TEMA 1TEMA 1HEMOPOYESISHEMOPOYESIS

1. Composición de la sangre2. Hematopoyesis

Componentes de la sangre

• Hematocrito– 55% plasma

– 45% cells • 99% RBCs• < 1% WBCsand platelets

SANGRE: líquido circulante por Sist. Circulatorio‐¼ líquido extracelular‐ 7% peso corporal (5L en 70 Kg)‐ Cels sanguineas: 2 l 

HEMATOPOYESIS•DEFINICIÓN: Proceso por el que se generan todas las células de  la circulación

•ORIGEN: ‐ embrión: saco vitelino, bazo, hígado, médula ósea‐adultos: médula ósea

•FACTORES ESTIMULADORES:‐Para leucos: interleucinas, CSF, GMCSF‐Para eritrocitos: EPO (riñón)‐Para plaquetas : Trombopoyetina(hígado)

•ALTERACIONES:‐Anemias, Leucemias

Médula ósea

Tejido blando que contiene sangre, grasa y cels hematopoyéticas

Contenida en un estuche óseo

MO cede elementos más maduros a la circulación en los momentos adecuados; la mayoría de estas cels completan su maduración en sangra periférica (sp) o en los tejidos

El nivel de hematopoyesis puede incrementarse de 2-8 veces cuando existe demanda periférica

Estructura de la MO:

Senos medulares dispuestos radialmente, revestidos de celsendoteliales, que se comunican directamente con los capilares intracorticales y drenan a la vena central

El paso de las cels sanguíneas se produce a través de los poros que se forman de novo en el citoplasma de las cels endoteliales; dicho tránsito es selectivo y solo pasan cels que han alcanzado cierto grado de madurez

Médula ósea

El tejido hematopoyético se sitúa entre los senos, por tanto la hematopoyesis es extravascular

Las distintas estirpes adoptan una distribución topográfica muy constante

Eritroblastos: cerca del sinusoide, se agrupan en islotes alrededor de los macrófagos [para facilitar la rofeocitosis o incorporación de Fe]

Granulopoyesis: en la parte más central de los espacios intersinusales

Las cels linfoides se distribuyen de modo irregular por todo el espacio, salvo ocasiones en que se agrupan en folículos linfoides

Megacariocitos: inmediatamente adyacentes a los senos para facilitar el abocamiento plaquetario en su interior

Las cels hematopoyéticas diferenciadas pasan desde los cordones medulares hacia la circulación a nivel de los senos, que tienen una luz muy amplia; deben hacerse hueco = separar las cels endoteliales, que están unidas por desmosomas; la adventicia que rodea a estas cels es incompleta y se supone que modula la intensidad de paso de celshematoyéticas a la circulación

Serie eritropoyéticaProeritroblasto

La serie roja supone un 20-30% de la celularidad de la MO

Tamaño y forma celular: diámetro de 14-19 μm, ovoideNúcleo: -Grande, redondo-De color púrpura claro con cromatina laxa uniforme

dispuesta en forma filamentosa-2 a 3 nucleolos rodeados de cromatina intensaCitoplasma: -Escaso-BasófiloRelación núcleo/citoplasma: aumentada

PROERITROBLASTOS en M.O

Eritroblasto Basófilo

Tamaño celular: diámetro de 12-17 μmNúcleo:-Grande, redondo, céntrico-De color púrpura oscuro-Cromatina más definida, de aspecto grueso-No tiene nucleolos visibles, en caso de versenucleolos tienen bordes difusos sin cromatina circunscrita

Citoplasma:-Intensamente basófilo-No tiene granulacionesRelación núcleo/citoplasma: aumentada

ERITROBLASTOS BASÓFILOS

Eritroblasto policromatófilo

Tamaño celular: diámetro de 12-15 μmNúcleo: -Céntrico, redondo-De cromatina compacta y condensadaCitoplasma: -Ligeramente gris azulado por la síntesis a gran escala de Hb

Relación núcleo/citoplasma: intermedia

ERITROBLASTO POLICROMATÓFILO

Eritroblasto ortocromático

Tamaño celular: diámetro de 12-15 μmNúcleo:-Excéntrico-Oscuro, homogéneo-De cromatina condensada-Sin estructura nuclear (picnótico), incapaz de replicar su DNACitoplasma: -Abundante-Acidófilo

