Validación de métodos analíticos

Download Validación de métodos analíticos

Post on 11-Aug-2015

96 views

Category:

Education

5 download

Embed Size (px)

TRANSCRIPT

<ol><li> 1. Validacin de Mtodos Analticos I.Q. Manuel Arturo Caballero Rdz. Universidad del Valle de Mxico Escuela de Ciencias de la Salud Qumico Farmaco Biotecnlogo Desarrollo Analtico Campus Monterrey Norte </li><li> 2. Validacin de mtodos analticos En este tema se pretenden responder las siguientes interrogantes: Qu es validar? Por qu valido? Para qu valido? Cundo valido? Cmo valido? </li><li> 3. Validacin de mtodos analticos Por qu es necesaria la validacin analtica? Generar confianza ? </li><li> 4. Validacin de mtodos analticos Cul es el propsito de la validacin analtica? Mtodos reproducibles y confiables </li><li> 5. Validacin de mtodos analticos Validacin: Confirmacin mediante examen y aporte de evidencia objetiva de que se han cumplido los requisitos para una utilizacin o aplicacin especfica prevista de un mtodo analtico. </li><li> 6. Validacin de mtodos analticos En otras palabras Es realizar un conjunto de pruebas de manera que podamos: a) Comprobar varios aspectos del comportamiento del mtodo. b) Establecer que sirve para el fin previsto. </li><li> 7. Validacin de mtodos analticos La validacin implica la determinacin de las fuentes de variabilidad y del error sistemtico de un procedimiento, no slo dentro de la calibracin sino en el anlisis de muestras reales. </li><li> 8. Verificacin de mtodos analticos Verificacin: Aportacin de evidencia objetiva de que un mtodo satisface los requisitos especificados. En la verificacin de mtodos se suele indicar el proceso que lleva a cabo el laboratorio con el fin de demostrar su capacidad para ejecutar correctamente un mtodo normalizado cuando lo realiza exactamente como est descrito en la norma. </li><li> 9. Para qu valido un mtodo analtico? Para cumplir con requisitos de las normas internacionales: BPM (industria farmacutica). Norma ISO 71025 (acreditacin de laboratorios de ensayo y calibracin). Norma ISO 15189 (acreditacin de laboratorios clnicos) Organismos internacionales como FAO, USP y otras farmacopeas, OMS, ICH. </li><li> 10. Para qu valido un mtodo analtico? Para emitir resultados exactos y precisos, que sean reproducibles, y con esto generar la confianza de nuestros clientes. </li><li> 11. Cules son los tipos de mtodos? Mtodos Normalizados Mtodo analtico desarrollado por un organismo de normalizacin u otro organismo reconocido cuyos mtodos son generalmente aceptados por el sector tcnico correspondiente. (Ref. ILAC-G18) </li><li> 12. Cules son los tipos de mtodos? Mtodos No Normalizados Mtodo analtico desarrollado por un tercero o que ha sido adaptado por el laboratorio a partir de un mtodo normalizado. (Ref. ILAC-G18) </li><li> 13. Cules son los tipos de mtodos? Mtodos desarrollados por el Laboratorio Mtodo analtico que no se encuentra en normas u otras colecciones de mtodos, ni en publicaciones de terceros, habiendo sido desarrollado por el propio laboratorio. </li><li> 14. Qu mtodos se validan? 1. Los Mtodos No Normalizados. 2. Los Mtodos desarrollados por el Laboratorio. 3. Los Mtodos Normalizados utilizados fuera del alcance previsto. 4. Los Mtodos Normalizados que han sido modificados por el Laboratorio. </li><li> 15. Qu mtodos se verifican? 1. Los Mtodos Normalizados. 2. Los Mtodos Oficiales. 