suelo pruebas bioquimicas

7/23/2019 Suelo Pruebas Bioquimicas

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M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L Página 1/16

ÁREA DE SUSTENTABILIDAD PARA EL DESARROLLO

PROGRAMA ACADÉMICO DE QUÍMICA

ESPECIALIDAD TECNOLOGIA AMBIENTAL

GRUPO

QU304

MATERIA

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

TITULO

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS

DE LA MATRIZ AMBIENTAL: ______SUELO____________

ASESORA

Dr. ROSA RICO MATA

DATOS DE IDENTIFICACIÓN DE LOS ANALISTAS

Fecha de inicio del análisis: 30/06/15

Fecha de termino: 09/07/15 Nombre Cargo

Flores Ojeda Eduardo Emmanuel Responsable

Torres Barco Alma Viridiana Administrador

González Martínez blanca Fabiola Laboratorista 1

Ornelas Rodríguez Nataly Laboratorista 2

Pérez Serna Aidé Sarahi Laboratorista 3

GENERACIÓN: 2014-2016




DATOS DEL SITIO EN ESTUDIO

1.- Breve descripción del estatus ambiental del sitio de estudio:

La Presa Blanca se ubica en el estado mexicano de Guanajuato en el municipio de León, localizado en unaaltura de 1784 metros sobre el nivel del mar. En León se cuenta con una presa de aguas negras y residuales(Presa Blanca) donde desembocan todo tipo de desechos industriales y domésticos, el agua de dicha presa seconduce a través de un canal a cielo abierto, hacia las Comunidades de Santa Rosa, Plan de Ayala y San Pedro

del Monte y su destino final es para el riego de alfalfa y lechuga, estas aguas están fuertemente contaminadasquímica y bacteriológicamente, al no sufrir ningún tratamiento de remediación.

SITIO DEMUESTREO

Nombre Ubicación/coordenadas GPS

Imagen de mapa satelital

“Presa Blanca” Municipio León del

Estado de Guanajuato México

Las coordenadasGPS:

Longitud (dec): -

101.698333

Latitud (dec):21.088889

2. Evidencia fotográfica del sitioFecha: 06/11/2015 Hora: 11:40 AM

Fecha: 06/11/2015 Hora: 12:00 PM

http://www.mipueblo.mx/11/

http://www.mipueblo.mx/11/608/

http://www.nuestro-mexico.com/Guanajuato/Leon/

http://www.nuestro-mexico.com/Guanajuato/




http://www.nuestro-mexico.com/Guanajuato/Leon/

http://www.mipueblo.mx/11/608/

http://www.mipueblo.mx/11/




DATOS DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR

1. Identificación

Matriz ambiental: Suelo Hora de toma de muestra: 06/11/201511:55 AM

Hora de siembra: 06/11/2015 12:47AM

Punto de Muestreo (ubicación /coordenadas GPS):Puente #1 coordenadas: N 21° 05´36.2´´ W 101° 42´25.3´´

Tiempo de exposición (aplica solo para muestra de aire)

Nombre del/ los analistas que tomaron la muestra:Torres Barco Alma Viridiana, Ornelas Rodríguez Nataly yGonzález Martínez Blanca Fabiola

Nombre del/ los analistas que sembró la muestra:Flores Ojeda Eduardo Emmanuel, Pérez Serna Aidé Sarahi

2.Parámetros Fisicoquímicos

Color: Café Temperatura (oC) ambiental: 22°C pH: 4

Olor: Ausente Describir condiciones climatológicas: clima cálido, cielodespejado, viento mínimo y humedad considerable altacto.

3. Evidencia fotográfica del sitio de toma de muestra




AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

1. Justificación del proceso para la identificación bacteriana

Toda la gama de procedimientos y pruebas dedicadas a la identificación de la bacteria se basaprincipalmente en el uso de medios selectivos y pruebas bioquímicas, que nos indiquen una serie decaracterísticas metabólicas, donde estas en conjunto, nos permitan diferenciar la bacteria de alguna otrabacteria que se le asimile. Estos van desde los simplemente descriptivos (morfología colonial, tinción),pasando por pruebas bioquímicas simples para detección de productos metabólicos o de una determinadareacción enzimática, sin embargo hay ciertos aspectos que debemos tomar en cuenta para saber quepruebas se realizaran, las cuales se basan en; Origen de la cepa, condiciones bajo las que ha sido aislada,Morfología, Posibilidad de formación de poros y por la posibilidad de formación de capsula. Y así, con estaspruebas, bajo el criterio de reacciones negativas o positivas tenemos la capacidad de ir aislando esta bacteriade una enorme lista.

