“situación epidemiológica y laboratorio de la rabia en … · de la rabia en méxico” ......

INSTITUTO NACIONAL DE DIAGNOSTICOINSTITUTO NACIONAL DE DIAGNOSTICOINSTITUTO NACIONAL DE DIAGNOSTICOINSTITUTO NACIONAL DE DIAGNOSTICO

Y REFERENCIA EPIDEMIOLOGICOSY REFERENCIA EPIDEMIOLOGICOSY REFERENCIA EPIDEMIOLOGICOSY REFERENCIA EPIDEMIOLOGICOS

“Situación Epidemiológica y Laboratorio “Situación Epidemiológica y Laboratorio “Situación Epidemiológica y Laboratorio “Situación Epidemiológica y Laboratorio de la Rabia en México”de la Rabia en México”de la Rabia en México”de la Rabia en México”

PRESENTA: D en C ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D en C ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D en C ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D en C ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D. en C. ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D. en C. ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D. en C. ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIXPRESENTA: D. en C. ALEJANDRA MELÉNDEZ FÉLIX

Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMF

RED DE RABIA 2011RED DE RABIA 2011

InDRE

INSTITUCIÓN REGULADORA DE LA

SECRETARÍA DE SALUD EN MÉXICO

Estados con mínimo contacto con el InDRE (COL)

Estados sin LESP– muestras analizadas por el InDRE (BC, BCS, SIN, NAY, MICH, DF, YUC)

LESP formalmente integrados a la red (23)


Actualmente Morelos está en proceso de implementación (MOR)

I N F O R M A C I Ó NI N F O R M A C I Ó NI N F O R M A C I Ó NI N F O R M A C I Ó N

LESPs(SSA)

Laboratorios de (SAGARPA)

INDRE (SSA)CENASA (SAGAR)

POBLACIÓN

Centros de control canino o antirrábicos

CENAVECEDGE

JEFES DE PROGRAMA

LESPs (SSA)INDRE (SSA)

CENASA (SAGAR)LABs (SAGARPA)

Centros de control caninoy antirrábicos

OPS


OPSCDC

APOYO DEL LAB DE RABIA DEL InDRE 2010APOYO DEL LAB DE RABIA DEL InDRE 2010

Diagnóstico de rabia 3667 (12+, 3531- y 124 rechazadas)

A l di ó ti B j C lif i B j C lif i S Si l N it C li Mi h áApoyo en el diagnóstico •Baja California, Baja California Sur, Sinaloa, Nayarit, Colima, Michoacán yMorelos .También al área metropolitana: 7 Centros antirrábicos y Centros de ControlCanino del Distrito Federal, Centro de Control Canino de Naucalpan, CentroAntirrábico Cuautitlán Izcalli y a la Jurisdicción de Ecatepec.

Control de calidad (23LESP) 2541 [246+, 1295 (85 rechaz, 4 incong)]

Red de LESP •Envío de dos paneles anuales• Control de calidad mensual 5-10% de muestras negativas y el 100% demuestras positivas•Implementación de IFD por el LESP de Morelos a la Red de diagnóstico,p p gcapacitación próxima al LESP de Yucatán.

Colaboración binacional •Asistencia de un funcionario del Laboratorio de Rabia del InDRE al D t t d S l d d A ti T 30 t bi ló iDepartamento de Salud de Austin Texas con 30 muestras biológicas para corroborar resultados antigénicos y genéticos, obteniendo un 100% de concordancia•Implementación del control externo por CDC al Laboratorio de Rabia del InDRE•Ampliación del panel de AcMo


•Ampliación del panel de AcMo

COMPROMISO DEL TCC-GUATEMALA-CHIAPAS- InDRE 2010COMPROMISO DEL TCC-GUATEMALA-CHIAPAS- InDRE 2010

•Antecedentes:

E l 2005 d l I DRE li ó i it G t lEn el 2005una persona del InDRE realizó una visita a Guatemala para implementar la caracterización antigénica y el Control

Externo por parte de nosotros, a lo cual no se le dio seguimientoseguimiento.

•Resultado esperado•Resultado esperado•Cronograma de envió de muestras de Guatemala al LESP enChiapas y al InDRE

•Flujograma desde que se toma la muestra hasta su resultado porIFD y estudios especiales, precisando tiempos de emitirresultados.

