tao vat lieu thay xuong
TRANSCRIPT
![Page 1: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/1.jpg)
NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG TẾ BÀO GỐC
TỪ TỦY XƯƠNG ĐIỀU TRỊ BỆNH LÝ XƯƠNG
Huỳnh Duy ThảoBm Mô – Phôi – Di truyề[email protected]
![Page 2: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/2.jpg)
NỘI DUNG
ĐẶT VẤN ĐỀ1
MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU2
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU3
KẾT QUẢ4
HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO5
![Page 3: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/3.jpg)
ĐẶT VẤN ĐỀ
![Page 4: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/4.jpg)
+ Mô xương => tự lành vết thương [1]
+ Với những khuyết hỗng xương lớn => mô không thể tự chữa lành nếu không có sự can thiệp [2]
+ Vật liệu ghép thay xương:
– Ghép xương tự thân: “tiêu chuẩn vàng” [3]
– Ghép xương đồng loại
– Ghép xương dị loại
=> Những loại mô ghép trên có một số “hạn chế”
ĐẶT VẤN ĐỀ
![Page 5: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/5.jpg)
![Page 6: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/6.jpg)
+ Xương tự thân => Hạn chế số lượng, gây tổn thương
+ Xương ghép đồng loại => Hạn chế số lượng, “nguy cơ” truyền nhiễm bệnh: HIV, HBV, HCV, VDRL …
+ Xương dị loại => Dồi giàu nhưng nguy cơ truyền
nhiễm những “protein lạ” không kiểm soát được, yếu
tố tâm linh …
=> NHU CẦU TÌM NGUỒN THAY THẾ
ĐẶT VẤN ĐỀ
![Page 7: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/7.jpg)
![Page 8: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/8.jpg)
MẮC QUÁ VẬY TRỜI
![Page 9: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/9.jpg)
VẬT LIỆU GHÉP THAYXƯƠNG
– Kim loại (Titanium, Vitallium, Aluminium …)
– Calcium photphate (TCP và HA)
– Thủy tinh sinh học (gốm sứ)– Polymer tổng hợp
(Polyhydroxyethyl methacrylate, Polythylen ...)
![Page 10: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/10.jpg)
![Page 11: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/11.jpg)
?
![Page 12: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/12.jpg)
ĐÁP ỨNG NHU CẦU THỰC TẾ
KHÔNG CÓ XƯƠNG GHÉP
![Page 13: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/13.jpg)
Đ t o m t m nh ghép thay ể ạ ộ ảx ng hi u qu c n có:ươ ệ ả ầ - T bào (nguyên bào x ng)ế ươ - Giá th (khung x ng)ể ươ
ĐẶT VẤN ĐỀ
![Page 14: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/14.jpg)
TẾ BÀO GỐC
TỰ ĐỔI MỚI
BIỆT HÓA
TẾ BÀO KHÁC
TẾ BÀO MỠ
TẾ BÀO XƯƠNG
NGUỒN
TẾ BÀO
![Page 15: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/15.jpg)
RĂNG
MẠCH MÁU
GAN
TỦY XƯƠNG
NGUỒN THU NHẬN TẾ BÀO GỐC TRƯỞNG THÀNH
NÃO
DA
TUYẾN TIÊU HÓA
MÔ CƠ
MÁU NGOẠI VI
MÔ CƠ TIM
![Page 16: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/16.jpg)
TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ
MÔ MỠ
THẦN KINH TIM
MẠCH MÁU
THẬN
CƠ
TỦY XƯƠNGMÁU NGOẠI VI
XƯƠNG
MỠ
SỤN
![Page 17: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/17.jpg)
TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ
MẢNH GHÉP
NUÔI CẤY (IN VITRO)
CẤY GHÉP
VẤN ĐỀ TỒN TẠI ?
