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Universidad Católica del Trópico Seco
Pbro. Francisco Luis Espinoza
Trabajo de tesis para optar al título profesional de Ingeniero Agropecuario
Evaluación de extractos de Murraya paniculata, Azadirachta indica y
Alcohol al 30% para control de Amblyomma y Boophilus en
laboratorio
Autores
Isabela Chamorro Irías
Jorge Alberto Blandón Salgado
Tutor
Dr. Jaime Antonio Landero Amaya
Asesor
M.Sc. Allan Francisco Silva Benavides
Estelí, Septiembre del 2015
INDICE
Contenido Pág.
DEDICATORIA ............................................................................................................................................... i
AGRADECIMIENTO ...................................................................................................................................... iv
RESUMEN .................................................................................................................................................... v
I. INTRODUCCIÓN........................................................................................................................................ 1
II. OBJETIVOS............................................................................................................................................... 3
III. MARCO TEORICO .................................................................................................................................. 4
3.1Composicion química de los tratamientos etnoveterinarios.............................................................. 4
3.1.1 Composición química del Neem (Azadirachta indica) ................................................................ 4
3.1.2 Composición química de Limonaria (Murraya paniculata) ........................................................ 4
3.1.3 Composición química del Alcohol .............................................................................................. 5
3.2 Características de las garrapatas ...................................................................................................... 5
3.3 Enfermedades transmitidas por garrapatas ...................................................................................... 6
3.4 Estudios realizados en el control de garrapatas ................................................................................ 6
3.5 Elaboración de extractos de forma artesanal ................................................................................... 8
IV. MATERIALES Y MÉTODOS ...................................................................................................................... 9
4.1 Ubicación del ensayo ........................................................................................................................ 9
4.2. Diseño experimental ........................................................................................................................ 9
4.3. Tratamientos implementados ........................................................................................................ 10
4.4. Recolección de las garrapatas y preparación de los tratamientos ................................................. 10
4.5. Montaje del ensayo y técnica para la realización del estudio ........................................................ 11
4.6. Análisis estadístico ......................................................................................................................... 12
V. RESULTADOS Y DISCUSION ................................................................................................................... 13
5.1 Mortalidad diaria ............................................................................................................................ 13
5.2 Mortalidad acumulada .................................................................................................................... 15
5.2.1 Comportamiento de los tratamientos en periodo de 48 horas. ............................................... 18
5.3 Costo de los Tratamientos .............................................................................................................. 21
5.3.1 Ccomparación de costos y beneficios es relación con otros productos de origen químico ...... 22
VI. CONCLUSIONES.................................................................................................................................... 24
VII. RECOMENDACIONES........................................................................................................................... 25
XIII. BIBLIOGRAFIA .................................................................................................................................... 26
IX. ANEXOS ................................................................................................................................................ 30
INDICE DE TABLAS Y FIGURAS
Figura 1. Dispersión de los datos con respecto a la media en 24 horas............................... 15
Figura 2. Dispersión de los datos con respecto a la media de 48 horas................................ 18
Figura 3. Comportamiento de los tratamientos en periodo de 48 horas ............................... 19
Tabla 1. Análisis de varianza para la mortalidad a las 24 horas ........................................... 13
Tabla 2. Separación de medias Duncan a las 24 horas ......................................................... 14
Tabla 3. Analizis de varianza para la mortalidad a las 48 horas .......................................... 15
Tabla 4. Separación de medias Duncan a las 48 horas ......................................................... 16
Tabla 5. Costo de la dosis ..................................................................................................... 20
Tabla 6. Tabla de comparación de costos y beneficios es relación con otros productos de
origen químico ............................................................................................................ 21, 22
INDICE DE ANEXOS
Anexo 1. Diseño experimental. ............................................................................................ 30
Anexo 2. Modelo de hoja de campo. .................................................................................... 31
Anexo 3. Analisis de normalidad 24 horas. .......................................................................... 32
Anexo 4. Prueba de homogeneidad 24 horas ....................................................................... 32
Anexo 5. Análisis de varianza a las 24 horas ....................................................................... 33
Anexo 6. Analisis de normalidad 48 horas. .......................................................................... 34
Anexo 7. Prueba de homogeneidad 48 horas ....................................................................... 34
Anexo 8. Análisis de la varianza a las 48 horas ................................................................... 35
Anexo 9. Elaboracion de tratamientos y aplicacion en garrapatas ....................................... 36
i
DEDICATORIA
Dedico este trabajo primeramente a Dios por haberme dado el don de la vida, inteligencia,
capacidad y fuerza de voluntad para así finalizar mi carrera.
A mi madre Juvenia Olivia Salgado Reyes. Por su incondicional apoyo en todas las
situaciones presentadas durante el trascurso de mi vida, por su incesable paciencia,
sacrificio y motivación brindada durante mis estudios y todos los aspectos en vida. Por
haberme inculcado la fe y confianza necesaria para realizar cada uno de mis sueños y así
finalizar mi carrera exitosamente.
A mi padre Juan Alberto Blandon Rodríguez. Por haber sido el principal ejemplo a seguir
como Ingeniero Agropecuario, por haberme guiado desde temprana edad en el camino
profesional agrícola y pecuario, por darme la opción de elegir y nunca haberme presionado
con respecto a mi desarrollo como profesional. Así también su apoyo moral, intelectual y
económico sin el cual no hubiese culminado mi principal objetivo, convertirme en un
profesional.
A mis amigos y seres queridos. Los cuales siempre estuvieron a mi lado en este camino y
de una u otra forma contribuyeron en la realización de mi visión, por su apoyo, compañía y
ánimos brindados.
Jorge Alberto Blandón Salgado
ii
DEDICATORIA
Dedico esta Tesis a mi familia los cuales me han brindado apoyo durante toda mi
trayectoria universitaria.
