serija biohemijski testovi

8/19/2019 SERIJA BIOHEMIJSKI TESTOVI

1/23

FermentacijaFermentacijaugljikohidrataugljikohidrataBiohemijski testovi koji služeBiohemijski testovi koji služeza dokazivanjeza dokazivanje

mikroorganizamamikroorganizama


2/23

IskorištavanjeIskorištavanje

ugljikohidrataugljikohidrata• Mikroorganizmi mogu fermentirati ugljikohidrateMikroorganizmi mogu fermentirati ugljikohidraterazličito zavisno o nihovim enzimskim sustavimarazličito zavisno o nihovim enzimskim sustavima• Aerobni, anaerobni, fakultativni anaerobi, a nekim Aerobni, anaerobni, fakultativni anaerobi, a nekim

mikroorganizmima nedostaje sposobnost oksidacijemikroorganizmima nedostaje sposobnost oksidacije

glukoze bilo kojim putem nego to radeglukoze bilo kojim putem nego to radefermentacijom.fermentacijom.

• ermentacija! anaerobna disamilacija pri čemu seermentacija! anaerobna disamilacija pri čemu sestvara organska kiselina kao "to je mliječna,stvara organska kiselina kao "to je mliječna,mravlja, octena, pri čemu nastaju plinovi kao "to jemravlja, octena, pri čemu nastaju plinovi kao "to je

vodik i ugljični dioksid. vodik i ugljični dioksid.• akultativni anaerobi su u pravilu fermentoriakultativni anaerobi su u pravilu fermentori

ugljikohidrata i koriste glikolitički put razgradnje #ugljikohidrata i koriste glikolitički put razgradnje #$mbden!Ma%erhof $mbden!Ma%erhof


3/23


ugljikohidrataugljikohidrata


4/23


ugljikohidrataugljikohidrata• ermentacijska razgradanja u laboratorijskimermentacijska razgradanja u laboratorijskimuvjetima se obavlja kori"tenjem &urhamoveuvjetima se obavlja kori"tenjem &urhamoveepruveticeepruvetice

• &a bi se odigrala reakcija fermentacije u ispitivanju&a bi se odigrala reakcija fermentacije u ispitivanjumikroorganizama podloga za uzgoj treba da sadrži'mikroorganizama podloga za uzgoj treba da sadrži'

• (ranljive materije,(ranljive materije,• "e)er koji se razlaže,"e)er koji se razlaže,• p( indikator fenolno crvenilop( indikator fenolno crvenilo• *ulture mikroorganizama koje ne mogu fermentirati*ulture mikroorganizama koje ne mogu fermentirati

pojedini "e)er ne)e uzrokovati promjenu boje podlogepojedini "e)er ne)e uzrokovati promjenu boje podlogeu žutu i stvaranje plina u &urhamovoj epruveticiu žutu i stvaranje plina u &urhamovoj epruvetici

• +zeli smo podlogu koja se zove Andrade peptonska+zeli smo podlogu koja se zove Andrade peptonska voda sa indikatorom i dodavali tri test "e)era! voda sa indikatorom i dodavali tri test "e)era!lakotozu, glukozu i saharozu.lakotozu, glukozu i saharozu.


5/23

Određivanje fermentacije glukoze iOdređivanje fermentacije glukoze ilaktoze na Klingerovom željeznomlaktoze na Klingerovom željeznom

agaru i na agaru sa trostrukimagaru i na agaru sa trostrukimželjezom i šećeromželjezom i šećerom• azlikovati rodove unutar obitelji $nterobacteriaceaeazlikovati rodove unutar obitelji $nterobacteriaceae• azlikovati predstavnike obitelji $nterobacteraceae odazlikovati predstavnike obitelji $nterobacteraceae od

ostalih skupina bakterijaostalih skupina bakterija• azlika unutar obitelji i izme-u predstavnika drugih obiteljiazlika unutar obitelji i izme-u predstavnika drugih obitelji

su gram!negativni bacili kojin se razlikuju po načinu na kojisu gram!negativni bacili kojin se razlikuju po načinu na kojifermentiraju ugljikohidrate i tvorbe vodikova sulda odfermentiraju ugljikohidrate i tvorbe vodikova sulda odstrane različitih skupina mikroorganizama probavnogstrane različitih skupina mikroorganizama probavnogsustava.sustava.

