topical treatment with liposomes containing t4 endonuclease v protects human skin in vivo from...

8
Topical Treatment with Liposomes Containing T4 Endonuclease V Protects Human Skin In Vivo from Ultraviolet-Induced Upregulation of Interleukin-10 and Tumor Necrosis Factor-a Peter Wolf, Harald Maier,* Robert R. Mu Èllegger, Caroline A. Chadwick,² Rainer Hofmann-Wellenhof, H. Peter Soyer, Angelika Hofer, Josef Smolle, Michael Horn, Lorenzo Cerroni, Daniel Yarosh,³ Jonathan Klein,³ Corazon Bucana,§ Kenneth Dunner Jr,§ Christopher S. Potten,² Herbert Ho È nigsmann,* Helmut Kerl, and Margaret L. Kripke§ Department of Dermatology, Karl Franzens University, Graz, Austria; *Division of Special and Environmental Dermatology, Department of Dermatology, University of Vienna, Vienna, Austria; ²CRC Epithelial Biology Group, Paterson Institute for Cancer Research, Christie Hospital (NHS) Trust, Manchester, U.K.; ³Applied Genetics Inc. Dermatics, Freeport, New York, New York, U.S.A.; §Department of Immunology, The University of Texas MD Anderson Cancer Center, Houston, Texas, U.S.A. Exposing human skin to ultraviolet radiation causes DNA damage, sunburn, immune alterations, and eventually, skin cancer. We wished to determine whether liposomes containing a DNA repair enzyme could prevent any of the acute effects of irradiation when applied after ultraviolet exposure. Fifteen human patients with a prior history of skin cancer were exposed to two minimal erythema doses of ultraviolet radiation on their buttock skin. Liposomes containing T4 endonuclease V or heat- inactivated enzyme were applied immediately and at 2, 4, and 5h after ultraviolet irradiation. Transmission electron microscopy after anti-T4 endonuclease V-staining and immunogold labeling on biopsies taken at 6 h after ultraviolet exposure revealed that the enzyme was present within cells in the skin. Immunohistochemical DNA damage studies suggested a trend toward improved DNA repair at the active T4 endonuclease V liposome- treated test sites. Although the active T4 endo- nuclease V liposomes did not signi®cantly affect the ultraviolet-induced erythema response and micro- scopic sunburn cell formation, they nearly com- pletely prevented ultraviolet-induced upregulation of interleukin-10 and tumor necrosis factor-a RNA message and of interleukin-10 protein. These studies demonstrate that liposomes can be used for topical intracellular delivery of small proteins to human skin and suggest that liposomes containing DNA repair enzymes may provide a new avenue for photo- protection against some forms of ultraviolet-induced skin damage. Key words: cyclobutane pyrimidine dimers/ cytokines/DNA damage/DNA repair enzyme/photoprotec- tion. J Invest Dermatol 114:149±156, 2000 E xposure to solar ultraviolet (UV) radiation is the main environmental factor linked to the formation of skin cancers, which are the most common cancers in humans (Silberberg and Lubera, 1988). Wavelengths particularly in the UVB (280±320 nm) range damage DNA in the cells of human skin, and unrepaired UV-induced lesions in DNA, such as cyclobutane pyrimidine dimers (CPD), can give rise to mutations involved in skin tumorigenesis (Ananthaswamy and Pierceall, 1990). The importance of an effective DNA repair mechanism in inhibiting skin cancer development is best illustrated by the genetic disease xeroderma pigmentosum (XP), in which a defect in DNA repair is associated with the development of multiple skin cancers early in life, at a rate several thousand-fold greater than that in the normal population (Cleaver and Bootsma, 1975; Kraemer et al, 1994). In addition, UV-induced DNA damage is the initiating event for some forms of UV-induced immune suppression (Applegate et al, 1989; Kripke et al, 1992; Wolf et al, 1995), which contributes to skin cancer formation in rodents (Kripke and Fisher, 1976; Fisher and Kripke, 1982) and probably also in humans (Streilein et al, 1994a, b). In the normal population, overloading DNA repair mechanisms by excessive sunlight exposure and a low DNA repair capacity may also be potential risk factors for the development of skin cancer (Lambert et al, 1976; Munch-Petersen et al, 1985; Thielmann et al, 1987; Alcalay et al, 1990; Wei et al, 1994, 1995; Grossman and Wei, 1995). Particularly, Wei et al (1994, 1995) have recently reported epidemiologic evidence comparing basal cell carcinoma patients with normal subjects that impaired DNA repair may be a susceptibility factor for sunlight-induced skin cancer in the general population. In the cascade of events that occur as a consequence of DNA damage, the production of immunomodulatory cytokines from Manuscript received March 16, 1999; revised May 27, 1999; accepted for publication September 21, 1999. Reprint requests to: Dr. Peter Wolf, Department of Dermatology, University of Graz, Auenbruggerplatz 8, Graz 8036, Austria. Email: [email protected] Abbreviations: CPD, cyclobutane pyrimidine dimer; CTTD, cyclo- butane-type thymine dimer; SBC, sunburn cell; T4N5 liposomes, T4 endonuclease V-containing liposomes; XP, xeroderma pigmentosum. 0022-202X/00/$15.00 ´ Copyright # 2000 by The Society for Investigative Dermatology, Inc. 149

Upload: margaret-l

Post on 06-Jul-2016

212 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

������� ����� �� �������� ��������� ������������ � ����� ����� ���� �� ���� ������������� ����� ���������� �� ��������!" �������� #������ $������

����� ���� ����� ����� ������ �� ��������� �������� �� ��������� ������ ����������������� ����� ����� �������� ���� �!�� ������ ������ ��� "����#� ������� $����� %���!�� ������� &����� ����#�� '������ &������ $����� �� ����!��(��� �� ������� ������ �����!���������� &��� ��� ������� "� &��(���$�(������� �� $���������� &��� )���#��! *��+��!��� ,��# ��!����- �$�+�!��� �� �(����� ��� .�+���������� $���������� $�(������� ��

$���������� *��+��!��� �� /����� /����� ��!����- ���� .(�������� '������ ,���( �����!�� 0�!������ ��� ������ ��!����� ����!��� �!(����

12�3 4��!� �����!��� *�&�- ��((���� ,������! 0��� $�������! )���(��� 2�� %��� 2�� %��� *�����- �$�(������� �� 0���������

4�� *��+��!��� �� 4�5�! $ �����!�� ������ ������ ��!��� 4�5�! *�����

�%������ ����� ���� � �������� �������� �����&#' �����( ���)���( ����� ��������( ���������*( ���� �����+ , ���� � ����� ��� �������� ��������� � &#' ����� �-*������ ���� ��* �� � ��� ���� �� ���������� �� ������ ��� �������� %�����+ $�������� ����� �� � ����� �����* �� ���� ����� � %���� � � ������� �*��� ���� ���������� �������� �� ��� )���� ����+�������� ��������� �� ��������� � �� ����������� �-*� � ������ �������* ��� �.( �( ��� / � ��� �������� ����������+������������ ����� ���������* ��� ��������������� ��������� ��� ���������� ��)������ )������ ��� � 0 � ��� �������� %���������� �� � �-*� �� ���� ���� ������ � ����+ ���������������� &#' �����

����� ������ � ��� � ��� ������� &#'����� � � ���� �� ��������� � ����������� � ���+ '������ � ���� �� ���������� � �������� ��� �� �����1����* ���� ���������������� �*��� ������ ��� ������������ ���)��� ��� ��������( �* ����* �������* ����� ��������������� ���������� �����������!" ��� ���� ������� ������� 2#'����� ��� �� ���������!" �����+ ��� ������������ �� �������� ��� ) ��� ��� ����������������� �����* �� ����� ������ � ����� ������� ����� �� �������� ��������� &#' ������-*�� ��* ������ � � ���� ��� ������������ ������ ��� ����� �� ������������������� �����+ �� ��� � ���������� ��������� ����� �������� ���� ���������� ������ ���������������������� ! ���� � �������� ""#�"#$%"&'( )***

.5(�!��� �� !���� �����+����� 1*/3 ��������� �! ��� ������+���������� ������ ������ �� ��� ��������� �� !���������! ����� ��� ��� ��!� ������ ������! �������! 1���������� ��� "����� 67883� ��+�������!(����������� �� ��� */' 198:;<9: ��3 ����� ������

$2� �� ��� ����! �� ����� !��� ��� ����(����� */����������!���! �� $2� !��� �! ����������� (��������� �����! 1��$3��� ��+� ��!� �� ��������! ��+��+�� �� !��� ����������!�!1�������!���� ��� ��������� 677:3� 4�� ��(������� �� ���������+� $2� ��(��� �������!� �� ���������� !��� ��������+���(���� �! ��!� ����!������ �� ��� ������� ��!��!� 5��������(�������!�� 1=�3 �� ����� � ������ �� $2� ��(��� �! �!!�������

���� ��� ��+���(���� �� �����(�� !��� ������! ����� �� ���� �� � ����!�+���� ����!�������� ������� ���� ���� �� ��� ������ (�(�������1����+�� ��� '���!�� 67>?- &������ �� �� 677@3� 0� ��������*/�������� $2� ������ �! ��� ���������� �+��� ��� !��� ����! ��*/�������� ������ !�((��!!��� 1�((������ �� �� 6787- &��(���� �� 6779- ���� �� �� 677?3 ����� ����������! �� !��� ��������������� �� ������! 1&��(�� ��� )�!��� 67>A- )�!��� ��� &��(��67893 ��� (������� ��!� �� �����! 1��������� �� �� 677@� �3�

0� ��� ������ (�(������� �+��������� $2� ��(��� �������!�!�� �5��!!�+� !������� �5(�!��� ��� � ��� $2� ��(��� ��(����� �����!� �� (�������� ��!� ������! ��� ��� ��+���(���� �� !��� ������1"������ �� �� 67>A- ����������!�� �� �� 678?- 4�������� �� ��678>- ������� �� �� 677:- ��� �� �� 677@ 677?- ,��!!��� ��� ���677?3� ������������ ��� �� �� 1677@ 677?3 ��+� �������� ��(������(����������� �+������ ���(����� ��!�� ���� ��������� (������!���� ������ !��B���! ���� ��(����� $2� ��(��� ��� �� �!�!��(�������� ������ ��� !��������������� !��� ������ �� ��� �������(�(��������

0� ��� ��!���� �� �+���! ���� ����� �! � ���!�C����� �� $2������� ��� (��������� �� ���������������� ��������! ����

���!���(� �����+�� ���� 6A 6777- ��+�!�� �� 9> 6777- ����(������ (���������� ��(������ 96 6777�

��(���� ��C��!�! ��D $�� ����� ���� $�(������� �� $����������*��+��!��� �� ,��# �����������(���# 8 ,��# 8:<A ��!����� .����D(���������E��������#������

�����+������!D ��$ ����������� (��������� �����- �44$ ���������������(� ������� �����- �'� !������ ����- 4@2? ��(�!���! 4@����������!� /����������� ��(�!���!- =� 5�������� (�������!���

::99�9:9=F::FG6?�:: H ��(������ � 9::: �� 4�� ������� ��� 0�+�!������+� $���������� 0���

!�3

������������! ��� ����� ������ ����! �� ��� !��� (���! � ������� ���� ��*/�������� ������ !�((��!!��� 1/������ ��� ��������� 677:-��+�! ��� *������ 6779- 2�!������ �� �� 677A3� 4���� �����!�!������ 142)3�� ��� ����������� 10"3�6: ��� ��+��+�� �� */�������� !�((��!!��� �� ������� ������� ��� ����������(� ��(���!��!���+��� ��!(��!�! ��!(����+��� 1/������ ��� ��������� 677:-%�!������ ��� ��������� 677:- ��+�! ��� *������ 6779- 2�!�������� �� 677A3� '��� ��������! ��+� ���� !���� �� �� �(��������� ��������������! �� ��!(��!� �� */�������� $2� ������� 4��!������!��� ��! ��!�� �� !�����! �� ����� ��(�!���! ���������� �$2� ��(��� ��#��� I4@ ����������!� / 14@2? ��(�!���!3J �����!�� �� ������ ��$ ��� �������� ��������� �� ������� ��� �������� !��� �� ���� 12�!������ �� �� 677A- &������ �� �� 67783� 4��!��(�!���! ���������� $2� ��(��� ��#���! (���������� ��(��!��� ���+�� �((����� ��� (��������� �����!� ��� ������� ������! �� !��������5(�!��� ���� ��!��� ���� */�������� $2� ������� 0� �����((�������� �� 4@2? ��(�!���! �� */����������� !��� (������!�����!� */�������� !�((��!!��� �� ������� ������� ��!(��!�! �������������(� ��(��!��!���+��� ��!(��!�! �� ������� �������! 1&��(���� �� 6779- ���� �� �� 677<� 677?3 ��� ������! ��� ��������� ��!��� ������! 1%���!� �� �� 6779- '��� �� �� 677?3� 0� ���! !���� ��!��� �� !��� ������ (������! ��� ��� ����K� ���� ���� ������!��B���! ���� ��(���� $2� ��(��� ��#��� ��������� ���� 4@2?��(�!���! �((���� ����� */ �5(�!��� (�������� ����� !��� �������+�� 4@ ����������!� ���� ������������! ��� �(�������"��������! ����!� 0�(�������� �� �����!����� ���� 4@2? ��(�!������������ (��+���! */�������� �(���������� �� ��� �������!�((��!!�+� ��������! 0"�6: ��� 42)�� ����� ������!�����! ������� ��� */�������� �������� 1���� !������ ��������3 ������!�����������

�4.�0�"� �2$ .4L$�

����� ��� �������� ���* ����� 4�� �������� !���� (������� ��!�((��+�� �� ��� .������ ��������� �� ��� &��� )���#��! *��+��!��� ,��#��!����� )������ (������! ���� � ��!���� �� �� ���!� ��� !��� ������ ������������ �� ��� !���� ����� ��+��� ����� �������� ���!���� 4�� ���� ��� ����� (������! 1��� ����� ��� 6< ���3 ��! A<�? � 1����� <A;>7 �3� 4�� !�����(� �� ��� (������! ��������� �� )��#(������M! ���!!�K������ ��! �! ������!D����� !��� ��(� 0- ���� !��� ��(� 00- ��� ����� !��� ��(� 000� ��5 (������! ���� ��!���� �� ��!�� ���� ��������� K+� �� !C�����! ���� ��������� ��� ������ ����� 2��� �� ��� 6? (������! ��� ��� �����(�� !��� ������! ��������������� !���� ������!�! ��� ����� �� ���� ��!� ��������! ������������������ �� ��� ���� �� ���! !���� ��� (������! ���� ���� �� !��� ��������� !���� ������!�!�

4�� !��! �� ��!� �������� ���!�!���� �� ����+� ��� ������+� ��(�!��������� ���� ���� � ����� ����� � ��� ' ���� (��(���� �� �((����,������! 0��� $�������! 1)���(��� 2%3 ��� ���� (������� .��� (������ ��!�������� �!!����� � !���� ������ ����� �����!(����� �� ��� ������!�������� ����� ������� !��� �����+�� ��� ����+� 4@2? �� ������+� 4@2?��(�!��� ������� .��� (������ �����+�� ��� ����+����� ������� ����������!�! 1 .$3 �� */ ��������� ������� � ���(���� �� ���� !���! �� 9� 9 ���������� ���� ��� �� ��� ���� ������� 1!���! 6 ��� 93 ��� ��� �� ��� ������������ 1!���! < ��� @3 ������� �� ���!� 9 �� ���+� ��� !��� �� .$ ��!�����4�� ��������� !��� ��! !������� ���� ��� ����� !������ 0���������� �����*/ �5(�!��� ��� ��!� ������ � ��! �((���� ��������� 1@:;6::�� (�� ��93 ��� ������ !��� ���!����� ���� !����� �� ��� */����������� !��� 9 ��� ��� ��!������� ' ��! �((���� �� � ��� ���!����� ������ !��� �� ��� */�����������!��� <� ������ 6: ��� ����� */ �5(�!��� � @ �� (���� ���(!� ��! ���������� ����� ���!���!�� ���� 6N ��������� ������������� ���� ��� */����������� !��� @ ���� ��� ���� ���� ���������� �� 9 @ ��� ? � ����� */�5(�!��� �� ���((���� ��� ����� ��!� ��(�!��� (��(�������!� �� A � (�!��*/ �5(�!��� @ �� (���� ���(!��! ���� �������� ����� ����� ���!���!������ ��� ����� ��������� */����������� ��!� !���! 16;<3 ��� ���� �������������� ��� ��(�!������������� ���� 1!��� ?3 �� ��� ���� !���� ������(!��! ���� !����� ���� ���� 6 �� !���(! ������ K5����� ���F�� �������(����!!����

��#/ �������� 4@2? ��(�!���! ���� (��(���� �� ����(!�������(���K�� ����������� 4@ ����������!� / �� ��(�!���! ���(�!�� ��(��!(�������������� (��!(������������������� ����� ���� ��� �����!���������!�������� 19D9D6D? ����� �����3� 4�� ��#��� �� ��� ��(�!���! ��!C�����K�� �� ��#���������� ������!������ �!!�� ��� �!!���� ��� ����+����!��� */����������� $2� �! � !��!����� 1%���!� �� �� 67793� 4�� 4@2?��(�!���! ���� !�!(����� �� � ������ ����� ���!�!��� �� 6N �(�� �� 9:6

�������� 1�����5 0������������ 0��� $����� 2 3 �� (��!(���� ��������!����� �� � ������������� �� 6�� (�� �� �� 4@ ����������!� / ����(!�������� ��(�!���!� 4�� (������ ��(�!��� (��(������� ��! ���������� ����������5��(� ���� 4@ ����������!� / ��! ������+���� �� ������� ����������(!��������

�� ����� */ ��������� ��! (��+���� �� � �����(��!!��� ����� ���������( �����!�� 69:: 1�����! ���#���!��� ,������ ,�� ,�+��!����,������3 ����� ��! ��! ����� ������� �� 97< �� ��� ����+��! ?�?N �� ��!����� ������ ������ ��� */' 198:;<9: ��3 ���7@�?N ������ ���*/� 1<9:;@:: ��3 ��+������� ������ ��������� �� ��� �0. ������ !(������ ��� */�������� �������� �� ����� !��� 7?�?N �� ��� ������+� ��������+� ����������������+���!! �� � �����!�� 69:: ���( ��!���! ���� ��! */' ��� @�?N ���� ��!*/� (������ �� ��� ���!!��� !(������� 4�� ���� */' ���������� �� <: ����!����� ���� ��� ����� !����� ��! :�?A �� �!!����� ������������� ����� ��97> �� �! ���������� �� �� 0" 6>:: ���������� �C��((�� ���� �� �.$ 9@:�������� K���� ���� �� 2� 97> ������������ K���� ��� � �?<?9 C����# �����!��10������������ "���� 2������(��� �3�

4������ �*��� ��� .��� (������ ��! ��!��� �� � !������� */����������� (������� ��� ��� ����+����� .$� ��5 9� 9 �� ����! �� ����������� �������! ���� */����������� ���� ������ ��!�! �� */ �� @:N���������!� .������� ��! !����� 9@ � ����� */ �5(�!��� ��� ��� .$��! ��K��� �! ��� ����!� ��!� ��C����� �� (������ �������� ���� � !���(�������

25���� ���������* .������� ��� (����������� �� ��� ��!� !���!���� ��������� �� ��O������� !(�����!��(� 1$����� �� �� 678@3 �!��� ���$�����(���������� 1�����5 4��������� ��!��� $������3� 4��!�������� �((�����! (��+���! � �������� �� � ������+� ��������F������������5 ��!�� �� ��� ��!������� ����������!���! �� ��� ����� !���� 4����������F������������5 ��! ���!���� �� ��� ��!� !���! ������ */ �5(�!������ �� 9 @ ��� A � ����� �5(�!���� �� ���� ���� (���� K+� !�(��������!�������! ���� (�������� (�� ��!� !��� ��� ��� �+����� �� ��� ��!���!��! �!�� ��� ���� �����!�!�

�������* �(������! ���� K5�� �� @N �������� �������� (����!!����������� !�������� �� @�� ��� !������ ���� ������5���� ��� ��!��� 4��!(������! ���� �5������ �����!��(������ �� ��� !��� ��!��+�� 1�����3 ��� ������� ��!���� ��� ���!! ��� !(���K� ��!��(��������� ����������!� 4��(��!���� �� �(������� !(�����!�! ������ ����� ��� ������ ����������K������ ��! ����� �� � !���� ���� : �� @ �! ������!D : ����- 6 �������- 9��������- < ������- ��� @ �5���!�+�� ������� ����! 1�'�3 ����! ������K��� �! ��!���(����� ����! ���� (������� ������ ��� ���� ������� �� ������������������ �(������! �� ������ �����(���� K���! 1@::�3� 4����� K���!���� �5������ (�� ��������� !��� ��� ��� (��!���� �� �'�� �����! �����5(��!!�� �! ��� ����� �. ������ �� �'� (�� ���������� ������ ���(������!�

������ ���������* 4��! ��! (�������� ��������� �� ��� (���������� ���!!�� �� �� 1677:3� 0��������� �������� ��! ���� �� !�C����������������� �� ����! ���� ��� ��������� �������!D ?:�� (�� �� �� ��K����(���K�� ������ �����4@ ����������!� / �������� 1�((���� ,������! 0���$�������!3 ��� 9 � �� ���� ���(������� ��� 6D6: �������� �� ����(�������� ����������� �������� 16? �� ����3 1����!��� ��������� �����! 0"3��� 6 �� ����� ���� !��( ��� ����! ���� ��!��� ���� 4��!��������� !��������!�� ���� ��!������ ����� !�+���� ����! ����� ��� ��������!������ ���������� ������� ��� ���� ������� �� �� "&' �����!������ 1"���� $������� 0"3�4�� !��(��! ���� �5������ �� � .L" 69::�.= ����!��!!��� �������������!��(� �� 8: �/�

���������������� ������� ��� ������ ���� ����*��� �����& 4�!!�� !���(! K5�� ��� 9@ � �� @N �������� ��� ���� ����!������ ��� >:N ������� !������� ���� �!�� ��� ��� �44$ 1��������������(�������� �����3 �!!�� �!��� 4$ �6 �������� 1 �#��� �� �� 67763 ��� ���$�!��+��� ��������� ���(�����#�� ����� �����!�! !�!��� 1'�����$�����!�� "����� 4�� 2���������!3 �! (��+���!�� ��!������ 1�������� �� 677<- �������� �� �� 677?- %���� �� �� 677A3� 0��������!���������� !������� ���� 4$ �6 �������� ��! (�������� �� <���������� ��������!������ !������!� 4$ �6 �������� ��! ���� ����� �� ��!(���K� ��� ��������������(� ������� 1443 �����! ��� ���! ��� �������#�����!��� ���������� �����! �� �4 �� 4� 1 �#��� �� �� 67763� 4�������� �� !(���K� �������� ������� ��! +�!����#�� �� ���������!���������� �����!��(� C�����K�� �� ������#�� ����� �����!�! ����5(��!!�� �� ����! �� ���������� ���� �(����� ���!��� (�� ���� 1������ �� ��677<3� 4�� ������� !������� �� �� ���!� 9:: ��(��!������+� ������ ��!���!���� (�� !(������ ��� ���(!� !����

!/" �L") �� 4. L*�2�" L) 02/.�40,�40/. $.� �4L"L,%

���������������� ������� ��� ������ ���� ����*��� ����������� ���� )��� ���������� ����!��� !������! ���� !��(����#��6 �� ����� ��!!�� !���(! ���� ��������!������������ !������ �!��� � �$�6���!� ���������� �������� 1L&4 A L���� �������������� ������� 2 3��� � ������!��( ������(���5���!� ������C�� ���� �����������������#����! ��� ���������� �������!���� ��! (�������� ���� ����M! ������5�������������� ����� �����!�! ���� ����� ����K������! ��! ���� �!(��+���!�� ��!������ 1������ ��� ���������������� 67783� 0���������!�! ��! �((���� �� 6:;6? K���! !��(��� ���� ���� !(������ !������ ����� ��������� ���(!� !���!� 4�� ���� ���� �!�� �� ��������� ��� ���� �������� "��������! ����! �����! (�� �� �(������! ������ (��������� �� �$�6�(�!���+� !��������! (�� �(������� !������ ���� ��� ������ �� �$�6�(�!���+�!��������! 1���� ��������!3 (�� �(������� !������ ������ 1�� (�� ��3�

�� ��� �*)����-���� ��� ��!" ��� �#$�� �2#' )��������K5��(����K���������� !��� ���(!� !��(��! ���� ��!��� �!��� � ����K������ ����� ������ ��!������ �� "�� �� �� 1677A3� '���O� ����� (���������#��������� (�������!� & ��� �������+��� ?�� ��!!�� !������! ���� �������#������ � ����5�������������� ?>@ �� �����!��!� ����(���� �����!(������ ������������! <@@;76> �� ��� ����� 42)�� �$2� ��� � 6::: �� ����(���������!(������ �� �� @66;6@6: �� ��� ����� 0"�6: �$2� ������ (��+������ $�� ��� �� ��.��� 1*��+��!��� �� ������� '��������� �"3�������#����� !����� ��! �������� ���� ���������5������ �������������������� ��� �+����;(���5���!� ���B����� ��+���(�� ��������������#������9L9� ��!���+� ����! �� ��� ������ �(������! ����������� �����!��(������ �� � ������� ��!��+�� 1���� �3 ����� � @::�����K������ �� K+� �� 6: K���! (�� !(������ ��� ��������� !�������������(�!���+� ����! ���� ��K��� �! ����! ���� (���������� ����������������� !�������� ������#����� ���� !��!� (����! 1�� �!!�!! ����������!�������3 ��� �((�������� �� �������#����� ������ ���� �� (���� !��+�� �!������+� �������!�

���������������� ������� ��� ��!" ��� �#$�� �����$�(����K��#�� ��!!�� !������ 1@��3 ���� !������ ���� ������ �������������!� ���������� 42)�� �������� (��������� ������ ���������� 42)���������� �� (��������� ���!� ���������� 0"�6: �������� 1,��#���$�����!���! ��������� �3 �� ��������� ��������!� ��������� ��������!������� ��! (�������� �� � 4��� ��� ���#��� ��������� !������ 1" "'��!�!���! $�&L /����� ��!����3 �!��� $�&L ���� ���(���5���!�F�.� ������F���!� ��������� ��� & ?::< 1$�&L3� �������!���� ��������!������ ���� ������5�����

�������� ����*��� �((�������� �� ��� ��!� ��(�!��� ������! ��� ���!��!�C���� �������� ��� ���������� !�����! ���� (�������� �� � ������������� ��� ��� ���� ��! ������ ����� !���� ���(������ �� (������!����!����� �����!�!� 4�� !����K����� �� ����������! ����� ��������� ������������ ���(!� !���! ��� ��� ��������� �������� ����(����! ��! ���������� �!������ �����5��M! ��!�� 4�� !����!����� ���������� �� ��� ������ �� ����(�������! �� ��� �������� �����!��(� !�����! ��� �� ���������(�!���+� ����! ����� �� ��� �������#����� !�����! ����� ��� ��������� ��������� !���! ��!�+������� �!��� ��� ��(����� �������M! � ��!� 1����������3� � ���������� ��!���!������ �� �� !����!������� !����K���� ���� (� :�:?�

�.�*"4�

������ ���������* ����� ����� �� ��������� ��-*� �� )�� �������*� ��� ��������� ����$������� ����!��!!��� �������� �����!��(� 14. 3 !�����! ����(�������� �� ��� (������! 1.�� ��� "���3 ���!� !��(��! ��� �����!� �����!��������� ���(������� ��� !��(��! ���� !���! ������� ����4@2? ��(�!���! !����� ������������ �����4@ ����������!� /�������� !������� ���������� ��� �(������! ��� �����! 1$�� !�3�,��� (�������! ���� ��!��+�� �� ��� ����(��!� ��� ������ ��������������! ��� "��������! ����! 1$�� !+3� ���� "��������! ����!��� ���� ����� ���� ��� !���������� ������������! ����� ��!�!!������� ���� '������ �������! 1$�� !,3� ,��� (�������! ���� ��!�!��� �� ��� ������������� !(���! ��� ���! (������ ��! C����(�������� �� ��� !������ ������� ��� �������� ����� �� ����(������!� ,��� (�������! ���� ������� �� ���� �� 6< K���! �� (����!����� �� ?:::����� ��� �������� �� 6<:::����� �����K������ �� ��������� �(������! �5��(� ��� !������ �������� 4�� ������ �� ����(�������! (�� K��� ������ ���� A@ �� <:A� 4�� ����� �. ������ �� (�������! (�� ������ !C���� ��! :�@9� :�:< �� �����(�!������������� !��� 6�:7� :�:> �� ��� ����+� 4@2?���(�!����������� !��� ��� :�<>� :�:6 �� ��� ������� ��(�!����������� !��� ��(������ .�� 4�� ���������� ������� ��� ����+� 4@2?���(�!����

������� !��� ��� ����� ��������� !���! ��! !����!������� !����K����1��(����� �������M! � ��!� ( P :�:::63� ������� ��!���! ���� ����� ��(������ "��� "�(�!���� !��������! 1������������� +�!����!3 !��� �!!��� �� ��� ������ �5(�������! 1%���!� �� �� 677@3 ���� �����!��+�� �� ���! !���� �5��(� ��� ����!����� ��������������������!��� !��������! !��� �� �����(��������� ����! ���� !����������� �� ��� �((�� �����!�

���� � ��� ������� ����� �� &#' ����� )* ��#/�������� �! !���� �� ��)� ����� ��! !����K�������������! $2� ��(��� �� ��� ��������� !��� �! ���!���� ����������� ����� �����!�! �� �������� !������� �����!� �44$� ��A � ����� */ �5(�!��� ������ ���������! ��(��� ������� ��������� �� �44$ �� 6:�7N 1�����5��M! ��!� ( Q :�:<:3� ����+�4@2? ��(�!���! ������� ��� �44$ �� 68�:N 1( Q :�:6?3 ���������+� ������� ��(�!���! ������� �44$ �� 69�<N 1( Q :�:963��� � */����������� ��������� ���� : !��(��� 4�� ���������� ��$2� ��(��� ������� 4@2? ��(�!����������� ��� ���������(�!����������� !���! ��� ��� ����� !����!����� !����K������������� ��� (�+����! !����!��� � ����� ������ ����������� $2���(��� �� ��� ��(���� �((�������� �� ��� ����+� 4@2? ��(�!���! �+���� ��� ����� ���� �� A � ����� */ �5(�!����

#� ��� �� ��#/ �������� �� ��������� �*���(���������( ��� �6� �������� �! !���� �� $�� . �������! � !����!������� !����K���� ������!� �� ��� �������� 1$�� .�3 ���������� 1$�� .+3 ������! �! ���!���� �� ��O������� !(�����!��(� ��9 @ ��� A � ����� */ �5(�!��� ����!(����+� �� ��� ���������-����+�� ����� ��! �� !����!������� !����K���� ���������� �� ����������� ��� ������� ����5 ����� ��� ��������� */����������� ��!�!���!� �!������� �5��������� �� ������5���� ��� ��!���!������!(������! ��+����� !����!������� !����K���� �'� ��������� �� A ������ */ �5(�!��� ������� ���� � ����� �. �� >�8� 6�A ��6:�:� 6�@ �� ��� ��������� */����������� ��!� !���! ��� � 6�@� :�?�'� (�� �� �(������! ������ �� ������������� !��� 1�����5��M!��!� (� :�:?3� 4���� ���� �� !����!������� !����K���� ����������!����+�� �� ��� ���� ������ �� �'� ����� ��� ������������������ !���! �� A � ����� */ �5(�!���� 4���� ���� ��!� ��!����!������� !����K���� */�������� ������!�! �� �(�������!(�����!�! ������ ����� ��� ������ ��K������ ����� ������������ ��������� !���! 1���� ��� !����3�

4���� ������� �� ��������� ��� ���)� )* ��#/������� ���� ��� �� %����� 0�������!����������� �$�6 !������� ��� ��������� ����� �����!�! ���(������! ��+����� � !���� ��� !����K���� ��������� �� "��������!����! ������ A � ����� */ �5(�!��� �� 9 .$ ��� ��������� ��������+� 4@2? ��(�!���! 1��)� 3� 4�� ������ �� "��������! ���������! ��! ������� �� >AN ���� ���(���� ���� ��� ��������������� ��(�!������������� ������� !���� ��������� ��� (��������� ���$�6�(�!���+� !��������! (�� �(������� !������ ���� ��� ������ ���$�6�(�!���+� !��������! 1���� ��������!3 (�� �(������� !������������ ��! !������� ������� A � ����� */ �5(�!��� ��� ����+� 4@2?��(�!��� ���������� 4���� ���� �� !����!������� !����K��������������! ����+�� ����� ��� ����� ���(!� !���! ��� ���"��������! ���� (���������

��#/ �������� ���� ��������� ���������� �� ��!"��� �#$�� �� ��� �������#����� !�����! �� ��� ���(!� !��(��!���� ����� �������� !������� (������! 1�& ��� ��� )�,�3��+����� ���� */ ����������� ��!����� �� !����K���� �(���������� ��0"�6: ��� 42)�� ��2� �� ��� �(������! �� A � ����� */�5(�!��� 1$��� 7 ��� �3� 0"�6: ��� 42)�� !������� ��! ��!�����!������� �� (��������� ����! �� ��!�� ��� !�(����!�� ����� ����!1$�� 7, -3� ���� (�!���+� ����! ����+�� ���� ����� ������������� ������ �(������!� 4�� ������ ����! �� ��� !������! ��� ��� !���(�!���+� !�����! �5��(� ��� 0"�6: �� ��� !��(�� 1*/����������� ����!��� �� (������ )�,�3� 0� ���! (������ �� ����� 6�<� :�> 0"�6:�(�!���+� ����! �� ��� �����! (�� � @:: K���� ������� !(������! ������ (���� ��+� ���!�!������ ������+� ��!���! ��� ��� ���(!� !(������!�5������ ��� �������#����� ���� !��!� (����! �������� ����

/L"� 66@ 2L� 6 �2*��% 9::: �L4L��L4.�40L2 '% 4@2? "0�L�L .� !/!

���!(���K� ���������� !������� 1���� ��� !����3� R���������+������!�! �� ���������(�!���+� �(������� ����! ��+����� ���� �� �������+����� ��!�! */�������� ��2� �(���������� �� ���� 0"�6:��� 42)�� ��! !����!������� !����K���� ���(���� ���� ��������������� ��� ��������� ������� !��� 1�������M! � ��!� ( P :�:931$�� �3� 0� ��� ��!�! �5������ ����� ��! � !����!������� !����K����(�������+� ������ �� ��� ����+� 4@2? ��(�!���! 1$�� 7�3 ��� ���������� ��(�!���! 1$�� 7-3 �� */�������� �(���������� �� 0"�6:�! ���� �! 42)�� ��2� ���(���� ���� ��� */����������� ����������� !��� �� A � 1�������M! � ��!� ( P :�:93�

*/ �5(�!��� ��!� ��!����� �� �(���������� �� 0"�6: (�������5(��!!��� �� A � 1$�� /3� 4�� !������� (������ ��������� ���� �����B����� �� ���������(�!���+� ����! ���� ������������!� �� ��!���!��+�� ����+�� !������� �� !��� ����! �� ��� �����! �������������������� ����! �! ���� �! K������!�! ���F�� �����(����! 1$�� /�,3� 4�������� ���� ����+� 4@2? ��(�!���! 1$�� /+3 ��� ���������+� 4@2? ��(�!���! 1$�� /,3 (�������� ���� 0"�6: (�������(����������� 0� ������!� �� ��� K����� ��� 0"�6: �� ���� �������� ������ */�������� �(���������� �� 42)�� (������ �� A � �����*/ �5(�!��� �!��� ���������� ���!� ���������� 42)���������� �� (��������� ������ ���������� 42)�� �������� �+��� ����� ����� �� �������� ��������! 1���� ��� !����3�

$0��*��0L2

�� ����� ���� �5(�!��� �� ������ ����� !��� �� */ �����������!����� A � ����� �� !����K���� �(���������� �� ��2� ��� ���

������!�((��!!�+� ��������! 0"�6: ��� 42)�� �� ��� �(������!��� ���� ���! �(���������� ��! ������� �� ���� ���� 7:N ����������� ���� 4@2? ��(�!���!� 0� �������� */ �5(�!��� ��!�

$���� !+ ������ ���������* ����� ������� ������� �� � ��#/ �������� ���� ����+ 4. ��� ������������ �����4@ �����������!� / !������� �� 4@2?���(�!�����������!��� ���(!��� A � ����� */ �5(�!���� 1�3 4. ���(������ �� �(������! !������ ���� ������!��������� ������ ��� K+� "��������! ����! 1�3 ����� ��!�� ������ 1�3 0��������� �������� !���������� ����� �� "��������! ����! ��� ������������!1����� 3� 1�3 ��� �����K������ ��������(� ��"��������! ����! !������ ���� ����� ��!��� '�������������! ��� ������! 1�����!3�

��)� + ���� � ��� ������� ���& ����� )* ��#/��������

*/ 4��� �� �44$ �44$�5(�!���� 4��������� ���(!�� 1 L$� �. 3� ����+��� (�+�����

9 .$ 2��� : � @<8� @6 ; ;9 .$ 2��� A � <79� <? 6:�7 :�:<:9 .$ 4@2? A � <A9� <? 68�: :�:6?9 .$ ��4@2? A � <8A� @A 69�< :�:962��� 2��� A � 6?� @ ; ;

�9 .$ �5(�!��� �� ��� ������� �������� ��!�!��4@2? ��(�!���! ���������� ����+� 4@ ����������!� /- 0�4@2? ��(�!���!