A mi Abuelo Luis Irías (QEPD), que me ayudó a elegir el camino de la agricultura y creyó
en mí desde el inicio de mis estudios. Le agradezco infinitamente por todas sus enseñanzas,
consejos y las palabras que calaron en mi persona, por enseñarme la paciencia, honestidad,
a ser positiva y por ser el pilar fuerte que siempre nos dio esperanza ante las adversidades.
Físicamente no logramos estar juntos en esta etapa final, pero sé que ha estado a mi lado
guiándome y cuidando de mí en todos mis pasos. Siempre lo llevo en mi corazón. Lo amo
mi Ángel.
A mi Madre, Claudia Irías. Este gran paso no lo hubiera logrado sin su ayuda, le agradezco
por haber estado a mi lado en los buenos y malos momentos, por haber sido mi fuerza, mi
motor que me impulsaba en los momentos difíciles. Por jugar dos papeles en mi vida, por
ser mi amiga y aconsejarme, decirme que la vida está llena de obstáculos pero que depende
de uno detenerse o seguir adelante y luchar por lo que vale la pena. Agradecida
infinitamente con usted Madre. La Amo.
A mi Hermana, Gabriela Chamorro. Por ser parte de mi trayectoria y apoyarme en todo
momento de mi vida. Te agradezco por siempre estar ahí conmigo y escucharme. Te amo
hermana.
A mi Padre, Roberto Chamorro. Aunque la distancia nos separara, quiero agradecerle por
siempre estar pendiente de mis estudios, transmitirme sus conocimientos y ayudarme en
mis trabajos. Lo amo Padre.
A mi Tía, Elizabeth Irías. Que me ha apoyado en todo momento y que ha sido mi segunda
madre, gracias por sus consejos y siempre recordarme que la Fe esta ante todo. La amo
Vieja.
iii
A mi Tía Karina Irías. Quien ha sido mi ejemplo a seguir en mi vida profesional.
Agradecida por que siempre ha estado pendiente de mis estudios y ha sido mi hermana en
todo momento. Te amo Kari.
Isabela Chamorro Irías
iv
AGRADECIMIENTO
Primeramente a Dios y la Virgen María. Por darnos la sabiduría y paciencia necesaria para
culminar nuestros estudios Universitarios.
A nuestro Tutor Dr. Jaime Antonio Landero Amaya. Por haber sido parte de nuestro
trabajo de tesis y por habernos transmitido sus conocimientos durante 5 años.
Asesor MCs. Allan Antonio Silva Benavides quien nos asesoró en el procesamiento de los
resultados y nos brindó su apoyo incondicional en todo el transcurso de nuestra carrera
profesional.
Profesor MsC. William Arturo Ortiz González quien nos ayudó en la elaboración de los
tratamientos y nos brindó sus consejos para realizar un mejor estudio en el trabajo de
Tesis.
Darwing Isaac Ochoa Lazo quien nos brindó su apoyo en el área de laboratorio en la
elaboración de los extractos para los tratamientos. A Don Pedro Pablo Gutierrez quien nos
brindó su ayuda en el área de servicios generales. María José Talavera Guevara quien nos
dio su ayuda en el área de laboratorio facilitando los instrumentos necesarios y por su gran
positivismo ante nuestro proyecto.
Madre Sandra. Por su ayuda y consejos brindados en nuestra carrera y por recordarnos
siempre que con Fe y esfuerzo todo es posible.
Alicia González por brindarnos su ayuda en el área de Biblioteca y proporcionarnos
información útil para nuestra investigación.
Lic. Francisco Orellana por su apoyo incondicional en toda nuestra trayectoria
universitaria, por sus consejos, sus opiniones, paciencia y positivismo ante nuestro trabajo
final.
Jorge Alberto Blandón, Isabela Chamorro Irías
v
RESUMEN
El presente estudio se llevó a cabo en la Universidad Católica del Trópico Seco, UCATSE,
con el objetivo de Evaluar extracto de Limonaria (Murraya paniculta), extracto de Neem
(Azadirachta indica) y Alcohol para el control de garrapatas del genero Amblyomma y
Boophilus en condiciones de laboratorio. Se utilizaron 320 garrapatas de los géneros
Boophilus y Amblyomma, las cuales estuvieron alojadas en 16 platos Petri. (Rodríguez,
Rodríguez, Cruz, 2010) donde se aplicaron los tratamientos y se evaluó la mortalidad por
48 horas. Los tratamientos que se aplicaron fueron Extracto de Neem (Azadirachta indica)
al 30%, Extracto de Limonaria (Murraya paniculta), Alcohol al 30% y como testigo se
utilizó agua destilada. Las variables medidas fueron analizadas empleando el sistema
estadístico InfoStat versión 2010 donde se realizó un análisis de varianza y un test de
Duncan. Los resultados indicaron que el extracto de limonaria tuvo un mejor efecto con un
88.7% superando a los demás tratamientos, los cuales obtuvieron un 82.5 %, 47.5% y el
40% de control para el extracto de neem, alcohol y el testigo respectivamente durante el
periodo del experimento. Se concluye que el tratamiento de Limonaria obtuvo un mayor
porcentaje de mortalidad el cual recomendamos que puede seguir siendo estudiado para
poder ser aplicado en campo como producto etnoveterinario para el control de garrapatas.
Palabras claves: Garrapatas, Neem, Limonaria, etnoveterinario, Mortalidad, Costos.
1
I. INTRODUCCIÓN
Nicaragua es un país eminentemente agropecuario, su economía está basada principalmente en la
explotación del campo y la ganadería. En los sistemas de producción ganadera ubicados en
regiones tropicales y subtropicales, las afecciones por ectoparásitos son consideradas como una
causa importante de pérdidas en la producción debido a daños como morbilidad y mortalidad de
los animales y altos costos de control (Lazo, Mejía, 2009).