• Bogatstvo nutrijenata kod ove podloge omogu)ava rastBogatstvo nutrijenata kod ove podloge omogu)ava rastbakterija iz porodice $nterobacteriaceae nakon primarnebakterija iz porodice $nterobacteriaceae nakon primarne

izolacije na primarnim ili selektivnim čvrstim podlogama.izolacije na primarnim ili selektivnim čvrstim podlogama.• /ndikator je ponovo fenolno crvenilo, laktoza i saharoza su/ndikator je ponovo fenolno crvenilo, laktoza i saharoza susadržane 01 puta u ve)oj koncentraciji od glukoze.sadržane 01 puta u ve)oj koncentraciji od glukoze.

• *osi dio podloge je izložen atmosferskom kiseoniku!*osi dio podloge je izložen atmosferskom kiseoniku!aeroban, donjindio relativno anaeroban.aeroban, donjindio relativno anaeroban.


6/23

TŠ!"Kultura se nanosi cik"cak naTŠ!"Kultura se nanosi cik"cak nakosoj #ovršini i u$odom u du$inukosoj #ovršini i u$odom u du$inu

#odloge#odloge


7/23

%eakcije do kojih dolazi na%eakcije do kojih dolazi naTŠ! TŠ!

&užnato na kosini ' lužnato&užnato na kosini ' lužnato uu du$inidu$ini!nema fermentacije!nema fermentacije(Pseudomonas aeruginosa)(Pseudomonas aeruginosa)

Kiselo na kosini ' kiselo uKiselo na kosini ' kiselo u du$inidu$ini!glukoza,laktoza i!glukoza,laktoza i

saharoza su fermentirani #saharoza su fermentirani # Escherichia, Enterobacter i Escherichia, Enterobacter i

Klebsiella. ( Klebsiella. ( lužnato na kosinilužnato na kosinipokaziuje fermentira lipokaziuje fermentira limikroorganizam laktozu2mikroorganizam laktozu2

&užnato na kosini ' kiselo&užnato na kosini ' kiselo

(crno) u du$ini(crno) u du$ini!glukoza!glukozafermentirana laktoza nijenfermentirana laktoza nijenfermentirana , proizvodi sefermentirana , proizvodi se vodonik vodonik sulfd-Salmonella,sulfd-Salmonella, Arizona, Proteus, Citrobacter Arizona, Proteus, Citrobacter


8/23


9/23

Indol reakcijeIndol reakcije

Indol " sposobnost mikroorganizama da razgrade aminokiselinu triptofan E. coli #pozitivna reakcija$ Klebsiella, Enterobacter "negativna reakcija%odaje se &hrlihov ili 'ovačev reagens


10/23

Test metilnimTest metilnim

crvenilomcrvenilomIdentifikacija bakterija koje proizvode jake kiseline p(ispod ),) *raspon p( + uto"p( crveno ),)- "roduljena inkubacija )/"01 sata


11/23

+oges"-roskauer +oges"-roskauer

oges roskauer test pozitivan kod bakterija koje proizvodeacetilmetilkarbinol kao krajnji produkt metabolizma ( Enterobacter,Serratia, Klebsiella)


12/23

Indol i test sa metilIndol i test sa metil

crvenimcrvenim


13/23

.immonsov citratni agar .immonsov citratni agar /asniva se na s#oso$nosti mikroorganizama da u#otrije$e/asniva se na s#oso$nosti mikroorganizama da u#otrije$e

natrijev citrat kao jedini izvor ugljika0 ta s#oso$nostnatrijev citrat kao jedini izvor ugljika0 ta s#oso$nostzaviosi od #risustva enzimazaviosi od #risustva enzima

citarat 1#ermeazecitarat 1#ermeazeIndikator $romtimolno modrilo koje na #odru2ju is#od #3Indikator $romtimolno modrilo koje na #odru2ju is#od #3 vrijednosti 4 "žute $oje0 a u #odrul2ju iznad #3 504 modre vrijednosti 4 "žute $oje0 a u #odrul2ju iznad #3 504 modre

