo con cada nuevo

lote de medio de cultivo, ya sea líquido, sólido o preparado por componentes. Para tal fin los microorganismos

utilizados deben ser los recomendados por la farmacopea al mismo tiempo que deben proceder de colecciones

conocidas internacionalmente, como es el caso de las cepas ATCC (American Type Culture Collection).

Se pudo evidenciar que los medios que se utilizaron en los muestreos como lo fueron agar plate count, petrifilm

aerobios comunes y hongos-levaduras están dentro de parámetros y son confiables para su uso. De esta forma los

medios de cultivo utilizados en esta prueba proporcionan a los microorganismos los nutrientes esenciales en la

concentración adecuada, pH adecuado y la cantidad necesaria de agua y sales para su apropiado crecimiento.

(Manacorda.et al 2007).

10.3 Prueba de esterilidad

La prueba de esterilidad busca determinar contaminaciones microbianas, esta se define como la ausencia de todo

microorganismo capaz de multiplicarse. Cualquier producto estéril debe estar totalmente libre de microorganismos

viables (OMS. 1998).

Las pruebas de esterilidad hacen parte del control de calidad microbiológica, y es útil para probar que determinado

producto es estéril, determinando la ausencia o presencia de microorganismos contaminantes en este (Cortes.et al

2003).

Por este motivo a los medios preparados y esterilizados anteriormente, Caldo Letheen, solución salina fisiológica

0.85%, agar plate count, petrifilm de mesófilos aerobios y hongos y levaduras, se les realizo un seguimiento diario

38

durante catorce (14) días teniendo muestras a 32.5ºC ± 2.5ºC y a 22.5ºC ± 2.5ºC para determinar mesofilos

aerobios y hongos-levaduras respectivamente. Obteniendo como resultados SATISFACTORIOS en todos los

medios preparados y así asegurándonos que no haya falsos positivos en los muestreos microbiológicos.

39

11. CONCLUSIONES

1. Los procesos de limpieza y sanitizacion llevados a cabo, aportaron los datos necesarios para mencionar que su

funcionamiento es óptimo y cumplen con los requerimientos de mantener áreas limpias.

2. Se evidencio que los sanitizantes ambientales: Formol y Terminex y lo sanitizantes de superficie: Desinfloor 2% y

Sanivec 1% son efectivos a la hora de la desinfección de la cabina de envase.

3. Se demuestra que el tiempo de exposición o contacto que tienen los sanitizantes con las áreas y superficies son

suficientes para reducir y/o eliminar los microorganismos presentes.

4. Se estableció un plan de muestreo microbiológico teniendo en cuenta 4 puntos de muestreo de aire (Área de

esclusa, Área Total, Área de Flujo laminar y Área de grafado) y 8 de superficies (Cortina área estéril, Piso área estéril,

Tornamesa área estéril, Uniforme área estéril, Guantes área estéril, Agujas área estéril, Pared área total y Cortina área

de grafado).

5. Se establecieron 12 límites de acción para el área de envase aftosa formulación tanto ambientales como de

superficies.

6. Se dejó documentado en un procedimiento la limpieza y sanitizacion para el área de envase de Aftosa

formulación.

40

12. RECOMENDACIONES

1. Realizar capacitaciones periódicas al personal sobre la importancia de la sanitizacion, concentración y

tiempo de exposición de los sanitizantes además de Buenas prácticas de manufactura, ya que el personal es

la mayor fuente de contaminación en un área estéril.

2. Evitar generar turbulencias de aire en el área de envase aséptico, teniendo cuidado al abrir y cerrar la

puerta del área de esclusa para evitar contaminación cruzada entre áreas.

3. Sanitizar ambientalmente la esclusa y el área de grafado también con microdifusor, para abarcar una

sanitizacion ambiental al 100% en el área.

4. Realizar muestreos AT REST periódicos para evaluar la sanitizacion ambiental y de superficies del área de

envase.

