简介

产品 含量 浓度 储存 稳定性

100 µl

200 µl

500 µl

SYBR® Green I 、SYBR® Green II

各 50 ml，以及 SYBR® 滤光片

10,000×

· ≤–20°C

· 干燥

· 避光

如果直接储存

在 DMSO 中，

染料可在 6 个

月至 1 年内稳

定。

SYBR® Green I 核酸凝胶染料

Molecular Probes SYBR® Green I 核酸凝胶染料是目前检

测琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶中双链DNA (dsDNA) 的最

灵敏的染料之一。在 300 nm 的透射光下，低至60 pg 的

dsDNA 条带也能被 SYBR® Green I 染料检测。利用 254 nm 紫外反射光源 (顶置光源) 照射、宝丽来 667 黑白无涂层

胶片，以及 SYBR® 滤光片 (S7569) ，能在 SYBR® Green I 染色的凝胶上检测到低至 20 pg 的单一条带1。这种灵敏度

比传统 300 nm 透射光下的溴化乙锭 (EB) 染色至少高了25 倍 (图 1) 。我们还发现 SYBR® Green I 染料对于检测寡核

苷酸也非常灵敏，能在 5% 的聚丙烯酰胺凝胶上检测低至

1-2 ng 的合成 24 聚体，比溴化乙锭的灵敏度高了 50-100

倍2。

SYBR® Green I 染料检测单链 DNA 和 RNA 的灵敏度就稍

低一些 (利用 254 nm 顶置光源照射大约能检测 100-300 pg的条带)，使之成为复杂溶液中检测 dsDNA 的理想选择

—特别是复杂溶液中的 ssDNA 或 RNA 可能会掩盖结果的

时候，如凋亡特有的连续梯度条带 apoptosis ladders3。

SYBR® Green I 染料检测凝胶中核酸的非凡灵敏度归因于独

特的染料性质。SYBR® Green I 染料表现出超强的 DNA 亲和

力，与 DNA 结合后荧光的显著增强——至少比溴化乙锭高出

一个数量级。同时，DNA/SYBR® Green I 复合物的荧光量子

SYBR® Green I

核酸凝胶染料 (CS7561)

SYBR® Green I

核酸凝胶染料 (CS7562)

SYBR® Green I

核酸凝胶染料 (CS7563)

SYBR® Green

核酸凝胶染料起始套装 (S7580)

标记的次数：500 ml 足够染约 100 块 mini 胶。

近似的荧光最大激发/发射波长：290，380，497/520 nm，与 DNA 结合

产率 (~0.8) 比 DNA / 溴化乙锭 (~0.15) 高了 5 倍多。SYBR® Green I 染料在琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中迅速渗透，在缺