=> TẾ BÀO PHÂN TÁN
ĐẶT VẤN ĐỀ
![Page 18: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/18.jpg)
Giá thể - Porites lutea
Porites lutea - Đã được sử dụng để ghép thay xương - Làm giá thể để nuôi cấy tế bào
ĐẶT VẤN ĐỀ
![Page 19: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/19.jpg)
![Page 20: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/20.jpg)
CÔNG NGHỆ MÔ XƯƠNG
XƯƠNG GHÉP NHÂN TẠO
![Page 21: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/21.jpg)
Tế bào gốc trung mô (nguyên bào xương)
MẢNH GHÉP THAY XƯƠNG
CÔNG NGHỆ MÔ XƯƠNG
San hô Porites lutea
MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU
![Page 22: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/22.jpg)
![Page 23: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/23.jpg)
MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU
![Page 24: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/24.jpg)
TẠO MẢNH GHÉP THAY XƯƠNG VỚI SỰ KẾT HỢP CỦA:
- San hô (Porites lutea)
- Tế bào gốc trung mô từ tủy xương
![Page 25: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/25.jpg)
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
![Page 26: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/26.jpg)
• Thiết kế nghiên cứu : Thí nghiệm thực nghiệm - mô tả
• Đối tượng nghiên cứu : - Tủy xương người thu nhận trong điều kiện phòng mổ
- Porites lutea: Phòng thí nghiệm Vật liệu Sinh học
Bộ môn Mô – Phôi Trường ĐH Y Khoa Phạm Ngọc Thạch
![Page 27: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/27.jpg)
QUY TRÌNH NGHIÊN CỨUPhân lập và nuôi cấy tế bào gốc trung mô
Biệt hóa tế bào gốc trung mô thành nguyên bào xương
Chuyển tế bào gốc trung mô lên giá thể san hô
Tạo ra mảnh ghép
![Page 28: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/28.jpg)
PHÂN LẬP VÀ NUÔI CẤY TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ TỦY XƯƠNG NGƯỜI
Tủy xương
Tủy xương
Ficoll-paque
Tế bào đơn nhân
Nuôi trong DMEM/F12, 10% FBS, kháng sinh, ủ ở 370C, 5% CO2.
![Page 29: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/29.jpg)
NUÔI CẤY TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ
C(C). Tế bào sau 1 tuần nuôi cấy, đạt được mật độ cấy chuyền (10X)
A(A). Tế bào sau 3 ngày
nuôi cấy (10X)
B(B). Tế bào sau 5
ngày nuôi cấy (10X)
![Page 30: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/30.jpg)
ĐỊNH DANH TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ
![Page 31: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/31.jpg)
ĐẶC TÍNH BÁM DÍNH
Hình thái tế bào gốc thu nhận từ tủy xương trong quá trình nuôi cấy in vitro. (A). Tế bào sau 7 ngày nuôi cấy được chụp dưới kính hiển vi đảo ngược (20X). (B). Tế bào sau 7 ngày nuôi cấy (20X được nhuộm Giemsa và chụp hình dưới kính hiển vi đảo ngược.
A B
![Page 32: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/32.jpg)
TIỀM NĂNG BIỆT HÓA
Biệt hóa mỡ(nhuộm Oli Red O)
Biệt hóa xương(nhuộm Alkaline phosphatase)
Biệt hóa sụn(nhuộm Alcian Blue)
Tế bào gốc(tủy xương)
Biệt hóa in vitro
![Page 33: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/33.jpg)
TIỀM NĂNG BIỆT HÓA TẠO XƯƠNG
![Page 34: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/34.jpg)
TIỀM NĂNG BIỆT HÓA TẠO MỠ
![Page 35: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/35.jpg)
TIỀM NĂNG BIỆT HÓA TẠO MỠ
![Page 36: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/36.jpg)
TIỀM NĂNG BIỆT HÓA TẠO SỤN
Nhuộm Alcian Blue để xác định chất nền sụn
![Page 37: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/37.jpg)
BIỂU HIỆN MARKER BỀ MẶT
Tế bào gốc(tủy xương)
Flow Cytometry
![Page 38: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/38.jpg)
ĐÁNH GIÁ BỘ NST ĐỒ CỦA TẾ BÀO SAU NUÔI CẤY
(A). Bộ nhiễm sắc thể đồ tế bào gốc trung mô trước khi biệt hóa.
(B). Bộ nhiễm sắc thể đồ của nguyên bào xương.