41

13. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

AGALLOCO, J. 1999. Validation of Pharmaceutical Process Sterile Products. Segunda edición. New York,

Estados Unidos. Páginas 669 -702. Capítulo 3.

BARRERA, C. 2002. Calificación de desinfectantes empleados en el proceso de desinfección en las áreas

asépticas de envase de una empresa de productos biológicos y farmacéuticos de uso veterinario. Pontificia

Universidad Javeriana. Facultad de Ciencias. Departamento de microbiología. Bogotá, Colombia.

BOLETIN INFORMATIVO DIVISION INDUSTRIAL, 2010. Páginas 8-10. No.4

CORTÉS, A. Sandino, C. Arias, J. 2003. 34. Validación de la prueba de esterilidad para vacunas virales

preparadas en vehículos oleoso y acuoso. Vol. 45 (1): 2-5

DELLEPIANE, N. Griffiths, E. Milstien, J. 2000. Nuevos retos para asegurar la calidad de las vacunas.

Bulletin of the World Health Organization. Vol 78 (2): 155–162.

DELGADO, M. Escamilla, L. Pérez, A. 2004. Determinación de parámetros de la contaminación

microbiana presente en un área de fabricación de medicamentos estériles A base de antibióticos ß-

lactámicos. Pontificia Universidad Javeriana. Facultad de Ciencias. Departamento de microbiología. Bogotá,

Colombia.

DUFFAU, F. Rojas, I. Guerrero, L. Roa, L. Rodríguez. et al. 2010. Validación de métodos y determinación

de la incertidumbre de la medición: “aspectos generales sobre la validación de métodos”. Guía técnica No.

1: 21-49.

ECHEVERRY, G. Cifuentes, J. Granados, J. Arias, C. Fernández. 2007. Cinética de desinfección para cinco

desinfectantes utilizados en industria farmacéutica. Revista cubana de farmacia. Vol. 41(2): 1-5.

EDIPORC. 2009. Selección y manejo de desinfectantes tipos, características, instrucciones de manejo y

consejos de seguridad para su uso. (125): 42-51

FDA. 2004. Sterile Drug Products Produced by aseptic Processing Draft. U.S. Department of Health and

Human Services.

FOOD AND DRUG ADMINISTRATION. United States of America.

FULLER, 2007.Instrumentación quirúrgica, teoría, técnicas y procedimientos. Editorial medica

Panamericana. Cuarta edición. Páginas 128.

42

GONZALEZ, C. 2005. Validación retrospectiva y control estadístico de procesos en la industria

farmacéutica. Universidad de Chile. Santiago de Chile.

LIMPIEZA Y SANITIZACION DE ÁREAS Y EQUIPOS DE LLENADO ASÉPTICO- PRO-FC1-022.

(Vecol).

MANACORDA A. M., Cuadros D. P y Álvarez A. S. 2007. Manual práctico de microbiología- Medios de

cultivo. Tomo I: Microbiología Ambiental I. Capítulo 6.

MARIEL Fiorentino, R. (2007). Aspectos funcionales y normativos en la arquitectura industrial bonaerense

el caso de los mataderos del ing./arq. Francisco Salamone. (Spanish). I + A: Investigación + Acción, 11(10),

243.

MAZARIEGOS, G.A. 2004. Determinación de la carga bacteriana más frecuente en pollo fresco,

distribuido en el mercado “ciudad real”, situado en la zona 12 de la ciudad de Guatemala. [cited November

18, 2012]; (125): 26-31.

MEDINA, J. S. Quintana. 2002. Validación microbiológica de las áreas de producción de la vacuna contra la

fiebre amarilla y laboratorios de aseguramiento de calidad en el instituto nacional de salud. Pontificia

Universidad Javeriana. Facultad de Ciencias. Departamento de microbiología. Bogotá, Colombia.

MONTOYA, E. 2001. Optimización, validación y modelización de un proceso de fabricación de

comprimidos. Desarrollo de una aplicación interactiva multimedia. Universidad de Barcelona. Tesis

doctoral. Facultad de farmacia. Barcelona.