3. Los Mtodos de Org. Nacionales o Internacionales reconocidos. </li><li> 16. Valido un mtodo cuando Se incorporan mejoras al mtodo. Se ampla su alcance para matrices complejas. </li><li> 17. Verifico un mtodo cuando Las pruebas de evaluacin de desempeo indican rendimiento deficiente. Se reemplacen equipos importantes que puedan afectar la calidad de los resultados. </li><li> 18. Verifico un mtodo cuando Nota: Cuando se cambia el analista no necesariamente se debe verificar el mtodo de nuevo, sino que se hace una evaluacin de desempeo del analista, antes de autorizarle su ejecucin rutinaria. </li><li> 19. Clasificacin de mtodos De acuerdo a varios organismos internacionales, entre ellos la USP, los mtodos entran en las siguientes categoras: Categora I Categora II Categora III Categora IV Mtodos Microbiolgicos En todos ellos puede ser aplicable la validacin. </li><li> 20. Clasificacin de mtodos Categora I Pruebas cuantitativas del contenido del principio activo, son procedimientos qumicos o microbiolgicos que miden el analito presente en una muestra determinada. </li><li> 21. Clasificacin de mtodos Categora II Pruebas para la determinacin del contenido de impurezas o de valores lmite para el control de impurezas. Pueden ser pruebas cuantitativas o una prueba cualitativa para determinar si la impureza est presente en la muestra por encima o por debajo de un valor lmite especificado. </li><li> 22. Clasificacin de mtodos Las Categoras I y II miden con exactitud las caractersticas de pureza de una muestra. Los parmetros de validacin requeridos por una prueba cuantitativa son diferentes a los de una prueba cualitativa de cumplimiento de lmite. </li><li> 23. Clasificacin de mtodos Categora III Pruebas fisicoqumicas que miden caractersticas propias del desempeo del producto, por ejemplo la prueba de disolucin en medicamentos. Las caractersticas de validacin son diferentes a las de otras pruebas, aunque las pueden incluir. </li><li> 24. Clasificacin de mtodos Categora IV Pruebas de identificacin. Aquellas que se realizan para asegurar la identidad de un analito en una muestra. Esto normalmente se realiza por comparacin de una propiedad de la muestra, contra la de un estndar de referencia, por ejemplo espectros, comportamiento cromatogrfico, reactividad qumica y pruebas microcristalinas. </li><li> 25. Clasificacin de mtodos Pruebas Microbiolgicas Aquellas que se realizan para asegurar la calidad microbiana del medicamento. </li><li> 26. Consideraciones al validar mtodos La validacin debe reflejar las condiciones reales del ensayo. La debe realizar personal calificado para esa actividad. La extensin de la validacin necesaria depender del mtodo y de su aplicacin. Para validar un mtodo de ensayo, siempre se debe partir de la descripcin del mtodo de ensayo. </li><li> 27. Cmo implementar un mtodo analtico nuevo? </li><li> 28. Cmo implementar un mtodo analtico nuevo? 1. De preferencia, que sea un mtodo normalizado de versin reciente. 2. Que el mtodo sea apropiado para el tipo de muestra a analizar. 3. Determinar si el Laboratorio cuenta con personal capacitado para el anlisis a realizar. 4. Determinar si el Laboratorio cuenta con las instalaciones y condiciones ambientales requeridas para el anlisis. </li><li> 29. Cmo implementar un mtodo analtico nuevo? 5. Descripcin del procedimiento incluyendo el alcance del mtodo (aplicabilidad, tipo), tipo de compuestos y de matriz. 6. Detalle de reactivos, estndares de referencia que se utilizan. 7. Lista de equipos y requisitos de funcionamiento y rendimiento. 8. Detalle de las condiciones e implementacin del mtodo, incluyendo la preparacin de la muestra. </li><li> 30. Cmo implementar un mtodo analtico nuevo? 9. Definir los procedimientos estadsticos y clculos representativos. 10.Definir los procedimientos para el control de calidad de la rutina. 11.Definir los grficos representativos, cromatogramas, espectros y curvas de calibracin. 12.Definir los criterios de aceptacin/rechazo de datos. 