tekniker, metoder och peg i nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf ·...
TRANSCRIPT
![Page 1: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/1.jpg)
Tekniker, metoder och PEG
i
Nefelometrisk/turbidimetriska
analyser
Anders Larsson
KKF, Uppsala
2011
![Page 2: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/2.jpg)
Turbidimetri
2011
Prov
![Page 3: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/3.jpg)
Nefelometri
2011
Prov
![Page 4: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/4.jpg)
Nefelometri/turbidimetri
2011
Prov
Prov
Prov
Prov
![Page 5: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/5.jpg)
Nefelometri/turbidimetri
Små mängder antigen
2011
Prov Prov
![Page 6: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/6.jpg)
Nefelometri/turbidimetri
Antigensöverskott
2011
Prov
Prov
![Page 7: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/7.jpg)
![Page 8: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/8.jpg)
Heidelberger-Kendall
Precipitering av komplex i lösning
(1-3 dygn, 37oC och 4oC)
2011
Mängd antigen
Grumlighet
![Page 9: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/9.jpg)
Antigenet och antikroppens ursprung
påverkar kurvans form
2011
Mängd antigen
Grumlighet
![Page 10: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/10.jpg)
Komplementaktivering påverkar
precipitatstorleken
2011
Mängd antigen
Grumlighet
![Page 11: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/11.jpg)
Interferens av anti-IgG i provet
Orsaker:
RF
HAMA
Andra anti-IgG
Troligen mindre problem i nefelometri
än i t.ex. Sandwich immunoassays
2011
![Page 12: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/12.jpg)
Tillsats av polymerer för att snabba på och
förstärka reaktionen (Hyaluronsyra,
dextran, Polyetylenglykol (PEG), etanol,
ammoniumsulfat)
![Page 13: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/13.jpg)
2011
![Page 14: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/14.jpg)
PEG
Fäller ”selektivt” immunkomplex i
intervallet <4% PEG 6000 om vi använder
fria antikroppar
Ju lägre PEG konc ju större komplex krävs
och ju tidigare når vi antigen excess
Inert
Billig
Atoxiskt
Ej brandfarligt
Ej temp beroende
Går göra koncentrerade PEG lösningar
![Page 15: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/15.jpg)
![Page 16: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/16.jpg)
![Page 17: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/17.jpg)
Rening av antikroppar
Precipitation
Etanol (gammaglobulin)
40% amsulfat
12%PEG 6000
Jonbyteskromatografi
Affinitetskromatografi
T.ex. Protein A, G, L, T-gel
![Page 18: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/18.jpg)
![Page 19: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/19.jpg)
Varierande linjaritet inom
mätområdet
Kurvanpassningsproblem!
2011
Mängd antigen
Grumlighet
Mätområde
![Page 20: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/20.jpg)
Varierande linjaritet inom
mätområdet
Kurvanpassningsproblem!
![Page 21: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/21.jpg)
Hur kan vi kontrollera att vi inte råkar ut
för antigen excess?
Flesta proteiner har så liten
koncentrationsvariation att det inte är
något problem.
Exempel på problemanalyser
U-albumin
IgG, IgA, IgM
lätta kedjor
![Page 22: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/22.jpg)
Mängd antigen
Grumlighet
Antigen excess kontroll 1
Tillsats av antigen
![Page 23: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/23.jpg)
2011
Absorbans
700 nm
700 nm
0,000
0,200
0,400
0,600
0,800
1,000
1,200
1 6 11 16 21 26 31
Point
Ab
s
CYSTC 0,81 mg/L CYSTC 3,02 mg/L CYSTC 6,98 mg/L
Antigen excess kontroll 2
Initiala absorbansförändringen
![Page 24: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/24.jpg)
Sammanfattning PEG och vanliga
nefelometriska metoder
Vill vi ha snabba svar krävs någon form av
polymer när vi använder fria antikroppar
Oftast används PEG 6000 (numera 8000)
PEG skall helst inte fälla fritt IgG vilket
gör att PEG konc oftast är 3-4% i
reaktionsblandningen
![Page 25: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/25.jpg)
Vad gäller för
partikelförstärkta metoder?
Teoretiskt bör PEG konc vara
lägre än de 3-4 % som används
för fria antikroppar
![Page 26: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/26.jpg)
Ingen selektivitet med 4%PEG
Prov
Prov
![Page 27: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/27.jpg)
2011
Partikelbaserade tester
Partiklarna bör vara små
Mindre diffusionsavstånd
Snabbare reaktion
![Page 28: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/28.jpg)
Partikelbaserade tester
har ett bra antigen excess skydd
Tveksamt om PEG tillför något för antigen
excess
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1
0 10 20 30 40 50 60 70 80
cystatin C concentration (mg/L)
delt
a a
bso
rban
ce
![Page 29: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/29.jpg)
Kalibreringskurvor, Architect
0,0000
0,2000
0,4000
0,6000
0,8000
1,0000
1,2000
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00
lot 1006401
220/45/3 kal 8,30
spädd med fys
buffert sp 25%
med PEG-fri buffert
lot 1006401
220/45/3 kal 8,30
spädd med fys
PEG-fri buffert
Partikelbaserade tester
PEG påverkar kurvformen
![Page 30: Tekniker, metoder och PEG i Nefelometrisk/turbidimetriska ... metoder peg_a larsson.pdf · Sammanfattning PEG och vanliga nefelometriska metoder Vill vi ha snabba svar krävs någon](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022021915/5c91f47609d3f207228c3c90/html5/thumbnails/30.jpg)
Tusen tack för uppmärksamheten
Anders Larsson
KKF, Uppsala
2011
Prov
Prov