UJI SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL

KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP

SEL T47D

SKRIPSI

Oleh:

CITA HANIF MUFLIHAH

K 100 080 083

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA

SURAKARTA

2012

UJI SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL

KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP

SEL T47D

SKRIPSI

Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai

Derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi

Universitas Muhammadiyah Surakarta

di Surakarta

Oleh:

CITA HANIF MUFLIHAH

K 100 080 083

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA

SURAKARTA

2012

i

DEKLARASI

Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya

yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan

Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang

pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu

dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.

Surakarta, 8 Maret 2012

Peneliti,

Cita Hanif Muflihah

ii

KATA PENGANTAR

Assalamu’alaikum warohmatullohi wabarokatuh.

Segala puji bagi Allah yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah

sehinga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi yang

berjudul: “UJI SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK ETANOL

KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP SEL T47D”

sebagai salah satu syarat untuk mencapai derajat Sarjana Strata 1 Farmasi

(S.Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.

Penulis banyak memperoleh bantuan, dukungan, dan bimbingan dari

berbagai pihak sehingga skripsi ini dapat selesai tepat waktu. Untuk itu penulis

menyampaikan ucapan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada:

1. Bapak Dr. Muhammad Da’i, M.Si.,Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Muhammadiyah Surakarta dan sebagai penguji.

2. Ibu Tanti Azizah, M.Si,Apt sebagai pembimbing akademik.

3. Bapak Dr. Haryoto, M.Sc. sebagai pembimbing utama.

4. Bapak Peni Indrayudha, M.Biotech, Apt. sebagai pembimbing pendamping.

5. Ibu Rosita Melannisa, M.Si.,Apt sebagai penguji.

6. Bapak Sahlan Rosjidi dan Ibu Ponidah, kedua orangtuaku, serta kedua

kakakku Mbak Ida dan Mas Dian.

7. Tim Sitotoksik: Mbak Woro, Mbak Hefi, Mbak Umma, Mbak Indah, Mbak

Eva, Mas Wildan, Mas Desil, Mbak Mustika, Mbak Yennie, Mas Adi, dan

Mas Iwan.

8. Segenap pihak yang telah banyak membantu dan memberi dukungan yang

tidak dapat disebutkan satu persatu.

Semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi siapa saja yang membacanya

dan muncul kritik dan saran untuk perbaikan penulis selanjutnya.

Wassalamu’alaikum warohmatullohi wabarokatuh.

Surakarta, 8 Maret 2012

Peneliti

Cita Hanif Muflihah

iii

DAFTAR ISI

LEMBAR PENGESAHAN .................................................................................. i

DEKLARASI ........................................................................................................ ii

KATA PENGANTAR .......................................................................................... iii

DAFTAR ISI ......................................................................................................... iv

DAFTAR TABEL ................................................................................................. vii

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ viii

DAFTAR SINGKATAN ...................................................................................... ix

DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... x

INTISARI ............................................................................................................. xi

BAB I. PENDAHULUAN .................................................................................... 1

A. Latar Belakang ....................................................................................... 1

B. Perumusan Masalah ............................................................................... 2

C. Tujuan Penelitian ................................................................................... 2

D. Tinjauan Pustaka .................................................................................... 3

1. Tanaman Srikaya (Annona squamosa L.) ....................................... 3

a. Sistematika Tanaman................................................................... 3

b. Nama Daerah ............................................................................... 3

c. Deskripsi Tanaman ...................................................................... 3

d. Khasiat Tanaman ......................................................................... 4

e. Kandungan Kimia ........................................................................ 4

f. Efek Farmakologi ........................................................................ 5

2. Kanker .............................................................................................. 5

a. Tinjauan Umum ........................................................................... 5

b. Penyebab Kanker ......................................................................... 6

c. Karakteristik Sel Kanker ............................................................. 6

d. Perkembangan Sel Kanker .......................................................... 7