La subsistencia de las garrapatas en sus diversos estados de evolución (huevo, larva, ninfa,
adulto), está determinada por factores climatológicos como lluvias, sequias, altitud, heladas,
temperaturas medias nocturnas y diurnas, tipo de vegetación, así como por la cantidad de
animales a disposición, de cuya sangre se alimentan estos parásitos. Por lo tanto, en las zonas
tropicales donde llueve regularmente, imperando una alta humedad y clima cálido se dan
condiciones óptimas para fomentar el desarrollo de varias generaciones de garrapatas por año,
haciéndose sentir constantemente en estas áreas. En regiones subtropicales, marcada por
temporada de más o menos lluvias o sequías, la intensidad de la plaga es fluctuante. (Navarro &
Tercero 2013).
Tradicionalmente, el control de los parásitos externos se ha efectuado durante la aplicación
continua de productos químicos sin medir el riesgo potencial que significa la residualidad que
dejan estos productos en la carne, leche y otros, que a largo plazo provocan un deterioro en la
salud humana. Además el nivel de contaminación a que es sometido el medio ambiente y los
inconvenientes de tener altos costos y surgimiento de cepas de garrapatas químicos resistentes
(González, 2007).
Conociendo todas las amenazas que constituyen estos ectoparásitos para el ganado bovino en
Nicaragua, se encuentra una alternativa viable para el control de garrapatas con productos
etnoveterinarios a veces utilizados por los productores de manera empírica, para el control de
garrapatas (Maradiaga, Navarro 2010).
2
Por lo tanto, el presente estudio se basó en la evaluación de los extractos de Neem (Azadirachta
indica), Limonaria (Murraya paniculta) y Alcohol al 30% para el control de garrapatas y así
determinar la mortalidad sobre los ectoparásitos tomando en cuenta los datos encontrados en la
investigación.
3
II. OBJETIVOS
Objetivo general
Evaluar los extractos de Limonaria (Murraya paniculta), Neem (Azadirachta indica) y Alcohol
al 30% para el control de garrapatas del genero Amblyomma y Boophilus en condiciones de
laboratorio
Objetivos específicos
Determinar la mortalidad por 24 horas de las garrapatas producida por los extractos de Limonaria
(Murraya paniculata), Neem (Azadirachta indica) y alcohol bajo condiciones controladas
Determinar la mortalidad acumulada de las garrapatas en un periodo total de 48 horas producida
por extracto de Limonaria (Murraya paniculata), extracto de Neem (Azadirachta indica) y
Alcohol bajo condiciones controladas
Comparar los costos de elaboración de los tratamientos evaluados en comparación con los
productos comerciales para el control de garrapatas
4
III. MARCO TEORICO
3.1Composicion química de los tratamientos etnoveterinarios
Tradicionalmente las diferentes plantas vasculares propias de cada zona geográfica han venido
siendo empleadas con diferentes fines medicinales, y entre ellos se encuentran los usos
antiparasitarios de aplicación en ganado doméstico (Ortiz, 2010).
3.1.1 Composición química del Neem (Azadirachta indica)
Ingrediente activo: azadirachtinas y nibidinas (triterpenoides)
Toxicidad aguda: DL50 Oral: >3450 mg/Kg
DL50 Dermal: >2000 mg/Kg
Toxicidad EPA: IV (FORMULACION)
Origen: Árbol de Neem (Azadirachta indica)
Es un extracto botánico insecticida derivado del árbol de Neem con efectos translaminar y
sistémicos, además tiene efecto acaricida, Nematicidas, molusquicida y fungicida. Actúa por
contacto-ingestión. El efecto insecticida se produce cuando la azadirachtinas actúa como un
potente regulador de crecimiento, pues inhibe la ecdisoma (hormona de crecimiento del insecto)
perjudicando los estados inmaduros (larva, ninfa y pupa), lo que bloquea el ciclo de mudas y
provoca la muerte de los insectos en estado inmaduro. También actúa como fago disuasivo (anti
alimentario) por lo que los insectos dejan de comer, pierden peso y se interrumpe su crecimiento
y desarrollo causando la muerte entre cuatro a seis días (Duran 2004).
3.1.2 Composición química de Limonaria (Murraya paniculata)
La hoja es particularmente rica en cumarinas. También se han identificado en la hoja los
Flavonoides bannamurpanicín, el lignano murraxonín y el beta sitosterol. En la hoja también se
indica la presencia de un aceite esencial en el que se han identificado el sesquiterpeno bisabolon
5
y el carotenoide cadineno. Su dosis letal 50 (DL50) es de 1 gr por kg. (Biblioteca nacional de la
medicina tradicional. 2009)
3.1.3 Composición química del Alcohol
Estado físico: Liquido Color: Incoloro Pto. De fusión: -117 ºC Temperatura de inflamación:
13ºC Olor: Característico Punto de ebullición: 79 ºC Solubilidad: Miscible Temperatura de
autoignicción: 363 ºC (Martínez, 2001)
3.2 Características de las garrapatas
La garrapata es un ectoparásito hematófago que se encuentra con frecuencia en bovinos,
principalmente en las regiones tropicales y subtropicales. Dentro de los efectos adversos
producidos, se destaca la transmisión de microorganismos de los cuales es vector, como Babesia
spp., y Anaplasma spp.; así mismo, induce anemia, daño de la piel y estrés; esto último conduce
a anorexia, disminución de peso y pérdidas económicas en los sistemas de producción animal.
(Pulido, Cruz 2007). Por otra parte, la supervivencia y el mecanismo de adaptación, así como su
propagación ocurren a expensas de los hospederos vertebrados y se debe, a que existe una total
dependencia del consumo de sangre por parte del parasito, quien, además es reservorio potencial
de agentes infecciosoos. (Navarro, Tercero 2013).
