tipos de siembra

MICROBIOLOGIA

ALUMNOS

– PORTUGUEZ BAZALAR ANA – MARCOS SANTOS WILIAMS

DOCENTE

2015 - 1

INTRODUCCION

Las bacterias se cultivan en el laboratorio en materiales nutritivos denominados medios de cultivo, cuyos componentes son muy variados. La elección del medio se basa en el propósito del estudio.

El material que se inocula en el medio se denomina inocuo. Cuando se inocula un medio como agar nutritivo u otros medios con agar en placas Petri, por el método de siembra por estría cruzada en placa, las células quedan separadas individualmente.

Durante la incubación, las células microbianas individuales se reproducen tan rápidamente que en un tiempo de 18 a 24 horas producen masas visibles a simple vista, denominadas colonias. Cada colonia que se observe diferente, presumiblemente es un cultivo puro de una sola clase de bacterias. Si dos células microbianas procedentes del inocuo original quedan muy cerca una de la otra sobre el medio de agar, las colonias que resultan pueden quedar mezcladas o muy juntas. La siembra por estría permite aislar las bacterias que dan lugar a colonias separadas y posteriormente, transfiriendo una sola colonia a un medio nuevo, se permite el desarrollo de un cultivo puro bacteriano.

OBJETIVOS

- Aprender aplicar diferentes tipos de técnicas de siembra

- Comprobar la utilidad que tienen los medios de cultivos: usos generales, diferenciales y selectivos.

- Aprender a trabajar en condiciones de asepsia, es decir, en un ambiente libre de contaminación microbiana.

- Aprender mediante el uso de las técnicas tradicionales de laboratorio a aislar y cultivar microorganismos en medios sólidos y líquidos.

Materiales

Placas Petri tubos de ensayo

Gradilla mechero de bunsen

Asa de Drigalsky Asa de koller

Pipetas Papel toalla

Papel kraft Autoclave

FUNDAMENTO TEORICO

Métodos Generales:

1) Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa de Koller cargada con el material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.

-          Medio de cultivo: Liquido-          Instrumento: Asa de Koller-          Finalidad: poner la bacteria en suspensión.

2) Siembra por estrías en superficie: Se siembra el material en la superficie del agar inclinado en un tubo de ensayo, allí se extiende por toda la superficie con el asa de Koller, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo estrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte más profunda de la superficie inclinada y se termina la estría en la parte más cerca de la boca del tubo.

-          Medio de cultivo: agar base inclinado-          Instrumento: asa de Koller

3) Siembra por estría por agotamiento: Con éste procedimiento se puede conseguir una buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para ello se funde el medio de cultivo, se vuelca en la placa Petri y se deja solidificar. Con el asa de Koller previamente esterilizada se toma material de un cultivo heterogéneo y se descarga sobre la superficie del medio formando estrías. Esto puede realizarse de varias formas:

a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las estrías. Cuando se quiere obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de Petri, para lo cual se repite la operación sin tomar con el asa de Koller de nuevo el material.

b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una estría luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa; en el último cuadrante aparecerán las colonias aisladas.

c- El inóculo se extiende sobre una pequeña zona de la placa, próxima al borde, se esteriliza el asa y se traza otra estría a partir del depósito y así sucesivamente.

-          Medio de cultivo: solido en placa de Petri-          Instrumento. Asa de Koller-          Finalidad. Obtener colonias aisladas

4) Por picadura o punción: Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio semisólido. Introducir la aguja hasta el fondo, formando un canal de punción, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este método se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.

-          Medio de cultivo: Semisólido-          Instrumento: aguja bacteriológica-          Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias

5) Siembra en TSI: (Por picadura y estrías en superficie): el TSI (Triple Sugar Iron) es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el rojo fenol. En este medio sembraremos por picadura y estrías en superficie, como ya conocemos, para estudiar los cambios que ocurrirán en superficie y profundidad. A lo largo del canal se desarrollan los microorganismos, y según lo hagan en la parte superior o inferior del tubo, estarán indicando su comportamiento frente a los azucares, los cambios indican lo siguiente:

6) Estría única: depositamos la muestra lo más alejado de nosotros y realizamos la siembra en forma de zig-zag. De esta forma vamos descargando la muestra del asa. Es importante no volver a repasar el trozo de medio de cultivo que ya hemos sembrado. Para conseguir que al final de la estría tengamos colonias aisladas es importante que al principio hagamos la estría más junta y que la cantidad de muestra tomada en el asa de Koller sea la adecuada.

