uji kuantitatif protein kel 4
TRANSCRIPT
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
1/35
UJI KUANTITATIF
PROTEINAFIFA ZAHRA (3315106757)
ARINI KAMALIA HARIS (3315108570)
PENDIDIKAN KIMIA NON REGULER 2010
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
2/35
DATA PENGAMATANMETODE BIURET
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
3/35
Data Pengamatan
2 mL H2O + 8mL reagen
Biuret
Kocok & diamkan30 menit pada
suhu kamar
Larutanberwarna biru
a. Blanko
b. Sampel0,2 mL
larutansampel +
0,2 mLH2O + 8 mL
reagen
Biuret
Kocok &diamkan 30 menit
pada suhu
kamar
Larutanberwarna
biru
Ukurabsorbansi
pada =550 nm
Abs =0,003
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
4/35
c. Larutan Standar
0,6 mL
larutanBSA + 1,4
mL H2O + 8mL reagen
Biuret
Kocok &diamkan 30 menit
pada suhu
kamar
Larutanberwarna
biru
Ukurabsorbansi
pada =550 nm
Abs =0,223
0,2 mLlarutan
BSA + 1,8mL H2O + 8mL reagen
Biuret
Kocok &diamkan 30 menit
pada suhu
kamar
Larutanberwarna
biru
Ukurabsorbansi
pada =550 nm
Abs =0,175
Tabung 1
Tabung 2
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
5/35
1,4 mL
larutanBSA + 0,6
mL H2O + 8mL reagen
Biuret
Kocok &
diamkan 30 menit
pada suhu
kamar
Larutanberwarna
biru
Ukurabsorbansipada =550 nm
Abs =0,295
1 mLlarutan
BSA + 1 mLH2O + 8 mL
reagenBiuret
Kocok &diamkan 30 menit
pada suhu
kamar
Larutanberwarna
biru
Ukurabsorbansi
pada =550 nm
Abs =0,259
Tabung 3
Tabung 4
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
6/35
1,8 mLlarutan BSA
+ 0,2 mLH2O + 8 mL
reagen
Biuret
Kocok &diamkan 30 menit
pada suhu
kamar
Larutanberwarna
biru
Ukurabsorbansi
pada =550 nm
Abs =0,334
Tabung 5
Pembuatan Larutan Sampel
1 mL putihtelur
dalam labuukur 250
mL
H2Ohinggatandabatas
Larutantak
berwarna
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
7/35
PERHITUNGANMETODE BIURET
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
8/35
Perhitungan
Konsentrasi Larutan Standar
a. Tabung 1M1. V1= M2. V2
10000 ppm . 0,2 mL = M2. 10 mL
M2= 200 ppm
M1. V1= M2. V210000 ppm . 0,6 mL = M2. 10 mL
M2= 600 ppm
M1. V1= M2. V210000 ppm . 1 mL = M2 . 10 mL
M2
= 1000 ppm
b. Tabung 2
c. Tabung 3
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
9/35
d. Tabung 4
M1. V1= M2. V2
10000 ppm . 1,4 mL = M2 . 10 mL
M2= 1400 ppm
e. Tabung 5
M1. V1= M2. V2
10000 ppm . 1,8 mL = M2 . 10 mLM2= 1800 ppm
Kadar Protein dalam Sampel
Abs sampel = 0,003y = 0,0002x
0,003 = 0,0002x
x = 15 ppmsetelah pengenceran
Sebelum pengenceran:x . fp = 15 ppm .