La localización de la garrapata sobre huésped depende especialmente del género, en el ganado
bovino la más frecuente en el boophilus microplus que se distribuye por todo el animal
haciéndose más notoria la infestación en la orejas, tabla del cuello, región pectoral, axilas, base
de la cola, región periné, en todos sus estudios parasitarios, y parte interna del muslo,. Las larvas
y ninfas en ocasiones son encontradas en las orejas y los adultos en el pecho, papada, genitales,
cuello, axila, abdomen, ingle y prepucio.
El Amblyomma cajanense puede fijarse en cualquier parte del cuerpo, incluso han sido
encontradas en la lengua de terneros jóvenes. Los adultos prefieren fijarse entre las patas o sobre
6
el abdomen. También se encuentran sobre y alrededor de la ubre, debajo de la cola y pecho
(Peinado, 2006).
3.3 Enfermedades transmitidas por garrapatas
Las garrapatas causan diferentes tipos de daños al ganado chupan la sangre, provocando
anemia y debilidad en los animales. Las picaduras de las garrapatas causan dolor, comezón
en la piel e intranquilidad a los bovinos, esta molestia a su vez, hacen que los animales
coman menos, crezcan lentamente , tengan baja ganancia de peso y produzcan menos leche.
Las picaduras dejan heridas en la piel que se ven como perforaciones o zonas defectuosas en
el cuero curtido, estos defectos bajan el precio comercial de los cueros. Las garrapatas
también pueden trasmitir algunas enfermedades graves al ganado, como la babesiosis o
piroplasmosis y anaplasmosis, esto aumenta su peligrosidad para la producción ganadera.
3.4 Estudios realizados en el control de garrapatas
El extracto de neem es un insecticida de origen botánico utilizado como repelente, se obtiene a
partir de extractos de Azadirachta indica (árbol de Neem). Las sustancias activas que contiene
dicha planta, actúan como regulador de la vida del insecto, haciendo que sus (larvas; ninfas y
pupas), no lleguen a la edad adulta, esterilizando a los insectos maduros; reduciendo la
formación de quitina en el insecto (Sevilla, Rodríguez 2009).
La tabla a continuación muestra la cantidad de azadirachtinas obtenida utilizando distintos
solventes para la elaboración de extractos del árbol de neem.
Solvente usado Azadirachtinas encontrada (g 10 L -1 )
Etanol (95%)
Metanol / Agua (85:15)
Metanol
Acetona
Etil – éter
2,80
2,60
2,19
0,74
1,28
Fuente. Contreras (2011)
7
Peinado , et al, (2006) realizo una investigación sobre los efectos del hombre grande (Quassna
amara), tabaco (Nicotiana tabacum) y Neem (Azadirachta indica L.) en el control de garrapatas
de ganado bovino el cual obtuvo como resultado que el mayor efecto se logró con tabaco al
reducir en mayor cantidad la carga de garrapatas a partir de los siete días post tratamiento, le
sigue el Neem y por último el hombre grande, continuo disminuyéndose la infestación con el
tabaco en el intervalo de los 21 días periodo en el cual se acentúa la eficacia de los tres
tratamientos naturales aplicados.
Así mismo Navarro y Tercero, et al, (2013), evaluaron cuatro niveles de inclusión de sustrato de
vena de tabaco (Nicotiana tabacum) para el control de garrapatas en el cual tratamiento que
causó la mayor mortalidad fue la vena de tabaco 500g obteniendo la mayor mortalidad en el
primer día de aplicado los tratamientos. En comparación con vena de tabaco 400gr que obtuvo
una alta mortalidad en el primer día descendiendo en el segundo día y obteniendo su mayor
mortalidad en tercer día de aplicado los tratamientos, y la vena de tabaco 300g obtuvo una baja
mortalidad en comparación con los otros tratamientos.
Por otra parte Rodríguez, et al, (2007), demuestran que tanto el producto químico Torsafox,
como el producto natural harina de Neem, tienen igual comportamiento letal sobre las garrapatas,
afectándolas de manera similar. La harina de Neem tiene efecto letal contra los estadios
inmaduros del larvas y ninfas de garrapatas del género Boophilus, así como en su estado adulto,
ya que al finalizar el estudio además de encontrar un bajo porcentaje de las garrapatas, las
encontradas mostraban signos tales como: deshidratación, cambio a un color más claro, el
tamaño más pequeño, secas.
Como indica Sánchez, MS, Barahona, Benavides, et al, (2010) en el estudio de documentación
de prácticas etnoveterinarias en fincas ganaderas del departamento de Córdoba el Neem
(Azadirachta indica L.) aunque esta especie no es originaria de américa, hubo un buen número
de reportes de los beneficios de esta especie e incluso algunos ganaderos han implementado su
cultivo para el control de moscas y ectoparásitos. En la zona el Neem es usado para el control de
garrapatas, moscas, plagas en silos y alrededor del mundo sus propiedades insecticidas han sido
ampliamente estudiadas. En Venezuela, la inclusión de hojas de Neem en bloques
multinutricionales redujo el número de huevos de endoparásitos en eses de bovinos. En lo
8
referente a ectoparásito, a pesar de que extractos de semillas de Neem no tuvieron efecto en la
mortalidad de larvas y hembras adultas ingurgitadas de las garrapatas Boophilus Microplus, se
inhibieron parcial o totalmente la ovoposición y la embriogénesis. Esto pudo haber estado
asociado con el tipo de extracto usado. En Colombia, de diferentes extractos de semilla de Neem
solamente el etéreo tuvo efecto en el control de la garrapata B.microplus.
Por su parte Rosas Terrones (2011) evalúo la actividad inhibitoria del extracto acuoso de la
planta hellemium puberullum sobre la eclosión de los huevecillos de la garrapata Boophylus
microplus a diferentes concentraciones determinando que no existe una actividad significativa
del extracto acuoso de manzanilla de monte (hellemium puberullum) sobre la oviposicion de las
teologínas ingurgitadas a ninguna concentración de las utilizadas (0.5, 1.0, 1.5y 2.0 %).