乏 DNA 时背景荧光可以忽略，让染色步骤快速，而照相之

前也无需脱色。

SYBR® Green I 染料的超高灵敏度使之在多种 DNA 量有限

的应用，例如低循环数及少量目标 DNA 的扩增产物检

测 4；低拷贝 DNA 和 RNA 载体以及来自低细胞数培养物

的粘粒、质粒和噬菌体 DNA 的检测和限制性分析；核酸

酶保护和条带转移分析产物的检测中格外有用。SYBR ® Green I 染料的极佳灵敏度让它在某些应用中甚至能取代放

射性同位素5-8。

由于 SYBR® Green I 染料的 DNA 结合力强，它能在电泳前 (预染) ，以及电泳后 (后染) 对 DNA 进行染色9，也可

以对毛细管电泳分离的 DNA 进行染色10，11。倒胶时可以预

先加入 SYBR® Green I 染料以预制凝胶 (预染) ；但我们发

现 后 染 的 灵 敏 度 最 高 。 此 外 ， 我 们 的 研 究 人 员 还 发 现

SYBR® Green I 染料与 DNA 的结合不会抑制多种常见的限

制性内切酶的活性，包括 Hind III 和 EcoR I1，2，也不会干

扰 Southern 杂交分析。

开始实验之前

·在你打开管盖之前，管子应完全回暖至室温，以确保 DMSO 彻底解冻和溶液均一。为了避免损失染料，可在离心机中

短暂离心解冻的染料，让 DMSO 溶液汇集在管底。为了方便，染料应分装成多个小份并冻存。小份的染料将更快熔解。

·试剂盒未提供的必需材料

·TE、TBE 或 TAE 缓冲液

·可选：乙醇，在去除 SYBR® Green I 染料时用于沉淀 DNA

操作与处理

独立实验室进行的艾姆斯试验 (Ames test) 表明 SYBR® Green I 核酸凝胶染料的致突变性明显比溴化乙锭要低得多12。然

而，我们必须警告用户注意，目前还没有关于 SYBR® Green I 染料对人体的致突变性或毒性的数据。由于这种试剂能与核

酸结合，它应当被看作是潜在的诱变剂，在使用时应小心谨慎。在处理 DMSO 储存液时应特别小心，因为 DMSO 能促进

有机分子进入组织。染料的废弃处理应符合当地的规定。

光谱特性

SYBR® Green I 染料的最大激发波长为 497 nm，但是在 ~290 nm 和 ~380 nm 处有二级激发峰 (图 2)。与 DNA 结合的

SYBR® Green I 染料的荧光发射集中在 520 nm。这些光谱特性让 SYBR® Green I 染料适用于多种凝胶检测仪，从紫外

反射 (上紫外) 和透射仪 (下紫外) 到氩离子激光器和水银灯激发的凝胶扫描仪。

图1. 梯度稀释的 φX174 RF DNA 被 HaeIII 限制性内切酶切割，并在 5% 的聚

丙烯酰胺凝胶上电泳。凝胶包含了 DNA 片断的相同 3 倍梯度稀释。A 图展

示的凝胶是用 SYBR® Green I 核酸凝胶染料 (储存液 1:10,000 稀释) 染色 30

分钟，没有脱色。B 图展示的凝胶是用 5 µg/ml 溴化乙锭染色 30 分钟，然

后脱色 30 分钟。SYBR® Green I 染色的凝胶在 254 nm 紫外反射光源下激发，

而溴化乙锭染色的凝胶用 300 nm 透射光激发 (Fotodyne Foto/UV 450 紫外

透射仪)。尽管 SYBR® Green I 染色的凝胶也能在 300 nm 下激发，但 254 nm 的紫外反射光源产生的条带灵敏度最高。两种凝胶都用宝丽来 667 黑

白胶片来拍照，使用的滤光片分别为 SYBR® Green 凝胶染料滤光片 (SYBR® Green I 染色的凝胶) 或溴化乙锭凝胶染料滤光片 (溴化乙锭染色的

凝胶) 。

实验步骤

电泳后的DNA 染色1. 在琼脂糖或非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。

·TBE (89 mM Tris 碱、89 mM 硼酸、1 mM EDTA，pH8) 和 TAE (40 mM Tris-乙酸、1 mM EDTA，pH8) 缓冲液都适合

于 SYBR® Green I 染色。

2. 将 SYBR® Green I 试剂储存液进行 1:10,000 倍稀释。

·染料可用 TE (10 mM Tris-HCl、1 mM EDTA，pH8.0)、TBE 或 TAE 缓冲液来稀释。

SYBR® Green I 试剂的染色是 pH 敏感的。为了获得最佳的灵敏度，应确认在染色温度下染色液的 pH 值在 7.5 到 8.0 之间 (pH 8.0 更佳)。

·用水配制的染色液不如用缓冲液配制的稳定，为了确保最大的染色灵敏度，必须在 24 小时内使用。此外，用 pH 低 于 7.5 或高于 8.0 的缓冲液配制的染色液也不太稳定，染色效率有所下降。

3. 染色液要覆盖凝胶，在室温孵育 10-40 分钟。

·使用塑料的容器，如 Rubbermaid Servin 的三明治储存盒或吸头盒的盖子。请勿使用玻璃容器，因为它会吸附染色液

中的很多染料。

·让染色容器避光，可在上面覆盖铝箔或置于暗处。

·在室温下轻柔摇动凝胶。

·凝胶厚度及琼脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同，染色时间将有所不同。

·无需脱色。

·染色液可在暗处 (最好是冷藏) 放置一个星期或更久，重复使用最多四次。

·我们推荐用塑料而不是玻璃容器来储存染色溶液，因为染料会吸附到玻璃表面。

预制的 SYBR® Green I 凝胶临灌胶之前将 SYBR® Green I 储存液按 1:10,000 的比例稀释到凝胶溶液中，预制成含有 SYBR® Green I 染料的琼脂糖或非