= 3750 ppm
GRAFIK
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
10/35
y = 0.0002x + 0.0875
R = 0.8008
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.35
0.4
0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000
AxisTitle
Axis Title
Grafik Hubungan Antara
Konsentrasi dengan Absorbansi
Metode Biuret
Series1
Linear (Series1)
ppm Abs
0 0
200 0,175
600 0,223
1000 0,259
1400 0,295
1800 0,334
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
11/35
ANALISIS DATAMETODE BIURET
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
12/35
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
13/35
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
14/35
DATA PENGAMATANMETODE LOWRY
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
15/35
Larutan Standard
Standard 1
0,1 mL BSA (Bovin Serum Albumin) + 0,4 mL H2O + 5,0 mL reagent Lowry
Kocok dan diamkan selama 10 menit, segera tambahkan 0,5mL folin ciocalteu
Standard 2
0,2 mL BSA (Bovin Serum Albumin) + 0,3 mL H2O + 5,0 mL reagent Lowry
Kocok dan diamkan selama 10 menit, segera tambahkan 0,5mL folin ciocalteu
Standard 3
0,3 mL BSA (Bovin Serum Albumin) + 0,2 mL H2O + 5,0 mL reagent Lowry Kocok dan diamkan selama 10 menit, segera tambahkan 0,5mL folin ciocalteu
Standard 4
0,4 mL BSA (Bovin Serum Albumin) + 0,1 mL H2O + 5,0 mL reagent Lowry
Kocok dan diamkan selama 10 menit, segera tambahkan 0,5mL folin ciocalteu
Standard 5
0,5 mL BSA (Bovin Serum Albumin) + 0 mL H2O + 5,0 mL reagent Lowry
Kocok dan diamkan selama 10 menit, segera tambahkan 0,5mL folin ciocalteu
Warna biru kehijauan dengan intensitas warna std 1 < std 2 < std 3 < std 4 < std 5
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
16/35
Larutan Standard
Standard 1
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar
Ukur absorbansi pada = 700 nm (hasil 0,070 abs)
Standard 2
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar
Ukur absorbansi pada = 700 nm (hasil 0,162 abs)
Standard 3
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar Ukur absorbansi pada = 700 nm (hasil 0,387 abs)
Standard 4
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar
Ukur absorbansi pada = 700 nm (hasil 0,408 abs)
Standard 5
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar
Ukur absorbansi pada = 700 nm (hasil 0,463 abs)
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
17/35
Sampel dan Blanko
sampel
3 mL putih telur diencerkan hingga 250 mL
Sebanyak 0,2 mL larutan sampel + 0,3 mL H2O + 5,0 mL reagent Lowry
sampel
Kocok dan diamkan selama 10 menit, segera tambahkan 0,5mL folin ciocalteu
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar, ukur absorbansi pada = 700 nm
sampel Warna larutan biru kehijauan, nilai absorbansi 0,366 abs
BLANKO
0,5 mL H2O + 5,0 mL reagent Lowry
Kocok dan diamkan selama 10 menit, segera tambahkan 0,5mL folin ciocalteu
BLANKO
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar
Warna larutan biru
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
18/35
PERHITUNGANMETODE LOWRY
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
19/35
Larutan Standard Standard 1
M1 . V1 = M2 . V20,1 mL . 400 ppm = 6 mL . M2
M2 = 6,67 ppm
Standard 2
M1 . V1 = M2 . V2
0,2 mL . 400 ppm = 6 mL . M2
M2 = 13,33 ppm
Standard 3
M1 . V1 = M2 . V2
0,3 mL . 400 ppm = 6 mL . M2
M2 = 20 ppm
Standard 4
M1 . V1 = M2 . V20,4 mL . 400 ppm = 6 mL . M2
M2 = 26,67 ppm
Standard 5
M1 . V1 = M2 . V2
0,5 mL . 400 ppm = 6 mL . M2
M2 = 33,33 ppm
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
20/35
Grafik Larutan Standard
ppm Abs
0 0
6.67 0.07
13.33 0.162
20 0.387
26.67 0.408
33.33 0.463
y = 0.0152x - 0.0055
R = 0.9412
-0.1
0
0.1
0.2
0.30.4
0.5
0.6
0 10 20 30 40
Absorbansi(Ab
s)
ppm
Grafik Hubungan Antara Konsentrasi