���������� �����������+���� 4@ ����������!� /��4��� �� ���(!� ����� */ �5(�!����

��44$ ��������������(� ������� �����! �! ���!���� �� ����� �. �(��������!��� 1 L$3�

�������� �44$ ����+�� ���(���� ���� ��� */����������� ��� ��������� !��� ��: � ��������� ��� ���������� !�������� �� ��� ������������ ��� ��(�!�������������������� !����

�(�+���� �! ���������� �� �����5�� ��!� ���� ���(���� ���� */������������������ !��� �� : �- � Q 6? !��B���!�

!/. �L") �� 4. L*�2�" L) 02/.�40,�40/. $.� �4L"L,%

�(��������� 0"�6: (������ �� A � ��� ���! ������ ��! ������!�(��+����� �� ����+� ��� ��� ������+� 4@2? ��(�!���!� ������� ����� ��!��+����� .�� �� �� 1677?3 ��+� (��+���!�� !���� �� ����� ����� ���� ���� 0"�6: ���� �5(��!!��� �� ����� ������������! �!���!������+� ��� ��� �� �(��������� �(�� */ �5(�!���� 0� ������!��� ��� K����� ��� 0"�6: �� ���� ������ �� !��� */���������(���������� �� 42)�� (������� 4��! ���������� ��� �� ��� ����������� �������! �� (������ ����!������ ��� �����+��� 0��������������� �� �� 1677>3 ��+� �������� ��(����� ���� 42)�� ��2���� (������ ���� ���!������+��� �5(��!!�� �� ���� �� ����������������� !��� ��� ���� */�������� �(���������� �� ���! �������� ��!������� �� 8 � ��� ������� � ��5���� �� 9@ � ����� �5(�!����4�� ������(�������+� ��(����� �� ��� 4@2? ��(�!���! ����� �����! !���� �! !������ �� ���� ��!��+�� �� � ������ !���� �� ����� ���4@2? ��(�!���! ������� */�������� 0"�6: (������ �5(��!!��� ����� �(������! �! ���� �! !���� ��� (��+����� !�((��!!��� ������������(� ��(��!��!���+��� �� ����������� 12�!������ �� �� 677A3��������� ���! !���� ��� ��� ����� ��� �5��� ������K������ �� ������(�! (�������� 0"�6: ��� �������� !������� (������ ��������� ������� ��B����� �� 0"�6:�(�!���+� ����! �� ��� �(������! ����������������! ��� ���� ����� ���� ��!� !��� 0"�6:�(�!���+�

����������� ����! �! ���� �! K������!�! ���F�� �����(����! �� ��������! 1$�� /� ,3� 0����� (��+���! !�����! ��+� !���� ��������� ������������! 1.�� �� �� 677?- ,���� �� �� 677? 677A-&��� �� �� 67783 ����������! 14����!!�� �� �� 677>3 ��������(����! 1&��� �� �� 67783 ��� �� ��(���� �� (������ 0"�6:�(�� */ �5(�!����

L�� K�����! ��� ��(������ �����!� �� ���!� ��� ��!��+�����!��(������ ������!�((��!!�+� ��������! �� ����� */ ������������!�!D )��!� */ ��������� �! ���� �� !�((��!! ��� ���������(��!��!���+��� ��������� �� ��!! ���� @:N �� ������ �������!��B���! ��� �� �+�� 7:N �� !��� ������ (������! 1%�!������ �� ��677:3� 4�� */�������� !�((��!!��� �� ������� ��(��!��!���+��� ��!���� ������ �� */ ��������� �� 42)�� �5(��!!��� 1��������� �� ��677@� �3� ������ �� ��� ������ (����!(�!��� ��!��!� =� �������+�$2� ��(��� ����! �� ��� ������!�� �����!� �� !������ ��������!1%���!� �� �� 677<3 ��������� 42)�� 1&������ �� �� 67783 ���������!�� ���������� �� ������������� ����!��� ���������61&������� �� �� 677@3� 0�(�������� ��� =��� �������� ���!��! ���� !��!���+� ���� ������ ����������! �� */�������� ������!�((��!!��� 1 ������� �!������ �� �� 677A3 ��� !��� ������12����� �� �� 677?3�

4�� 4. !�����! �����!������ ���� ��� 4@ ����������!� /�����(������ ���� ��� ��(�!���! (��������� ��� !��� ��� ��!!����!!����� ����+���� ���� ����!� 4�� ��������� �� $2� ������1���� �44$3 �� !���! ������� ���� ����+� 4@2? ��(�!���! ��!������� ���� ���� �� ������� ��(�!����������� !���! ��� ������������� �� ��� A � ���� (���� ���� !����!��� � ����� ��� ������ ����� !����!����� !����K������ 4��! ��� �� �� ������!�����������!� �44$ !��� �� �� ���� !����� ��(����� ���� ����� ����!�� ��$ 12����� ��� ������� 678<- '���+ �� �� 67773 ��� ��� ��(������!���� �� ��� 4$ �6 �������� �! !����� ���� ���� ���!���� ������� !�!���! 1%���� �� �� 677A- '���+ �� �� 67773� ������� �� ��167793 ����+�� ��+� �������� ��(����� �� �((��5����� 6D6 �������� ������� 1443 ��� � ����!��� ���������� 1�� �4 4�3 �����!�� */����������� !���� 4��! �44$ !��� �� �� ��+�������!! ���((��(����� ��� +������� ����(���� �� ���!��� $2� ������ �����(���� 4��! !���� �! ���!�!���� ���� (��+���! K�����! ���� 4@2?��(�!���! �������� $2� ��(��� �� =� (������! �!��� ��� !�����������!���������� ������ ��� ��������� �44$ �� ������ 9:N�� A � ����� */ �5(�!��� 1%���!� �� �� 677A3� ���+���! !�����! ��+���!� ���!�!������ ����� ���� ��(��� �� ���� � �������� �� ��$ �����+� � ��!(��(��������� �������� ������� )�� ��!����� &��(�� �� ��167793 ��(����� ���� 4@2? ��(�!���! ������ ���(������ (��+�����*/�������� !�!����� ������ !�((��!!��� ������! ���� ��������+����� $2� ������ �� ���� ?:N� 2�!������ �� �� 1677A3 !������� ����� �� ������ ������������! ���� 4@2? ��(�!���! ������!�� ��������� �� ��$ ����+�� �� �((��5������� 9:N ������! ����������� */�������� 0"�6: (������ (��������� �� �( �� 7:N��������+� ������!�! �� $2� ��(��� ��+� �������� ������! ��������!�� ���� !��+�+�� 1����+�� �� �� 677?3 ��� !����� ����!�������

$���� .+ #� ��� �� ��#/ �������� �� ��������� �*������ ���������+ ��O������� !(�����!��(� ���!�������! �� ����������� (����������� ����� */ �5(�!���� 1�3 ��� �������� ��� 1�3 �����������5 � �. �� ��� ������������ ��� ��(�!������������� 1����3 */����������� ��� ��(�!������������� 1*/3 */����������� ��� ����+� 4@2?��(�!����������� 1*/ S 4@2?3 ��� */����������� ��� �����������+����4@2? ��(�!����������� 1*/ S ��4@2?3 ��!� !���� 2��� ����� ��!!����!������� !����K���� �������� �� ��� ���� (����! ����� */ �5(�!�������!(����+� �� ��� ��������� �( P :�:::9 �� 9 @ ��� A � �! ���(���� ������� ������������ ��� ��(�!������������� ������� !��� 1�3� 4���� ��! ��!����!������� !����K���� ���������� �� �������� ����� ��� ��������� */����������� ��!� !���!� 2��� ����� ��! ��!� � !����!������� !����K���� ������!��������� ����5 �� ��� ���� (����! ����� */ �5(�!��� ����!(����+� �� ������������ �( P :�:? �� 9 � ��� �( P :�::? �� @ ��� A � �! ���(���� ������� ������������ ��� ��(�!������������� ������� !��� 1�3� 4���� ��! ��!����!������� !����K���� ���������� �� ������� ����5 ����� ��� ��������� */����������� ��!� !���!�

��)� + 4���� ������� �� ��������� ��� ���)� ��� �� %����� ��� ��#/ ����

*/ �5(�!���� 4���������4��� �����(!��

2�� �� "��������!����!�

���������� "��������! ����!(�� �����

4���� "��������! ����!�������� �������

9 .$ ���� : � 9>�@� 9�9 18A3 6�8?� :�9A 16:63 6@>>� 6?6 16:939 .$ ���� A � <6�<� 6�A 1783 6�8?� :�67 16:63 69?A� 69> 18>39 .$ 4@2? A � 9@�@� 9�: 1>A3� 6�?@� :�68 18@3 69@:� 6:@ 18A39 .$ ��4@2? A � 97�?� 9�@ 1793 6�>A� :�9> 17A3 6<?6� 6>8 17<3���� ���� A � <6�7� 6�8 16::3 6�8<� :�68 16::3 6@?:� 6A9 16::3

�9 .$ �5(�!��� �� 9 ������� �������� ��!�!��4@2? ��(�!���! ���������� ����+� 4@ ����������!� /- 0�4@2? ��(�!���! ���������� �����������+���� 4@ ����������!� /��4��� �� ���(!� ����� */ �5(�!�����2�� �� "��������! ����! ����� �. ������ �� "��������! ����! �����! (�� �� �(������! ������������������ "��������! ����! (�� ���� ����� �. (��������� �� �(������� ���� ����(��� �� "��������! ����!��4���� "��������! ����! �������� ������ ����� �. ����� ������ �� "��������! ����! ��������! �� �� (�� �� �(������! ���������� A � ����� */ �5(�!��� ��� ������ �� "��������! ����! �����! ��! !����K������ ������� �� ��� ����+� 4@2?�������� !��� ���� ���(���� ���� ��� ������������ ���

��������� ������� !��� 1�����5�� ��!� ( Q :�:6A3� 4�� ������! �� (�������!�! ��(��!��� (���������! �! ���(���� ���� ��� ������������ ��� ��������� ������� !��� ��� ������������ "��������! ����! (��������!- � Q 6? !��B���!�

/L"� 66@ 2L� 6 �2*��% 9::: �L4L��L4.�40L2 '% 4@2? "0�L�L .� !/7

1'������� �� �� 67783� )�� �5��(�� ��� �������� ��(��� �� ����+�������!������ ����! �� 4@2? ��(�!���! ��� !������+��� ����� �����5(��!!��� 1,� �,����� (��!���� �������������3�

4��! !���� �����! ���� (��+���! K�����! ���� �� ����� ����! ����9 @ A ��� 9@ � ����� */ 4@2? ��! ������ �� �� ������ �� ��������1%���!� �� �� 677A3� 0� =� (������! �� @8 � ����+�� 4@2?��(�!��� ������ ��� ������!� ��� �������� !��!���+��� 1%���!� �� ��677A3� 0� ������ !�����! 1���� �� �� 677<� 677?3 4@2?��(�!���! ���� ���������� ������� ��� !������ �������� �!���!���� �� !��� ����� ��� ������� ������� �� �+�� ���(������(��+����� ����� */�������� �������������� ������! ���������!�((��!!��� �� $4 �� ������� ������� ��� ����������! ��"��������! ����!� 4�� ��������� �� 4@2? ��(�!���! �� (�����������!� ��� */�������� !������ �������� �! �� ������!� �� !�����! ����� ����� �������� �(�!!�� ���������� ���� ���� �� �����(����������+����� $2� ��(��� (�������� �����!� � +������ �� */�������� �������� ������! ��������� �������� 1"�� 678?3 �������� 1�((������ �� �� 678?3� 4��! ���������� ���� ���! !��������+�� ��� �� ��� �� ����������! �� ��� �������! �� ��� 4@����������!� /�!��������� �5��!��� ��(��� 1������+��� !���3 1%���!��� �� 67793 ��� ��� (����������+����� ��(��� 1���� ��(��31�((������ �� �� 67873� 2�+�������!! ��� ��!��+�����! ������������ �����(� ���� 4@2? ��(�!���! ��� �� �������+� �� (��+������$2� ������ ��� ����� �!!������� ������! �+�� ����� ����O�������� !������ ��!(��!� ��! ���� ��������� �� */ ����������

,������!� �� �� 1677<3 �������� ��(����� ���� 4@2? ��(�!������������ �������� */�������� ����������!�! �� ���� �������������� ����! ��� ����� ����������!� 4�� 4@2? ��(�!������������ (����������� ����+�� ���� ����������!�! ������!��������� 6A ��� 7A � ��� ��� ��!� !����K���� ������!� ��! !��� ����� ���� ���� (����!� 4�� ����� ���� (���� �� A � �� ���! !���� �����+� (��+����� �! ���� ��!��+��� � !������ ������� 0����� ���(����������� ��!��+�� �� ���! !���� ������� 9 ��� A � ����� */�5(�!��� ��!� ��+� ���� ������ ��������� ���F�� (��!�!����(������ ��������� ��� �� (�����5������� �� ������� ���� ����(������������ 0� � (��+���! ������ !���� 4@2? ��(�!���! ���������� ��� ������ �� �'� �� 9@ � ����� */ �5(�!��� ���((��5������� ?:N 1���� �� �� 677?3� 0� ���! !���� ��� �((���������� 4@2? ��(�!���! ��� ��� !����K������ ������ */�������� �'� ��A � ����� */ ������������ �'� �� ���! ����� ���� ��� �� ��� �� ����������+����� �� ��� �$7? ����(��� 1������� �� �� 67783 ��� ��� �'������ �� 9@ � ��� ���� ������ �� ��O��� �(�(��!�! ������� �� $2������� 1T������ �� �� 677@3� �� ��!� �����(��� �� ���!��� �����(�����#�� ��������� ����� �����!�! ��� ������! �� */ �5(�!������ 4@2? ��(�!���! �� "��������! ����! �� ��� !��� 1��)� 3��� ���� ����+�� ������ �� ������ ��� ���(������� ������! ����������� �� ��� ������ �� "��������! ����! �� ��� !��� ����� */�5(�!��� ����� ����� ��� �� ��!� ��� �� ��� ����� A � ���� (����

�� �5���������� 4�� ���!�� ��� ��� !���� ��������� �� ��� �������� "��������! ����! �� ��� ����+� 4@2?���(�!����������� !��� �����*/ �5(�!��� ������! ������� �� (��!����

4���� �������� ��� ��!���! �� ���! !���� �����!����� ������(�!���� ����+��� ��(��!���! �� �������+� ��� �� �����������(������! ���� ��� ����! �� ����� !��� ��������� ������������! ���"��������! ����!� L�� ��!���! !��� ���� � $2� ��(��� ��#�������+���� �� ���! ������ ��� ��+��!� !��� �� ��� ����������! ������!�� */ ����������� ���� !��� �� �� ���!�� �� $2� ������ !��� �!��� �(���������� �� ��� ������!�((��!!�+� ��������! 0"�6: ���42)��� 4�(���� $2� ��(��� ��#��� �((�������� ��������� ��� ��� ���������� �!���� �((����� �� (����(��������� �� �����!� 0�������!� �� ���+�������� !��!�����! ����� ��� �������+� ��� ������� ������� �� �������� ���F�� (��!���� */ K����! ��(�!���!���������� $2� ��(��� ��#���! ��� �� ���� �� (������ �����!�*/�������� ������ �� ��� !��� �+�� ���� ���� ��� �((���� �����*/ �5(�!��� ��� ���������� �� ��� !������ ��������� 4��! ���

$���� 7+ 8������� ������� )* ��#/ �������� ������ ��������� ���������� �� ��!" �2#' %�������+ �� ��� �������#����� !�����!��� 0"�6: ��2� �5(��!!��� �� (������ )�,� 1�3 2����� ������������ !���- 1�3 */����������� ��� ��(�!������������� !��� ���(!� ����� !������ 16: ���3 �����*/ �5(�!���- 1�3 */����������� ��� ��(�!������������� !���- 1�3 */����������� ��� ����+� 4@2? ��(�!����������� !���- 13 */����������� ��� �����������+���� 4@2? ��(�!����������� !��� ���(!��! ����� A � ����� */ �5(�!���� 2��� */ �5(�!��� ��!����� ������ A � �� �(���������� �� 0"�6: ��2���!!��� 1�������� !�������3 1�3� 0"�6: ��2� �5(��!!��� ��! ��!��� ��!������� �� (��������� ����! �� ��!�� ��� !�(����!�� ����� �(������� ����!� 4������������ ����+� 4@2? ��(�!���! 1�3 ��� ��� �����������+���� 4@2? ��(�!���! 13 (�������� ���� 0"�6: ��2� �(�����������

$���� �+ 8������� ������� )* ��#/ �������� ������ ��������� ���������� �� ��!" ��� �#$�� �2#' %�������+R���������+� �����!�! �� �� ��� �������#����� !�����! ��� 0"�6: ��� 42)����2� �5(��!!���� 4�� ���� !���� ��(��!��� ��� ����� �. ������ �����������(�!���+� �(������� ����! (�� K��� �� @::� �����K������ ��� ������������ ��������� !���! ���� ����� (������!D 2��� 1A �3 ������������ �����(�!������������� !���- */ 1: �3 */����������� ��� ��(�!�������������!��� �� 6: ���- */ 1A �3 */����������� ��� ��(�!������������� !��� �� A �-*/ S 4@2? 1A �3 */����������� ��� ����+� 4@2? ��(�!����������� !��� ��A �- ��� */�0�4@2? 1A �3 */����������� ��� �����������+���� 4@2?��(�!����������� !��� �� A � ����� */ �5(�!���� /����! �� (�������!�!��(��!��� ��� ���� (������ (��������� ���� */�������� �(���������� ���������� ��2� ��!!���� 4�� (������ (��������� ��! ���������� �� ������������ ������� I6 ; 1� ; '3F1� ; '3J� 6:: ����� ��� ������! ��(��!������ �+����� ���������(�!���+� �(������� ����! �� 1�3 ��(�!����������� ���*/����������� !��� 1�3 ������������ ��� ��(�!������������� !��� ��� 1�3*/����������� ��� ��(�!������������� !��� �� A ��

!/� �L") �� 4. L*�2�" L) 02/.�40,�40/. $.� �4L"L,%

������(�������+� ������! �� ��(���� $2� ��(��� ��#��� �((��������� ��� �(�� ��� �+����! ��� (����(��������� (����������� ��(��������� ��K������� �����!� ��� ������! �� */ ��������� �� ��������� !�!��� ����� ��� ��� �����! (��+����� �� !��!�������������! 1���� �� �� 677<�� 677@- ,���!���� 677?3�

�� ������ �� � �� ����� �� �� ������� ��� ��� ���� �� ���������� ! �����������

��������� " �� � #���������� ��� �� #���� ��� ��������� ���� �� ���������

�� ������� ������ " ��� �� �� #������ ��� ���������� �������� ���������� �������

��������� � $� ����� %��� ��&��� 1�#3 ��� ��������� � � ����� �� �� !���

�'�����(����� ����� ��������� �� ��� ���������' �� ��� ����� �� #����� 1���� ��� ��

)����������'*���������'" ��� ����� ��' #����� �� ��������" �� ���" ��3

�' )�)� ��+�������" �������� �' � ��, -��� .� ��������� )� ����� %�����

#�������� �' ��� �� ����� /������� ���� 0������ 1��� ��� 2322 ��� �' �����

���� ��� # 1��� ��� ���� ������ ������� ��� /�& ����� �� 23425675�

�.).�.2�.�

������� )������ �. ,������� " ���� .D .5��!��� ��(��� �� (��������� �����!������� �� !�������� !���� ��������� �� ��� !��� �� (������! ���� ��!�� �������������� 0 ���� � �������� 7?D?:A;?:7 677:

�������!���� 2 ��������� �.D �������� �������!� �� �����+����� ��������������������!�!� .�������� .�������� ?9D667;6<A 677:

�((������ "� ������ 4$ "�� �$D *����+����� ����������������� ��!��(���������������! �� ��� !��� �� ��� ���!�(��� ���������� ���� ����� 0� 4�� ������! ������� ��� ������� �5(�!���! ��� �� (����������+����� ���������� �� 0 ��������66<D967;99> 678?

�((������ "� "�� �$ ������� &��(�� "D 0�����K������ �� ��� ��������� ��������� ��� !�((��!!��� �� ������� ��(��!��!���+��� �� �����+����� ���������� 0 ,���� 6>:D666>;66<6 6787

������� % &���! $ ��#� $ �����! , ��((������ ' "���� 4� ������# 4D*����+����� ����� ������! �(�(��!�! +�� ������ ����+����� �� �$7? 1)�!F��L�63����(�������� �� ��! ������ �$7?"� 0 ���� ���� 6@:D6>6;689 6778

'��� 4 *��� 2����� 4 )�B�� � 0�����!�� D ��������� �� �����+�������������!��� ������ �� ���� �� ��(���� �((�������� �� $2� �5��!��� ��(��� ��#���!�.������������ .����������� .������� 66D7;6< 677?

'������� � '����� & ������� � ����!���� D �����(������! �� ����!���(������������+� $2� ������ !����� ����!������� �� ��� ������� *�/����!(��!�+� ����!��� ���������!� ��� ���������������� 8������� 6AD989>;98<@ 6778

'���+ / ������� ������� & %���� ��D �� ��� ��(��� �� �����������(��������� �����! ��� A;@ (����(������! �� ����� !��� �5(�!�� �� !����!��������� ���������� 0 ���� � �������� 669D<9A;<<6 6777

�������� �� ������ �� 2������ L ��!����� 4 ����� � %���� ��D 4����������� �� ����������� ������� �����! 1A;@3 (������!���! ��� ��� $����(�����!����! �� !������! �� */����������� ����� !��� �!��� !(���K����������! ��� ��� �����!������� �� ��(�� (���������� ������!� 0 .��������.�������� � ���� 677?D6A<;6>: 677?

����+�� '���!�� $D =�������� (�������!��D ����������� ��� �����������������!���!� ���� )�� %���� 7D67;<8 67>?

����+�� . ������! �� �$����� " �����!�� � ������� $"D L+���5(��!!����� ��� =�� ��(��� ���� ������!�! ��!�!����� �� �����+����� ��������� �� ���������! �� !������+� ��(��� �� $2� ������� ������ )� ??DA6?9;A6A: 677?

$����� '" L��+�� � )��� � D � (������� ��!������� ��� C���������� ��������������� �� �����+����� ���������� �� 0 �������� 666DAA<;A>9 678@

.�� �$ ������ $ '���+��� � &��# �0D 0�������� �� 0"�6: ���� �5(��!!��� ������� ������������! �� */' �5(�!��� �� +�+� ��� �� +����� 0 �������66?@D@8?6;@8?A 677?

)�!��� � &��(�� "D ��((��!!�� 4 ���(������! ������� ��� ��+���(���� ��(������ !��� ������! �� */����������� ����� #������ 96AD66<<;66<@ 6789

,������!� '� T��� � .���� � %���!� $' %��� D 4�������� �� ���������������! ��� �76 �������� ����! ���� ��� $2� ��(��� ��#��� 4@����������!� / �������! ����������!�! ����� �����+����� ���������� 0 ���� ��������� 6:6DAAA;A>9 677<

,���!���� �$D .+������ ���� !��!�����! (��+��� */ �����������������������!�((��!!��� �� �����!� ���� �������� 6<6D69:6;69:@ 677?

,���� ,����� & &������� D 0�����������6: (��������� �� �������� �����������������!D ���������� �� �����+����� ' ��� �����+����� �6 ���������� 0 ���� ��������� 6:@D<;A 677?

,���� $�+�� ������� % ������# 4 *������ �. &������� � "��� ����������� �� 0"�6: �5(��!!��� �� ����� ������������! 1��(��3� 0 ���� � ��������6:AD 6:<:;6:<6 677A

,��!!��� " ��� RD $2� ��(��� ��� �(���������� �� ��!�� ���� ���������� �������� @6D68?@;68A< 677?

&��� & ,������ �� ���� , 4������ . ���(�� &$D 0� ����� !��� */' ��������!����� ��������� �� 0"�6: �+�� 0"�69 (������������� �� ��� �5(������ ���������������F�����(����� (�(�������� 0 ���� � �������� 66:D<6;<8 6778

&������ �B���� / ���! " LM������ � ���������� ' %���!� $D */�$2������� �� ���!� ��� ����� ����! ������! ��� �5(��!!��� �� ����� �����!�!��������� .�������� .�������� A>D?@6;?@A 6778

&������ & "�� ������! �$ "������ ��D 4�� ���� �� !������� ��� $2���(��� �� �������� ��� ����������� !��� ������� 4�� 5��������(�������!�� (�������� ���� �������� 6<:D6:68;6:96 677@

&��(�� " )�!��� �D 0���������� (��������! �� �����+����� �����������!�!� 0 /��������� �� � ?>D966;96? 67>A

&��(�� " ��5 �� ���! ", %���!� $'D ���������� �����! �� $2� ��������!�!����� ������!�((��!!��� �� */����������� ����� .��� /��� ���� #�� #�87D>?6A;>?9: 6779

&������� '������ . ��� .,D .+������ ���� $2� ������ �! � ������� �������+����� ' ����������������� ���������� �� ����� ���� �5(��!!���D

$���� /+ ��#/ �������� ���� ��������� ���������� �� ��!" �����+ 0�������!���������� !�����! ��� 0"�6: (������ �� (������)�,� 1�3 */����������� ��� ��(�!������������� !���- 1�3 */����������� �������+� 4@2? ��(�!����������� !���- 1�3 */����������� ��� �����������+����4@2? ��(�!����������� !��� ���(!��! ����� A � ����� */ �5(�!���� 2���*/ �5(�!��� ��!����� ������ A � �� �(���������� �� 0"�6: (������ 1���;����� !�������3 1�3� ������� �5(��!!��� ��! �������� �� ��� �������(������! ��� ��! ��!� (�������� �� ��� !�(����!�� ��� �������� ���������!� 4�������� ���� ����+� 4@2? ��(�!���! 1�3 ��� ��� �����������+����4@2? ��(�!���! 1�3 (�������� ���� 0"�6: (������ �(����������� 4������! ���� �� +��� ���� (������ �5(��!!��� �� ������ ������������ !��� ����� */����������� ��(�!������������� !��� ���(!��� 6: ��� ����� �5(�!���1���� ��� !����3� 4�� (������ �������� �!�� ��� ��������!����������!������� ��! � (��������� ���!� ���������� 0"�6: �������� �� � �������� ��6D9:�

/L"� 66@ 2L� 6 �2*��% 9::: �L4L��L4.�40L2 '% 4@2? "0�L�L .� !//

�����+����� ' ��������� ������! �� ������������� ����!��� ���������6 10�� �63�5(��!!���� 0 ���� � �������� 6:9D@98;@<9 677@

"������ ' �������� * �������� ,D *����+������������� ��(��� !�����!�! �����(������! ���� (������! ���� ������� ������!�!� 0 ���� � �������� A>D?7@;?7867>A

"�� % � � 2� %% 2������ �����!�� $ �����! ��D � !��(�� �������� ���!��!���+� ������ ��� ������������+� �� !��� �������#�����D �!� �� �������+�������� �� ��(��+� �������#����� ��K������ ��� (��!��+� ��!!�� ���(������� 0&� ������ �'������ @@D986;98> 677A

"�� �$D �����������+����� �� */�������� (��������� �����! ��� �������� �� ������!�(��� ���������� ���� ����� .��� /��� ���� #�� #� 89D9@:7;9@66 678?