ERITROBLASTO ORTOCROMÁTICO

Eitrocito policromatófilo

Tamaño celular: diámetro de 7-10 μmNúcleo: -Ha perdido el núcleo Citoplasma:-Coloración violácea (tiene afinidad por coloranteácido y básico del colorante de Wright)-Restos de RNA pueden visualizarse con la tinción supravital (azul cresil brillante) recibiendoel nombre de reticulocitoValor normal en sangre periférica: 0,5-1,5% y su recuento indica el ritmo de la eritropoyesis: si aumenta hay policromatofilia

•RETICULOCITO: pre-eritrocito, anucleado y sin mitocondria, primera célula que deja pasar la médula ósea a sangre

En 24-48 horas se transforma en ERITROCITO= 4 meses de vida y destrucción en bazo

Hematíes maduros

Tamaño celular: diámetro de 6.2-8.2 μm y espesor de 1.8-2.2 μmForma celular: disco circular bicóncavo y elásticoNúcleo:-Carente de núcleo-Halo claro centralCitoplasma:-Acidófilo (se observa de color rojo-naranja)-Contiene de 27-32 pg de Hb

ERITROCITOS/HEMATÍES

• FUNCIÓN: transporte de O2 y CO2. Contiene pigmento transportador de O2 (proteína): hemoglobina, que le da el color rojo al hematíe y constituye la 3ª parte del peso de la célula

• CARACTERÍSTICAS: su forma de disco bicóncavo hace que aumente su área de superficie (difusión de gases), sea flexible. No tiene núcleo ni otros orgánulos. No sufre división celular ni necesita formación de ATP  para la respiración celular

Hombre: 5,4 millones/mcl•NÚMERO  Mujer: 4,8 millones/mcl

‐Producción de 2 millones por segundo de hematíes al torrente sanguíneo

ERITROPOYESIS

•DEFINICIÓN:  proceso completo de formación de los eritrocitos

•FACTORES EXÓGENOS NECESARIOS: ‐Hierro:  biosíntesis hemoglobina‐Cobalamina: vit B12 y Ácido Fólico. Factores de maduración celular

•RETICULOCITO: pre‐eritrocito anucleado y sin mitocondria, primera célula que deja pasar la médula ósea a sangreSu recuento indica el ritmo de la eritropoyesis: normal 0,5%‐1,5%

En 24‐48 horas               ERITROCITO= 4 meses de vida y destrucción en bazo

Serie granulopoyética

Las cels granulopoyéticas constituyen el 60-65% de las cels de la MO

Los cambios morfológicos consisten en reducción de la relación núcleo-citoplasma, desaparición de los nucleolos, maduración de la cromatina nuclear, desaparición de la basofilia citoplasmática, aparición de granulación primaria o azurófila a partir del promielocito y aparición de la granulación secundaria o específica [neutrófila, eosinófila, basófila] a partir del mielocito; por ultimo tiene lugar una indentacióndel núcleo al llegar a metamielocito, y una segmentación del núcleo en el estadio de segmentado

La granulación azurófila es carácterística de esta línea, con alto contenido en hidrolasas ácidas, puede; considerarse formada por lisosomas primarios

Serie granulopoyética

Por citoquímica

se demuestra que los gránulos primarios contienen mieloperoxidasa, que constituye el mejor marcador [gr. primaria];

también, lisozima [1/3 de la actividad], fosfatsa ácida [también en otras estructuras]; el color azulado se debe a mucopolisacáridossulfatados, lo que contribuye a la PAS positividad así como a la metacromasia con azur A; el color rojo púrpura con tinciones panópticas se pierde en el estadio siguiente al mielocito, ya que sepierde la metacromasia

A partir del estadio de mielocito aparece la granulación secundaria o específica; gránulos de menor tamaño (0,3 µm) y menos densos; coexisten primarios y secundarios y en sucesivos estadios disminuyen los primarios y aumentan los secundarios

Citoquímica

Los gránulos secundarios son MPO negativos y lisozima positivos en mayor proporción que los primarios; el mejor marcador de la granulación secundaria es la lactoferrina; en el segmentado la granulación primaria reopresenta 1/3 y la secundaria 2/3

Serie granulopoyética

Mieloblasto

No hay acuerdo sobre si tiene o no tiene gránulos: al microscopio óptico, no obstante, carece de granualación [Woessner]

Célula de tamaño de 15-20 µm, de forma redondeada u oval y contorno liso

Núcleo de gran tamaño, redondeado, cromatina finamente reticulada, con presencia de 2-3 nucleolos bien visibles

