saliva biochimie

56
Saliva, o noua sursa Saliva, o noua sursa neinvaziva de neinvaziva de determinari biochimice determinari biochimice

Upload: giorgicamg76

Post on 21-Nov-2015

205 views

Category:

Documents


15 download

DESCRIPTION

saliva

TRANSCRIPT

  • Saliva, o noua sursa neinvaziva de determinari biochimice

  • SALIVACE ESTE ?CARE ESTE COMPOZITIA ACESTEIA ?CE ROLURI ARE ?CE COMPUSI PUTEM DETERMINA ?CE SEMNIFICAIE CLINIC AU ?

  • Sa analizam salivaoglinda organismuluifluid heterogen cu proteine, electroliti, hormoni si alti compusi transportati din sangesolutie de spalare, un lubrifiant, rezervor de ioni, sistem tampon si antioxidant remarcabilprima linie defensiva in stresul oxidativ

  • Cavitatea orala:mediu extrem de dinamic si unicsingurul loc din organism unde tesuturile mineralizate sunt expuse mediului exterior si care implica interactiuni complexe intre suprafete diferite, tesut gazda moale si tare/alimente/aer/microorganismescldat permanent de saliv, care ncearc s fac fa unui mediu extrem de dinamic

  • AVANTAJELE SALIVEIrecoltare rapida, oriunde , oricand si nestresantastabilitate mare a probelor si posibilitate pastrarii lor indelungatetehnica neinvazivarepetarea testelor se realizeaza mai usor minimalizarea contaminarii pacientilor si a personalului medicalconcordanta excelenta cu nivelul sanguin pentru aproape toti compusiisensibilitate comparabila cu a sangelui si specificitate mai mare in unele cazuri

  • To be continued ofera posibilitatea efectuarii unor studii in dinamicapermite o colaborare mai stransa si permanenta cu pacientulnu necesita un echipament specialse preteaza excelent pentru screening

  • Interesul pentru salivaevolutia tehnicilor de determinare cu o mare sensibilitateconcentratia componentelor salivare este de 10-100 de ori mai mica decat in sangesaliva - unanim recunoscuta ca mijloc de investigare si diagnostic in mai multe domenii medicale: endocrinologie, medicina legala, toxicologie, medicina interna, medicina dentara

  • Mandel spunea:Saliva nu este un lichid obinuit; aceasta este lipsit de sinceritatea transpiraiei, dramatismul sngelui i elocvena lacrimilora devenit o alternativ neinvaziv pentru biochimia clinic

  • Functiile saliveiprotectie mpotriva infeciilor bacteriene, virale i fungiceimplicat n masticaie, deglutiie, vorbire, retenie dentar, degustare i probabil n comunicarea chimic(srut !!!!!)

  • Proveniena saliveiprodus de trei glande majore (2 parotide, 2 submandibulare i 2 sublinguale) i de glande minore(GSM) localizate n buze, mucoasa oral i limb contribuia relativ a glandelor salivare individuale la saliva total este diferit n condiii normale i de stimulare

  • Saliva rezidualprodus n proporie de 60% de glanda submandibular / sublingual i 30% de parotidprezent aproape permanent n cavitatea oral

  • SALIVA TOTALsecretat de glandele salivare dar include i constitueni provenii din snge, bacterii i produi ai acestora, virui, celule epiteliale descuamate, electrolii, fluid crevicular i resturi alimentare ideal pentru identificarea unor biomarkeri ai afeciunilor orale i sistemicefrecvent studiat pentru evaluarea afeciunilor sistemice

  • Saliva totalaConstituentii serici (medicamente, hormoni) ajung in saliva pe cai diferite: transport activ, difuzie pasiva si ultrafiltraresau ca rezultat al secretiei fluidului crevicularin functie de gradul de inflamatie al gingiei, fluidul crevicular, f. mult studiat in ultimul timp- considerat fie un transudat seric sau, mai frecvent, un exudat inflamator ce contine constituenti serici

  • Recoltarea saliveiCu/fara stimulareStimulare masticatia - guma de mestecat sau parafina - gustativa aplicare de acid citric pe limbaAfecteaza concentratia unor constituentiSaliva nestimulata- afectata de gradul de hidratare, expunerea la lumina, pozitia corpului, momentul recoltarii

  • COMPOZITIA SALIVEIComponentii salivei - mirror of the bodys health"

  • COMPOZIIA CHIMICmai mult de 99% ap- cel mai apos produs de secreie al organismuluisubstana uscat ( 0,5%): substane organice (2/3) i anorganice (1/3)-foarte dependent de alimentele ingerate