3. Kanker Payudara .............................................................................. 8

4. Sel T47D .......................................................................................... 8

5. Uji Sitotoksik ................................................................................... 9

6. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) untuk Annona squamosa L ......... 9

iv

E. Landasan Teori ....................................................................................... 10

F. Hipotesis ................................................................................................ 11

BAB II. METODE PENELITIAN ........................................................................ 12

A. Kategori Penelitian ................................................................................. 12

B. Variabel Penelitian ................................................................................. 12

1. Variabel Bebas ................................................................................. 12

2. Variabel Tergantung ........................................................................ 12

3. Variabel Terkendali.......................................................................... 12

C. Alat dan Bahan ....................................................................................... 12

1. Alat-alat yang digunakan ................................................................. 12

2. Bahan-bahan yang digunakan .......................................................... 13

D. Tempat Penelitian .................................................................................. 13

E. Jalannya Penelitian ................................................................................. 13

1. Determinasi Tanaman ...................................................................... 13

2. Penyiapan Bahan .............................................................................. 14

3. Ekstraksi ........................................................................................... 14

4. Fraksinasi ......................................................................................... 14

5. Uji Kandungan Senyawa dengan KLT ............................................ 15

6. Uji Sitotoksik ................................................................................... 16

a) Sterilisasi alat ............................................................................. 16

b) Pembuatan media pertumbuhan ................................................. 16

c) Preparasi sampel ........................................................................ 16

d) Pemanenan sel ............................................................................ 16

e) Pembuatan larutan uji ................................................................ 17

f) Uji sitotoksik dengan MTT assay .............................................. 17

F. Analisis Data .......................................................................................... 17

1. Uji sitotoksik .................................................................................... 17

2. Analisis Kromatografi lapis Tipis .................................................... 18

BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................. 19

A. Determinasi Tanaman Srikaya ............................................................... 19

B. Ekstraksi Kulit Batang Srikaya (A. squamosa L.) ................................. 19

v

C. Fraksinasi Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (A. squamosa L.) ....... 19

D. Uji Sitotoksik Fraksi Semipolar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya

(Annona squamosa L.) terhadap Sel T47D dengan MTT Assay............ 22

E. Analisis Kualitatif Kandungan Senyawa pada Fraksi Semipolar

Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona squamosa L.) ............... 24

BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 29

A. Kesimpulan ............................................................................................ 29

B. Saran ...................................................................................................... 29

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 30

LAMPIRAN .......................................................................................................... 34

vi

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Komposisi eluen yang digunakan untuk proses fraksinasi ................. 15

Tabel 2. Seri konsentrasi sampel uji yang digunakan dan persentase sel hidup

setelah perlakuan ................................................................................. 23

Tabel 3. Hasil analisis kualitatif kandungan senyawa dengan KLT ................. 26

vii

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Struktur umum asetogenin pada Annonaceae .................................. 4

Gambar 2. Profil KLT pendahuluan ekstrak untuk menentukan fase gerak

untuk fraksinansi. (i) Fase gerak heksana:etil asetat (9:1) (ii) Fase

gerak heksan:etil asetat (8:2) (iii) Fase gerak heksana:etil asetat

(7:3) (iv) Fase gerak heksana:etil asetat (6:4) .................................. 20

Gambar 3. Profil kromatografi hasil tiga kali proses fraksinasi ekstrak dengan

metode KCV menggunakan silika gel F 254 dan fase gerak

heksana:etil asetat (8:2) .................................................................... 21

Gambar 4. Pengelompokan fraksi berdasarkan profil kromatografi yang mirip

dari ketiga hasil fraksinasi. A-R delapan belas bercak yang

diperoleh dari tiga kali proses fraksinasi. (1) Fraksi nonpolar, (2)

fraksi semipolar, dan (3) fraksi polar ............................................... 21

Gambar 5. Reaksi reduksi garam MTT membentuk formazan .......................... 22

Gambar 6. Grafik hubungan antara Log Kadar vs Rata-rata % Sel hidup dan

persamaan regresi liniernya, menunjukkan semakin tinggi harga

log kadar semakin kecil % sel hidup ................................................ 23