•Costo estimado de la vigilancia del virus rábico en el aéreafronteriza


•Personal de Guatemala capacitado por el InDRE

INTRODUCCIONINTRODUCCION

Envoltura viralEnvoltura viralProteína MProteína M

A.A. Virus de la rabia en Virus de la rabia en forma de balaforma de bala

NucleocápsideNucleocápsideB.B. Estrías en la RNPEstrías en la RNP

C.C. Espículas de las glicoproteínas Espículas de las glicoproteínas l d bí li ídil d bí li ídi

RhabdoviridaeRhabdoviridaeLyssavirusLyssavirus

NucleocápsideNucleocápside

ancladas en una bícapa lipídicaancladas en una bícapa lipídica

3’ 5’NN PP MM GG LL

22 22 -- 2525 35 35 -- 4040 65 65 -- 808058 58 -- 6262190190 KDKD

ΨΨ


KDaKDa KDaKDa KDaKDaKDaKDa 190 190 KDaKDa

TECNICAS UTILIZADAS EN EL ESTUDIO DEL VIRUS DE LA RABIATECNICAS UTILIZADAS EN EL ESTUDIO DEL VIRUS DE LA RABIA

Detección del virus rábico por IFD e Inmunohistoquímica

Aislamiento del virus por inoculación

Procesamiento de encéfalos deanimales silvestres y domésticossospechosos de rabia

Aislamiento del virus por inoculaciónintracerebral de ratones lactantes ocultivo celular

C1 C4 C9 C10 C12 C15 C18 C19

CVS/ERA/SAD/PAST + + + + + + + + ControlPerro/ mangosta + + + + + + - + 1

Perro + + - + + + - + 2A i

VAgAcs Monoclonales

+Vampiro - + + + - - + 3

*Tadarida brasilensis - + + + + - - - 4

Vampiro - + +/- + + +/- - +/- 5

*Lasiorus cinereus +/- + + + + - - - 6

Central zorrillo - + + + + + + + 8

*Tadarida b. mexicana + + + + + - - - 9

Zorrillo BCS + + + + - + - + 10

Arizona zorro + + + - + + - + 7

Caracterización antigénica del virus con un panel de 8 anticuerpos monoclonales

donados por el CDC.

RT-PCR y secuenciaciónAnálisis de las secuencias y construcción de

árboles filogenéticos . En implementación RT-PCR en tiempo real

pVampiro - + + + - - - + 11


Titulación de anticuerpos antirrábicos por ELISA y por Inhibición de Focos

Fluorescentes (RIFFT).

INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA (IFD)

AnticuerposespecíficosF

F F

LavadosPBS pH 7.6

Conjugado Antirrábico

F F F

AntígenorábicoAntígeno

del cerebro F F


INMUNOHISTOQUÍMICA

La técnica de Inmunohistoquímica que es una prueba rápida, basada en launión de un anticuerpo a una enzima (peroxidasa) y que al reaccionar conun antígeno produce coloración que puede ser observada por unu a t ge o p oduce co o ac ó que puede se obse ada po umicroscopio óptico

Anticuerposespecíficos + peroxidasa

P

P P

Improntas del encéfalo

LavadosPBS, agua y

tinciones

P P P

Antígenorábico

P P

Negativa

Positiva


+ sustrato

Positiva

PRUEBA BIOLÓGICA

Fluorescencia 4+ (98%)