  • Compusi anorganici si organicicele mai importante componente anorganice-Ca, fosfatbicarbonat, Na, K, Cl, I, F,cele mai importante componente organice-proteinele identificate prin electroforez cel puin 150Saliva total - 2,2 g/L (10-500g/mL) salivar

  • Componentele salivare majoreHistatine : 2-4 kDaStaterina : 4-6 kDaLizozimul : 14 kDaCistatine : 14 kDaPRP : 10-30 kDaAC : 42-65 kDa

  • To be continued Amilaza : 56-60 kDaPeroxidaze : 75-78 kDaLactoferina : 75-78 kDaMucina 2 (MG2) : 130 kDaIgAs : 280 kDaMucina 1 (MG 1) : >1000 kDa

  • Albumina

    1 -10% din proteinele totale salivare i concentraia ei scade cu creterea fluxului salivarrol antioxidant + uratul i ascorbatulValori crescute la pacienii supui chimioterapiei i la care apare stomatitamarker predictiv al complicaiiorValori scazute la pacientii diabetici, probabil datorita accentuarii stresului oxidativ la nivelul cavitatii orale, in conditiile existentei unei boli parodontale

  • To be continued rolul albuminei in saliva, desi minor, nu poate fi neglijat, deoarece, n absenta acesteia, activitatea de scavenger a uratului scade scaderea albuminei la pacientii cu parodontopatii indica un consum accentuat al acestei proteine , in conditiile cresterii stresului oxidativ

  • Saliva mai conineFactori de crestere: factorul de cretere neuronal (NGF), epitelial (EGF), insulin-like (IGF)- justific activitatea paracrin i endocrin a glandelor salivaren saliva parotidian parotina -activitate hormonal-implicat n calcifiere i meninerea homeostaziei calcemicechemokine i citokine -implicate n procese acute, inflamatorii i imunoreglatoareChemokinele i receptorii lor - cheia nelegerii infeciilor cu HIV

  • Citokinele salivaregrup de GP cu rol imunoreglatorsecretate i de keratinocitele mucoasei orale mucoasa are, pe lng alte funcii i o foarte important funcie imunitarimplicate n inflamaie, aprarea antiviral i antitumoral

  • Compui cu greutate molecular micsaliva total 18 aminoacizicel mai abundent Gly- probabil datorit scindrilor hidrolitice ale proteinelor prin intermediul enzimelor bacterieneGABA i fosfatidiletanolaminetetrapeptin (Gly-Gly-Lys-Arg) - implicat n metabolismul plcii dentare

  • Alte proteine salivareproteina care ndeprteaz mirosul -odorant binding protein- leag acidul 3-metil-2-hexenoic, componentul major al mirosului transpiraiei aceeai protein - implicat n respiraia patologic, cu miros neplcut (ca o surs de acizi volatili) i n comunicarea chimic (srutul !!!!, salivatia sugarilor la vederea parintilor )

  • Sialinaoligopeptidstimuleaz metabolismul bacteriilor prin creterea producerii de acid lactic din glucoz creterea pH-ului prin sinteza de compui baziciresponsabil - un rest de Arg (din cei 4 AA ai peptidei)denumit i factor de cretere a pH-uluirezultatul amplificrii metabolismului - ndeprtarea rapid a glucidelorimportant sistem tampon alternant sistemului bicarbonat

  • DEFENSINELECe denumire sugestiv !!!!Peptide cu valene antimicrobiene i citotoxiceValori crescute n saliv au fost detectate la pacienii cu cancere orale

  • Istoric Surprinzator- saliva a fost utilizata in scop diagnostic in urma cu aproape 2000 de ani !!!In medicina traditionala chineza- saliva si sangele- are brothersAu origine comuna semnificatie diagnostica hipersalivatiaarsuri gastricesaliva dulce in afectiuni ale splinei sau intoxicatii cu metale

  • Afectiuni sistemice (ereditare, autoimune, cancer si boli infectioase)

    Afecteaza direct sau indirect glandele salivare volumul si compozitia salivei Modificarile unor markeri specifici diagnosticul si prognosticul acestor afectiuni

  • BOLI EREDITARE

    Fibroza chistica- concentratii salivare crescute de calciu, fosfati(incidenta calculilor dentari la copii), proteine si lipide(alterarea proprietatilor fizico-chimice ale salivei), uree, acid uric, prostaglandine si EGF(epidermal growth factor) cu activitate biologica scazuta17-OHP(17-hidroxi-progesterona)- excelent test screening hiperplazia congenitala a glandelor suprarenale-corelare perfecta intre nivelul salivar si cel sanguin

  • Afectiuni autoimuneAlterare- flux salivar, pH, capacitate tampon, profilul citokinelor-diagnosticul si monitorizarea sindromului Sjgren