7) Siembra en superficie (diseminación): se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie 0,1ml de la muestra del inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos.

8) siembra por difusión (inclusión o vertido en placa): se coloca una alícuota de la muestra en una placa Petri y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo girando a la derecha y a la izquierda, previamente fundido. Este método se utiliza para microorganismos aerobios.

RESULTADOS

En los cultivos líquidos no tiene lugar la formación de colonias, por lo tanto se examinará la existencia de enturbiamiento más o menos intenso, la formación de una película o velo sobre la superficie, la aparición de sedimento en el fondo del tubo, etc. La utilización de medios de cultivo líquidos permite la obtención de una población microbiana grande, con un elevado número de microorganismos, para ser utilizados posteriormente.

En medio sólido (agar inclinado) se observará el aspecto general del medio y la aparición de crecimiento sobre su superficie. Este tipo de siembra permite el cultivo de microorganismos aerobios o anaerobios facultativos. Además, se utiliza para almacenar cultivos durante cortos períodos de tiempo, a temperaturas de 4ºC.

En medio semisólido se podrá comprobar si el microorganismo es o no móvil, ya que en el primer caso se observará que el crecimiento difunde alrededor de la zona donde se hizo la picadura, detectándose turbidez. Por eso es tan importante que, cuando se inocula el medio de cultivo, no se distorsione el agar y se vuelva a sacar el hilo por el mismo sitio de inoculación. Los microorganismos inmóviles crecerán únicamente a lo largo de la picadura.Este tipo de siembra en picadura sirve, también, como otro de método de conservación de microorganismos anaerobios facultativos

CONCLUSIÓN

Esta práctica, se dividió en distintas sesiones, nos permitió conocer y aplicar de manera favorable, los procesos básicos para el estudio de microorganismos en el laboratorio, tales como la esterilización, medios de cultivo, siembra, los cuales son la base para realizar los pasos prácticos posteriores.

También es necesario destacar que pudimos aprender sobre la seguridad en el laboratorio y las medidas necesarias para evitar riesgos, los cuales son muy importantes cuando se trabaja con microorganismos patógenos, ya que una incorrecta manipulación puede llevar a un contagio del manipulador o de quienes le rodean.

Hemos podido observar los diferentes tipos de siembra, del mismo modo pudimos reconocer las características de los microorganismos que se desarrollan tanto el cambio de color del cultivo como las precipitaciones y otros.

REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

LIBROS

- Madigan, M. T., J. M. Martinko y J. Parker. 2003. Brock. Biología de los microorganismos. 10ª Ed. Prentice Hall Iberia. España.

- Ramírez-Gama, R. M., B. Luna Millán, O. Velásquez Madrazo, L. Vierna García, A. Mejía Chávez, G. Tsuzuki Reyes, L. Hernández Gómez, I. Müggenburg, A. Camacho Cruz y M del C. Urzúa Hernández. 2006. Manual de Prácticas de Microbiología General. 5ª edición. Facultad de Química, UNAM. México.

- Tortora Gerard J., Fonke Beidell R. y Case Christine L. 1995. Introducción a la Microbiología. 9na. ed. The Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. 801 pp.

- Vullo, D., M. Wachsman, L. Alche. 2000. Microbiología en Práctica. Manual de laboratorio para la enseñanza de Microbiología básica y aplicada. 1ª edición. Atlante S. R. L. Argentina

PAGINAS WEBS

- http://html.rincondelvago.com/microbiologia_21.html

- https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo- en-un-laboratorio-de-microbiologc3ada.pdf

- https://www.google.com.pe/url? sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=4&cad=rja&uact=8&ved=0CC0QFjAD&url=http%3A%2F%2Fwww2.cbm.uam.es%2Fjalopez%2FCLASES2002%2FCLASES0203%2FGUIONPRACTICAS0809.doc&ei=zV1SVa2VHsWaNpSpgdgP&usg=AFQjCNGqyKgYuk1ftSoYOmYAru2AWxjHzA&sig2=ayar5394k2b3gAhQrlAhiw

- http://elblogdeadepi.blogspot.com/p/microbiologia-bacteriologia-medios- de.html