skripsi sintesis dan uji aktivitas sitotoksik asam 10 …repository.unair.ac.id/30167/1/halaman...

SKRIPSI

SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK

ASAM 10-N-(BENZOIL) FOLAT PADA SEL

HELA

AHMAD FATIH JAUHARI

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA

DEPARTEMEN KIMIA FARMASI

SURABAYA

2015

ADLN - Perpustakaan Universitas Airlangga

SKRIPSI

SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS... AHMAD FATIH JAUHARI

SKRIPSI

SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK

ASAM 10-N-(BENZOIL) FOLAT PADA SEL

HELA

AHMAD FATIH JAUHARI

051111078

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA

DEPARTEMEN KIMIA FARMASI

SURABAYA

2015


SKRIPSI


LEMBAR PERSETUJUAN

PUBLIKASI KARYA ILMIAH

Demi perkembangan ilmu pengetahuan, saya menyetujui

skripsi/karya ilmiah saya, dengan judul :

SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK ASAM 10-N-

(BENZOIL) FOLAT PADA SEL HELA

untuk dipublikasikan atau ditampilkan di internet atau media lain yaitu

Digital Library Perpustakaan Universitas Airlangga untuk kepentingan

akademik sebatas sesuai Undang-Undang Hak Cipta.

Demikian pernyataan persetujuan publikasi karya ilmiah ini saya

buat dengan sebenarnya.

Surabaya, September 2015

Ahmad Fatih Jauhari

NIM: 051111078


SKRIPSI


SURAT PERNYATAAN Saya yang bertanda tangan di bawah ini,

Nama : Ahmad Fatih Jauhari

NIM : 051111078

Fakultas : Farmasi

menyatakan dengan sesungguhnya bahwa hasil tugas akhir yang saya tulis

dengan judul :

SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK ASAM 10-N-

(BENZOIL) FOLAT PADA SEL HELA

adalah benar-benar merupakan hasil karya saya sendiri. Apabila dikemudian

hari diketahui bahwa skripsi ini merupakan hasil plagiarisme, maka saya

bersedia menerima sangsi berupa pembatalan kelulusan dan atau pencabutan

gelar yang saya peroleh.

Demikian surat pernyataan ini saya buat untuk digunakan sebagaimana

mestinya.


Ahmad Fatih Jauhari

NIM : 051111078


SKRIPSI


Lembar Pengesahan

SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK ASAM

10-N-(BENZOIL) FOLAT PADA SEL HELA

SKRIPSI

Dibuat untuk memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada

Fakultas Farmasi Universitas Airlangga

2015

Oleh :

AHMAD FATIH JAUHARI

NIM : 051111078

Skripsi ini telah disetujui oleh:

Pembimbing Utama Pembimbing Serta

Prof. Dr. Siswandono, MS.,Apt. Dr. Suko Hardjono, MS.,Apt.

NIP. 19521002 198002 1 001 NIP. 19520928 198103 1 001


SKRIPSI


v

KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Allah SWT yang selalu melimpahkan

Rahmat-Nya kepada kita semua sehingga penulis dapat menyelesaikan

skripsi yang berjudul “Sintesis dan uji aktivitas sitotoksik asam 10-N-

(benzoil) folat pada sel hela” sebagai prasyarat untuk mencapai gelar

sarjana farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Airlangga.

Skripsi ini dapat selesai berkat bantuan berbagai pihak, oleh karena

itu penulis ingin mengucapkan terima kasih dan apresiasi sedalam-dalamnya

kepada:

1. Prof. Dr. Fasich, Apt. selaku Rektor Universitas Airlangga yang

telah memberikan kesempatan kepada penulis untuk menyelesaikan

skripsi ini.

2. Dr. Umi Athijah, MS., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Airlangga yang telah memberikan kesempatan kepada

penulis untuk menyelesaikan skripsi ini.

3. Prof. Dr. Siswandono, MS., Apt. selaku dosen pembimbing utama

saya, yang tidak mengenal lelah membantu memberikan saran,

arahan, nasehat, masukan dari awal penelitian dan memberikan

semangat baru dalam menghadapi skripsi ini.

