techniques of isolation
TRANSCRIPT
![Page 1: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/1.jpg)
ISOLATION
![Page 2: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/2.jpg)
Isolasi senyawa kimia dari bahan alam adalah suatu usaha bagaimana caranya memisahkan senyawa yang bercampur sehingga kita dapat menghasilkan senyawa tunggal yang murni.
Misalnya: dari tumbuhan (DAUN, BUAH, BUNGA, KULIT BATANG, KULIT AKAR)
Biasanya: targetnya adalah senyawa metabolit sekunder, karena senyawa metabolit sekunder diyakini dan telah terbukti dapat memberikan manfaat bagi kehidupan manusia
![Page 3: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/3.jpg)
Misal:Anda menemukan ataupun mendapatkan informasi bahwa sebuah tumbuhan telah digunakan dalam pengobatan suatu penyakit tertentu.Tentu saja tumbuhan tersebut bisa memberikan efek karena ada sesuatu yang dikandungnya.Bagaimana cara kita mengetahui jenis senyawa yang terkandung dalam tumbuhan yang memberikan efek farmakologis itu?Salah satu caranya adalah dengan mengisolasi senyawa kimia yang terdapat dalam tumbuhan itu dan kemudian menguji aktivitas farmakologisnya.
![Page 4: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/4.jpg)
Apakah semua senyawa yang terdapat dalam tumbuhan itu dapat diisolasi?
Jawabnya: tidak mungkin. Karena senyawa yang terdapat dalam tumbuhan itu sangat banyak (ratusan atau jutaan)Biasanya yang memberikan efek farmakologis itu adalah senyawa yang persentasenya didalam tumbuhan itu besar, dan biasanya juga memang senyawa ini yang mudah diisolasi.
![Page 5: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/5.jpg)
1. Melakukan ekstraksi dengan menggunakan pelarut organik (biasanya)
2. Melakukan fraksinasi dengan berbagai metode, antara lain menggunakan metode partisi, kromatografi kolom, kromatografi planar, kromatografi radial, HPLC dll.
3. Elusidasi struktur senyawa yang telah diisolasi dengan menggunakan berbagai metoda spektroskopi seperti Ultraviolet, Inframerah, spektum massa dan NMR
4. Uji aktivitas farmakologis senyawa yang telah diisolasi itu
LANGKAH-LANGKAH/ GARIS-GARIS BESAR YANG DILAKUKAN DALAM PENELITIAN/ ISOLASI SENYAWA ORGANIK BAHAN ALAM
LANGKAH-LANGKAH/ GARIS-GARIS BESAR YANG DILAKUKAN DALAM PENELITIAN/ ISOLASI SENYAWA ORGANIK BAHAN ALAM
![Page 6: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/6.jpg)
Ekstraksi adalah proses pengambilan komponen dari sampel/bahan atau campuran dengan menggunakan pelarut seperti alkohol, eter, aseton dan sebagainya bahkan juga air. Komponen itu harus larut dalam pelarut tersebut.
Metode ekstraksi yang dipilih untuk mendapatkan senyawa bahan alam tergantung kepada jenis sampel tumbuhan dan jenis senyawa yang ada.Terutama tergantung pada keadaan fisik senyawa tersebut.Misalnya senyawa berupa cairan yang mudah menguap.
Metode ekstraksi
![Page 7: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/7.jpg)
Ada beberapa metode ekstraksi senyawa bahan alam yang umum digunakan:
2. Percolation
1. Maceration (perendaman)
4. Steam Distillation
3. Soxhletation
![Page 8: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/8.jpg)
Metode maserasi digunakan terutama jika kadar senyawa metabolit sekunder yang ada dalam sampel cukup tinggi dan adanya suatu pelarut yang dapat melarutkannya tanpa pemanasan
1. Maceration (perendaman)
Setelah direndam kemudian disaring dan filtratnya diuapkan dengan alat rotary evaporator sampai diperoleh ekstrak kental
Biasanya cara ini digunakan untuk senyawa yang tidak tahan panas dan membutuhkan waktu yang cukup lama
![Page 9: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/9.jpg)
1 x 24 jam
Kapan maserasi dihentikan? Ekstrak kental
![Page 10: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/10.jpg)
![Page 11: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/11.jpg)
Metode perkolasi menggunakan suatu pelarut yang dilewatkan secara perlahan (tetes demi tetes) kepada sampel.
2. Percolation
Pelarut yang digunakan pelarut yang tidak mudah menguap, tetapi melarutkan senyawa organik yang terkandung dalam bahan alam tersebut cukup besar
Filtrat yang diperoleh kemudian diuapkan pelarutnya menggunakan alat rotary evaporator
![Page 12: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/12.jpg)
sampel
kapas
Ekstrak kental
Pelarut diteteskan
Kapan maserasi dihentikan?
![Page 13: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/13.jpg)
Metode sokletasi mempunyai keunggulan dari metode lainnya, karena metode ini penyarian dapat dilakukan berulang-ulang dan pelarut yang digunakan tidak banyak
3. Soxletation
Prinsipnya yaitu menggunakan suatu pelarut yang mudah menguap secara berulang-ulang dan dapat melarutkan senyawa organik yang terdapat pada sampel.
