univerzita komenskÉho v bratislave prírodovedecká fakulta katedra organickej chémie
DESCRIPTION
UNIVERZITA KOMENSKÉHO V BRATISLAVE Prírodovedecká fakulta Katedra organickej chémie Rýchla chromatografická technika pre preparatívnu separáciu so strednou rezolúciou Miroslav Murár Školiteľ: doc. RNDr. Andrej Boháč, PhD. BRATISLAVA 2014. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
UNIVERZITA KOMENSKÉHO V BRATISLAVEPrírodovedecká fakulta
Katedra organickej chémie
Rýchla chromatografická technika pre preparatívnu separáciu so strednou
rezolúciou
Miroslav Murár
Školiteľ: doc. RNDr. Andrej Boháč, PhD.
BRATISLAVA 2014
• Autori porovnávajú flash chromatografiu s bežnou (gravitačnou chromatografiou) a opisujú postup flash chromatografie
• Gravitačná chromatografia je pri preparatívnom delení časovo náročná metóda.
• Pri delení 1 až 2 gramov sa rapídne predlžuje čas a ďalšie použitie chromatografickej kolóny ťažko realizovateľné.
• Autori popisujú kombináciu tlakovej a stĺpcovej chromatografie, ktorú nazvali flash chromatografia.
• Vychádzali z chromatografických metód, kedy bolo možné podeliť látky s rozdielom RF = 0.05 a metód skrátenia času o 1 až 3 hodiny.
• Cielom bolo opísať najvhodnejšiu metodiku a parametre flash chromatografie a upozorniť na jej praktické obmedzenia
• Autori pri flash chromatografii sledovali nasledovné parametre:
• - rezolúciu
• - mesh SiO2
• - prietok
• - priemer kolóny a množstvo SiO2
• - veľkosť vzorky
• Vypracovali metodiku ako postupovať pri flash chromatografii.
• Rezolúcia bola určovaná na základe pomeru čas medzi píkmi látkami a šírky v ½ výšky signálu.
• Mesh sili gélu udáva veľkosť povrchu na základe veľkostí častíc. Čím menší rozmer SiO2
čím menší rozmer sili gélu tým väčší mesh.
• Prietok pri ktorom dostávali autori najefektívejšie delenie látok bol 2 ml/L ( 2 palce za minútu na kolóne)
• Priemer kolóny a množstvo sili gélu je závislé od veľkosti vzorky, RF hodnôt, autori v tabulke aj odporúčajú ideálnu veľkosť frakcie.
• Metodika pri flash chromatografii
• 1 Pomocou TLC nájsť vhodnú elučnú zmes
• 2 Určiť kolónu o vhodných rozmerov (tabuľka)
• 3 Pridanie SiO2 do chrom. kolóny
• 4 Premývanie SiO2 v kolóne elučnou zmesou
• 5 Nanesenie vzorky
• 1. Identifikácia ideálnej elučnej zmesi
• Pomocou TLC hľadáme elučnú zmes, kde je rozdiel medzi RF hodnotami látok 0.35 ideálne ak je tento rozdiel v strede TLC platničky.
• Dosiahnutie rozdielných RF hodnôt dosahujeme zmenou polarity eleučnej zmesi alebo jej kvality.
• V prípade rozdielu RF hodnôt pod 0.15 je delenie problematické, treba zvoliť väčší priemer kolóny, menšie frakcie...
• 2. Určenie vhodnej veľkosti kolóny
• Autori udávajú konštantnú výšku 5-6 palcov (12-14 cm)
• 3 Pridanie SiO2 do chrom. Kolóny
• Na dno chromatogra-
fickej kolóny vata, po-
tom zrnite jší SiO2 (1/8),
alebo aj morský piesok,
následne dané množ-
stvo pevnej fázy,
opäť zrnitejší SiO2.
• 4 Premývanie SiO2 v kolóne elučnou zmesou
• Následne začíname premývať chromatografickú kolónu elučnou zmesou pri prietok ideálne 2ml/L.
• Nezabudnite otvoriť ventil !!!
• Tento konštantný prietok je dosahovaný pri istom tlaku, ktorý pevnú fázu zhutní
• Túto elučnú zmes je možno opätovne použiť na chromatografické delenie.
• 5 Nanesenie vzorky
• Autori nanášajú vzorku na v roztoku pri 20-25 % koncentrácii.
• Vzorka by nemala byť nanesená na suchý sili gél.
• Nanášanie na pevnej fáze autori nespomenuli.
• Pri samotnom delení je vhodné robiť TLC analýzu z frakcii (každá druhá). Odporúčaný objem na TLC je 5 μL.
Záver• Flash chromatografia je lacná metóda. Pri hore
uvedenej metodike je možné počas 10-15 minút podeliť od 0.1 – 10 g látky.
• Najlepšie výsledky ak je rozmer SiO2 40-63 μm, prietok 2 ml/min a RF viac ako 0.35.
• Pri veľkých kolónach je vhodná ich regenerácia, premytím polárnejšou zmesou (EA Acetón)
NEZABUDNITE SI NECHAŤ ŠTANDART DELENEJ ZMESI !!!
Ďakujem za pozornosť