dengan Absorbansi Metode Lowry
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
21/35
Konsentrasi Sampel
Absorbansi Sampel = 0,366 AbsPersamaan Garis
y = 0,0152 x
Konsentrasi protein sampel setelah pengenceran
y = 0,0152 x0,366 = 0,0152 . X
x = 24,07 ppm
Konsentrasi protein sampel sebelum pengenceran
konsentrasi = 24,07 ppm . Fp
= 24,07 ppm. 250 mL/3 mL
= 2005,83 ppm
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
22/35
ANALISIS DATAMETODE LOWRY
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
23/35
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
24/35
Bovine Serum Albumin
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
25/35
Reagent Lowry
Merupakan campuran dari:
1. Lowry A = 2% (w/v) Na2CO3 in 0.1 N NaOH 100.0 ml
2. Lowry B = 1 % (w/v) CuSO4 . 5 H2O 1.0 ml
3. Lowry C = 2% (w/v) Sodium tartrate 1.0 ml
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
26/35
reaksitirosin
d d
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
27/35
Larutan Standard
Standard 1
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar
Ukur absorbansi pada = 700 nm (hasil 0,070 abs)
Standard 2
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar
Ukur absorbansi pada = 700 nm (hasil 0,162 abs)
Standard 3
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar
Ukur absorbansi pada = 700 nm (hasil 0,387 abs)
Standard 4
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar
Ukur absorbansi pada = 700 nm (hasil 0,408 abs)
Standard 5
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar
Ukur absorbansi pada = 700 nm (hasil 0,463 abs)
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
28/35
Sampel dan Blanko
sampel
3 mL putih telur diencerkan hingga 250 mL
Sebanyak 0,2 mL larutan sampel + 0,3 mL H2O + 5,0 mL reagent Lowry
sampel
Kocok dan diamkan selama 10 menit, segera tambahkan 0,5mL folin ciocalteu
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar, ukur absorbansi pada = 700 nm
sampel Warna larutan kehijauan, nilai absorbansi 0,366 abs
BLANKO
0,5 mL H2O + 5,0 mL reagent Lowry
Kocok dan diamkan selama 10 menit, segera tambahkan 0,5mL folin ciocalteu
BLANKO
Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar
Warna larutan tidak berwarna
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
29/35
Konsentrasi protein sampel sebelum pengenceran
konsentrasi = 24,07 ppm . Fp
= 24,07 ppm. 250 mL/3 mL
= 2005,83 ppm
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
30/35
KESIMPULANMETODE LOWRY DAN METODE BIURET
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
31/35
KESIMPULAN
1. Uji kuantitatif dapat dilakukan dengan beberapa metode
diantaranya adalah metode biuret dan metode lowry
2. Metode lowry dan metode biuret memiliki kelebihan dankekurangan masing-masing, diantaranya
Metode Kelebihan kekurangan
LOWRY
- Lebih sensitif- Menggunakan
sedikit reagen
- Waktu cukuplama
- Prosedur kerjalebih rumit
BIURET
- Waktu yangdiperlukan sedikit
- Prosedur kerjatidak sulit
- Kurang sensitif- Menggunakan
banyak reagen
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
32/35
y = 0,0002 x
Persamaan
Garis
3750 ppm
Kadar
Protein
Kesimpulan Metode Biuret
Larutan biru
WarnaLarutan
Standar &Sampel 0,003
AbsorbansiSampel
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
33/35
y = 0,0152 x
Persamaan
Garis 2005,83ppm
Kadar
Protein
Kesimpulan Metode Lowry
LarutanKehijauan
WarnaLarutan
Standar &Sampel 0,366
AbsorbansiSampel
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
34/35
Daftar Pustaka
Fessenden, Fesenden. 2001. Kimia Organik Jilid II.Jakarta: Erlangga
Lehninger. 2003. Dasar-Dasar Biokimia. Jakarta :Erlangga
Poedjadi, Anna. 2001. Dasar-Dasar Bikimia. Jakarta: UI-Press
-
8/12/2019 Uji Kuantitatif Protein Kel 4
35/35
TERIMA KASIH