  • CANCERDatorita localizarii sale, saliva fluid biologic ideal pentru screening-ul leziunilor orale premaligne si maligne, prognosticul malignizariiMarkerii tumorali identificati in saliva utili in screening-ul afectiunilor maligne orale- anticorpii p53(P53 mutation and mitotic infidelity !!!!) si defensineleNivelul catechinelor salivare(provenite din ceai) i activitatea catechin-esterazei salivare-rol n prevenirea cancerului oral i esofagianPrognosticul cancerului de san si ovar

  • Boala Alzheimer Activitatea acetilcolinesterazei salivare - marker util al modificarilor asociate bolii si al eficientei terapeutice cu inhibitori ai enzimei

  • Saliva-mediu idealpentru evaluarea markerior turnoverului tesutului ososimpact deosebit in implantele dentarediagnosticarea si monitorizarea osteoporozei si parodontopatiilorfosfataza alcalina, osteocalcina, osteopontina, etc.

  • Afectiuni viraleSaliva- o alternativa utila pentru diagnosticul hepatitelor virale(A, B, C) sensibilitate si specificitate remarcabile

  • HIVTeste salivare pentru diagnosticul HIV-Orasure (SUA)recoltarea si analiza salivei modalitate simpla, sigura, rapida, bine tolerata si precisa de diagnosticare a infectiei cu HIV concordan excelent ntre concentraia sanguin si cea salivarasaliva pacienilor infestai cu HIV - cantiti semnificativ mai mari de colagenaze i inhibitori ai acestora, comparativ cu pacienii care nu sunt seropozitivi-HIV

  • Monitorizarea medicamentelorAvantajele salivei- corelare perfecta intre nivelul salivar si cel sanguinindex al nivelului sanguin(etanol)- apar rapid in salivadetectare rapida- monitorizare rapida a nivelului unor medicamente sau depistarea consumului acestora- monitorizarea expunerii la tutun (tiocianat , cotinina, enzime) sau toxine, consumul de droguri

  • ToxineDeterminarea concentraiei salivare a PG a evideniat la fumtori o inciden crescut a afeciunilor orale corelat cu o concentraie salivar sczut a acestor compuiSaliva - mediu optim de monitorizare a unor substane chimice toxice pentru organismul uman (pesticide, tetraclorur de carbon, nitraI, etc.) reprezantnd n acelai timp i o modalitate de evaluare a concentraiei tisulare a acestor compui

  • Substante sau compusi care sunt corelati cu nivelul de stresModificri ale unor componente salivare, glucagon, cortisol, adrenalin, noradrenalin, dopamin, peroxizi lipidici, antioxidani, sunt relevante n stres, aa cum au evideniat determinrile efectuate pe personalul medical de pe ambulane, pacienii care se prezint la cabinetele stomatologice, etc.Remarcabil este i corelarea perfect ntre parametrii salivari i cei sanguini n stresul oxidativ

  • HORMONIConcordan excelent ntre concentraia sanguin i cea salivarReflecta concentratia hormonilor liberiSaliva- curent folosita pentru determinarea de cortisol, dehidroepiandrosterona, testosteron, estradiol, estriol si progesteronamonitorizare a pubertii precoce sau ntrziate, a hiperplaziei corticosuprarenalei, bolii Addison, amenoreei, hipopituitarismului, dezvoltarea ftului n ultima perioad a sarciniiprogesterona i estradiolul n saliv s-a impus ca o metod neinvaziv de investigare a funciei ovariene

  • HormoniCortisolul( C ), testosteronul( T ) i raportul T/C n saliv variaz semnificativ n timpul competiiilor sportive i in perioada de recuperare Cortisolul salivar crete semnificativ n cursul competiiilor sportive nivelul salivar al testosteronei fiind neafectat La sfritul competiiei, cortisolul scade rapid, n aproximativ 1,5 ore, la valoarea bazal iar testosterona crete rapid, rezultnd un raport T/C foarte mare. In perioada de recuparare fizic, raportul se menine crescut , >30% fa de condiiile bazale, timp de 5 zile

  • Cortisolul salivarRaportul T/C sczut din timpul competiiei corespunde fazei catabolice Perioada de refacere post-competiional se caracterizeaz printr-o senzaie de oboseal, incapacitate de antrenare intensiv, recunoscut i de antrenori i, paradoxal, printr-un raport T/C mare, corespunztor aa-numitei faze anabolicecortisolului salivar faciliteaz diferenierea pacienilor cu obezitate de cei cu sindrom Cushing i poate fi un parametru util de screening pentru pacienii cu sindrom Cushing