MUÑOZ, D. M. Ross. 2009. Validación de procesos de limpieza y sanitizacion del área de producción y

envase de inyectables de una industria farmacéutica. Pontificia Universidad Javeriana. Facultad de Ciencias.

Departamento de microbiología. Bogotá, Colombia.

NORMA TECNICA DE LAS BUENAS PRACTICAS DE MANUFACTURA (BPM) PARA LA

INSDUSTRIA DE PRODUCTOS FARMACEUTICOS.

. QUILES, A. A. 2008. Limpieza y desinfección: tecnología todo dentro/todo fuera. (Spanish). Ediporc,

(121), 24-36.

REY, L. MAY, J. 2004. Freeze-Drying/Lyophilization of Pharmaceutical and Biological Products. Drugs

and the Pharmaceutical sciences. Volume 137. Páginas: 613

43

USP 32 nf 27 2009 united pharmacopeias. USA.

USP XXVIII, 2005 united pharmacopeias. USA.

VECOL- INS-CC1-029, manejo y limpieza del muestreador de aire para microbiología. MAS 100.

VECOL- PRO- CC1-002

VECOL-PRO-FC1-022

VECOL S.A. Procedimiento No. PRO-CC1-056

VERDAGUER, F. Tubau, Z. Vázquez, J. Lucena. 2008. Cartas científicas Infección del tracto urinario

causada por Corynebacterium riegelii. Servicio de Microbiología y Parasitología. Hospital Universitario de

Bellvitge. 26(10):669-73.

44

14. CONSULTAS EN LINEA

SANIVEC- VECOL https://www.plmconnection.com/PEV-Colombia/src/productos/4268_98.htm.

Página visitada: 18/11/2012

CALDO LETHEEN http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/letheencaldo.htm, página

visitada: 20/11/2012

ISO 14644-1 CLEAN ROOMS-ISO STANDARD 14644

http://www.ispch.cl/sites/default/files/documento_tecnico/2011/01. Página visitada: 20/11/2012

NORMAS DE BUENAS PRÁCTICAS DE MANUFACTURA

http://apps.who.int/medicinedocs/documents/s18835es/s18835es.pdf

HIPOCLORITO DE SODIO http://www.minambiente.gov.co/documentos/Guia18.pdf

EL DESINFECTANTE IDEAL http://www.consumer.es/seguridad-alimentaria/sociedad-y-

consumo/2001/10/01/462.php

3M PLACAS PETRIfiLM TM PARA EL RECUENTO DE AEROBIOS

http://www.microlabscr.com/resources/rta.pdf página consultada : 08/03/13

ESTERILIZACIÓN - DESINFECCIÓN - ANTISÉPTICOS Y DESINFECTANTES Página consultada:

08/03/13 http://www.ramosmejia.org.ar/s/inf/recomend/desinf.htm

BIOCIDAS- LENNTECH www.lenntech.es/biocidas.htm página consultada: 08/03/13

MANUAL DE LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN HOSPITALARIA

es.scribd.com/doc/63754469/30/FORMALDEHIDO página consultada: 08/03/13

BENZALCONIO- ECURED www.ecured.cu/index.php/Benzalconio página consultada: 08/03/13

DESINFECCIÓN POR VÍA AÉREA- MARK SRL www.marksrl.com.ar/productos.php página

consultada: 08/03/13

3M GUÍA DE INTERPRETACIÓN, PETRIFILMTM LEVADURAS Y MOHOS

http://multimedia.3m.com/mws/mediawebserver página consultada 11/03/13

http://www.minambiente.gov.co/documentos/Guia18.pdf

http://www.consumer.es/seguridad-alimentaria/sociedad-y-consumo/2001/10/01/462.php

http://www.consumer.es/seguridad-alimentaria/sociedad-y-consumo/2001/10/01/462.php

http://multimedia.3m.com/mws/mediawebserver

45

3M PLACAS PETRIFILM MR PARA EL RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS

http://www.chemicalcenter.com.ar/folletos/Petrifilm/Flyer%20Hongos%20y%20Levaduras.pdf página

consultada 11/03/13

http://www.drthrasher.org/page142.html Corynebacterium especies página consultada: 16/04/13