TIPIFICACIÓN ANTIGÉNICA

C1 C4 C12C9 C15C10 C18 C19P l d 8Panel de 8

anticuerpos monoclonales

del CDC

N 12000 pb P M G LRNA- *

V8V1 * *C1 -

C18 - Anti-ratón marcado con

FF F

marcado con FITC

*Proteína N de diferentes virus de la rabia


CARACTERIZACIÓN ANTIGÉNICA DEL VIRUS DE LA RABIA POR AcMo

VAgC1 C4 C9 C10 C12 C15 C18 C19Acs Monoclonales

CVS/ERA/SAD/PAST + + + + + + + + Control

Perro/Mangosta + + + + + + - + 1Perro + + - + + + - + 22

Zorrillo Central - + + + + + + + 8Zorrillo BCS + + + + + + 10

Zorro Arizona + + + - + + - + 7

*Tadarida brasilensis - + + + + - - - 4*Lasiorus cinereus +/- + + + + - - - 6

*Tadarida b. mex. + + + + + 9

Zorrillo BCS + + + + - + - + 10

+Vampiro - + + + - - + 3Vampiro - + +/- + + +/- - +/- 5

Tadarida b. mex. + + + + + - - - 9

Vampiro - + + + - - - + 11*Murciélagos insectívoros

Ciclo aéreo


Ciclo terrestre

TOTAL DE MUESTRAS TRABAJADAS POR EL LABORATORIO DE RABIA DE InDRE 2010

Lab. de Rabia InDRE AMFLab. de Rabia InDRE AMFMuestras negativas Muestras positivas

PORCENTAJES DE LAS VARIANTES ANTIGÉNICASPORCENTAJES DE LAS VARIANTES ANTIGÉNICASPORCENTAJES DE LAS VARIANTES ANTIGÉNICASPORCENTAJES DE LAS VARIANTES ANTIGÉNICAS

V1 1% V1

2005 2006

38%47%

1% V3V4V5V7V8V9

33%

52% 1%

V1

V3

V5

V7

V8

V9

8%1%0,08% 1%2%2%

0,08%

V9V10V11ATÍPICA

1%10%2%

0,4% V9

V11

ATÍPICA

2007 2008

13%1%

8%

1%1% V1

V3

V7

V8

V9

9%7%

2%

1%

0,3%

2%1%V1V3V7V8V9

7%1%

68%

V10

V11

ATÍPICA 78%

V9V10V11ATÍPICA


CARACTERIZACIÓN ANTIGÉNICA 2010 – JUNIO 2011419 MUESTRAS TOTALES

CARACTERIZACIÓN ANTIGÉNICA 2010 – JUNIO 2011419 MUESTRAS TOTALES

V1 Perro CHIH DF MEX

300

350316

V1 Perro CHIH, DF, MEX, PUE,CHIS, SON

V3 Vampiro CHIH. CAM, GRO, QROO

200

250V7 Zorro Ariz DGO, CHIH

V8 Zorrillo Centro JAL, ZAC, MÉX, QRO CHIH COL GRO

150

QRO,CHIH,COL, GRO

V9 Murc Insect JAL, DF, OAX, NL

50

100

4021

321

7 6 5

V10 Zorrillo B.C.S.

V11 Vampiro HGO, GTO, SLP, PUE, TAM, CAM, QRO,TAB CHIS MEX GRO NAY VER

0Variantes antigénicas

3 5 CHIS,MEX,GRO, NAY, VERAtípica SIN, B.C.S., TAM, GTO


ANÁLISIS MOLECULAR:ANÁLISIS MOLECULAR:

RT-PCR Y SECUENCIAMIENTO NUCLEOTÍDICO

RT-PCR Y SECUENCIAMIENTO NUCLEOTÍDICONUCLEOTÍDICONUCLEOTÍDICO


TIPIFICACIÓN MOLECULAR

N P M G L5´ 3´

304bdg

Ly001, JW12 (1500)

550FW (960pb) 304bdg

Termociclador

( p ) g

A8bis (700pb) 304bdg

NUCLEOPROTEINATermociclador

Selección de un gen semivariable


SECUENCIAMIENTO NUCLEOTÍDICO


DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL BROTE DE RABIA CANINA ISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL BROTE DE RABIA CANINA EN EL VALLE DE MEXICO 2005EN EL VALLE DE MEXICO 2005--20062006


Tadarida brasiliensis mexicana V-9Coyotepec

OtumbaZumpangoTecamac

4 h

64

Perro V-1

Zorrillo V-8

Atípica

TultepecTultitlan

EcatepecMelchor Ocampo

Cuautitlan

Tlalnepantla

NextlalpanAcolman

Xonacatlan

TeotihuacanEstado Mex.

Coacalco

4 65

4

2

513

33

Valle de Bravo Malinalco

D.F.Netzahualcóyotl

Tequixquiac

Luvianos Amatepec

Tejupilco

Cuernava

Cuernavaca.