3.5 Elaboración de extractos de forma artesanal
Es una extracción que se realiza a temperatura ambiente. Consiste en remojar el material vegetal,
debidamente fragmentado en un solvente (agua o etanol, se prefiere el etanol puesto que a largos
tiempos de extracción el agua puede 8 propiciar la fermentación o la formación de mohos) hasta
que éste penetre y disuelva las porciones solubles. Se puede utilizar cualquier recipiente con tapa
que no sea atacado con el disolvente; en éste se colocan el material vegetal con el disolvente y
tapado se deja en reposo por un período de 2 a 14 días con agitación esporádica. Luego se filtra
el líquido, se exprime el residuo, se recupera el solvente en un evaporador rotatorio y se obtiene
el extracto. (González 2004)
9
IV. MATERIALES Y MÉTODOS
4.1 Ubicación del ensayo
El presente ensayo se realizó en el Laboratorio General de la Universidad Católica del Trópico
Seco de Estelí, ubicada en el kilómetro 166.5 carretera panamericana norte, se encuentra a una
altura de 810 msnm, una temperatura promedio de 25ºC una precipitación anual 900mm entre las
coordenadas 13º 14 29” latitud oeste.
4.2. Diseño experimental
Se utilizó un Diseño Completamente al Azar (DCA) con cuatro tratamientos y cuatro
repeticiones para 16 unidades experimentales. Se contó con un universo de 320 garrapatas
adultas a las cuales se les aplicaron los tratamientos. El plato Petri con 20 garrapatas se consideró
como la unidad experimental.
El modelo matemático del diseño
Yij: µ + τi + ɛij Donde:
Yij: Variable respuesta en la j-esima repetición del i-esimo tratamiento
µ: Promedio poblacional de la variable respuesta
τi: Efecto del tratamiento i
ɛij: Error aleatorio, donde Éij ˷ Ν(0,σ²)
Silva (2015)
10
4.3. Tratamientos implementados
T1: Extracto de hoja de Neem. El tratamiento solo se aplicó una vez por inmersión en un tiempo
de 3 segundos diluido al 30% en agua. Disolviendo 3 ml del extracto obtenido en 10 ml de agua
destilada.
T2: Extracto de hoja de Limonaria. El tratamiento se aplicó una vez por manera de inmersión en
un tiempo de 3 segundos en una concentración del 30% de solución acuosa disolviendo 3 ml del
extracto obtenido en 10 ml de agua destilada.
T3: Alcohol. Se aplico a las garrapatas por el mismo método de inmersión durante tres segundos
en la solución alcohólica al 30%.
T4: Agua destilada. El tratamiento se aplicó una vez por inmersión en un tiempo de 3 segundos.
4.4. Recolección de las garrapatas y preparación de los tratamientos
Para llevar a cabo este experimento se visitó la vaqueriza de UCATSE con el objetivo de revisar
cada animal al cual se le pasó suavemente la mano, donde una vez detectada la garrapata se
procedió a girarla y tirarla suavemente en contrapelo hasta desprenderla, el procesos se repitió
hasta obtener la cantidad necesaria, 320 garrapatas adultas, para el experimento. Se utilizaron
garrapatas de los géneros Boophilus y Amblioma, las cuales estuvieron alojadas en los platos
Petri siguiendo la metodología propuesta por Rodríguez, Rodríguez, Cruz, et al, (2010).
Posteriormente se colocaron en envases de vidrio y se llevaron al laboratorio.
Para la preparación de los tratamientos se recolectaron hojas de Neem (Azadirachta indica) y
Limonaria (Murraya paniculata) en una cantidad de 250 ml de etanol por cada 100 gramos de
material por especie (Azhahianambi P, Ghosh et al, 2008). Con ayuda del extractor Soxhlet para
facilitar la extracción de los ingredientes activos; Luego se procedió a la extracción del alcohol,
11
aplicando el concepto de (Núñez 2009) que define a la extracción como la acción de separar con
un líquido una fracción específica de una muestra, dejando el resto lo más íntegro posible. El tipo
de extracción utilizada fue liquido-líquido que tiene usos especialmente en química analítica
cuando se extrae el producto de una reacción efectuada en fase líquida con un solvente específico
para separar uno o algunos de los componentes, en este caso se utilizara Etanol como solvente el
cual su punto de ebullición es de 78 ˚C.
Según Núñez (2009) para elaborar la extracción liquido - líquido a través del equipo llamado
Soxhlet la cual realiza un sinfín de extracciones de manera automática, con el mismo solvente
que se evapora y condensa llegando siempre de manera pura al material. Con las siguientes
etapas:
1) Colocación del solvente en un balón.
2) Ebullición del solvente que se evapora hasta un condensador a reflujo.
3) El condensado cae sobre un recipiente que contiene un cartucho poroso con la muestra en su
interior.
4) Ascenso del nivel del solvente cubriendo el cartucho hasta un punto en que se produce el
reflujo que vuelve el solvente con el material extraído al balón.
5) Se vuelve a producir este proceso la cantidad de veces necesaria para que la muestra quede
agotada. Lo extraído se va concentrando en el balón del solvente.
4.5. Montaje del ensayo y técnica para la realización del estudio
Para el montaje del ensayo se tomó como referencia la metodología utilizada por Navarro y
Tercero (2013). Se utilizaron 320 garrapatas las cuales fueron separadas en Dieciséis platos Petri.