4. Dr. Suko Hardjono, MS., Apt. selaku selaku dosen wali saya,

sekaligus pembimbing serta, yang tidak hentinya memberikan

semangat dalam penyelesaian skripsi ini serta naeshat akademik dari

awal masuk perkuliahan sampai kapanpun.

5. Prof. Dr. Djoko Agus Purwanto, Apt. dan Dra. Suzana, M.Si., Apt.

serta Drs. Achmad Toto Poernomo, M.Si., Apt. selaku dosen penguji

yang telah memberikan evaluasi saran, masukan dan nasehat dalam

perbaikan naskah skripsi ini.

6. Laboratorium Kimia Medisinal, Analisis, Sintesis, TDC dan

Laboratorium Parasitologi FK UGM beserta seluruh stafnya

terutama Pak Tukijo, Pak Yanto yang sering membantu preparasi

alat, Pak Sunar, Pak Kosairi, Bu Yayuk, Pak Iwan, Bu Juana, Mas

Tegar, Mbak Helen .

7. Ayahanda Muhammad Furqon dan Ibunda Eni Purwati yang selalu

mendoakan, membangkitkan semangat penulis serta Muhammad


SKRIPSI


vi

Nu’man Elfakhri dan Muhammad Alfan Nasrullah yang selalu

menemani penulis di rumah.

8. Para Kyai dan guru-guru di Darul Ulum beserta ustadz dan santrinya

yang bersedia memberikan ilmu, meluangkan waktu untuk bertukar

pikiran dan mendoakan penulis.

9. Seluruh teman satu lab tim proyek asam folat yang dipromotori oleh

Didy Yoga beserta anggota Erwin, Aldi, Faris dan Nindya yang tiada

pernah putus semangat dalam menyelesaikan proyek ini.

10. Spesial terimakasih pada seluruh angkatan Farmasi Unair 2011

beserta komponennya dari kelas A hingga kelas D, teman-teman

yang pernah menjadi komting kelas Hajir, Edy, Ananto, Raihan,

Primadi, Aldi, Arie yang sudah menjalankan tugas dengan

maksimal dan memperjuangkan angkatan hingga saat ini.

11. Segenap teman-teman Rep. PHP Management Ayu Ratnasari,

Febrianti, Meira dan Nadiyah yang selalu menemani, memberikan

motivasi dan inspirasi bagi penulis.

12. Teman-teman kontrakan sehidup serumah Nana Setyawan, Zainul

Amrullah, Khanzul, Rojikin, Arya Putra, Faris S, Faris K, Raihan,

Aldi, Ustad Alfi, Mas Febi, Mas Riki, Mas Dhoan dan Mas Cipto

dan komponen tambahan Rohman Hadi yang mengisi hari-hari

selama ini dengan pengalaman baru.

13. Serta seluruh teman-teman, kakak dan adik kelas yang berada di

BEM FF, ISMAFARSI, DKI dan UKMKI serta Mas Asset,

Haqqum, Kresma Okky yang turut bersama berjuang, memberi

bimbingan, masukan, pengalaman dan semangat baru pada penulis .

14. Serta berbagai pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu dalam

lembaran kertas ini.


SKRIPSI


vii

Dengan segala keterbatasan, penulis belum dapat membalas

kebaikan dari seluruh pihak yang terlibat baik secara langsung maupun tidak

langsung, semoga Allah SWT yang membalas seluruh kebaikan kalian.

Penulis menyadari dalam penyusunan skripsi ini banyak terdapat

kekurangan, maka dari itu segala kritik dan saran yang membangun penulis

harapkan dari berbagai pihak.