![Page 39: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/39.jpg)
San hô Porites lutea
![Page 40: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/40.jpg)
San hô Porites lutea
![Page 41: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/41.jpg)
TẠO MẢNH GHÉP
Tế bào gốc(tủy xương)
Chuyển tế bào lên san hô
ĐÁNH GIÁ:- Đặc tính bám dính- Tiềm năng biệt hóa- Khả năng tăng trưởng
Nhuộm Alkaline phosphatase
Nhuộm Giemsa Nhuộm H&E
Bám dính Tăng trưởngBiệt hóa
![Page 42: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/42.jpg)
Control
![Page 43: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/43.jpg)
![Page 44: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/44.jpg)
![Page 45: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/45.jpg)
A
C D
B
ĐÁNH GIÁ MẢNH GHÉP TRÊN MÔ HÌNH THỎ
![Page 46: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/46.jpg)
A B C
NUÔI CẤY IN VITRO
![Page 47: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/47.jpg)
B
ĐÁNH GIÁ CFU-Fs
![Page 48: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/48.jpg)
ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG TĂNG TRƯỞNG
![Page 49: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/49.jpg)
A
C D
B
TIỀM NĂNG BIỆT HÓA TẠO XƯƠNG
Nhuộm Alkaline phosphatase
Nhuộm Von kossa Nhuộm Alirazin Red
![Page 50: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/50.jpg)
A CB
ĐÁNH GIÁ CẤU TRÚC MẢNH GHÉP
Nhuộm Giemsa Nhuộm H-SG Nhuộm H-SG
![Page 51: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/51.jpg)
A CB
ĐÁNH GIÁ CẤU TRÚC MẢNH GHÉP
Nhuộm Alkaline phosphatase Chụp SEM bề mặt
![Page 52: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/52.jpg)
K T QU NGHIÊN C UẾ Ả Ứ
![Page 53: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/53.jpg)
PHẪU THUẬT GHÉP MẢNH GHÉP XƯƠNG CÔNG NGHỆ
A
E F
C
D
B
![Page 54: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/54.jpg)
A B C
E F G
D
H
MẢNH GHÉP TỒN TẠI 1 THÁNG
![Page 55: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/55.jpg)
A B C
D E F
MẢNH GHÉP TỒN TẠI 3 THÁNG
![Page 56: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/56.jpg)
A B C
D E F
MẢNH GHÉP TỒN TẠI 6 THÁNG
![Page 57: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/57.jpg)
K T QU NGHIÊN C UẾ Ả ỨTRÊN LÂM SÀNG
![Page 58: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/58.jpg)
THỬ NGHIỆM MẢNH GHÉP TRÊN HOẠI TỬ CHỎM XƯƠNG ĐÙI
Bệnh nhân bị hoại tử vô trùng chỏm xương đùi 2 bên ARCO 2
![Page 59: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/59.jpg)
KẾT QUẢ GHÉP TRÊN BỆNH LÝ THOÁI HÓA CHỎM XƯƠNG ĐÙI
Phẫu thuật ghép mảnh ghép san hô có mang MSC tự thân
![Page 60: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/60.jpg)
02 tháng sau ghép, biểu hiện trên lâm sàng bình thường
![Page 61: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/61.jpg)
SAU PHẪU THUẬT SAU 2 THÁNG GHÉP
SO SÁNH KẾT QUẢ GHÉP
![Page 62: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/62.jpg)
THỬ NGHIỆM MẢNH GHÉP TRÊN MẤT ĐOẠN XƯƠNG
06 tuần sau ghép, biểu hiện trên lâm sàng bình thường
![Page 63: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/63.jpg)
THỬ NGHIỆM MẢNH GHÉP TRÊN MẤT ĐOẠN XƯƠNG
04 tháng sau ghép, biểu hiện trên lâm sàng bình thường
![Page 64: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/64.jpg)
THỬ NGHIỆM MẢNH GHÉP TRÊN MẤT ĐOẠN XƯƠNG
03 tháng sau ghép, biểu hiện trên lâm sàng bình thường
![Page 65: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/65.jpg)
GHÉP XƯƠNG KÉO DÀI CHI
![Page 66: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/66.jpg)
GHÉP XƯƠNG KÉO DÀI CHI
![Page 67: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/67.jpg)
CÂU CHUYỆN CỦA BẠN TÔI
![Page 68: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/68.jpg)
KẾT LUẬN• Ghép mảnh ghép từ san hô và MSC tự thân là một
phương thức điều trị đầy tiềm năng cho các
trường hợp tổn thương xương.
• Tiệm cận với công nghệ mô trên thế giới.
• Cần triển khai và nghiên cứu sâu để trở thành một
phương thức điều trị hiệu quả cho người bệnh
![Page 69: Tao vat lieu thay xuong](https://reader034.vdocuments.mx/reader034/viewer/2022042618/589c9d911a28abf4148b5449/html5/thumbnails/69.jpg)