Sokhletasi merupakan teknik ekstraksi yang digunakan terhadap sampel padat yang senyawa kimianya tahan panas.
![Page 14: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/14.jpg)
air keluar
air masuk
Kapan sokhletasi dihentikan?
![Page 15: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/15.jpg)
![Page 16: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/16.jpg)
Ada dua teknik pengerjaan dalam metode distilasi uap:
4. Steam Distillation
Distilasi uap digunakan untuk senyawa yang dapat menguap bersama uap air.
a. Uap air dihasilkan tersendiri, terpisah dari sampel bahan alamb. Sampel bahan alam langsung ditambahkan air dan
dipanaskan
Senyawa: minyak atsiri
![Page 17: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/17.jpg)
steam
air keluarair masuk
a. Uap air dihasilkan tersendiri
![Page 18: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/18.jpg)
Industrial Scale
![Page 19: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/19.jpg)
air masuk
air keluar
b. Sampel langsung ditambahkan air
Massa jenis minyak atsiri > air
![Page 20: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/20.jpg)
air masuk
air keluar
Massa jenis minyak atsiri < air
![Page 21: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/21.jpg)
Metode Fraksinasi
1. Ekstraksi Pelarut2. Kromatografi kolom3. Kromatografi lapis tipis preparatif4. Kromatotron5. High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
Ada beberapa metode fraksinasi, antara lain
![Page 22: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/22.jpg)
1. Ekstraksi Pelarut
Corong pisah
Ekstrak kental (g) dicampurkan dengan air (mL), dan diaduk. Kemudian masukkan kedalam corong pisah dan tambahkan pelarut organik (mL) yang tidak bercampur dengan air. Pelarut yang digunakan mulai dari yang non polar ke yang polar.Biasanya pelarut yang digunakan adalah: heksana, etil asetat, 1-butanol atau juga boleh menggunakan pelarut lainnya. Kemudian setiap fraksi diuapkan pelarutnya
![Page 23: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/23.jpg)
diaduk
Water (mL) + extract (g)
Organic solvent (mL) that is not soluble with water
Diambil
![Page 24: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/24.jpg)
![Page 25: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/25.jpg)
Terhadap fraksi-fraksi yang diperoleh dari ekstraksi pelarut ini dapat dilakukan:
1. Analisis KLT2. Kromatografi kolom3. KLT preparatif4. Kristalisasi/ Rekristalisasi5. Dan lainnya
Tergantung tujuan atau hasil analisis KLT ?
Masing-masing metode ini sangat erat kaitannya dalam mengisolasi senyawa organik bahan alam
![Page 26: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/26.jpg)
Adsorbent (silika gel)
kapas
2. Column Chromatography
Cara membuat kolom: ?
Sistem eluen:1.Isokratik2.Step Gradient Polarity (SGP)
![Page 27: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/27.jpg)
THIN LAYER CHROMATOGRAPHY (KLT)
![Page 28: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/28.jpg)
Preparative Thin Layer Chromatography
Cara: ?
Kapan digunakan ?
Batas eluen)
Sampel
![Page 29: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/29.jpg)
3. Chromatotrone
![Page 30: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/30.jpg)
4. High Performance Liquid Chromatography
![Page 31: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/31.jpg)
Crystallization and Recrystallization
Crystallization is one of the important method for the purification of the reaction product. The method consist of heating the crude product with suitable solvent (substance sparingly soluble in the solvent in cold and highly soluble on warming) and the filtered hot to remove any insoluble material. Upon cooling the substance generally in pure form crystallises out
![Page 32: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/32.jpg)
Contoh 1: Skema kerja isolasi senyawa organik bahan alamSampel (Kg)
Maceration (Metanol)dan disaring
Filtrate
Ekstrak kental (g)
Diuapkan (rotavapor)
Fraksinasi (ekstraksi pelarut)Heksana, Etil asetat, 1-butanol
Fraksi heksana Fraksi EA Fraksi 1-butanol Fraksi sisa (air)
Diuapkan (rotavapor)
Fr. kental E (g)
KLT, Krom. Kolom dll
Uji bioaktifitas
Uji bioaktifitas
Fr. kental A (g)Fr. kental H (g) Fr. kental B (g)
![Page 33: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/33.jpg)
Contoh 2: Skema kerja isolasi senyawa organik bahan alamSampel (Kg)
Maceration (Metanol)dan disaring
Filtrate
Ekstrak kental (g)
Diuapkan (rotavapor)
Fraksinasi (krom. kolom)Isokratik atau SGP
Fraksi 1 Fraksi 2 Fraksi 3 Fraksi 4
KLT untuk menentukan fraksi yang sama
Fraksi gab.
Krom. Kolom atau kristalisasi, dll
dst
Fraksi gab. Fraksi gab.
10 atau
20, dll mL
Uji bioaktifitas
Uji bioaktifitas
![Page 34: Techniques of Isolation](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022050721/557210e9497959fc0b8de76b/html5/thumbnails/34.jpg)