Gambar 7. Pengaruh perlakuan fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang

Srikaya terhadap sel T47D dengan konsentrasi sebesar 250 µg/mL

(i) dan 25 µg/mL (ii) (a) Sel T47D yang mati. (b) Sel T47D yang

hidup ................................................................................................ 24

Gambar 8. Hasil KLT fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya

dengan fase gerak heksana:etil asetat (7:3) dan fase diam silika

gel F 254 .......................................................................................... 25

Gambar 9. Senyawa N-Nitrosoxylopine ............................................................. 27

viii

DAFTAR SINGKATAN

DMSO Dimetil sulfoksida

ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay

FBS Fetal Bovine Serum

IC50 Inhibitory Concentration 50%

KCV Kromatografi Cair Vakum

KLT Kromatografi Lapis Tipis

LAF Laminar Air Flow

RPMI Rosewell Park Memorial Institute

MTT 3-(4,5-Dimetilltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide

nm Nanometer

PBS Phosphate Buffered Saline

Penstrep Penicillin Streptomycin

Rf Retardation factor

ROS Reactive Oxygen Species

UV Ultraviolet

SDS Sodium Dodecyl sulphate

ix

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Surat keterangan determinasi ......................................................... 34

Lampiran 2. Perhitungan seri konsentrasi fraksi semipolar ekstrak etanol kulit

batang srikaya ................................................................................. 35

Lampiran 3. Perhitungan kepadatan stok sel T47D ............................................ 37

Lampiran 4. Data uji sitotoksik dengan metode MTT ........................................ 38

Lampiran 5. Data Uji Sitotoksik dengan Metode MTT akibat Perlakuan Fraksi

Semipolar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona

squamosa L.) .................................................................................. 39

Lampiran 6. Perhitungan Presentase Sel Hidup akibat Perlakuan dengan Fraksi

Semipolar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona

squamosa L.) .................................................................................. 40

Lampiran 7. Perhitungan harga IC50 .................................................................... 42

Lampiran 8. Tanaman Srikaya (Annona squamosa L.) ....................................... 43

Lampiran 9. ELISA reader .................................................................................. 44

x

INTISARI

Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa senyawa dalam daun dan biji

Srikaya memiliki aktivitas sitotoksik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui

aktivitas sitotoksik fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya (Annona

squamosa L.) terhadap sel kanker T47D.

Fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya (Annona squamosa

L.) yang diujikan diperoleh dengan metode fraksinasi mmenggunakan

Kromatografi Cair Vakum (KCV) dengan eluen heksana:etil asetat (9:1, 8:2, 7:3,

dan 6:4). Uji sitotoksik dilakukan dengan metode MTT dengan menggunakan 5

seri konsentrasi, pada 250, 150, 100, 50, dan 25 µg/mL Potensi ketoksikan fraksi

semipolar ekstrak etanol kulit batang srikaya (Annona squamosa L.) terhadap sel

kanker T47D dihitung berdasarkan persentase penghambatan sel hidup yang

selanjutnya ditentukan IC50nya. Analisa kandungan senyawa dalam fraksi

semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya (Annona squamosa L.) dilakukan

dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) menggunakan fase diam silika

gel F254 dan fase gerak heksan:etil asetat (7:3) v/v. Deteksi bercak profil

kromatografi menggunakan lampu UV 254 nm dan 366 nm serta reagen

Dragendorff, sitroborat, dan FeCl3.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi semipolar ekstrak etanol kulit

batang Srikaya (Annona squamosa L.) mempunyai aktivitas sitotoksik yang poten

terhadap sel kanker T47D dengan nilai IC50 sebesar 70,77 µg/mL. Hasil KLT

menunjukkan bahwa fraksi semipolar ekstrak etanol kulit batang Srikaya (Annona

squamosa L.) megandung senyawa golongan flavonoid dan alkaloid.

Kata kunci : Uji sitotoksik, srikaya (Annona squamosa L.), sel T47D, IC50 , fraksi

semipolar

xi