Penulis


SKRIPSI


viii

RINGKASAN

SINTESIS DAN UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK ASAM

10-N-(BENZOIL) FOLAT PADA SEL HELA

Ahmad Fatih Jauhari

Terkait pengobatan kanker diketahui bahwa salah satunya adalah

golongan anti metabolit folat. Asam folat dengan nama asam N - [ 4 - [ [ (10

– amino - 1,4 – dihidro – 4 – oxo – 6 - pteridinil) metil] amino] benzoil] -L -

glutamat dan metabolitnya (dikenal dengan folat) merupakan koenzim dari

banyak transformasi biokimia esensial. Dalam rangka meningkatkan aktivitas

biologis dari suatu struktur senyawa maka dilakukan modifikasi molekul atau

struktur dari senyawa penuntun. Modifikasi asam folat menjadi antimetabolit

folat diawali dengan membuat rancangan senyawa dimana asam folat

ditambahkan gugus-gugus yang memiliki sifat lipofilik, elektronik, dan sterik

tertentu. Kemudian dilakukan uji in silico , melakukan sintesis senyawa

tersebut dengan metode reaksi subtitusi asil nukleofilik. Sintesis turunan

asam folat pada gugus amin sekunder pernah dilakukan sebelumnya dengan

subtituen trifluoroasetil. Senyawa hasil sintesis kemudian dilihat aktivitas

biologisnya dengan menguji aktivitas sitotoksiknya secara in vitro pada sel

HeLa dengan menggunakan metode MTT.

Tujuan penelitian ini untuk membandingkan aktivitas sitotoksik

secara in silico dari senyawa asam 10-N-(benzoil)folat dengan metotreksat,

memperoleh senyawa asam 10-N-(benzoil)folat melalui hasil reaksi antara

asam folat dan benzoil klorida dan membandingkan aktivitas sitotoksiknya

dengan metotreksat secara in vitro dengan metode MTT terhadap kultur sel

HeLa.

Uji in silico secara komputerisasi dilakukan untuk memprediksi

apakah senyawa asam 10-N-(benzoil)folat memiliki aktivitas sitotoksik yang

lebih besar daripada metotreksat menggunakan program Molegro Virtual

Docker (MVD). Dari hasil doking melalui reseptor DHFR dengan kode

1DDS didapatkan nilai rerank score yang lebih rendahdari metotreksat.


SKRIPSI


ix

Sehingga energi ikatan antara senyawa dan dengan reseptor akan semakin

interaktif, dan diprediksi aktivitasnya akan meningkat.

Hasil sintesis memperoleh cairan minyak kuning. Yang selanjutnya

dicuci menggunakan benzen dan eter untuk menghilangkan sisa subtituen

benzoil klorida yang tersisa. Lalu fase minyak di pisahkan menggunakan

corong pisah dan diuapkan untuk mendapatkan senyawa asam 10-N-

(benzoil)folat.

Uji kemurnian dilakukan metode KLT dengan 3 sistem eluen. Dari

uji kemurnian senyawa asam 10-N-(benzoil)folat yang dieluasi dengan

metanol: air (7:3), metanol : air (1 :1) yang dilakukan pada plat KLT RP dan

acetonitril : air (3:1) pada plat KLT fase normal dihasilkan satu noda yang

berbeda Rf nya dengan noda asam folat.

Uji konfirmasi struktur dilakukan dengan metode spektrofotometri

inframerah dan 1H-NMR. Dari hasil analisis dengan spektrofotometri

inframerah tidak didapatkan data yang mendukung bahwa senyawa target

adalah asam 10-N-(benzoil)folat. sedangkan dari hasil analisis dengan

spektrofotometri 1H-NMR dapat disimpulkan ada 2 benzena yang

menunjukkan senyawa yang diuji adalah asam 10-N-(benzoil)folat.

Uji sitotoksik mendapatkan dari data absorbansi dan dikonversikan

menjadi % sel hidup, menunjukkan bahwa baik perlakuan dengan senyawa

asam 10-N-(benzoil)folat maupun dengan kontrol positif metotreksat tidak

menyebabkan adanya kematian sel yang signifikan. Hal ini dapat disebabkan

oleh penggunaan metode ataupun pengaruh bahan dan komposisi bahan pada

pengujian aktivitas sitotoksik dari senyawa hasil sintesis dan kontrol positif

yang tidak sesuai, sehingga hasil yang diperoleh tidak dapat mendeskripsikan

aktivitas sitotoksik dari senyawa hasil sintesis maupun kontrol positif.

