UNIVERSIDAD NACIONALFEDERICO VILLAREAL

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMTICAESCUELA DE BIOLOGIA

ESTUDIO DE LAS BACTERIASAlumnos: Aranguren Daz Lizandro Prncipe Morillo Fabiola Vega Chozo Karolyn

Docente: Erik Mercado

2015

I. INTRODUCCION

La morfologa de la mayora de lasclulas bacterianases tal que resultan difciles de ver con elmicroscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea. El modo ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes.

II. MARCO TEORICO

Las clulas procariticas se caracterizan por su estructura muy sencilla, no presentan envoltura nuclear y ningn tipo de endomembranas, pertenecen a este grupo las bacterias y las algas azul-verdosas. Algunas bacterias son dainas al organismo, otras son benficas y son usadas en la industria, tal es el caso de aquellas que acidifican la leche y permiten la produccin del yogurt.Las bacterias son seres procariticos, unicelulares que carecen de envoltura nuclear, en algunas circunstancias forman esporas para protegerse del medio. Presentan formas esfricas, alargadas o espiraladas. Pueden presentarse aisladas o agrupadas y tienen como medio de locomocin los flagelos en nmero variable. Hay bacterias que son patgenas para el hombre, animales y plantas, otras son saprfitas, que se las encuentran en materias en descomposicin y otras son inocuas y benficas, tales como las bacterias nitrificantes, que se las encuentra en diversos medios como el agua, aire, tierra y en otros.Qu es la tincin Gram?La tincin de Gram es una tcnica de coloracin de contraste; fue descubierta por Hans Christian Gram en (1884). El fundamento de la tcnica se hace con base a las paredes celulares de las bacterias. Gram positivas y Gram negativas.La coloracin Gram es de amplia utilidad para clasificar a las bacterias en Gram positivas y Gram negativas. Las bacterias Gram positivas son aquellas que se tien de azul oscuro o violeta, esta caracterstica qumica est ntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular. Las bacterias Gram negativas son aquellas que se tien de un color rosado tenue o rojo.Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipdicas entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglucanos, mientras que las bacterias Gram-positivas presentan slo una membrana lipdica y la pared de peptidoglucanos es mucho ms gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tincin de Gram. (Figura1)

Figura 1Pared Gram +

capa densa y uniforme de 200 a 800 A)

cidos teicoicos

polisacridos

protenas (pocas veces)

glicopptido (50% del peso seco)

Pared Gram -

capa interna delgada de 20 a 30 A cubierta por capas externas de densidad menor)

lipopolisacridos

lipoprotenas

protenas

glicopptido (10% del peso seco)

III. MATERIALES

LABORATORIOBIOLOGICO

Microscopios Mecheros de alcohol o de Bunsen Aceite de inmersin Palitos de dientes Cristal de Violeta Safranina Lminas porta y cubreobjetos Lugol Agua destilada Alcohol cloroformo Azul de metileno

Muestra de sarro dentario

Yogurt

IV. METODOS

a) Coloracin de Gram de Bacterias del sarro dentario y yogurt:

1. Hacer una extensin de la muestra en estudio sobre una lmina portaobjeto.2. Fijar el preparado a la llama de un mechero.3. Cubrir con la solucin Cristal de violeta por 1 minuto.4. Lavar con agua corriente.5. Cubrir la preparacin con Lugol durante 30 segundos o 1 minuto.6. Lavar con alcohol hasta que este no arrastre colorante.7. Lavar con agua corriente.8. Agregar Safranina por 30 segundos o 1 minuto.9. Secar al ambiente o con un mechero.10. Colocar una gota de aceite de inmersin y observar al microscopio con la lente de inmersin.11. Esquematizar.

b) Coloracin Gram de bacterias de cultivo

V. RESULTADOS

Productos que se utilizanReaccin y coloracin de las bacterias

GRAM +GRAM -

1) Cristal violetaClulas color violetaClulas color violeta

2) Lugol solucin iodadaSe forma el complejo CV-I. Las clulas continan teidas de color violeta.Se forma el complejo CV-I. Las clulas continan teidas de color violeta.

3) AlcoholSe deshidratan las paredes celulares. Se contraen los poros. Disminuye la permeabilidad. El complejo CV-I no sale de las clulas que continan teidas de color violeta.Eliminacin por extraccin de grasas de las paredes celulares. Aumenta la porosidad. El complejo CV-I se separa de la clula.