NORMA TÉCNICA DE LAS BUENAS PRÁCTICAS DE MANUFACTURA (BPM) PARA LA

INDUSTRIA DE PRODUCTOS FARMACÉUTICOS http://www.minsal.gob.cl/portal/url/item/pdf

DIRECCIÓN NACIONAL DE LABORATORIOS, UNIVERSIDAD NACIONAL

www.laboratorios.unal.edu.co página consultada: 20/04/13

SISTEMAS DE IDENTIFICACIÓN BBL CRYSTAL ID

www.winklerltda.cl/quimica/images/protocolos_micro11.pd

Página consultada: 21/04/13

MEDIOS DE CULTIVO http://www.itescam.edu.mx/principal/sylabus/fpdb/recursos/r91252.PDF

NORMA TÉCNICA DE LAS BUENAS PRÁCTICAS DE MANUFACTURA (BPM) PARA LA

INDUSTRIA DE PRODUCTOS FARMACÉUTICOS http://www.minsal.gob.cl/portal/url/item/pdf

ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD. 1998. Guía de la OMS sobre los requisitos de las

prácticas adecuadas de fabricación (PAF) Segunda parte: Validación. Ginebra.

[http://www.who.int/vaccines-documents/DocsPDF/www9811.pdf]

(http://apps.who.int/medicinedocs/documents/s18835es/s18835es.pdf).

MINAMBIENTE. www.minambiente.gov.co. Página consultada: 21/11/2012

SANIVEC-VECOL. www.plmconnection.com. Página consultada: 21/11/2012

www.fda.gov/drugs/ . Página consultada: 19/11/2012

ISO 14644-1 CLEAN ROOMS-ISO STANDARD 14644

http://www.ispch.cl/sites/default/files/documento_tecnico/2011/01. Página visitada: 20/11/2012

http://www.ramosmejia.org. Página consultada: 20/11/2012

NORMAS DE BUENAS PRÁCTICAS DE MANUFACTURA

http://apps.who.int/medicinedocs/documents/s18835es/s18835es.pdf.


http://www.laboratorios.unal.edu.co/

http://www.itescam.edu.mx/principal/sylabus/fpdb/recursos/r91252.PDF



http://www.minambiente.gov.co/

http://www.plmconnection.com/

http://www.fda.gov/drugs/

http://www.ramosmejia.org/


46

http://www.solabia.com. Página consultada: 22/11/2012

http://www.distribucionesbiotecnologicas.com.mx/files/quick_swap_para_1_2_3_4_placas_petrifilmpdf .

http://www.pro-analise.com.br/produtos/2254/amostrador_de_ar_mas_100_merck. Página consultada:

24/11/2012

http://www.empresario.com.co/fagesa/info/dva.html. Página consultada: 24/11/2012

http://www.solabia.com/

http://www.distribucionesbiotecnologicas.com.mx/files/quick_swap_para_1_2_3_4_placas_petrifilmpdf

http://www.pro-analise.com.br/produtos/2254/amostrador_de_ar_mas_100_merck

http://www.empresario.com.co/fagesa/info/dva.html

47

1. A continuación se graficaron los resultados de las áreas:

1.1. PRIMERA SEMANA.

48

1.2. SEGUNDA SEMANA.

49

1.3 TERCERA SEMANA.

50

2. A continuación se graficaron los resultados de las superficies:

2.1 PRIMERA SEMANA.

52

2.2 SEGUNDA SEMANA.

54

2.3 TERCERA SEMANA.

3.