Ketiga tahap yang telah dilakukan, yaitu uji in silico, sintesis

senyawa, dan uji aktivitas in vitro MTT menjelaskan bahwa uji in vitro dapat

mengurangi percobaan trial and error sehingga dapat mengurangi waktu dan

biaya yang dibutuhkan dalam pengembangan obat baru. Hasil penelitian ini

dapat digunakan sebagai dasar pengembangan senyawa asam 10-N-

(benzoil)folat sebagai calon obat antikanker. Namun, masih perlu dilakukan

penelitian lebih lanjut terkait analisis untuk metode spektrofotometri

inframerah dengan pelet KBr dan uji in vitro untuk senyawa yang bekerja

sebagai antifolat. Selain itu, perlu dilakukan studi lebih lanjut terkait aktivitas

asam 10-N-(benzoil)folat secara in vitro dengan sel kanker lain dan studi in

vivo untuk memprediksikan toksisitas dan pengaruh metabolisme terhadap

keberadaan obat di dalam tubuh.


SKRIPSI


x

ABSTRACT

Synthesis and cytotoxic activity test of 10-N- (benzoyl) folic acid on

HeLa cells

In Indonesia, each year approximately 15,000 new cases of cervical

cancer and 7,500 of them lead to death. In cancer cells was found that excess

folic acid needs. Have been many analog of folic acid (antifolate) is used as

the analog cancer chemotherapy but still have considerable side effects. So it

is necessary to modify the folic acid molecule to produce another analog that

is expected to provide an optimal activity but have low toxicity. Folic acid

modification begins with drafting a compound where folic acid is added the

groups which have lipophilic properties, electronic and steric certain. Then

tested in silico to predict bond strength analogous to receptors. Then do the

synthesis of these compounds with acylation method and the its analog results

tested the activity with in vitro assays in HeLa cells that compared to the

positive control (methotrexate) with MTT assay method. Results from in

silico test shows modified compounds have lower scores rerank (potent).

Results compound from synthesis is 10-N- (benzoyl)folic acid with 60% yield

and proved by TLC and 1H-NMR spectrophotometric test. Then results

compound from synthesis tested with MTT assay test against HeLa cell

culture that compared with methotrexate at a level of 5000 ppm until 10 ppm.

The result from MTT assay test can not be analyzed because the method does

not show the good hindrance between 10-N- (benzoyl) folic acid and

methotrexate. This research resulted in 10-N- (benzoyl)folic acid as

antifolate.

Keyword: Cancer, folic acid, in silico, acylation, 10-N- (benzoyl)folic acid,

MTT assay, HeLa cell.


SKRIPSI


xi

DAFTAR ISI

Halaman

KATA PENGANTAR .................................................................................. v

RINGKASAN .......................................................................................... viii

ABSTRACT ............................................................................................. x

DAFTAR ISI ............................................................................................ xi

DAFTAR TABEL .......................................................................................xv

DAFTAR GAMBAR ................................................................................. xvi

DAFTAR SINGKATAN ......................................................................... xviii

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................. xix

BAB I PENDAHULUAN

1.2 Rumusan Masalah ....................................................................... 6

1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................ 6

1.4 Manfaat Penelitian ...................................................................... 6

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tinjauan tentang Kanker ............................................................. 7

