uji mutagen s

8/19/2019 Uji Mutagen s

1/23

UJI MUTAGEN(AMES TEST)

Marlia Singgih Wibowo

School of Pharmacy ITB


2/23

Pendahuluan

Lingkungan di sekitar kita banyak mengandung senyawakarsinogen (cancer-causing agents misalnya sinar !"#$olutan industri# $estisida# food additi%es dan $roduktobacco

&nalisis terhada$ berbagai senyawa kimia yang makin harisemakin banyak digunakan# men'adi $erhatian utama$eneliti toksikologi# karena kecurigaan terhada$kemungkinan bahaya kanker yang mungkin diakibatkanoleh senyawa tersebut

Senyawa karsinogen ini da$at menginduksi kanker karenamereka bersifat mutagen (da$at menyebabkan mutasi#yang da$at mengubah susunan )*&


3/23

MUTAGEN Mutagen adalah zat atau senyawa yang

dapat meningkatkan laju perubahan didalam gen. Mutasi (perubahan) dapatmempengaruhi reproduksi sel, bahkan

kadangkala menyebabkan kerusakan selatau pertumbuhan sel yang tidak terkendali

Beberapa contoh mutagen, antara lainsenyawa kimia mustard, etil metil sulfonat,

sinar uv, radiasi sinar , dll. Mutagenesis adalah proses pembentukan

mutasi


4/23

Beda MUTAGEN danKARSINOGEN

!arsinogen menyebabkan !"#!$%

Mutagen menyebabkan M&'",tidak selalu menyebabkan!"#!$%


5/23

Klasifkasi senyawa kasin!"en#enuu$ ak$i%i$asnya dala#

$aha&an kasin!"enesis Initiating agent (incom$lete carcinogen +Senyawa kimia yang hanya menginisiasi sel

Promoting agent + senyawa yangmenyebabkan eks$ansi sel yang terinisiasi

Progressor agent + senyawa yang da$atmengubah sel yang terinisiasi atau sel yangada dalam taha$ $romosi men'adi sel yangber$otensi men'adi sel kanker

,arcinogen lengka$ (com$lete carcinogen +senyawa yang mam$u menginduksi kankerdari sel normal# biasanya memiliki sifatinisiasi# $romosi dan $rogessor


6/23

E&ide#i!l!"i

kasin!"enesis e$idemiologi adalah studi tentangdistribusi dan determinan $enyakitmelalui obser%asi terhada$ eks$erimen

yang terkontrol bser%asi atau$engamatan termasuk + $engamatan e$isodik

$engamatan retros$ektif

$engamatan $ros$ektif


7/23

'uun"an ak$! kasin!"enikden"an kanke yan" $e*adi

Penyebab senyawa karsinogen Kemungkinan kanker yang dapatterjadi

Bukti karsinogenitas

Minuman beralkohol Esophagus, hati, orofaring, laring Cukup

aflatoksin Hati cukup

Makanan (lemak, protein, kalori) Payudara, kolon, endometrium, kemih cukup

merokok Mulut, faring, laring, paru-paru,esophagus, kemih

cukup

Senyaa pengalkil !emih, leukemia cukup

Senyaa arsen !ulit, hati cukup

!loramfenikol leukemia terbatas

Estrogen premonopause Sel hati cukup

Estrogen postmonopause Endometrium "erbatas


8/23

Penyea ke#a$ian kaena

kanke Makanan + ./0 1okok + .20

Infeksi + 320

Perilaku seksual + 40 Peker'aan + 50

6aktor geofisik + .0

&lkohol + .0

Polusi + 70

Produk industri 8 30

9at $enambah makanan 8 30


9/23

U*i senyawa kasin!"en !'i 'angka $endek (short-term test + dikembangkan

untuk mengidentifikasi senyawa karsinogenik yangber$otensi atas dasar ka$asitasnya untuk menginduksimutasi $ada )*& di dalam sel secara in-%itro atau in-%i%o,ontoh test + "mes test Pada &mes test# digunakan sel

mikroba Salmonella ty$himurium Selain u'i mutasibakteri# ada $ula u'i mutasi sel mamalia secara in-%itro#u'i mutasi gen secara in-%i%o menggunakan mencit# u'ikerusakan )*& secara in-%itro

!'i 'angka menengah + u'i kronis 3 tahun + !'imenggunakan /2 ekor tikus

!'i 'angka $an'ang + u'i kronis 7 tahun + Multi stagemodels $ada $erkembangan neo$lasti


10/23

AMES Tes$

: &mes test adalah u'i untuk menentukan a$akah suatusenyawa adalah mutagen *ama test ini diambil dari nama$enemunya yaitu Bruce &mes Bruce &mes dkk $ada tahun3;42an menemukan suatu metode u'i denganmenggunakan bakteri khusus yang sangat sensitif terhada$senyawa7 mutagen

: Penggunaan &mes test adalah berdasarkan asumsi bahwasetia$ senyawa yang bersifat mutagenik terhada$ bakteriyang digunakan# da$at berubah men'adi karsinogen yangda$at menyebabkan kanker