Los tratamientos de Neem al 30%, Limonaria al 30%, Alcohol al 30% (Turmero, 2012) y Agua
destilada fueron aplicados a las garrapatas por medio del método de sumersión por tres segundos
utilizando una pinza para evitar el contacto con los agentes patógenos. A continuación se les
removió el exceso de tratamiento con papel toalla y se colocaron en los platos Petri donde fueron
12
tapadas con papel aluminio y se les dio monitoreo para medir las variables por 48 horas. Los
datos fueron tomados a través del método de la observación tomando en cuanta movilidad, color,
reducción del tamaño y reacción ante la luz de las garrapatas. Posteriormente se anotó el número
de muertes por hora en la hoja de campo (Anexo 2).
4.6. Análisis estadístico
Para el análisis estadístico de las variables estudiadas, se implementó un análisis de normalidad
(anexo 3 y 6), prueba de homogeneidad de Shapiro- Wilks (Anexo 4 y 7), para posteriormente se
realizó un análisis de varianza con un nivel de significancia de 0.05, prueba de separación de
media con Duncan, utilizando el paquete estadístico InfoStat versión 2010.
13
V. RESULTADOS Y DISCUSION
Las garrapatas del ganado vacuno (Boophilus y Amblyomma) son el principal problema
veterinario en las regiones tropicales y subtropicales (Navarro, Tercero. 2013). Son un grupo de
parásitos artrópodos hematófagos causantes de una enfermedad parasitaria externa que afecta a
los bovinos en todas sus edades, causándoles una anemia perjudicial para la producción de leche
y carne, irritación y malestar (Gonzales 2007). Así también son transmisores de enfermedades tal
como la babesiosis y anaplasmosis capaces de causar daños económicos dentro del hato
ganadero. Por lo tanto, para ayudar ante la problemática en el control de estos ectoparásitos se
realizó el ensayo para su control a nivel de laboratorio con extractos de neem, limonaria, y
alcohol al 30% respectivamente. Obteniendo los siguientes resultados:
5.1 Mortalidad diaria
Tabla 1. Análisis de varianza para la mortalidad a las 24 horas
Variable N R² R²Aj CV
Mortalidad 24 horas 16 0.68 0.6 21.26
FV SC gl CM F
P-valor
Modelo 51.19 3 17.06 8.44 0.0028
Tratamiento 51.19 3 17.06 8.44 0.0028
Error 24.25 12 202
Total 75.44 15
Como se observa en el analicis de vrianza ( Tabla 1) muestra una p de 0.0028 en la mortalidad
indica que hay diferencias altamente significativas. El valor de R2 = 0.68 indica que el 68% de
los datos se ajustan al modelo. El CV (Coeficiente de Variación) es de 21.26 lo cual nos indica
que no hay problema con el modelo que se está aplicando a los datos.
14
Tabla 2. Separación de medias Duncan a las 24 horas
Tratamiento Medias n
N.1 Extracto de Neem T1 8.75 4 A
N.2
Extracto de Limonaria
T2 8 4 A
N.3 Alcohol T3 5.75 4
B
N.4 Testigo (Agua) T4 4.25 4 B
Letras distintas indican diferencias significativas (p˂=0.05)
La prueba de Duncan (Tabla 2) indica los grupos formados de acuerdo a la separación de medias.
La N indica el número de datos tomados para realizar la media. En este caso la limonaria y el
Neem no tienen diferencia significativa entre ellos pero son diferentes que el alcohol y el agua.
Asi también que los tratamientos de limonaria y neem resultaron con los mejores promedios y
que el tratamiento 1 y 2 son diferentes de 3 y 4 formando 2 grupos A (limonaria y neem) y B
(agua y alcohol).
Tomando en cuanta esto se puede afirmar que el tratamiento con la mayor mortalidad a las 24
horas después de montado el experimento fue el extracto de neem al 30% seguida del extracto
de limonaria al 30% con un 43.75% y 40% de control respectivamente, aunque los dos
tratamientos no difieren el uno del otro, ya que estadísticamente son similares. En comparación
con el alcohol el cual tuvo una baja mortalidad (28.75%) estadísticamente similar a la del grupo
testigo, en este caso agua destilada (21.25%). Esto en cuanto a porcentajes tomando en cuenta la
media y el número total por la unidad experimental.
Por su parte el análisis de dispersión de datos (Figura 1) muestra que el tratamiento más
consistente en cuanto a muertes por repetición durante el experimento en el periodo de 24 horas
fue el extracto de limonaria ya que está más cercano a la media, a diferencia de los demás
tratamientos.
15
Figura 1. Dispersión de los datos con respecto a la media en 24 horas
5.2 Mortalidad acumulada
Tabla 3. Analizis de varianza para la mortalidad a las 48 horas
Variable N R² R²Aj CV
Mortalidad 48 horas 16 0.94 0.92 9.66
FV SC gl CM F P-valor
Modelo 288.19 3 96.06 61.48 ˂0.00001
Tratamiento 288.19 3 96.06 61.48 ˂0.00001
Error 18.75 12 1.56 Total 306.94 15
16
El análisis de varianza para la mortalidad a las 48 horas (tabla 3) muestra que el valor de p:
0.0001 en la mortalidad indica que hay diferencias altamente significativas. El valor de R2 =
0.94 lo cual indica que el 94% de los datos se ajustan al modelo. El CV (Coeficiente de
Variación) es de 21.26 lo cual nos indica que no hay problema con el modelo que se está
aplicando a los datos.
Tabla 4. Separación de medias Duncan a las 48 horas
Tratamiento Medias n
N.1 Extracto de Neem T1 17.75 4 A
N.2 Extracto de Limonaria T2 16.50 4 A
N.3 Alcohol T3 9.50 4 B
N.4 Testigo (Agua) T4 8.00 4 B
Letras distintas indican diferencias significativas (p˂=0.05)
Al realizar la separación de medias con Duncan (Tabla 4) se encontró que los tratamientos de
neem y limonaria, en comparación con el alcohol y el testigo tuvieron un efecto significativo con
relación al número promedio de muertes después de las 48 horas de aplicados, no habiéndose
encontrado una diferencia significativa ante el tratamiento 1 y 2, aun cuando el extracto de
limonaria al 30% tubo una tendencia a aumentar en el número de muertes. Lo cual indica que
hay dos grupos formados de acuerdo a la separación de medias A (limonaria y neem) y B (agua y
alcohol). La N indica el número de datos tomados para realizar la media. En este caso la
limonaria y el Neem no tienen diferencia significativa al igual que el alcohol y el agua.