Citoplasma basófilo, aunque menos que el del proeritroblasto, escaso y sin granulación y sin vacuolas

A nivel ultraestructural puede detectarse MPO en reticuloendoplásmico y aparato de Golgi

MIELOBLASTO en M.O MIELOBLASTO en sp

Promielocito

Tamaño ligeramente superior al mieloblasto, 16-25 µm y es la celmayor de la granulopoyesis normal

Forma redondeada u oval

Núcleo redondeado, situación algo excéntrica, cromatina algo más densa, con algún nucleolo visible

Citoplasma amplio y basófilo y contiene un número variable de gránulos primarios o azurófilos, que se disponen alrededor del núcleo dejando una zona más clara, agranular: zona centrosómica; esa granulación toma un color rojo-violacea con tinciones panópticas habituales

Citoquímica

Positivos a MPO, fosfatasa ácida, naftol_AS-D-cloro-acetatoesterasa

Negro de sudán: positivo por su contenido en MPO

PAS positivos, por su contenido citoplásmico en glucógeno

PROMIELOCITO, MO

MIELOBLASTO

PROMIELOCITO, sp

Mielocito

Cel redondeada de tamaño, 12-18 µm

Núcleo redondeado, situación algo excéntrica; cromatina condensada en acúmulos de color violeta oscuro y sin nucleolo visible

Citoplasma ha perdido toda su basofilia, contiene un gran número de gránulos

A partir de este estadio comienza la formación de granulación secundaria específica [neutrófila, eosinófila, basófila], que junto con la primaria persiste en todos los elementos de la serie

MIELOCITO NEUTRÓFILO1.MIELOBLASTO  2.MIELOCITO NEUTRÓFILO  3. CAYADO

Metamielocito

Tamaño, 10-15 µm

Posee las mismas carcterísticas morfológicas del mielocito, salvo la forma del núcleo, que es reniforme al iniciar su indentación con zona convexa hacia el exterior y zona cóncava hacia el interior

Núcleo reniforme con cromatina condensada en numerosos acúmulos

Ha perdido su capacidad mitótica

Al progresar en su maduración se estrecha su núcleo hasta que éste se transforma en una delgada banda [forma de cayado], lo que da lugar a su nombre; el tamaño es algo inferior al de su precursor, siendo igual en lo demás; la mayor parte se localiza en la MO, y solo un 2-5% pasa a sp, aumentando la proporción en infecciones

METAMIELOCITOS

Promielocito

Mielocitos neutrófilos

Cayado

LEUCOCITOS

6 TIPOS DIFERENCIADOS DE LEUCOCITOSNEUTRÓFILO POLIMORFONUCLEAR: función fagocitaria, son muy móviles, pueden emigrar de los vasos y penetrar en los espacios tisulares. Esto es la diapédesis

•EOSINÓFILO  POLIMORFONUCLEAR:  aunque  son  fagocitos débiles pueden ingerir sustancias químicas y proteínas inflamatorias relacionadas con  complejos  de  la  reacción  antígeno‐anticuerpo.  Protección  frente  a infcciones por  gusanos‐parásitos  y  a  las  reacciones  alérgicas.  Liberan histaminasa, mitigan la inflamación originada por los basófilos

•BASÓFILO POLIMORFONUCLEAR:  son móviles y  capaces de diapédesis, liberan histamina (sustancia química inflamatoria), serotonina y heparina en  reacciones  alérgicas,  que  aumentan  la  respuesta  inflamatoria; evolucionan a mastocitos en los tejidos 

• MONOCITOS: evolucionan a macrófagos en tejidos: función fagocítica

•LINFOCITOS:  se  activan  y  autorregulan  como  respuesta  a  sustancias extrañas llamadas antígenos.

‐ linfocitos B, crean anticuerpos, tras transformarse en cels plasmáticas, para combatir a los agentes extraños.