: The 6ood and )rug &dministration (6)& !S& saat ini

menggunakan metode yg dikembangkan &mes untukmena$is senyawa7 kimia secara ce$at dan murah: Walau$un demikian# $ada kenyataannya# bebera$a

senyawa yang menyebabkan kanker $ada hewan $ercobaan(dioksin# misalnya tidak menun'ukkan $ositif $ada &mestest (atau kebalikannya


11/23

&mes test sangat murah dan mudah# sehingga banyakyang berangga$an bahwa test ini tidaklah %alid

Bakteri yang digunakan +


12/23

Pada mutan Salmonella typhimurium tidak da$attumbuh tan$a asam amino histidin karena mutasiditu'ukan $ada gen yang mengkode salah satu dari ;en>im yang digunakan $ada 'alur biosintesis histidin

leh karena itu# mutan &mes hanya akan tumbuhbila ada histidin di dalam medium $ertumbuhankarena mutan tersebut tidak da$at mensintesis

sendiri histidin tersebut Mutan ini adalah mutanauksotrof yang disebut mutan histidine-dependent orhis - (baca + hiss-minus


13/23

+!n$!h A#es $es$ un$uk u*i

kuali$a$i Suatu sus$ensi biakan Salmonellatyphimurium galur histidine-re?uiring (his@ ditumbuhkandalam $elat agar yangmengandung cam$uran rat li%eren>ymes yang tidak mengandung

histidin Sebuah filter $a$er di im$regnasi

dengan 32Ag 7-aminofluorene#suatu karsinogen fek mutageniksenyawa ini da$at menyebabkanbakteri tersebut mem$eroleh

kembali kemam$uannya untuktumbuh walau$un di dalam mediatidak ada histidinnya =al inimenyebabkan tumbuhnya kolonibakteri disekitar disk filter $a$er


14/23

Men"a&a #ediu# un$uk A#es$es$ di$a#ahkan eks$ak ha$i

(li%e e,$a-$).

Banyak senyawa kimia tidak bersifat mutagenatau karsinogen# teta$i da$at berubah men'adi

mutagen atau karsinogen setelah dimetabolismedi dalam tubuh (hati

Bakteri u'i adalah mikroba $rokaryot# sedangkanmanusia adalah eukaryot# oleh karena itu $erlu

ditambahkan cam$uran en>im7 hati organismeeukaryot (dalam hal ini hati tikus


15/23

Bagaimana menghitunghasil

Ames test ? Cumlah koloni bakteri yang tumbuh

meru$akan ukuran akti%itas mutagenik

($otensi dari senyawa yang digunakan &ngka ini biasanya mere$resentasikan 'umlah re%ertants (bakteri yang termutasi$er mikrogram of mutagen atau $er gramsam$el yang mengandung mutagen


16/23

K!eksi $ehada& hasil

A#es $es$ Pada umumnya mutasi s$ontan ter'adi $ada awal$embiakan bakteri dalam medium yang tidakmengandung histidin

=al ini $erlu di$erhitungkan sebelum mengu'i

senyawa kimia yang dianalisis Pada awal $engu'ian ditumbuhkan 32D selbakteri# maka setelah bebera$a waktu dihitung 'umlah bakteri yang tumbuh# dan angka inidigunakan untuk $engurangan 'umlah bakteriyang memang termutasi oleh senyawa kimia

)engan cawan $etri ter$isah# baru dilakukan u'imutagen dengan menggunakan senyawa kimiayang diu'i di dalam media yang ditambahkancam$uran en>im hati tikus


17/23

Biakan selan'utnya diinkubasi $ada suhu .4E,selama 5D 'am

Cumlah koloni yang terbentuk menun'ukkanre%ertans yang terbentuk yang sebanding dengan$otensi senyawa mutagen


18/23

Galu #u$an Salmonellatyphimurium im yang dimiliki mutan mengandung$roline sementara biakan induk mengandung

leucine


19/23

Ga#a u*i #u$a"en


20/23

*umlah koloni yang dihasilkansetara dengan besarnyaefisiensi mutagenmengembalikan sifat mutanke asalnya

uatu mutagen "

menghasilkan jumlahrevertans yang lebih tinggidari kontrol, berarti mutagen" adalah betul+betul mutagendan mungkin suatukarsinogen.

uatu mutagen B tidak

menghasilkan jumlah revetanslebih banyak dari kontrol,maka dapat dikatakan bahwasenyawa B bukanlah suatumutagen.


21/23

Me$!de lain un$uk u*i

#u$a"en Menggunakan mencit transgenik yangdisuntikkan dengan senyawa kimia(kandidat mutagen

)*& dari 'aringan tertentu diisolasi laludisisi$kan dalam bakteriofaga# laluditransformasikan ke dalam E.coli

E.coli ditumbuhkan dalam mediumtertentu# dan dihitung 'umlah koloni yangberubah warnanya


22/23


23/23

-# B$/-%$ '0$ B%$"!'0%-&0,

'0$%$ " 1&$'-#

uji mutagen s

Documents