$oje$oje


14/23

+oges 1-roskauer i test za +oges 1-roskauer i test zaiskorištavanje citrataiskorištavanje citrata


15/23

-rodukcija i određivanje-rodukcija i određivanjeureaze u #odloziureaze u #odlozi

s#oso$nost mikroorganizama da razgrades#oso$nost mikroorganizama da razgrade

ureu o#omoću enzima ureaze 0 #ose$no zaureu o#omoću enzima ureaze 0 #ose$no zaodređivanje vrste -roteus vulgarisodređivanje vrste -roteus vulgaris


16/23

-rodukcija i određivanje-rodukcija i određivanjeureaze u #odloziureaze u #odlozi

• /skori"tavanje ureje je mnogo slabije izraženo/skori"tavanje ureje je mnogo slabije izraženokod drugih vrsta enterobakterija u odnosu nakod drugih vrsta enterobakterija u odnosu na3roteus, stoga služi za brzu dijagnostiku3roteus, stoga služi za brzu dijagnostikupredstavnika toga roda i razlikovanje odpredstavnika toga roda i razlikovanje od

ostalih laktoza nefermentiraju)ih bakteriajostalih laktoza nefermentiraju)ih bakteriaj• 3risutnost ureaze može se odrediti pojavom3risutnost ureaze može se odrediti pojavomružičate boje zahvaljuju)i p( indikatoruružičate boje zahvaljuju)i p( indikatorufenolonom crvenilu, oslobo-eni amonijakfenolonom crvenilu, oslobo-eni amonijakstvara lužnati medij i ružičastu boju "to jestvara lužnati medij i ružičastu boju "to je

pozitivna reakcija.pozitivna reakcija.• *ao podloga se upotreblajva 4hristensenova*ao podloga se upotreblajva 4hristensenova

ureja agar.ureja agar.


17/23

Test za dokazivanjeTest za dokazivanjestvaranja vodikova sul6da0stvaranja vodikova sul6da0

#lina u #odlozi#lina u #odlozi• 5uldi se osloba-aju iz cistina ili metionina enzimskim5uldi se osloba-aju iz cistina ili metionina enzimskimdjelovanjem bakterijadjelovanjem bakterija• 5pajanje sulda sa vodikovim jonima5pajanje sulda sa vodikovim jonima

• 6tkrivanje plina pomo)u soli te"kih metala kao "to su6tkrivanje plina pomo)u soli te"kih metala kao "to su

željezo, bizmut ili olovo..željezo, bizmut ili olovo..


18/23

Određivanje $iohemijskihOdređivanje $iohemijskihaktivnosti mlije2nih $akterijaaktivnosti mlije2nih $akterija

#omoću litmus indikatora#omoću litmus indikatora


19/23

Katalaza testKatalaza tests#oso$nost nekih mikroorganizama das#oso$nost nekih mikroorganizama da

razgrade vodikov #eroksid #oomoću enzimarazgrade vodikov #eroksid #oomoću enzimakatalazekatalaze


20/23

2esto kori3teni testovi za aerobne gram pozitivne koke

'atalaza pozitivan i katalaza negativan testStaphylococcus, Streptococcus)


21/23

Oksidaza test saOksidaza test sa#"aminodimetilanilin#"aminodimetilanilin

oksalatomoksalatom• 5posobnost nekih bakterija da proizvode citohrom5posobnost nekih bakterija da proizvode citohromoksidazuoksidazu• &okaz proizvodnje je pojava ružičaste, potom sjetlo sme-e&okaz proizvodnje je pojava ružičaste, potom sjetlo sme-e

i napokon crne boje na povr"ini kolonija.i napokon crne boje na povr"ini kolonija.


22/23

.ta#h7lococcus vrste.ta#h7lococcus vrste


23/23

Koagulaza testKoagulaza test

• 5posobnost nekih bakterija da sintetiziraju5posobnost nekih bakterija da sintetizirajuenzime koji koaguliraju krvnu plazmu!koagulazaenzime koji koaguliraju krvnu plazmu!koagulazaplazma kuni)aplazma kuni)a

• *oagulaza pozitivna reakcija *oagulaza*oagulaza pozitivna reakcija *oagulazanegativnanegativna

reakcijareakcija

serija biohemijski testovi

Documents