TRIPLE NEGATIVE BREAST TUMORS IN AFRICAN-AMERICAN AND HISPANIC/LATINA WOMEN ARE HIGH IN CD44⊕, LOW IN CD24⊕, AND HAVE LOSS OF PTEN

YANYUAN WU, MARIANA SARKISSYAN, YAHYA ELSHIMALI, JAYDUT V. VADGAMA

INTRODUÇÃO

• Portadoras de câncer de mama afroamericanas e latinas têm pior prognóstico que portadores de câncer de mama caucasianas

• A causa provável reside na expressão de receptores para esses 2 grupos populacionais:

• ER (Estrogen Receptor);

• PR (Progesterone Receptor);

• HER2 (Human Epidermal growth factor Receptor 2).

HR (Hormone Receptor)

TRIPLE NEGATIVE BREAST CANCER (TNBC)

• Câncer de mama triplo negativo corresponde a:

• ER⊖;

• PR⊖;

• HER2⊖.

• Possuem tratamento limitado, pois não respondem a:

• Tamoxifeno, voltado para HR⊕;

• Trastuzumabe, voltado para HER2⊕.

HR⊖

CANCER-STEM-CELL-LIKE CELLS (CSC)

• Células cancerígenas similares a células-tronco

• O fenótipo CSC é manifestado por uma maior presença de células CD44⊕ e CD24⊖: pior prognóstico e uso como novos biomarcadores

• TNBC tem sido repetidamente associado ao fenótipo CSC

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BIOMARCADORES TRADICIONAIS

• Há diversos biomarcadores da via Akt/PI3K, associado ao ciclo celular:

• PTEN (Phosphatase and TENsin homologue);

• pAkt (phosphorylated Akt);

• FOXO1 (Forkhead bOX protein O1a).

• Marcador de proliferação: Ki67

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NOVOS BIOMARCADORES

• Eixo do IGF (Insuline-like Growth Factor):

• IGF1 (Insuline-like Growth Factor 1);

• IGFBP3 (Insuline-like Growth Factor Binding Protein 3).

• CD44 [Cluster of Differentiation 44 (Indian blood group)]

• CD24 (Cluster of Differentiation 24)

EIXO DO IGF

• IGF1: fator de crescimento sistêmico que se liga a diversas proteínas ligantes, especialmente IGFBP3

• IGFBP3: principal proteína ligante da IGF-1 (atenção: ≠ receptor)

★ Cânceres de mama de pior prognóstico ⬆ níveis

séricos de IGF-1 e de IGFBP3 (∴ ⬇ quantidades

livres circulantes)

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OBJETIVOS

• Caracterizar diferenças entre subtipos de tumores entre pacientes afroamericanas e latinas

• Identificar potenciais biomarcadores associados com progressão tumoral em cada subtipo tumoral

• Determinar o prognóstico em pacientes com câncer de mama com diferente expressão de biomarcadores e subtipos de tumores

MÉTODOS

• n = 318, dos quais:

• 166 eram autodeclaradas afroamericanas;

• 152 eram autodeclaradas latinas.

• Definição de subtipos de tumor:

• HR⊕ e HER2⊕

• HR⊕ e HER2⊖

• HR⊖ e HER2⊕

• HR⊖ e HER2⊖

4 subtipos de tumor classificados por IHC (imuno-histoquímica)

MÉTODOS

• Padrões para cada subtipo de tumor:

• HR⊕: >5% de positividade nuclear

• HR⊖: <5% de positividade nuclear

• HER2⊕: alto, quando >20% de positividade nuclear

• HER2⊖: baixo, quando <20% de positividade nuclear

MÉTODOS

• Padrões para PTEN:

• PTEN⊕: >5% de positividade citoplasmática

• PTEN⊖: <5% de positividade citoplasmática

MÉTODOS

• Padrões para CD44, sitiado à membrana plasmática e ao citoplasma, para porcentagem de positividade:

• 0: negativo;

• 1: <10% de células positivas;

• 2: 11-50% de células positivas;

• 3: 51-80% de células positivas;

• 4: 80-100% de células positivas.

Porcentagem de positividade ≠ in-

tensidade de colo- ração (⊕, ⊕⊕, ⊕⊕⊕)

MÉTODOS

• Padrões para CD24, sitiado à membrana celular e ao núcleo, são os mesmos de CD44

• Score final: porcentagem de positividade x intensidade de coloração

COLORAÇÃO POR IHC

• Dos 318 blocos disponíveis, apenas 150 blocos, i.e., aqueles com >10% de células tumorais, foram selecionados

• Para CD44/CD24 (1º corte):

Tratamento com citrato de sódio a 95ºC

por 10min

Coloração dupla por IHC para CD44/CD24

com anticorpos anti-CD44 e anti-CD24

CD44: 60min em RT, detecção por Permanent Red

CD24: 30min em RT, detecção por diaminobenzideno (DAB)

COLORAÇÃO POR IHC

• Para PTEN (2º corte):

!

!

• Para FOXO1 e pAkt (3º corte): obtidas de outros estudos do mesmo grupo.

Tratamento com citrato de sódio a 95ºC

por 10min

Coloração dupla por IHC para PTEN com anticorpo anti-PTEN

60min em RT, detecção por

Vectastain Universal elite ABC kit e visua-

lizado por DAB

MÉTODOS

• A determinação de IGF1 e IGFBP3 ocorreu por radioimunoensaio (RIA).

• Análise estatística:

Curvas de sobrevida de Kaplan-Meier

Sobrevida livre de doença (DFS): proporção de pessoas com

câncer que atingem recidiva ou metástase

Risco relativo (RR)

Regressão de Cox: análises uni- e multi-variadas

ANOVA: comparação de variáveis quantitativas

Qui-quadrado: comparação de variáveis categóricasp-valor < 0,05 é

estatisticamente significativo

RESULTADOS

• Características demográficas

• O subtipo mais prevalente em ambas afroamericanas (49,4%) e latinas (48,7) foi o HR⊕HER2⊖;

• O segundo subtipo mais prevalente em ambas afroamericanas (35%) e latinas (28,3%) foi o TNBC (HR⊖HER2⊖).

RESULTADOS

• Expressão de CD44, CD24 e outros biomarcadores:

• CD44⊖: associado a HR⊕HER2⊖;

• CD44⊕CD24⊖: TNBC;

• IGF1: mulheres em pré-menopausa;

• IGFBP3: sem relações estatisticamente significativas

RESULTADOS

• Expressão de PTEN, pAkt e FOXO1:

• PTEN⊖: TNBC;

• pAkt⊕: CD24⊕;

• FOXO1⊖: HR⊖HER2⊕.

• DFS:

• TNBC e HER2⊕ têm DFS menor que outros subtipos em ambas afroamericanas e latinas;

• PTEN⊖ reduziu DFS em afroamericanas, mas não em latinas

DISCUSSÃO

• Os subtipos de câncer de mama HR⊖HER2⊕ e TNBC (associado ao subtipo CD44⊕CD24⊖, o fenótipo CSC) são muito comuns em afroamericanas e latinas

• PTEN⊖: TNBC em afroamericanas e latinas, com diminuição de DFS naquelas, mas não nestas.