56

1. Crecimiento de microorganismos muestreo de áreas DURANTE ENVASADO (OPERACIONAL)

FECHA DE

TOMA DE

MUESTRA

FECHA DE

LECTURA

FINAL

DIA DE

ENVASE

NOMBRE DE LA

MUESTRA

CLASE

FDA

(OMS)

RESULTADOS DESINFECTA

NTE USADO

LOTE CONCEPTO

MESOFILOS

AEROBIOS

(UFC/m3)

HONGOS Y

LEVADURAS

(UFC/m3)

PR

IMER

EN

VA

SE

2012/09/11 2012/09/17 2012/09/11 área total 10.000 0 0

Formol

2010335812

satisfactorio

área de flujo 100 0 0 satisfactorio

área esclusa 10.000 0 7 satisfactorio

área grafadora 100 0 0 satisfactorio

2012/09/12 2012/09/17 2012/09/12 area total 10.000 0 1 satisfactorio

area de flujo 100 0 0 satisfactorio

area esclusa 10.000 15 16 Formol

2010335812

satisfactorio

area grafadora 100 1 0 satisfactorio


area de flujo 100 0 0 Formol

2010335812

satisfactorio

area esclusa 10.000 8 2 satisfactorio



area de flujo 100 0 0 Formol

2010335812

satisfactorio

area esclusa 100 14 2 satisfactorio


SEG

UN

DO

ENV

ASE

2012/10/23

2012/10/30

2012/10/23

area total 10.000 1 2 satisfactorio

area de flujo 100 0 0 Terminex

0,11111

satisfactorio



57

2012/10/24

2012/10/31

2012/10/24

area total 10.000 0 5

satisfactorio




2012/10/25

2012/11/01

2012/10/25


satisfactorio




TER

CER

EN

VES

E

2012/11/06

2012/11/13

2012/11/06

area total 10.000 4 2 Terminex

0,11111

satisfactorio

area de flujo 100 0 0 Satisfactorio

area esclusa 10.000 1 4 Satisfactorio

area grafadora 100 5 1 Satisfactorio

2012/11/07

2012/11/14

2012/11/07

area total 10.000 0 1 Satisfactorio


area esclusa 10.000 3 1 Terminex

0,11111

Satisfactorio


2012/11/08

2012/11/15

2012/11/08

area total 10.000 8 7 Satisfactorio




2012/11/09

2012/11/15

2012/11/09


Terminex

0,11111

Satisfactorio




58

2. Crecimiento de microorganismos muestreo de superficies DURANTE ENVASADO (OPERACIONAL).

FECHA DE

TOMA DE

MUESTRA

FECHA DE

LECTURA

FINAL

DIA DE

ENVASE

NOMBRE

DE LA

MUESTRA

CLASE FDA

(OMS)

RESULTADOS DESINFECTANTE

USADO

LOTE CONCEPTO

MESOFILOS

AEROBIOS

(UFC/PTF)

HONGOS Y

LEVADURAS

(UFC/PTF)