‐ linfocitos T, atacan directamente a las células infectadas

LEUCOCITOS

DEFINICIÓN:  células blancas sanguíneas‐ Producción en MO y maduración en sangre y tejidos linfáticos (ganglios). Se almacenan en MO, ganglios y órganos linfáticos

FUNCIÓN: respuesta inmune. Se movilizan a tejidos dañados y focos de infección

PORCENTAJE DE LEUCOCITOS EN SANGRE:

NEUTRÓFILOS: 60‐70%, 10‐12 µmEOSINÓFILOS: 2‐4%BASÓFILOS: <1%MONOCITOS: 3‐8%, 12‐20 µmLINFOCITOS: 20‐30%, 6‐9 µm (pequeños) y 10‐14 

µm (grandes)

En MO suponen un 10% de la celularidad

Los linfocitos B se originan en la MO y sufren su proceso madurativo en la propia MO; luego migran a la sp y al resto de tejidos linfoides

Los linfocitos T se originan en la MO y maduran hasta el estadio pre-T, finalizando su proceso de maduración en el timo

En sp el 70-80% son linfocitos T y el resto, linfocitos B

Desde un punto de vista morfológico, existen 2 tipos de linfocitos, los pequeños y los medianos [grandes]

Serie linfocítica

Pequeños: 7-10 µm, constituyen la mayor parte de la población linfocitaria; el núcleo ocupa la mayor parte de la superficie celular, con cromatina muy condensada que se tiñe de color púrpura intensa, y muy escaso citoplasma

Grandes: muy heterogéneos en tamaño, 11-16 µm; núcleo similar al de los pequeños aunque un poco mayor y puede tener una pequeña depresión, pero el citoplasma es mucho mayor, que suele teñirse de azul por basofilia; pueden tener gránulos azurófilos que no se tiñen de peroxidasa

Serie linfocítica

Marcadores linfocitarios. Citometría de flujo

Linfocito B maduro: CD 19, CD 20

Linfocito T de sp: CD3, CD4, CD8

CD3+CD8+ se desarrollan hacia linfos T citotóxicos y actúan

frente a cels infectadas por virus o transformadas

CD3+CD4+: Helper

Th1: tras la estimulación con el Ag, IL2 y linfos B, secretan IL2 y TNF, y estimulan a los linfos T citotóxicos

Th2: tras la estimulación con el Ag, linfos B y macrófagos, secretan IL4, IL5, IL10 e IL13 y estimulan a los linfos B y la producción de Ac

Cels NK son CD3-CD56+, constituyen el 10% de los linfocitos

circulantes en sp; proceden de la cel madre pluripotencial de la MO

y completan la maduración en el timo, aunque no se conoce en su

totalidad

Precursores de linfos B, linfos T y mielomonoblasto: CD34 [su

presencia indica presencia de cels inmaduras, probable presencia de

blastos]

Linfocito, MO p q , p

Linfocito mediano

Secretora de Igs, representan el estadio final de la transformación antigénica del linfocito B

Se localizan en los ganglios linfáticos, bazo, timo y MO [en MO suponen un 1% de las cels]; en procesos reactivos pueden pasar a sp

Tamaño de 12-15 µm, forma ovalada, núcleo siempre excéntrico, cromatina condensada en fuertes acúmulos, cuya disposición radial adopta ángulo recto con el eje mayor de la cel, lo cual es muy carácterístico

Citoplasma abundante e intensamente basófilo, excepto en la zona centrosómica, donde adquiere una tonalidad blanquecina [arcoplasma]; desprovisto de granulación, puede contener vacuolas o bien cuerpos de Russell [inclusiones de 2-3 µm de color rosa claro o incoloros que corresponden a inclusiones de igs; en ocasiones adoptan una

forma cristalina]; el citoplasma puede adoptar una coloración rojo violácea, [aspecto flameado],debido a acumulación de glicoproteínas en sacos ergastoplásmicos

Célula plasmática

CÉLULA NK y plaquetas

METAMIELOCITO

CÉLULA PLASMÁTICA

Serie monocíticaMonoblasto

Difícilmente identificables en la MO en sujetos normales

En Leucemias monoblásticas sí se distinguen claramente de los mieloblastos, con un tamaño, 15-25 µm, superior al mieloblasto

Cels redondeadas con gran núcleo redondeado, cromatina muy laxa con numerosos nucleolos [más de 5]

Citoplasma más abundante que el del mieloblasto, intensamente basófilo con tonalidad azul plomiza con las tinciones habituales

El dato más fidedigno para su filiación es su intensa positividad a esterasa inespecífica fluorosensible

MONOBLASTO

Promonocito

Claramente identificables en la MO, pese a su escaso número

Tamaño, 15-20 µm, elevada proporción núcleo-citoplasma

Núcleo de aspecto morfológico irregular, con pliegues e indentaciones, cromatina algo más condensada que la de su precursor, con uno o dos nucleolos visibles