Lo que por el contrario a la mortalidad en 24 horas, muestra que el tratamiento con mayor
mortalidad a las 48 horas después de exponer las garrapatas al tratamiento fue el extracto de
limonaria con un 88.75% de control, superando al neem el cual obtuvo un 82.5 %, alcohol con
47.5% y el testigo en este caso agua destilada con 40% de control durante el periodo del
experimento. Esto en cuanto a porcentajes tomando en cuenta la media y el número total por la
unidad experimental.
17
Estos resultados son similares a los obtenidos por Peinado et al. (2006), quien trabajó con
extracto acuoso de tabaco, aceite de neem y hombre grande. Los cuales demostraron un efecto en
la mortalidad del 89.26%, 82.31%, 70.47% para los extractos de tabaco, neem y hombre grande
respectivamente. Lo que evidencia u resultado similar en cuanto al uso de extracto acuoso de
aceite de neem, y el extracto de hoja utilizado en este experimento.
Por otra parte, Azhahianambi , Ghosh, et al. 2008. Uttarakhand, India Obtubieron un rango de
control de garrapatas Boophilus microplus del 80% a 5 horas de aplicado el tratamiento de
extracto acuoso de hoja de neem al 8% in vitro.
Por otra parte Rodríguez, Fornos, Aguilar et al (2007). En Matagalpa, Nicaragua demuestran que
tanto el producto químico Torsafox, como el producto natural harina de Neem, tienen igual
comportamiento letal sobre las garrapatas, afectándolas de manera similar ya que ambas
controlaron un 62.5%. La harina de Neem tiene efecto letal contra los estadios inmaduros del
larvas y ninfas de garrapatas del género Boophilus, así con en su estado adulto, ya que al
finalizar el estudio además de encontrar un bajo porcentaje de las garrapatas
En cuanto a la dispersión de los datos a las 48 horas (Figura4) demuestra que el tratamiento más
cercano a la media y con mayor mortalidad es el extracto de limonaria, por lo tanto es el
tratamiento más consistente en cuanto al número de muertes por repetición. A diferencia del
neem el cual estadísticamente no tiene diferencia significativa, pero en cuanto a su dispersión es
menos estable en comparación con la limonaria.
18
Figura 2. Dispersión de los datos con respecto a la media de 48 horas
5.2.1 Comportamiento de los tratamientos en periodo de 48 horas.
En este grafico (grafica 5) se puede observar el comportamiento de los tratamientos en el periodo
de tiempo que duro el experimento (48 horas) ya que registra en número promedio de muertes
por hora. Se puede observar que los tratamientos con mayor efectividad fueron primero el neem
y después la limonaria aumentando el número de muertes por hora después de transcurridas 36
horas desde la exposición a los tratamientos. Asumiendo así que la aplicación de estos extractos,
tanto neem como limonaria, ejercen un efecto significativo en el control de garrapatas de los
géneros Amblyomma y Boophilus actuando mediante contacto y digestión el cual paraliza los
ganglios del sistema nervioso simpático y parasimpático y en la parte externa. Causando cambio
de color normal en la cutícula, volviéndose amarillenta rojiza, así como la reducción del tamaño.
Adquiriendo una estructura plegada y deshidratada causando parálisis. Lo cual termina
generando alta mortalidad por parte de estos. (Navarro, Tercero 2013)
19
Figura 3. Comportamiento de los tratamientos en periodo de 48 horas
20
Tabla 5. Costo de la dosis
COSTOS DIRECTOS
Concepto Unidad
de
Medida
Cantidad
Utilizada
Costo
(C$)
Costo Total
(C$)
Maquina Soxhlet Horas 20 15 300
Total (C$) 300
COSTOS INDIRECTOS
Tratamientos Insumos Unidad de
media
Costo
(c$)
Cantidad
utilizada Costo al
detalle (c$)
Extracto de
Neem
Alcohol Ml 100 100 10
Mano de
Obra
Dia/Hombre
(Horas) 100 1 10
Energia 12 Horas 25 8 17
Agua
Destilada Litro / Ml 10 2.10 20
Total c$ 57
Extracto de
Limonaria
Alcohol Ml 100 100 10
Mano de
Obra Dia/Hombre 100 1 10
Energia 12 Horas 25 8 17
Agua
Destilada Litro / Ml 10 2.10 20
Total c$ 57
Alcohol
Alcohol Ml 100 3 0.3
Agua
Destilada Litro / Ml 10 0.10 0.1
Total c$ 0.4
Agua (Testigo) Agua
Destilada Litro / Ml 10 0.10 0.1
Total c$ 0.1
21
5.3 Costo de los Tratamientos
La tabla de costo de los tratamientos (Tabla 5) muestra que para la elaboración de la cantidad
equivalente a 25 ml de extracto es de 57 córdobas, lo que equivaldría a 2.28 córdobas por cada
ml. Al utilizarlo en una concentración del 30% para una bombada de 20 litros se debe de usar
600 ml tanto de limonaria como de neen, conllevando a un costo de C$1368, sin embargo esto se
reduciría al realizar la elaboracion de los extractos de manera artesanal.
Tabla 6. Tabla de comparación de costos y beneficios es relación con otros productos de
origen químico
Tratamiento Costo Docis/UA Docis/bomba Costo/Dosis U/A
tratado
Costo
dosis/
UA
Observaciones
Extracto de
limonaria
1000 ml
C$
2,280
4 lts 6,000 ml C$ 13,680 1 C$
1200
Bajo impacto
ambiental, no
contamina la
canal, reduce
el riesgo de
intoxicación.