13.Consideraciones de seguridad. </li><li> 31. Etapas para desarrollar un mtodo analtico </li><li> 32. Bosquejo de requisitos para validar </li><li> 33. Parmetros del desempeo del mtodo analtico Son las propiedades, caractersticas o capacidades cuantificables del mtodo que indican su grado de calidad. stos son: Exactitud Repetibilidad Precisin intermedia Reproducibilidad Especificidad Lmite de deteccin Lmite de cuantificacin Linealidad Rango Sensibilidad Robustez </li><li> 34. Parmetros del desempeo del mtodo analtico segn ICH </li><li> 35. Parmetros del desempeo del mtodo analtico segn la USP 34 </li><li> 36. Extensin de la validacin Mtodos nuevos requieren validacin completa. Mtodos de Farmacopea o referencias oficiales requieren validacin parcial (o verificacin). Cambios significativos implican revalidacin parcial. Cambios de equipo Cambios de frmula Cambios de proveedores de reactivos crticos. </li><li> 37. Estimacin de la Exactitud Varias maneras de determinar la exactitud. Prueba de un estndar de referencia Adicin de una cantidad conocida de estndar Comparacin con un mtodo reconocido como exacto </li><li> 38. Estimacin de la Exactitud Determinar por duplicado el contenido promedio del analito en la muestra con el mtodo a validar. Enriquecer las muestras con estndar: para preparar las soluciones, se mantiene constante la cantidad de muestra tomada y se agregan cantidades variables del estndar. </li><li> 39. Estimacin de la Exactitud La exactitud es evaluada utilizando un mnimo de 9 determinaciones, 3 concentraciones con 3 determinaciones para cada una. Ejemplo: concentraciones de 80%, 100% y 120% de la concentracin normal. Calcular el % de Recuperacin con la frmula % Rec = (valor medido) / (valor verdadero) 100 </li><li> 40. Estimacin de la Exactitud Criterio de Aceptacin y Documentacin El % Rec debe estar entre 90 y 110% del valor real. Para trazas: Menor a 100 ppb: 60 a 110% de Rec Mayor a 100 ppb: 80 a 110% de Rec Menos de 1 ppb: 70 a 120% de Rec </li><li> 41. Estimacin de la Exactitud Determinar por duplicado el valor promedio del estndar o material de referencia certificado por el mtodo a validar. Comparar el resultado obtenido con el valor declarado. Tomar en cuenta la disponibilidad y estabilidad del estndar o MRC. </li><li> 42. Estimacin de la Exactitud La exactitud es evaluada utilizando un mnimo de 30 determinaciones: 5 concentraciones y 6 determinaciones para cada concentracin. Criterio de Aceptacin y Documentacin: El % de Rec debe estar entre 98 y 102% del valor terico. </li><li> 43. Estimacin de la Exactitud La muestra debe ser analizada utilizando el mtodo a validar y un segundo mtodo bien caracterizado, de exactitud bien definida y establecida. Se analizan 6 muestras por duplicado a la concentracin normal de trabajo por ambos mtodos. Se hace un anlisis de varianza y de %Rec para determinar si hay o no diferencia significativa entre los dos mtodos comparados. </li><li> 44. Precisin de los resultados analticos Hay 3 niveles para determinar la Precisin del Mtodo: Repetibilidad Reproducibilidad Precisin intermedia </li><li> 45. Precisin de los resultados analticos Repetibilidad: Coincidencia entre los resultados de mediciones sucesivas realizadas en las mismas condiciones de medicin. Reproducibilidad: Coincidencia entre los resultados de mediciones realizadas en diferentes condiciones de medicin hechas en laboratorios diferentes. Precisin intermedia: Medida de la precisin de los resultados de un mtodo en condiciones diferentes de analista, da, equipo y lote de reactivos, dentro del mismo laboratorio. </li><li> 46. Precisin de los resultados analticos Repetibilidad: Coincidencia entre los resultados de mediciones sucesivas realizadas en las mismas condiciones de medicin. Reproducibilidad: Coincidencia entre los resultados de