2. Dos medios de siembra (Nombre y Receta)

CITRATO DE SIMMONSFormula (gr por litro)

Citrato de Sodio 2.0gr

Nacl 5gr

Fosfato dipotasico 1.0gr

Fosfatomonopotasico

1.0gr

Fosfatomonoamonico

1.0gr

Sulfato de magnesio 0.2gr

Azul de bromotimol 0.08gr

15.0gr

E.M.B AGARFormula (gr por litro)

Peptona 10.0gr

Lactosa 5gr

Sacarosa 5.0gr


Agar 13.5.0gr

Eosina 0.2gr

Azul de metileno 0.08gr

Morfología Colonial (Medio 1) Morfología Colonial (Medio 2)

DescripciónColor azul, borde regular y centro obscuro

Imagen

Color violeta obscuro, circular y con el centro

obscuro




3. Dos Medios selectivos de resiembra (Nombre y receta)

CITRATO DE SIMMONSFormula (gr por litro)

Citrato de Sodio 2.0gr

Nacl 5gr


Fosfatomonopotasico

1.0gr

Fosfatomonoamonico

1.0gr

Sulfato de magnesio 0.2gr

Azul de bromotimol 0.08gr

Agar 15.0gr

E.M.B AGAR

Formula (gr por litro)

Peptona 10.0gr

Lactosa 5gr

Sacarosa 5.0gr


Agar 13.5.0gr

Eosina 0.2gr

Azul de metileno 0.08gr

Morfología Colonial (Medio 1)Morfología Colonial (Medio 2)

DescripciónColor azul, borde regular y centro obscuro

Descripción

Imagen Imagen

Verde metálico, circular y con el centro

obscuro




4. Procedimiento de Aislamiento(describir detalladamente la cantidad de materiales y los pasos a seguir)

MATERIALES1 Matraz Erlenmeyer de 250ml1 Agitador1 Vidrio de reloj1 Espátula

1 Salmonella Shigella Agar1 Autoclave y/o olla express1 Parrilla1 Incubadora1Campana de esterilización1 Balanza analítica

Pasos para el aislamiento del microorganismos (siembra, selección de la colonia y resiembra):Investigación de donde puede desarrollarse mejor la bacteria que se quiere aislar.Siembra:

Investigación de en qué matriz puede desarrollarse mejor la bacteria que se quiere aislar.

Esterilización del material: 1. Empapelar 3 cajas Petri, pipetas, y preparación de tapones para los matraces a utilizar para laesterilización del agar (solo de ser necesario).2. Esterilizar el material en autoclave u olla de presión.

Preparación del agar:

1. Checar en el frasco del agar su preparación.2. Realizar cálculos de cuantos mililitros se utilizaran por cada caja Petri para la siembra y resiembra de labacteria.3. Calcular cuántos gramos se deben de pesar de agar para los mililitros necesarios para las cajas de acuerdoa la fórmula del frasco del agar.

4. Pesar los miligramos de agar y disolverlos en agua destilada.5.Verificar las instrucciones del fabricante en el frasco contenedor del medio si es necesario esterilizar enautoclave..6. Vertí r aproximadamente 20 ml de agar a cada una de las cajas Petri.7. Esperar que el agar gelifique

Siembra de la muestra de agua:

1. Con una pipeta estéril de 5 ml se toma un mililitrito de muestra de agua.2. Se vierte sobre la caja Petri que contiene el agar.3. Se agita la placa con 6 movimientos a la derecha, 6 a la izquierda y 6 de arriba a abajo.4. Se mete a incubar por 24 h o 48 h a 370C esto dependerá de la bacteria.

Selección de la colonia:1. Verificar si en la caja del agar hay una colonia con estas características.2. En caso de que la colonia que se quiere aislar no se encuentra en el cultivo donde se sembró, se debe

de averiguar qué fue lo que hizo que no creciera en ese agar. 3. Volver a sembrar la colonia haciendo los ajustes necesarios de selección de medio.

Resiembra de la colonia:

1. Flamear el asa de nicromo para su esterilización.2. Se debe de seleccionar dos colonias con las características ya elegidas anteriormente, marcar la caja




por debajo con un plumón las dos colonias enumerarlas como 1 y 2.3. La caja Petri donde se resembraran las colonias seleccionadas se divide en dos cuadrantes con un

plumón por la parte de abajo y se enumeran colonia 1 y 2.4. Con un asa de nicromo se toma una de las colonias seleccionadas y se siembra en el número

correspondiente.5. Se realiza en forma de estrías e tal forma que las líneas queden cerradas unas de las otras, girarla

caja 90° y realizar una vez más hasta estriar toda la caja.




5. Esquema del Perfil bioquímico (metabólico )para la identificación del microorganismo seleccionado

Muestra presa Blanca

Tinción de Gram

R= +R= -

Prueba de capsula

R= -

R= +

Prueba de RM-VP

R= +R= -

Prueba movilidad

R= -

R= +

Prueba de indol

R= -

R= +

Producción de H2S

R= -

R= +

Prueba de Ureasa

R= -

R= +

Prueba de catalasa




RESULTADOS DEL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

1. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO DE LA MUESTRA (SIEMBRA)

Citrato de Simmons Citrato de Simmons

2. MORFOLOGÍA COLONIAL OBSERVADATipo de colonia 1: Descripción

En la imagen se puede observar la presunta bacteriaCitrobacter Freundii que tiene colonias puntiformes con un

borde entero con una elevación plana con una superficieseca con un color azul marino además de que Presentacolores característicos y difusión de pigmentos en el medio.