PR

IMER

EN

VA

SE 2012/09/11 2012/09/17 2012/09/11

cortina

grafadora

100 0 0

Desinflor 2%

149001

SATISFACTORIO

cortina 100 0 0 SATISFACTORIO

tornamesa 100 0 0 SATISFACTORIO

piso 100 0 0 SATISFACTORIO

uniforme 100 0 0 SATISFACTORIO

guantes 100 0 0 SATISFACTORIO

agujas 100 0 0 SATISFACTORIO

pared 10.000 0 0 SATISFACTORIO

2012/09/12 2012/09/17

2012/09/12

cortina

grafadora

100 0 0

SATISFACTORIO




59

uniforme 100 12 0 DEFICIENTE




2012/09/13

2012/09/19

2012/09/13

cortina

grafadora

100 2 0

Desinflor 2%

149001

SATISFACTORIO





guantes 100 25 0 DEFICIENTE



2012/09/14

2012/09/20

2012/09/14

cortina

grafadora

100 0 1 SATISFACTORIO




uniforme 100 4 2 DEFICIENTE

60




SEG

UN

DO

EN

VA

SE

2012/10/23

2012/10/30

2012/10/23

cortina

grafadora

100 0 0

Desinflor 2%

149001

SATISFACTORIO








2012/10/24

2012/10/31

2012/10/24

cortina

grafadora

100 0 0

Desinflor 2%

149001

SATISFACTORIO






61



2012/10/25

2012/11/01

2012/10/25

cortina

grafadora

100 1 0 SATISFACTORIO








TE

RC

ER E

NV

ASE

2012/11/06

2012/11/13

2012/11/06

cortina

grafadora

100 2 0

Sanivec 1%

SATISFACTORIO







62

Pared 10.000 0 0 SATISFACTORIO

2012/11/07

2012/11/14

2012/11/07

cortina

grafadora

100 0 0

Sanivec 1%

SATISFACTORIO








2012/11/08

2012/11/15

2012/11/08

cortina

grafadora

100 0 0

Sanivec 1%

SATISFACTORIO








63

1. A continuación se graficaron los resultados de las áreas, durante el envasado (OPERACIONAL)

1.1 PRIMERA SEMANA.

64

1.2 SEGUNDA SEMANA.

65

1.3 TERCERA SEMANA.

66

2. A continuación se graficaron los resultados de las superficies, DURANTE ENVASADO (OPERACIONAL):

2.1 PRIMERA SEMANA.

68

2.2 SEGUNDA SEMANA.

70

2.3 TERCERA SEMANA.

72

INDICE DE GRAFICAS - ANEXO 1 Y 2

1.1 GRAFICAS PRIMERA SEMANA DE VALIDACION. MUESTREO DE AMBIENTES (AT REST)……..47

1.2 GRAFICAS SEGUNDA SEMANA DE VALIDACION. MUESTREO DE AMBIENTES (AT REST)……48

1.3 GRAFICAS TERCERA SEMANA DE VALIDACION. MUESTREO DE AMBIENTES (AT REST)…….49

2.1 GRAFICAS PRIMERA SEMANA DE VALIDACION. MUESTREO DE SUPERFICIES (AT REST)……50

2.2 GRAFICAS SEGUNDA SEMANA DE VALIDACION. MUESTREO DE SUPERFICIES (AT REST)…..52

2.3 GRAFICAS TERCERA SEMANA DE VALIDACION. MUESTREO DE SUPERFICIES (AT REST)……54

1.1 GRAFICAS PRIMERA SEMANA DE VALIDACION. MUESTREO DE AMBIENTES

(OPERACIONAL)………………………………………………………………………………………………63

1.2 GRAFICAS SEGUNDA SEMANA DE VALIDACION. MUESTREO DE AMBIENTES

(OPERACIONAL)……………………………………………………………………………………………….64

1.3 GRAFICAS TERCERA SEMANA DE VALIDACION. MUESTREO DE AMBIENTES

(OPERACIONAL)………………………………………………………………………………………………65

2.1GRAFICAS PRIMERA SEMANA DE VALIDACION. MUESTREO DE SUPERFICIES

(OPERACIONAL)……………………………………………………………………………………………...66

2.2 GRAFICAS SEGUNDA SEMANA DE VALIDACION. MUESTREO DE SUPERFICIES

(OPERACIONAL)………………………………………………………………………………………………68

2.3 GRAFICAS TERCERA SEMANA DE VALIDACION. MUESTREO DE SUPERFICIES

(OPERACIONAL)………………………………………………………………………………………………70

73

INDICE DE TABLAS- ANEXO 3

TABLA 1 MUESTREO MICROBIOLOGICO DE AMBIENTES (OPERACIONAL)………………………..56

TABLA 2 MUESTREO MICROBIOLOGICO DE SUPERFICIES (OPERACIONAL)……………………….58

TABLA 3 PRUEBAS DE ESTERILIDAD

PRO DE LIMPIEZA Y SANITIZACION DE AFTOSA FORMULACION

validacion del proceso de limpieza y sanitizacion de …

Documents