Citoplasma intensamente basófilo por su gran riqueza en polirribosomas; puede contener gránulos azurófilos, aunque en número escaso, lo que dificulta su diferenciacion de los promielocitos

Citoquímica: positivos a:

Fosfatasa ácida, naftol-AS-D-acetatoesterasa fluorosensible, alfanaftilbutiratoesterasa, peroxidasa, N-acetil B—glucosaminidasa, arilsulfatasa

PROMONOCITO

PROMONOCITO MONOCITO

Monocito

Cels de mayor tamaño encontradas en sp, 15-30 µm, con forma irregular, cuadrangular u oval

Núcleo en situación central, voluminoso de aspecto morfológico irregular, en herradura, indentado o doblado, cromatina densa y con aspecto como peinada en finas franjas cormatínicas; sin nucleolos

Citoplasma amplio con ocasionales mamelones periféricos de color azul-plomizo; con número variable de gránulos azurófilos; el citoplasma puede contener alguna vacuola

Citoquímica: positivos a:

Esterasas inespecíficas [naftol-AS-D-acetatoesterasa fluorosensible, alfanaftil butiratoesterasa] que se inhiben casi totalmente con fluoruro sódico, Fosfatasa ácida, lisozima, glucuroniidasa, arilsulfatasa; la actividad peroxidasa se ubica en la granulación primaria; a diferencia de los neutrófilos los monocitos son negativos a Naftol-cloroacetato-esterasa, fosfatasa alcalina y lactoferrina

MONOCITO MACRÓFAGO

Serie megacariocítica-plaquetar

En esta serie, a diferencia de las otras, las divisiones del núcleo no van seguidas de divisiones citoplasmáticas, lo que origina cels poliploidesde gran tamaño [aprox 8 núcleos por cel, oscilando entre 4-32]

MegacarioblastoObservación infrecuente en MO, 1-5%, 10-25 µm [el menor de la serie]

Núcleo único, grande, ovalado o bilobulado, cromatina laxa y numerosos nucleolos

Citoplasma intensamente basófilo, agranular, con prolongaciones a modo de pseudópodos muy característicos

Plaquetas

• Tienen su origen en el tejido hematopoyético de la médula ósea

• Se forman por fragmentación del citoplasma de unas células gigantes, llamadas megacariocitos

MEGACARIOBLASTO PROMEGACARIOCITO

Promegacariocito

Inicia la granulogénesis en diversas partes del citoplasma

Tamaño: 30-50 µm, fácilmente identificable en la MO, con citoplasma de bordes mal delimitados con numerosas prolongaciones

Núcleo multilobulado, cromatina densa, sin nucleolos

Citoplasma con tonalidad basófila, cubierta en zonas de numerosas granulaciones azurófilas

PLAQUETAS NORMALES

Megacariocito

Gran tamaño: >=80 µm,y extraordinaria ploidía

Núcleo multilobulado o segmentado, cromatina densa, sin nucleolos

Citoplasma extenso, ha perdido todo resto de basofilia, cubierto totalmente por granulación azurófila; los gránulos se disponen especialmente en la periferia, en acúmulos de 10-12 unidades, rodeados por una zona hialina citoplásmica [= membranas de demarcación], que irán delimitando las futuras plaquetas; la rotura y desprendimiento de los fragmentos de demarcación da lugar a los trombocitos

Tiene capacidad de captar y liberar serotonina, así como de pinocitosisy tiene receptores del C

Citoquímica

Positivos a PAS, fosfatasa ácida y esterasas inespecíficas

q

Desprendidas del citoplasma de los megacariocitos adultos pasan a la sp, donde ejercen sus funciones en la hemostasia

Tamaño: 2-3 µm, desprovistas de núcleo: son fragmentos celulares

En los frotis se observan, con frecuencia, agregadas, ya que poseen gran capacidad de agregación

Forma discoide, con prolongaciones

Poseen gránulos muy característicos, no visibles al microscopio óptico:

Gránulos alfa: contienen factor plaquetario 4, fibronectina, fibrinógeno, factor V, B-tromboglobulina y fGF

Un segundo tipo de gránulos, gránulos densos: Ca, serotonina, ADP y ATP

Vida media 8-12 días en sp, luego son destruidas en el bazo por las cels de SMF

PLAQUETA GIGANTE CON GRANULACIÓN NORMAL

ANISOCITOSIS PLAQUETARIA