FOTO 1

Tipo de colonia 1: Descripción

Se puede observar en las imágenes algunas colonias que sepresume que pueden ser hongos de un color blanco concolonias circular con un borde ondulado y superficie seca.

FOTO 2




3. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO PURO ( RESIEMBRA)FOTO 1 Citrato de Simmons FOTO2 Citrato de Simmons

4. MORFOLOGIA COLONIAL OBSERVADA

Descripción

NO OBTENIDO

FOTO 1

NO OBTENIDO




IDENTIFICACIÓN DEL MICROORGANISMO AMBIENTAL

EN LA MATRIZ DE ESTUDIO: _______SUELO________________________________

1.- Nombre científico del o los microorganismo identificado de acuerdo a los resultadosdel perfil bioquímico planteado ( género y especie)

Género: Citrobacter

Especie: C. freundii

2. Taxonomía del o los microorganismo identificadosReino: Bacteria Filo: Proteobacteria Clase: Gammaproteobacteria

Orden: Enterobacteriales Familia: Enterobacteriaceae Género: E. citrobacter

3. Características generales Son bacterias móviles, con capacidad variable para fermentar la lactosa, algunos pueden utilizar citrato y otros no,algunas especies tienen antígenos somáticos O, flagelar H y de superficie K, lo que hace que den reacciones cruzadascon otras Enterobacteriaceae. El género Citrobacter es un grupo de bacilos Gram negativos aerobios que se encuentranfrecuentemente en el agua, el suelo, la comida, vegetación y como flora saprófita en el tracto intestinal de muchosanimales además del hombre. Se trata de microorganismos ubicuos que son causa frecuente de infeccionesimportantes, especialmente en huéspedes inmunodeprimidos. Es uno de los patógenos más importantes en unidadesdecuidados neonatales hospitalarios. En los seres humanos producen, por ejemplo, infecciones urinarias, meningitis

neonatal y abscesos cerebrales. Destruyen las microvellosidades, formando lesiones muy características denominadasde adherencia y eliminación. El género Citrobacter descrito en el año 1932 por Werkman y Gillen, En la actualidad elgénero Citrobacter estcompuesto por las siguientes genomoespecies: complejo C. freundii (C. freundii, C. braakii, C.

sedlakii, C.werkmanii, C. youngae, C. gillenii, C. murliniae y C. rodentium), C. koseri, C. amalonaticus y C. farmeri. En loque respecta a estas nuevas especies, en particular a las que integran el denominado "complejo C.freundii", existenpocos estudios acerca de su significado clínico y de su distribución y frecuencia en especímenes clínicos.

4. Ciclo(s) biogeoquímicos en el(los) que intervienenCiclo del nitrógeno

5. La función que juegan en la transformación de la materia orgánica a travésde los ciclos biogeoquímicos

Como antes se mencionó la citrobacter como perteneciente a la familia de las enterobacterias tiene la capacidad dedescomponer la materia orgánica metabólicamente para así, propicia de los nutrimentos esenciales a las plantas

directamente en la biota, ya que estos utilizan el citrato de la materia orgánica como fuente de carbono, más aun,específicamente en el ciclo del nitrógeno, citrobacter interviene directamente al proceso de fijación de N atmosférico enestado libre, influenciado por la humedad, temperatura y la disponibilidad de energía.

6. Conclusión parcial sobre las interacciones bacterianas en la matriz estudiada y la importancia de lamicrobiología en el área ambiental

Sin duda las bacterias del genero citrobacter tiene gran influencia y son participes intimas de las reacciones yacontecimientos de cada uno de los ciclos biogeoquímicos, ya sea a manera de biodegradación o biosíntesis de materiaorgánica para la producción de componentes primarios en la biota. Por otro lado cabe mencionar que en base a lamarcha de las pruebas bioquímicas concluimos que tiene un enorme impacto la caracterización de bacterias de estetipo, ya que nos ayuda a comprender el comportamiento de los microorganismos en la matriz donde fue extraída, ycuáles pueden ser las causas de su reproducción, ya que, con los análisis correspondientes podemos deducir que elsuelo circundante a la presa blanca posee las características de humedad, temperatura y pH necesarios para su

desarrollo. Cabe mencionar que, en cuestiones ambientales es importante conocer el impacto que sugiere el tenerconcentración de bacterias al suelo, ahora se sabe que generalmente aportan nutrimentos al suelo gracias a su funcióncomo biodescomponedoras de la materia orgánica, pero también producen enfermedades a los seres humanos, por locual debe de existir su debido control y en base a los resultados de identificación de las bacterias proponer solucionesde mejora, de aquí parte la importante de las pruebas bioquímicas, que aportan las herramientas para identificar lasbacterias, gracias a que cada bacteria es tan especifica, que reacciona diferente a cada prueba.

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