2.1.1 Pengertian Kanker ............................................................ 7

2.1.2 Penyebab Kanker .............................................................. 7

2.2 Tinjauan tentang Antikanker ......................................................10

2.2.1 Antimetabolit ...................................................................10

2.2.2. Obat Antikanker yang Menghambat Kerja Hormon .........10

2.2.3. Agen Pengalkilasi DNA ....................................................11

2.3 Tinjauan tentang Uji In silico .....................................................11

2.3.1 Definisi Molegro Virtual docking ....................................11

2.3.2 Keuntungan MVD ...........................................................12

2.4 Tinjauan tentang Reaksi Substitusi Asil Nukleofilik .................12

2.4.1 Mekanisme Reaksi ...........................................................12


SKRIPSI


xii

2.5 Tinjauan tentang Analisis Senyawa ...........................................14

2.5.1 Tinjauan tentang Kromatografi Lapis Tipis .....................14

2.5.2 Tinjauan tentang Spektroskopi Absorbsi .........................14

2.5.2.1 Prinsip Dasar Spektroskopi Absorbsi.............................14

2.5.2.2 Kromofor.........................................................................15

2.5.2.3 Spektroskopi Inframerah.................................................15

2.5.2.4 Spektroskopi H1 NMR...................................................17

2.6 Tinjauan tentang Uji In vitro ......................................................17

2.6.1 Tinjauan tentang Kultur Sel .............................................17

2.7 Tinjauan tentang MTT assay .....................................................18

2.7.1 Pengertian ........................................................................18

2.7.2 Tujuan penggunaan .........................................................18

2.8 Tinjauan Tentang Sel HeLa ........................................................19

BAB III KERANGKA KONSEPTUAL

3.1 Kerangka Konseptual .................................................................21

3.2 Skema Kerangka Konseptual .....................................................24

3.3 Hipotesis .....................................................................................25

BAB IV METODOLOGI PENELITIAN

4.2 Alat dan Bahan Penelitian ..........................................................27

4.2.1 Alat Penelitian .................................................................27

4.2.2 Bahan Penelitian ..............................................................28

4.3 Uji In silico Turunan Asam Folat dengan Subtituen Benzoil

Klorida 28

4.3.1 Pembuatan Struktur Asam 10-N-(Benzoil)Folat ..............28

4.3.2 Docking Turunan Asam Folat dengan Subtituen Benzoil

Klorida .............................................................................28

