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Transporte e Congelamento de
SêmenM.V. PhD. Adriana Pires Neves
Medicina Veterinária – URCAMPReprolab - UFRGS
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Conservação do Sêmen
Retirar a fração gel
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Filtragem
Através de uma gaze estéril ou filtros
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Após a diluição
Estocagem no próprio frasco
Diluidor - +5oC - Geladeira
Todas as células em contato
com o diluente
Tubos
Rotação
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Tipos de Estocagem
• Anaeróbica
• Aeróbica –temp ambiente (da Europa…)- INRA 96
• Sem diferença na fertilidade
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Temperatura Crítica
+20oC a + 5oC
Choque térmico
Danos à membrana do spz.
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Taxa de Resfriamento
• Até 20oC Rápido• 20oC até 8oCLento <0,3oC/min • 8oC até 5oC Rápido
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Transporte de Sêmen
Recuperação
•Temperatura até destino – próxima a +5oC
•Vários tipos comerciais de containers
•Permanentes ou descartáveis (ambiente)
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Tipos de Transporte
•Boa comunicação entre as bases
•Identificação do sêmen
•Transporte aéreo ou rodoviário – prós e contras
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Sêmen Congelado
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Vantagens
Banco genético
Animais em campanha
esportiva
Mercado global
Menos transporte de
animais e conseqüente risco
Controle sanitário
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Desvantagens
Má congelabilidade
Menores taxas de fertilidade
Menor tempo de vida do spz
Maior custo da IA
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Passos para congelar
Aumento de concentração•Diluição em solução crioprotetora•Envasamento•Congelamento•Descongelamento•Inseminação
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Aumento de Concentração
Coleta Fracionada – 10% do plasma seminal
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Centrifugação <2% plasma
•Concentrações <300x106esp.•Diluição 1+2
–EDTA – Glicose
•Centrifugação–700 a 1000g/5min
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Centrifugação
• Retirar o sobrenadante em um único movimento
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Proteger durante a centrifugação, curva de resfriamento e descongelamento
Diluente de Martin
Diluição
•Lactose 11% 50 ml•EDTA – glicose 25 ml•Gema 25 ml•Glicerol 5%
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Diluente INRA 82
– Glicose 5g– Lactose 300mg– Rafinose 300mg– Citrato Trisód. dihid. 60mg– Citrato K 82mg– Hepes 952mg– Água 100ml– Leite UHT desn. 100ml– Penicilina 1UI/ml– Gentamicina 0,1g/ml
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Outros Diluentes
• Vidament et al. 2002– Inra 82 + 2% gema + 3% glicerol– Inra 82 + 2% gema + 2% glicerol– Inra 82 + 2% gema + 2% Dimetil
formamida• Papa et al. 2002
– Inra 82 + 5% Dimetil formamida
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Envasamento
Pellets
Macrotubos 4 ml
Palhetas 0,5ml
Palhetas 0,25ml
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Envasamento
Palhetas e Macrotubos– 50x106 espermatozóides/ml
• Pellets– Diluição 1+2
• Congelamento
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Congelamento
• Palhetas e Macrotubos
• 20 minutos a 4 cm do espelho de N2
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Congelamento
•Velocidade de congelamento•+20oC a +5oC =
–5oC/min•+5oC a -15oC =
–10oC/min•-15oC a –150oC =
–25oC/min
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Congelamento
Deposição em Nitrogênio Líquido
(-196oC)
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Descongelamento
Pellets–37oC leite desnatado•Palhetas
–37oC /30s•Macrotubos–50oC 40s
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Dose Inseminante•Até 1980
–200x106 espermatozóides
•Após 1980
–400 a 500x106
espermatozóides
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Inseminação
•Controle folicular rigoroso- 6 em 6 h•IDEAL:-2h antes ou após a ovulação•Possível-12 h antes ou 6hapós a ovulação
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Inseminação intracornual profunda
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Inseminação intracornual profunda
•Endoscopia
•Pipeta
•0,2 a 0,02ml
•5x106 spz
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Muito obrigada!!