4) SafraninaClulas no decoloradas;quedan teidas de color violeta.Clulas decoloradas;se tien de color rosado.

Muestra: Sarro dental Coloracin: Cristal de violeta Aumento: 100X Descripcin:Se observan estreptococos gram +

Muestra: yogurt Coloracin: Cristal de violeta Aumento: 100X Descripcin:Se observan Streptococos gram + que son como cadenasy cocos.

Muestra: Colonia Coloracin: Gram Aumento: 100X Descripcin:Se observan Bacilos gram -

VI. DISCUSION

Al fijar la muestra con calor es esencial para que las clulas se adyeren al portaobjetos, ya que l calor desnaturaliza las protenas y suelen matar microorganismos.

El paso critico de este procedimiento Gram es cuando se va decorar con alcohol ya que se tiene que lograr que la preparacin salga exenta de colorante por que los Gram + no se decoloran y los Gram si y esta diferencia es porque las Gram + sufren con el alcohol una deshidratacin, los poros se contraen y dificultan la salida del complejo yodo-azul en el interior de la clula, sin embargo en el caso de los Gram- el alcohol desorganiza la capa lipdica ms externa y elimina el color violeta de la delgada capa de peptidoglucano.

La diferencia que se observa en la resistencia a la decoracin se debe a que la membrana externa de las Gram es soluble en solvente orgnico

Por investigaciones, la muestra que realizamos la tincin Gram del sarro dental del cual observamos cocos gram +, en un principio del nacimiento la flora bucal es simple y generalmente son bacteria aerobias pero cuando aparecen los primeros dientes se pueden observar que se suma a esta flora los anaerbicos.

VII. CONCLUSION

Tincin diferencial que emplea secuencialmente dos colorantes para distinguir 2 tipos de microorganismos en funcin de sus diferencias en la pared celular

Las bacterias Gram positivas se tien de azul violeta mientras los Gram negativas se tien de color rojo o rosado.

Los bacilos son alargados y dan consistencia al yogurt.

Los streptococos son cadenas de cocos y acidifican el yogurt.

Mtodo de gran utilidad pero debe ser evaluado con precaucin: Al decorar por un tiempo muy prolongado se puede correr el riesgo de que todas bacterias Gram + se decoloren y se tien posteriormente como las Gram -

VIII. CUESTIONARIO

1. Qu funcin cumple el Lugol en la coloracin de Gram?Funciona como fijacin (mordiente) de la preparacin, y tambin acta sobre la pared de las bacterias Gram (+) de tal manera que al agregar el decolorante (alcohol-cetona) no se destian las bacterias que ya se tieron, al agregar la Safranina, las restantes bacterias se teirn, siendo estas ltimas Gram (-).

2. A que deben su color las bacterias Gram negativas?Esta caracterstica est ntimamente ligada a la estructura didrmica dada por la envoltura celular, pues presenta doble membrana celular, una externa y la otra citoplasmtica, lo que refleja un tipo natural de organizacin bacteriana.

3. Qu forma presentan los Streptococcus? Por qu?Los estreptococos son organismos anaerobios facultativos y Gram Positivos que a menudo aparecen formando cadenas o por pares.

4. Qu forma presentan los Staphylococcus? Por qu?Los estafilococos son granos que se presentan en forma de racimo de uvas.

5. Cul es la composicin de la pared bacteriana?Tanto las bacterias Gram positivas como las Gram negativas poseen una pared celular de peptidoglucanos que les confieren su forma caracterstica y les provee de proteccin mecnica.

6. Cul es el fundamento de la coloracin de Gram?Se fundamenta en la afinidad que poseen ciertas bacterias de retener colorantes y resistir a la decoloracin. Esto se debe principalmente a la diferencia de las paredes celulares de bacterias Gram positivas y Gram negativas, ya que las G+ tienen una pared celular ms gruesa, con mayor contenido de peptidoglucanos y cido teicoico, en cambio las G- poseen una cantidad menor de peptidoglucanos en su pared y no tienen cido teicoico

7. Por qu se usa alcohol-cloroformo en la preparacin?Se usa como decolorante, y al usar el alcohol cetona los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos s lo hacen, para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de contraste.

8. Por qu la observacin se hace a 100X?Es debido a su tamao, y debe usarse el aceite inmersin.

IX. BIBLIOGRAFIA

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Baumann, L.; M. Baumann; M. Mendel y R. Allen. 1972. Taxonomy of aerobic marine eubacteria. J. Bacteriol. 110: 402-429.