Huehuetocan 3

4

4

Tlataya




Tadarida brasiliensis mexicana V-9Coyotepec

OtumbaZumpangoTecamac

4 h

64

Perro V-1

Zorrillo V-8

Atípica

TultepecTultitlan

EcatepecMelchor Ocampo

Cuautitlan

Tlalnepantla

NextlalpanAcolman

Xonacatlan

TeotihuacanEstado Mex.

Coacalco

4 65

4

2

513

33

Valle de Bravo Malinalco

D.F.Netzahualcóyotl

Tequixquiac

Luvianos Amatepec

Tejupilco

Cuernava

Cuernavaca.

Huehuetocan 3

4

4

Tlataya


ANÁLISIS FILOGENÉTICOANÁLISIS FILOGENÉTICOANÁLISIS FILOGENÉTICOANÁLISIS FILOGENÉTICO

247coahcy01

363puedg024508tmct02

4506tmct02

370puedg02

362puedg02

112431puehm964822puedg96

555mxmxdg78

117293puedg97y

4815slpdg99

3251grodg003285grodg01

3287grodg01

4485yucdg0158

4491mxdg02365puedg043281puedg004519puedg02

3279puedg01564tlxdg04 4476yucdg99

4481yucdg01

4480yucpg02

64

93 9782

82

3278grodg994513puedg023302tlxdg01

4686puedg02117828puedg97

3303tlxdg02375puedg024491mxdg02

4626chishm034486chisdg02

2780coahbv06641sinsk01

4534sonsk0261

57

63

81

89 9594 59

100

841mxteotpg06

8092mxecadg05 115461slp96909puedg97

1278mxdg91117898puedg97118836verhm97

3278grodg993299dfdg99

5 3puedg0

231sinsk0159

57

5868

9785

316539739154720620839040338631683164mxecadg05

1944mxacodg06

194mxzumdg06 1246chihsk06

1248chihsk06

3304mxdg02

5245sonsk023142mxfrr901282mxdg913244mxdg983121mxhm913244mxdg98

84

57

5975


38631683284mxdg9939472131664511mxdg023763713546544013754514mxdg0231591374466846602553267mxdg016503325hgo023954023163378356664355315866035931612713160392V682Coa963300349317125421437321331693260dfdg00317374021538135037974135110443583934516mxdg02385263

3162mxdgeca0510

LOCALIZACIÓN GEOGRÁFICA DE CASOS DE RABIA POSITIVOSLOCALIZACIÓN GEOGRÁFICA DE CASOS DE RABIA POSITIVOSEN SERES HUMANOS 2010 EN SERES HUMANOS 2010 -- 20112011

LOCALIZACIÓN GEOGRÁFICA DE CASOS DE RABIA POSITIVOSLOCALIZACIÓN GEOGRÁFICA DE CASOS DE RABIA POSITIVOSEN SERES HUMANOS 2010 EN SERES HUMANOS 2010 -- 20112011

f3UriqueChih,zorrf3GuachochiChih zorr

m68Nonoava,zorrim6Guachochi,zorri

f3GuachochiChih,zorr

m7LoretoBCS,zorr

m9EscuinapaSin,murc

m8LaYescaNayarit,murcm9NayarNayarit,murcm21NayarNayarit,murc

f7TantoyucaVer,murc

m9-21Tulti-OtuEdoMéx perro

f4StaM.SLP,murcif38Nayar,Nay?

2000

2001

f4TuxpanJalis,murc

m11CarrilloPVeracruz,murc

m10HueyapanVerac,murcf28CunduacanTab,murc

f52SnLorenzoOax,murc

m11SnMartínPue,s/dm32SnMiguelPue,s/d

m9-21Tulti-OtuEdoMéx,perro

m2EcatEdoMéx,perrom14-18ArteagaMich,murci

m13ComalcalcoTab,s/d

f27ChiconquiacoVer,zorra

2009

2010

f4SnSeb,murcm63,Hostotipaquillo,murc

f63CopándaroMich,murc

2002

2003

2004

2005

f5CacahuatánChis,perrom6TlacoapaGro,murcm40OzolotepecOax,zorro


2006

2007

2008

Personal del Laboratorio de Rabia del InDRE


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