变性聚丙烯酰胺凝胶。预制的 SYBR® Green I 凝胶的 DNA 检测下限 (大约为 30-40 pg / 条带) 可能略高于电泳后染色 (< 20 pg /条带)。此外，在 SYBR® Green I 凝胶中的 DNA 片断迁移率明显比无染料凝胶中的相同片断慢。

图2. 与双链 DNA 结合的 SYBR® Green I 核酸凝胶染料的荧光激发和发射光谱。

在电泳之前进行 DNA 染色一般而言，DNA 在电泳前与染料的 1:10,000 稀释液 (在 TE、TBE 或 TAE 中) 至少孵育 15 分钟。我们用 1:10,000 的 SYBR® Green I 染料稀释液对 1 µg 的分子量标准 DNA 进行染色，总体积为 16 µl。我们并未在条带迁移分析中检验过 SYBR® Green I 染料作为 DNA 模板的预染标记，尽管它在此应用中应该有用。关于在电泳前如何进行 DNA 染色的常规方

法，详见参考文献 4 和 5。在这些参考文献中，特定应用中的步骤可能还需要优化。

凝胶成像·紫外或蓝光透射仪或紫外顶置光源直射。

·可在紫外或蓝光光源下轻松地观察到用 SYBR® Green I 染料染色的 DNA。

·254 nm 的紫外反射光源将比 300 nm 的透射光具有更高的灵敏度。注意：在每次使用后都要用去离子水和软布 (比如

粗棉布) 来清洁透射仪的表面，这一点很重要。否则，荧光染料，如 SYPRO® 染料、SYBR® 染料和溴化乙锭，将在玻璃

表面累积，并产生高的背景荧光。

·为了在宝丽来 667 黑白胶片上获得更佳的灵敏度，SYBR® Green I 染色的凝胶应该通过 Molecular Probes SYBR® 滤光

片 (S7569) 来照相。其他的很多黄色或绿色的明胶或玻璃纸滤光片 (从柯达及其他照相设备供应商处购买的) 也能用于照

相，但大部分的灵敏度会有所下降。用于溴化乙锭染色凝胶成像的红/黄色滤光片，则不能用于 SYBR® Green I 染色的凝

胶。对于手提式照相机或 CCD 照相机的滤光片，请联系你的仪器制造商。

染色的凝胶的背景荧光基本可以忽略，在检测少量 DNA 时允许长时间的胶片曝光。对于 300 nm 透射光，我们一般用普

通宝丽来相机的 4.5 光圈曝光 1-2 秒。对于 254 nm 的紫外反射光源 (尤其是手提灯)，曝光大约需要持续 1-1.5 分钟以

获得最大的灵敏度。

·我们的检测极限是根据 FOTODyne FOTO/UV 450 紫外透射仪加上宝丽来 667 黑白胶片所获得的结果。一般而言，摄像

机和 CCD 照相机与黑白胶片有着不同的光谱响应，因此表现出不同的灵敏度。

激光扫描仪·SYBR® Green I 染色的 DNA 也能通过配置 450、473、488 或 532 nm 发射波长的激光成像系统来成像。对于 SYBR® Green I 适用的最佳滤光片组合，请联系你的仪器制造商。

·从双链 DNA 中去除 SYBR® Green I。

·我们发现通过简单的乙醇沉淀能从双链 DNA 中除去 99% 以上的 SYBR® Green I 染料。将 SYBR® Green I 染色的 DNA 移至 100 mM NaCl 中，并加入 2.5 倍体积的无水或 95% 乙醇。在冰上孵育约 20 分钟，在 4°C 的离心机上至少离心 10 分钟。去除乙醇，并用 70% 的乙醇洗涤沉淀。让乙醇挥发，并用TE 来重悬双链 DNA。

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Biophys J 66, A159 (1994); 2. Biomed Products 19, 68 (1994); 3. Proc Natl Acad Sci USA 94, 12419 (1997); 4. J Virol Methods 55, 153 (1995); 5. FASEB J 10, A1128, abstract #751 (1996); 6. Methods Cell Sci 17, 1 (1995); 7. Biotechniques 23, 1029 (1997); 8. Nucleic Acids Res 25, 2945 (1997); 9. Methods Enzymol 217, 414 (1993); 10. Clin Chem 43, 267 (1997); 11. Biotechniques 22, 1107 (1997); 12. Mutat Res 439, 37 (1999).

参考文献

仅限于科研使用，请勿用于动物或人类的疾病诊断及治疗。