thin layer chromatography (얇은막크로마토그래피)...
TRANSCRIPT
Thin Layer Chromatography(얇은막 크로마토그래피)(박층 크로마토그래피)
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
1
(박층 크로마토그래피)
TLC ?
• 크로마토그래피 분리법의 하나로서 얇은막에 고체 지지체나 유도체로 구성된 이동상을 이용한 분리법
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
2
• 정상상 TLC : 극성 판 + 비극성 전개용매
• 역상 TLC : 비극성 판 + 극성 전개용매
TLC 의 활용
• 물질이 비휘발성이거나 저휘발성일 경우
• 극성 비극성 이온성 모두 가능
• 짧은 시간에 해결하거나 대량의 샘플을 분석하거나, 동시에분석하거나, 적은 비용으로 분석할 경우
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
3
분석하거나, 적은 비용으로 분석할 경우
• GC 나 LC를 활용할 경우에 샘플의 파괴가 우려될 경우
• GC 나 LC 검출기에 검출이 안될 경우
• 분석되어야 할 구성 성분들이 각각 다른 검출기에 의해 응답할 경우나 여러 가지 검출기를 활용하여야 할 경우
• 전기가 없을 경우
TLC 활용 분야
• 제약 및 의약품 개발
• 생체화학, 범죄화학 및 생화학 분야
• 화장품학
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
4
• 화장품학
• 식품분석
• 환경분석
• 무기분석
TLC 순서
• 전개통에 용매 장착
• TLC 판 약 1cm위에 연필로 선을 표시
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
5
필로 선을 표시
• 시료 점적
TLC 순서
• 거름종이 투입
• 용매 투입
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
6
• TLC 투입
• 마개막기
보정/표준물질 TLC
• 보정 필요 없음
• 표준물질이 필요함
– 미지시료를 분석하기 위해 필요
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
7
– 미지시료를 분석하기 위해 필요
– Rf 값을 비교
발색(Visualization and derivatization)
• 침습적 발색 (destructive visualization)– 황산 스프레이를 사용해 스프레이 한 후 110oC
정도의 핫플레이트에 구워주면 거의 모든 시료가 눈에 보임
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
8
• 비 침습적 (Nondestructive visualization)
UV를 사용하여 시료의 발색단을 검사하며모든 시료에 적용 되진 않음
– Long wave UV
– Short wave UV
– Semi-destructive visualization
발 색A plate under a UV light to display the compounds after they were developed
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
9
일반적인 전개
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
10
TLC 표시법
• Retardation/retention factor (머무름 지수)
Rf = ZS/ZF-Z0 ZS ZStZF
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
11
• Rf = 머무름 지수
• ZS= 출발점부터 시료 이동 지점까지의 거리
• ZF= 용매 출발점부터 최종 도달 지점까지의 거리
• Z0= 출발점부터 시료 적용 지점까지의 거리
• 최적의 머무름 지수 : 0.3-0.6
Solvent level
Start lineZ0
• hRf = 100 X Rf
• RSt = ZS/ZSt
• ZSt = 출발지점부터 표준 시료 이동 까지 거리
• Flow constant (κ)
TLC 표시법
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
12
• Flow constant (κ)
κ = ZF2/t
κ = flow constant [mm2/s]
ZF = 용매 출발점부터 최종 도달 지점까지의 거리[mm]
t = 전개시간 [s]
• hRf 영역
TLC 용어
• 전개 : Development
• 전개용매 : Solvent system
• 발색 : Visualization/Derivatization
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
13
• 발색 : Visualization/Derivatization
• 전개통 : Developing Chamber
• 모세관 : Capillary spotter
제약학 분야 순도 비교 (고농도)
각기 다른 화합물임
(a) 200 mg 농도에 따른 순도(b)500 mg 농도에 따른 순도
200 mg 원액
불순물
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
14
(c) 300 mg 농도에 따른 순도
저농도로 정확한 Rf를 찾음
TLC의 구조 (흡착물질, Sorbent)• 흡착물질 : 실리카겔 60 (60 옹스트롱 단위의 내부 기공
지름), 카페인이 섞인 실리카 혹은 키셀궈(kieselguhr; 단세포 해조류인 규질 껍질로 구성된 밝은 색을 띤 다공질의 부서지기 쉬운 퇴적암) 혼합물을 대부분 사용함
• Silica gel-F (Fluorescing indicator added)• Magnesium Silicate (Florisil)
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
15
• Magnesium Silicate (Florisil)• Polyamides• 전분 (starch)• 알루미나• RP-8, RP-18 : 말단 역상 부분 변화 (비극성)• NH2 : 말단 아미노기 부분 변화 (약알칼리이온교환)• CN, DIOL : 친수성 중성 부분 변화• CHIR : 광학이성질체의 분리
실리카의 구조 (SiO2)
OH
Si
O
OH
SiO
OO
OH
Si
OO
OH
Si
OO
OH
SiO O
O
Si
OO
Si
OO
Si
OO
SiO O
OSi
OO
Si
OO
SiO O
O
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
16
OH
Si
O
OH
SiO
OO
OH
Si
OO
OH
Si
OO
OH
SiO O
O
Si
OO
Si
OO
Si
OO
SiO O
OSi
OO
Si
OO
SiO O
O
알루미나의 구조
O
AlO O
AlO
OH
AlO
OH
AlO
OH
Al
OH
O
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
17
O
AlO O
AlO
OH
AlO
OH
AlO
OH
Al
OH
O
Acidic: -Al-OH
Neutral: -Al-OH + -Al-O-
Basic: -Al-O-
역상의 구조
C-18으로 처리된 실리카
OO
CH2
CH3
17Si
CH3
CH2
CH3
17Si
CH3
CH3SiCH3)3
SiCH3)3SiCH3)3
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
18
O
Si
O
O
SiO
OO
Si
OO
O
Si
OO
O
SiO O
O
Si
OO
Si
OO
Si
OO
SiO O
OSi
OO
Si
OO
SiO O
O
SiCH3
3 3
TLC 지지체의 종류
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
19
TLC 지지체의 종류
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
20
• Aluminium foil
• Terephthalate film
• Thin glass plates
TLC의 구조 (구조체)
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
21
• Thin glass plates
• Braided (꼬인) PTFE
• Glass fiber
• Fluorescence indicator
페퍼민트 오일 분리의 예
기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)
22