  • Determinari de Igsportivii de performan(atleti, jucatori de tenis, schiori) -stresul fizic din perioada antrenamentelor i a competiiilor induce o supresie a sistemului imunitar oral diminuare semnificativ a IgA salivarLa aceleai concluzii -studiu efectuat cu cadre didactice, n timpul anului universitar i studeni, dup o sesiune de examene Persoanele cu bun dispoziie, cu mult umor, se caracterizeaz printr-o concentraie crescut de IgA salivar i deci predispoziie mai mic la afeciuni respiratorii sau oro-dentare

  • To be continued Extrem de utila in screening-ul infectiilor virale(virusul herpesului la om, citomegalovirus, Epstein-Barr)IgA cel mai bun marker al infectiei cu rotavirus(RV)IgAs - rol major n mecanismul de aprare localrelaie invers ntre IgAs i susceptibilitatea la cariisubiecii cu concentraii salivare mici de IgA i IgM -inciden mare a cariilor dentare

  • Boli infectioasePosibilitatea monitorizarii prin detectarea de anticorpi specifici in salivaHelicobacter pylori stimuleaza sinteza de anticorpi specifici IgG (ELISA si PCR)A relevat prevalenta in salivaexplica transmiterea pe cale orala

  • Alte aplicatii ale determinarilor salivare Gangliozidele din glandele salivare au probabil un rol n complicaiile din diabet.Studiile relev c polimorfismul dezoxiribonucleazei I n saliv este deosebit de util n medicina legalFactorul de activare plachetar(PAF) detectat n saliva persoanelor sntoase i nivelul su este crescut n parodontopatii Sursa celular de PAF salivar este controversat dei numeroase date sugereaz originea sa n relaie cu prezena inflamaiei

  • Recent diagnosticarea unor afeciuni dureroase cronice(artrita reumatoid, osteoartrita, migrenele, etc.) prin estimarea concentraiei salivare de serotonin, substan P(SP), calcitonin gene-related peptide(CGRP), factorul de cretere neuronal(NGF) Concentraiile salivare ale acestor parametrii sunt semnificativ crescute la pacienii cu astfel de afeciuni, comparativ cu persoanele sntoase.Concentraiile salivare ale SP i CGRP sunt de aproape 3 ori mai mari dect n plasm

  • In patologia oralaParametrii salivari ca peroxidaza salivar, acidul uric, albumina, acidul ascorbic, GGT- indicatori ideali ai stresului oxidativ din diferite afeciuni orale: gingivite, parodontopatii, etc. Potenialul antioxidant al salivei, asigurat n principal de acidul uric, precum i concentraia antioxidanilor salivari scad n gingivite i parodontopatii Activitile mieloperoxidazei din LPMN polimorfonucleare, determinat prin chemiluminescena LPMN i peroxidazei salivare cresc n gingivite si parodontopatii, constituind un bun indicator al procesului inflamator

  • Markeri ai afectiunilor oraleAST si FA din saliva markeri ai afectiunilor parodontalesistemul enzimatic salivar-compromis in cazul expunerii la fum de tigaraGGT salivar marker al stresului oxidativ indus de fumul de tigara

  • To be continuedcistatina S salivar - biomarker al rezistenei la placa bacterian nivelului salivar al amilazei i lizozimului -modalitate neinvaziv de monitorizare a activitii glandelor salivareTrombomodulina( TM )-proteoglican din keratinocitele gingivale poate regla activitatea trombineirol anticoagulant major- receptor al trombinei- acioneaz ca i cofactor n activarea proteinei Csczut n inflamaiile gingivale i parodontopatii Parodontopatiile din diabet se coreleaz cu valori crescute ale metaloproteazelor salivare-utile astfel n monitorizarea afeciunilor parodontale asociate diabetului

  • Perspectiveelaborarea unor biomolecule n care domeniile structurale s corespund unor necesiti individualesaliv artificial care s includ oligozaharide ale PRG - facilita lubrifierea n masticaie diminund astfel abraziunile asociate xerostomieiun domeniu adeziv de la mucin sau fibronectin, prin cuplare cu un domeniu de la lactoferin sau peroxidaz tratamentul afeciunilor orale asociate plcii dentare

  • Continuarea investigaiilor pe salivva conduce cu siguran la descoperirea unor noi utiliti, saliva putnd s ne ofere n continuare multe surprizeEra genomica in care am intrat a deschis noi perspective determinarilor pe saliva-determinari de ADN, ARNDovada: initierea in 2004 a unui consortiu de cercetare multidisciplinara da catre National Institute of Dental and Craniofacial Research pentru elaborarea unui catalog complet al proteinelor salivare (Human Salivary Proteome Project)