mediciones realizadas en diferentes condiciones de medicin hechas en laboratorios diferentes. Precisin intermedia: Medida de la precisin de los resultados de un mtodo en condiciones diferentes de analista, da, equipo y lote de reactivos, dentro del mismo laboratorio. </li><li> 47. Precisin - Repetibilidad Trabajar con submuestras de una muestra homognea, bajo las mismas condiciones de medicin: El mismo procedimiento de medicin. El mismo observador. El mismo instrumento de medicin. En un periodo corto de tiempo. Hay 2 formas de determinarla </li><li> 48. Precisin - Repetibilidad Hay 2 formas de determinarla: Hacer un mnimo de 9 determinaciones, 3 rplicas a 3 concentraciones diferentes. Hacer un mnimo de 6 determinaciones a una concentracin que corresponda con la de la muestra problema. </li><li> 49. Precisin Intermedia Se determina realizando un mnimo de 6 determinaciones al 100% de la concentracin esperada (diferentes das, analistas y equipo). Criterio de Aceptacin y Documentacin: RSD &lt; 2.0% para macrocomponentes RSD &lt; 10.0% para componentes menores RSD &lt; 3.0% en mtodos empleados en disolucin RSD &lt; 10.0% para muestras biolgicas </li><li> 50. Precisin - Reproducibilidad Se determina realizando un mnimo de 6 determinaciones al 100% de la concentracin esperada (diferentes das y horas del da, analistas y equipo). Criterio de Aceptacin y Documentacin: Registrar los resultados: la media, desviacin estndar, desviacin estndar relativa, y el intervalo de confianza. Considerar los mismos criterios que en Precisin Intermedia, aunque se espera una variabilidad mayor. </li><li> 51. Lmite de Deteccin Documentacin Imprimir el cromatograma o registrar la menor concentracin detectable en una hoja de registro. Criterio de Aceptacin No hay un lmite de deteccin mnimo. Sin embargo, para mtodos cromatogrficos el lmite superior suele ser un valor de al menos 3 veces la lnea base (nivel de ruido). Canadian Health Protection Branch (CHPB) establece una razn de 3:1 entre la seal y el ruido. </li><li> 52. Lmite de Deteccin Para Mtodos No Instrumentales Se preparan 10 blancos independientes y 10 blancos enriquecidos a la concentracin ms baja aceptada. Se hacen las mediciones y se calcula la desviacin estndar. Con estos datos se puede calcular el lmite de deteccin: LD = Valor promedio del blanco + 3s </li><li> 53. Lmite de Cuantificacin Este valor puede ser la menor concentracin en la curva patrn. Documentacin Imprimir el cromatograma o anotar el dato de la menor concentracin cuantificable en la hoja de datos. Proveer datos que demuestren exactitud y precisin requeridas en el criterio de aceptacin. </li><li> 54. Linealidad 1. Preparar solucin madre con el analito. 2. Preparar al menos 5 diluciones con concentraciones de analito entre el 80 al 120% de la concentracin esperada, o bien entre 50-150%. 3. Analizar por duplicado cada dilucin. Criterio de Aceptacin y Documentacin Graficar curva de calibracin. Los valores deben caer dentro de una zona horizontal angosta. Los que queden fuera no son aceptables para ser incluidos en el intervalo normal de trabajo. </li><li> 55. Linealidad r mayor o igual a 0.99 (coeficiente de correlacin) r2 mayor o igual a 0.98 (coeficiente de determinacin) CV menor o igual a 2.0% (coeficiente de variacin, o RSD desviacin estndar relativa) b aproximadamente igual a 0. m igual a la sensibilidad del sistema (pendiente de la curva) </li><li> 56. Bibliografa Validacin de Mtodos Analticos, Fisicoqumcos y Microbiolgicos Qum. Lucrecia Arreola Manual de Mtodos Analticos para la Determinacin de Parmetros Fisicoqumicos Bsicos en Aguas Carlos Alberto Severiche Sierra Marlon Enrique Castillo Bertel Rosa Leonor Acevedo Barrios </li></ol>

Recommended

View more >