4.4 Sintesis Asam Folat dengan Subtituen Benzoil Klorida .............30

4.5 Analisa Kualitatif dan Konfirmasi Struktur ...............................30

4.5.1 Kromatografi Lapis Tipis ................................................30


SKRIPSI


xiii

4.5.2 Spektrofotomeri Inframerah ............................................31

4.5.3 Spektrofotometri 1HNMR ................................................31

4.6 Uji Sitotoksik Senyawa Secara In vitro dengan Metode MTT ...31

4.6.1 Prosedur Pembuatan Media .............................................31

4.6.2 Prosedur Menumbuhkan Sel dari Tangki Nitrogen Cair .32

4.6.3 Prosedur Penggantian Media ...........................................33

4.6.4 Prosedur Panen Sel ..........................................................33

4.6.5 Prosedur Perhitungan Sel .................................................34

4.6.6 Prosedur Subkultur Sel ....................................................35

4.6.7 Prosedur Preparasi Sampel ..............................................35

4.6.8 Prosedur Uji Sitotoksik Metode MTT .............................36

BAB V HASIL PENGAMATAN

5.1 Uji In silico .................................................................................39

5.1.1 Pembuatan Struktur Senyawa ..........................................39

5.1.2 Hasil Preparasi Protein ....................................................39

5.1.3 Hasil Penentuan Lubang (Cavity) ....................................40

5.1.4 Hasil Perolehan Nilai Docking ........................................41

5.1.5 Hasil Interaksi Ligan dengan Asam Amino .....................42

5.2 Hasil Sintesis Senyawa asam 10-N-(benzoil)folat......................43

5.3 Uji Kualitatif Senyawa Hasil Sintesis ........................................43

5.3.1 Pemeriksaan Organoleptis ...............................................43

5.3.2 Uji Kemurnian Senyawa Hasil Sintesis ...........................43

5.3.2.1 Uji Kemurnian dengan Kromatografi Lapis Tipis ..........43

5.4 Konfirmasi Struktur Senyawa Hasil Sintesis .............................45

5.4.1 Analisis Spektrofotometri FT-IR .....................................45

5.4.2 Analisis Spektrofotometri 1H-NMR ................................47

5.5 Uji Aktivitas Sitotoksik secara In vitro dengan Metode MTT ...50

5.5.1 Penimbangan dan Pengambilan Bahan ............................50


SKRIPSI


xiv

5.5.2 Pemanenan Sel HeLa .......................................................50

5.5.3 Hasil Pengukuran Absorbansi Sel HeLa yang Masih

Hidup Setelah Perlakuan metotreksat ..............................51

5.5.4 Hasil Pengukuran Absorbansi Sel HeLa yang Masih

Hidup Setelah Perlakuan asam 10-N-(benzoil)folat ........51

5.5.5 Hasil Pengukuran Absorbansi Sel HeLa pada Kontrol

Sel ....................................................................................52

5.5.6 Hasil Pengukuran Absorbansi Kontrol Media .................52

5.5.7 Perhitungan IC50 Metotreksat ..........................................52

5.5.8 Perhitungan IC50 asam 10-N-(benzoil)folat .....................53

BAB VI. PEMBAHASAN ..........................................................................55

BAB VII. KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................61

DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................62


SKRIPSI


xv

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel V.1 Nilai doking metotreksat terhadap reseptor 1DDS ......... 41

Tabel V.2. Pemeriksaan organoleptis senyawa hasil sintesis ........... 43

Tabel V.3. Rf noda kromatografi lapis tipis pada tiga eluen berbeda 44

Tabel V.4 Karakteristik spektrum inframerah senyawa asam folat .. 46

Tabel V.5 Karakterisasi spektrum 1H-NMR senyawa asam folat .... 48

Tabel V.6 Karakterisasi spektrum 1H-NMR senyawa hasil sintesis . 48

Tabel V.7 Penimbangan dan pengambilan bahan ........................ 50

Tabel V.8. Hasil absorbansi perlakuan dengan senyawa metotreksat 51

Tabel V.9. Hasil absorbansi perlakuan dengan senyawa asam 10-N-

(benzoil)folat ......................................................... 51

Tabel V.10 Hasil absorbansi kontrol sel ...................................... 52

Tabel V.11 Hasil absorbansi kontrol media ................................. 52

Tabel V.12 Tabel perhitungan % sel hidup pada perlakuan

metotreksat ............................................................ 53

Tabel V.13 Tabel perhitungan % sel hidup pada perlakuan asam 10-N-

(benzoil)folat ......................................................... 54


SKRIPSI


xvi

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1.1 Senyawa AM dan MTX (Avendano & Menendez, 2008) ... 3

Gambar 1.2 Struktur (a)asam folat; (b)metotreksat; (c)asam 10-N-

(benzoil)folat (ChemBioDraw Ultra). ................................. 4

Gambar 1.3 Struktur asam 10-N-(trifluoroasetil)folat yang pernah

disentesis. ............................................................................ 5

Gambar 2.1 Siklus Sel dalam Tubuh (Bolsover, et al., 2004) ................. 9

Gambar 2.2 Interaksi folat dengan reseptor ...........................................10

Gambar 2.3 Substitusi Asil Nukleofilik .................................................13

Gambar 2.4 Mekanisme Reaksi Substitusi Asil Nukleofilik pada Asam

Folat ....................................................................................13

Gambar 2.5 Skema Spektra Absorbsi .....................................................15

Gambar 2.6 Daerah inframerah dari spektra elektromagnetik ................15

Gambar 2.7 Absorbsi IR dari Beberapa Gugus Fungsi ...........................16

Gambar 3.1 Skema Kerangka Konseptual ..............................................24

Gambar 4.1 Kerangka Operasional Penelitian ........................................26

Gambar 4.2 Gambar (a) adalah struktur reseptor dihydrofolate reductase

1DDS sedangkan Gambar (b) adalah gambar ligannya yang

mengandung gugus farmakofor diaminopirimidin (Molegro

Virtual docking) ..................................................................29