������� $" �� ����+�� .D ��C����� !(���K���� �� ����������� (��������������! �� $2� ������� ���� !���� 1�����+����� '3 ���������� /������ ���� )� 9:D99?;997 6779

������� �!������ 4����� & ���� 4D .������� ��O�������� ���������!�((��!!��� �� �����+����� ��������� �� 5�������� (�������!������( � 1=��3 ����� ����� 0 ���� � �������� 6:>D<@<;<@8 677A

�#��� 4 ��!����� 4 0���� 2������ LD .!�����!����� �� � ������������������ �������!��� ��������������(� ������� ����� �� $2�� � ���(�����+�!���� ���� A@ �6 �������� !(���K� ��� 1A;@3 (����(������!� ����� )� 9?@D6>?;68@ 6776

����������!�� ' )���# , �C���� ' �����+�� & ��� � ������� ) )���� D�������� ���(������ ��!(��!� �� */ ��������� �� �����(�� !��� ������������������ � AD8@<;8@? 678?

2����� 4������� � %��� � �� ��D ��� ��������� �� �����+������'��� ��������������������������� !��� ������! �� ���� ������� ��� 5�������� (�������!������( � ����� /����� <>>D6A?;6A8 677?

2����� ������� ��D ��������������(� (��������� (��������� ��������� ����5��!��� �� ����� !��� K������!�! ����� ����������� ���� <6<��� �����+����������� �������� ��' 99D6<7:;6<7? 678<

2�!������ � %���!� $' *������ �. /��� �� '����� �$ ��#� " &��(�� "D.+������ ���� $2� ������ �������! ����������� 6: �������� (��������� ��*/����������� ������ ������������!� .��� /��� ���� #�� #� 7<D6:<?@;6:9?7677A

������ �� �������� �� ����� � 2������ L ��!����� 4 ����((�� 2�%���� ��D $2� ������ �� */����������� ����� !��� �� ����D ��������������� ���!������� �� ����� �����!�! 1������� �����!3 ���(���� ���� �����������!������� 1��!�������� $2� !�����!�!3 ��� (��������� �� ?������5�(!������� ��� 0 )����� ���� A<D<6<;<9@ 677<

��+�! *������ �.D ��!����� !�((��!!��� �� ����������(� ��(��!��!���+��� ��!�(��������! ���� */����������� ������������!D �� �!!������ ���� ��������������������+�� ������������6:� 0 ������� 6@7D<8A?;<8>6 6779

���������� . "����� �D ������ !����!���!� �� ������ 0 ���� <8D?;99 6788������ ���������������� �D R���������+� �!!�!!���� �� �(������� "��������!

����! �!��� ��������� ����� �����!�!� #��� )� ������ @D<>;@: 6778���!!�� &��� ) &��(��� . �� ��D $�!�((������� �� ������� ������ ���������!

1����!���! ��� "��������! ���� �������!3 �����(����! ��!! �� �������(����!!��� ��(����� �(�� ������� �� �(������� "��������! ����!� 0 ,� ���6>9D6@>6;6@89 677:

��������� � 4����� � /����� / �� ��D ��������!��( ������� �����+����� ����������������� ������!�((��!!��� ��� �����������!�!� 0 ���� � ��������6:<1��((��3D6:>;666 677@�

��������� � 4����� � /����� / &������� 0 �����#� 4 4�� $ ������ �D0����� !��+�������� ��� !��������������� !��� ������� ������� ���' 6?D6>@;6>7 677@�

���������� 0 �����! ". )������� ') )�������� ��D 42)�� ��� 0"�8 ����(��������� �� ��� �(������! �� ������ ����� !��� ����� */' �5(�!���D����������� ���� ������(��� ������������ ��� .�!������� �5(��!!���� 0 ���� ��������� 6:8D>A<;>A> 677>

4����!!�� ' &����� �� ��!�� �� ��D 0� ������!� �� ����� ������ �������(���!������ ����� ������������! ��� ����� �(�������� ���� ����! �@<6 ������4 ���� �� �5(��!! 0"�6: ��2� ��� (������� ���� ,� ������� 6:>D96<;99< 677>

4�������� � .���� " '�������� � ��� .,D $2� ��(��� !�����!�! ��K������!�! !�����! ���� (������! ���� ������� ������!�! !C�����! ���� �����������!�� ���� ��������� �� ��������� �������� ����� ��������� ���� �����+���������� 2������5��9�������������O������ ������ �������!�������� ��� 2��������2������!����� 0 ������ )� ���� 8���� 66<D6>6;68A 678>

/������ ��������� �D *����+������' ����� ������� ����������! �� �(�������"��������! ����! ��� �������� �� ����� �����!�! ���������(��� .������������.����������� .������� >D9?8;9A? 677:

��� R �����!�� , )����� .� ������� � ,��!!��� "D $2� ��(��� ���!�!��(�������� �� ��!�� ���� ���������D � ��!��������� !����� �� 0 ��������6@:D?78;A:> 677@

��� R �����!�� , )����� .� ������� � ,��!!��� "D $2� ��(�����(����� ��� �����+����� ������������� ������ �! ������� �� (���(��������(������! ���� (������! ���� ��!�� ���� ��������� I!�� �������!J� 0 ���� ��������� 6:@D7<<;7<A 677?

���� � $������ �& &��(�� "D �����!�! �� ��� (�������+� ������ �� ���������!��!�����! �� �����+����� ����������������� ����� ��� !�!����� !�((��!!��� ��������� ��(��!��!���+��� ��� ��O�������� ��!(��!�! �� ����� 0 ���� � ��������6::D9?@;9?7 677<�

���� � %���!� $' &��(�� "D .�����! �� !��!�����! ��� � $2� �5��!��� ��(�����#��� �� �����+����� ����������������� ��O�������� ������ !�((��!!������ ����������� (��������� ����� ��������� �� ����� 0 ���� � ��������6:6D?9<;?9> 677<�

���� � $������ �& &��(�� "D .����� �� !��!�����! �� */ ���������������������������� �� �������� ������ �� ����� 0 /��� ������ �� � 8AD77;6:? 677@

���� � ��5 � %���!� $' &��(�� "D ���!�����! ��� 4@2? ��(�!��� ������ ������� ������� �� (������ �����!� */�������� !������ ���� ��������� ����������!�� ��������� �(������� ����! ��� ����� !�((��!!��� �� ������� ��(��!��!���+���� 0���� � �������� 6:@D98>;979 677?

%���!� $ ���! ", %�� / �� ��D ���������� ����� ����+�� �������� �� $2� ��(�����(�!���! ������! ��� ��������� �� */ !��� ������ �� ����� ������ )� ?9D@99>;@9<6 6779

%���!� $' ���! " &������ LM������ � ������� ) )������ � �D �����������(��������� �����! �� */�$2� ������ �����!� �� !������ ��������! ��������+��� ��� ����� ��������K������ +���! (�������� 0 ���� � ��������6::D>7:;>7@ 677<

%���!� $ '����� � ��5 � ���! " &������ &��(�� D "�����#����� �� ��(�!���!���������� � $2� ��(��� ��#��� �� ������ !���� 0 ���� � �������� 6:<D@A6;@A8 677@

%���!� $ &���� &������ �� ��D .�#��� �����(� �� 5�������� (�������!��D !�������� ��K���� ��!���� �� 4@2? ��(�!��� ������ ���������� � (���������� $2���(��� ��#���� .������������ .����������� .������� 69D699;6<: 677A

%�!������ 4 ��������� �D 4���� �����!�! ���������(�� ��� �����+����� ����� ��+�!������ ������! �� ������� ��(��!��!���+��� �� ����� )�� ������� <D6<7;6@@677:

%�!������ 4 ��� / '����!����� � /�� ��� '��� � 4����� � ��������� �D��!��(�������� �� ������! �� */' ��������� �� ��������� �� ���������(��!��!���+��� �! � ��!� ������ ��� !��� ������ �� �����!� 0 ���� � ��������7?D?<:;?<A 677:

%���� �� �������� �� ����!�� ,0 ��� " 2������ L ������ ��D 4�� �� ��� ��(��� �������! �� �(������� ������� �����! ��� A;@ (����(������! ������� !��� ��(�! 0 ��� 00� 0 ���� � �������� 6:AD6<:>;6<6< 677A

T������ � ���!�� �� "������ $ �� ��D ������� ��� (?< �� ��� ��!�� �� !��� ������I!�� �������!J� /����� <>9D>><;>>A 677@

!/0 �L") �� 4. L*�2�" L) 02/.�40,�40/. $.� �4L"L,%