Aplicación
cada 21 días.
Extracto de
neem 1000
ml
C$
2,280
4 lts 6,000 ml C$ 13,680 1 C$
1200
Bajo impacto
ambiental, no
contamina la
canal, reduce
el riesgo de
intoxicación.
Aplicación
cada 21 días.
22
Paret 120
ml
C$
147
4 lts 20 ml C$ 24.50 1 C$
4.90
Bajo costo, alto impacto
ambiental, el
manipulador
corre riesgo
de intoxicarse
baño cada 30
días.
Ectoline
5000 ml
C$
5,000
4lts 40 ml C$ 40 1 C$
40
Alto costo,
contamina él,
medio
ambiente, se
repite
aplicación 30
días.
Ivomec 50
ml
C$
430
4 lts 10 ml C$ 86 1 C$
21.5
Amplio rango
de control de
parásitos, alto
costo
contamina la
canal y
provoca
lesiones por
mal uso.
Fuente: (Navarro, Tercero 2013)
5.3.1 Ccomparación de costos y beneficios es relación con otros productos de origen
químico
Anteriormente se observa en la tabla de comparación que el extracto acuoso de hoja de limonaria
y el de neem tienen un bajo impacto ambiental en relación con los otros productos de origen
químico, aunque respecto a su costo representan una alta inversión económica en comparación
con el Ectoline, ivomec, paret, que tiene como desventaja su efecto contaminante por lo que el
uso de estos extractos puede ser una alternativa viable para los productores , al reducir sus costo
de producción en cantidades mayores y distintas concentraciones, amigable con el medio
23
ambiente lo que permitirá encaminar la producción ganadera con prácticas que promuevan la
trazabilidad, como norma para el acceso a mercados internacionales.
24
VI. CONCLUSIONES
El tratamiento de extracto de limonaria ( Murraya paniculata)obtuvo un mejor resultado de
control de garrapatas (Boophylus y Amblyomma)en un periodo de 48 horas con una mortalidad
de 88.77% teniendo en cuenta que este fue aplicado al 30%. La elaboración de los tratamientos
de manera orgánica resulto con costos elevados los cuales son inaccesibles para el uso de
pequeños y medianos productores.
25
VII. RECOMENDACIONES
Realizar estudios con los mismos tratamientos pero utilizando dosis bajas para lograr reducción
de costos en la elaboración o con las mismas dosis pero que sean aplicados directamente en
campo por método aspersión para una mejor distribución del tratamiento.
Darle seguimiento al estudio de la Limonaria ( Murraya paniculata) debido a que en la actualidad
no se encuentra información suficiente de esta especie donde de igual manera se podrían probar
los extractos cambiándole la metodología de realización.
Al elaborar los tratamientos de hoja Neem (Azadirachta indica) y Limonaria (Murraya
paniculta) utilizar un embudo el cual pueda ser llenado con un litro de agua y así reutilizar el
agua que mantiene la máquina de extracción (Soxhlet) en temperatura estable; al mismo tiempo
para obtener una mejor eficiencia en el mantenimiento de la temperatura en la máquina de
extracción (Soxhlet) utilizar una bomba pequeña de agua el cual estará llenando el embudo de
manera automática.
Realizar los extractos de manera artesanal para la reducción de costos y así sea una vía de control
accesible para un pequeño y mediano ganadero. (Método de elaboración de manera artesanal
Pag.8 inciso 5 de Marco Teórico).
26
XIII. BIBLIOGRAFIA
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30
IX. ANEXOS
Anexo 1. Diseño experimental.
Diseño completamente al azar (DCA)
T1: Extracto de neem
T2: Extraxto de limonaria
T3: Alcohol
T4: Agua (testigo)
R: Repetición
: Plato Petri
T1R1
………
………
T3 R2
………
T4 R3
……….
T2 R4
……….
T2R1
……….
T1 R2
……….
T2 R3
……….
T3 R4
……….
T4R1
……….
..
T2 R2
………
T1 R3
……….
T1 R4
……….
T3R1
………
T4 R2
………
T3 R3
……….
T4 R4
……….
31
Anexo 2. Modelo de hoja de campo.
TRATAMI
ENTO
REPETI
CION
8:0
0
A
M
9:0
0
A
M
10:0
0
AM
11:0
0
AM
12:0
0
AM
1:0
0
P
M
2:0
0
P
M
3:0
0P
M
4:00
PM
……
……
X
hora
Limonaria 1
Limonaria 2
Limonaria 3
Limonaria 4
Neem 1
Neem 2
Neem 3
Neem 4
Alcohol 1
Alcohol 2
Alcohol 3
Alcohol 4
Agua 1
Agua 2
Agua 3
Agua 4
32
Anexo 3. Analisis de normalidad 24 horas.
Anexo 4. Prueba de homogeneidad 24 horas
33
Anexo 5. Análisis de varianza a las 24 horas
34
Anexo 6. Analisis de normalidad 48 horas.
Anexo 7. Prueba de homogeneidad 48 horas
35
Anexo 8. Análisis de la varianza a las 48 horas
36
Anexo 9. Elaboracion de tratamientos y aplicacion en garrapatas
Foto1: Maquina Agitadora con función de Calentador (Chamorro 2015)
Foto2: Pesaje de las hojas junto con el papel filtro (Blandon 2015)
37
Foto3: Elaboración de Cartucho (Papel filtro con Hoja de Tratamiento) (Chamorro 2015)
Foto4: Maquina Soxhlet (Blandon 2015)
38
Foto5: Vertiendo el Solvente (Alcohol) en el balón (Blandon 2015)
Foto6: Recolección de garrapatas (Blandon 2015)