Gambar 4.3 Hemasitometer terdiri dari 4 kamar hitung. Setiap kamar

hitung terdiri dari 16 kotak .................................................34

Gambar 5.1 Gambar (a) adalah struktur 2D asam 10-N-(benzoil)folat,

gambar (b) adalah struktur 3D dari asam 10-N-

(benzoil)folat, gambar (c) adalah struktur 2D metotreksat,

dan gambar (d) adalah struktur 3D metotreksat

(chembiodraw) ...................................................................39

Gambar 5.2 Reseptor DHFR dengan kode 1DDS ..................................40


SKRIPSI


xvii

Gambar 5.3 Cavity pada reseptor DHFR 1DDS .........................................40

Gambar 5.4 Cavity 1 reseptor 1DDS terdapat gugus farmakofor dari

ligan asal reseptor dan ligan senyawa yang akan

disintesis. ............................................................................41

Gambar 5.5 Gambar ikatan hidrogen (biru) senyawa metotreksat beserta

jenis protein yang terikat pada saat proses doking. ............42

Gambar 5.6 Gambar ikatan hidrogen (biru) senyawa asam 10-N-

(benzoil)folat beserta jenis protein yang terikat pada saat

proses doking. .....................................................................42

Gambar 5.7 Spektrum inframerah senyawa asam folat dalam pelet

KBr .....................................................................................45

Gambar 5.8 Spektrum inframerah senyawa hasil sintesis dalam pelet

KBr .....................................................................................46

Gambar 5.9 Spektrum 1H-NMR senyawa asam folat dalam pelarut

DMSO. ...............................................................................47

Gambar 5.10 Spektrum 1H-NMR asam 10-N-(benzoil)folat dalam pelarut

DMSO ................................................................................49


SKRIPSI


xviii

DAFTAR SINGKATAN

2D 2 dimensi

3D 3 dimensi

DHFR Dihidrofolat Reduktase

DMSO Dimetilsulfoksida

DNA Deoxyribonucleic Acid

ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

FBS Fetal Bovine Serum

FT-IR Fourier Transform Infrared 1H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance

HDAC Histon Deasetilase

MTT 3-(4,5-dimetiltiazol-10-il)-10-5-difeniltetrazolium bromida

MTX Methotrexate

MVD Molegro Virtual Docker

PBS Phospat Buffer Saline

RNA Ribonucleic Acid

RPMI Roswell Park Memorial Institute

SDS Sodium Dodecyl Sulfate

WHO World Health Organization

UV Ultraviolet


SKRIPSI


xix

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

LAMPIRAN 1. Perhitungan bahan sintesis .................................................67

LAMPIRAN 2. Prosedur sintesis .................................................................68

LAMPIRAN 3. Perhitungan Hasil Sintesis .................................................69

LAMPIRAN 4. Pengaturan Docking Score .................................................70

LAMPIRAN 5. Penentuan nilai pKa Asam Folat Menggunakan Maestro

(Schrodinger) ......................................................................71

LAMPIRAN 6. Konfirmasi Struktur Senyawa Metotreksat dengan FT-IR .72

LAMPIRAN 7 .Konfirmasi Struktur Senyawa Hasil Sintesis dengan FT-

IR ........................................................................................74

LAMPIRAN 8. Konfirmasi Struktur Asam Folat dengan 1H-NMR dalam

Pelarut DMSO .................................................................. 75

LAMPIRAN 9. Konfirmasi Struktur Senyawa Hasil Sintesis dengan

Spektrum 1H-NMR dalam pelarut DMSO .........................78

LAMPIRAN 10.Denah Platting Uji Sitotoksik dengan metode MTT

Menggunakan Plate 96 Sumuran ........................................81

LAMPIRAN 11.Gambar Alat dan Bahan Uji Sitotoksik .............................82

LAMPIRAN 12.Perhitungan Pembuatan Larutan Uji Sampel, Larutan

Kontrol Positif, dan Larutan Sel HeLa ...............................83


SKRIPSI


skripsi sintesis dan uji aktivitas sitotoksik asam 10 …repository.unair.ac.id/30167/1/halaman...

Documents