tema n° 1 instrumentación y equipo de laboratorio
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APUNTES. LABORATORIO 1. INSTRUMENTACION Y EQUIPO DE LABORATORIO Latrodectus mactans
Probeta
TEMA N° 1: INSTRUMENTACIÓN Y EQUIPO DE LABORATORIO
A. MEDICIÓN DE VOLUMENES
Probetas: se usan para medir volúmenes aproximados o grandes. No interesa la exactitud.
Micropipetas y pipetas de vidrio: se usan para mediciones exactas.
Pipetas de vidrio
Mohr Serológicas
No están calibradas hasta la punta. Calibradas hasta la punta.
NO es correcto dispensar todo el volumen. Pueden dispensar el volumen total de la pipeta.
Micropipetas
o Dispensan volúmenes muy pequeños.
o Micropipetas fijas (10µL, 20 µL, 50 µL, 100 µL, 200 µL … )
o Micropipetas ajustables (10-100 µL; 100 − 1000 µL )
Propipetas
o Azul → 1-2 µL
o Verde→ 5-10 µL
o Roja→ 10-25 µL
Frascos dispensadores
o De vidrio o plástico.
o Tienen adaptado un sistema que dispensa la cantidad de
líquido requerido, sin la necesidad de usar pipetas.
o Es seguro y rápido.
B. MEDICIÓN DE pH
Potenciómetro
o Posee un electrodo combinado de vidrio que detecta [H+] en una solución
transformándola a pH.
o Puede usarse en titulaciones.
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C. MEDICIÓN DE ABSORBANCIA
Absorbancia
o Luz absorbida por un cuerpo o una solución.
o E una medida indirecta de la concentración de una sustancia.
𝐀 = − 𝐥𝐨𝐠𝟏𝟎 𝐓
Trasmitancia: Luz transmitida por un cuerpo o una solución.
Ley de Beer-Lambert: expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática y
concentración de un cromóforo en solución.
La luz visible está en un intervalo de ≈ 390-780 nm en el espectro electromagnético.
Espectrofotómetro
o Mide, en función de la longitud de onda, la absorbancia de una sustancia determinada
en una solución.
o Se proyectar un haz de luz monocromática a través de una muestra y mide la cantidad
de luz absorbida por la muestra.
o Da información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra e indica indirectamente
la cantidad de la sustancia está presente en la muestra.
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Espectrometría
Técnica que estudia la región visible del espectro dentro del rango de 400-700 nm
Longitud de onda (nm) Color
400 Azul
500 Verde
600 Amarillo
700 Rojo
PARTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO
Fuente de luz: ilumina la muestra.
Monocromador: aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan
desde el conjunto. se usa para obtener luz monocromática.
Celda: es el compartimiento de muestra, generalmente fabricado de cuarzo. Se manipulan por
su parte superior y se colocan en gradillas plásticas para evitar que se rayen con la madera o
metal con el cual se fabrican las gradillas.
Detector: detecta una radiación. Hay de dos tipos: los que responden a fotones y los que
responden al calor.
Registrador: convierte el fenómeno físico, en números proporcionales al analito.
DATOS
La absorbancia (en el laboratorio) va de 0 – 2. Sus “divisiones” (calibración) NO son proporcionales.
La trasmitancia (en el laboratorio) va de 100 – 0
Espectrómetro
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Cada vez que cambio la longitud de onda se utiliza agua para calibrar el Espectronic 20
(espectrofotómetro utilizado en el laboratorio).
RESULTADOS
Absorbancia
Longitud de onda (λ) nm
Azul de metileno Color-Azul
Ácido Píprico Color-Amarillo
Sulfato de cobalto Color- Rojo/Fucsia
420 0 0, 26 0, 06
520 0, 06 0 0, 85
595 0, 43 0 0, 06
Fuente: Datos obtenido en el laboratorio de bioquímica, Facultad de Medicina de la UP. 2012.
Nota: también se pueden usar los siguientes reactivos: Cromato de potasio (K2CrO4)- Color amarillo;
Sulfato de cobalto (II) (CoSO4)-Color rojo/Fucsia
λ (nm) y color de la luz Nombre de la solución Color de la solución
430 - Azul Ácido píprico Amarillo
500 -Verde Sulfato de cobalto (II) Rojo/Fuscia
590- Amarillo Azul de metileno Celeste
CUESTIONARIO
¿Qué requisito debe tener una solución para ser leída por espectrofotómetro (en la región
visible)?
La solución debe tener color.
¿Qué relación debe haber entre el color de la luz y el color de la solución para que haya una
absorbancia total?
El color de la luz y el color de la solución deben ser colores complementarios.
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0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
420 520 595
Absorbancia
Longitud de onda
Absorbancia vs Longitud de onda
Azul de metileno (ColorAzul)
Ácido Píprico (Coloramarillo)
Sulfato de cobalto (ColorRojo/Fucsia)