RICKETTSIOSI ed RICKETTSIOSI ed EHRLICHIOSIEHRLICHIOSI

EZIOLOGIA e EZIOLOGIA e DIAGNOSI DI LABORATORIODIAGNOSI DI LABORATORIO

Dott.ssa Valentina EbaniDip. Patologia Animale, Profilassi eIgiene degli AlimentiFacoltà di Medicina VeterinariaUniversità di Pisa

EZIOLOGIA

BATTERI Gram negativi Giemsa

Gimenez

Pleomorfi coccoidi/elissoidali

Parassiti intracellulari obbligati

liberi nel citoplasma in vacuoli intracitoplasmatici

(Rickettsie) (Ehrlichie)

TRASMISSIONE TRAMITE VETTORI INVERTEBRATI

ZECCHE

CELLULE BERSAGLIO

CELLULE EMATOPOIETICHE CELLULE

MATURE O IMMATUREENDOTELIALI

Ehrlichie Rickettsie

PRECEDENTE CLASSIFICAZIONE

ORDINE RICKETTSIALES

• Famiglia RICKETTSIACEAE Tribù Rickettsieae Genere Rickettsia

Tribù Ehrlichieae Genere Ehrlichia

Generi Coxiella Cowdria Neorickettsia

• Famiglia ANAPLASMATACEAE Generi Anaplasma

Aegyptianella

Haemobartonella

Eperythrozoon

• Famiglia BARTONELLACEAE Genere Bartonella

STUDI GENOMICI SU

•Gene 16S rRNA

•Gene groESL

•Geni che codificano per proteine di membrana

ATTUALE CLASSIFICAZIONE

ORDINE RICKETTSIALES

Famiglia RICKETTSIACEAE Genere Rickettsia

Genere Orientia

Famiglia ANAPLASMATACEAE Genere Anaplasma

Genere Ehrlichia

Genere Neorickettsia

Genere Wolbachia

Genere Cowdria

FAMIGLIA RICKETTSIACEAE

Rickettsia

Orientia tsutsugamushi

TYPHUS GROUP

R. prowatzekii R. typhi R. canadensis

R. rickettsiiR. conorii

R. felisR. helveticaR. akariR. sibirica

SPOTTED FEVER GROUP

entrata moltiplicazione rilascio

Rickettsia rickettsii

FEBBRE DELLE MONTAGNE ROCCIOSE

ROCKY MOUNTAIN SPOTTED FEVER (RMSF)

Ixodes ricinus

Rickettsia rickettsii

Rickettsia conorii

FEBBRE BOTTONOSA DEL MEDITERRANEO

Rhipicephalus sanguineus

Rickettsia felis

Rickettsia typhi

CANEGATTOCtenocephalides felis !?

FAMIGLIA ANAPLASMATACEAE

Anaplasma

Ehrlichia

Neorickettsia

A. phagocytophila A. platys A. marginale A. bovis

E. canisE. chaffeensisE. ewingii E. muris E. ruminantium

N. risticiiN. sennetsuN. helminthoeca

entrata moltiplicazione rilascio

Ehrlichia canis

EHRLICHIOSI MONOCITICA

“PANLEUCOPENIA TROPICALE CANINA”

Rhipicephalus sanguineus

MONOCITI

• Ehrlichia chaffeensis

EHRLICHIOSI MONOCITICAMONOCITI

• Ehrlichia ewingii

EHRLICHIOSI GRANULOCITICAGRANULOCITI

Anaplasma phagocytophila

“EHRLICHIOSI” GRANULOCITICA

Ixodes ricinus

Neorickettsia risticii

EHRLICHIA MONOCITICA

“POTOMAC HORSE FEVER”

MONOCITI

DIAGNOSI DIAGNOSI DIDILABORATORIOLABORATORIO

DIAGNOSI INDIRETTADIAGNOSI INDIRETTA

• Immunofluorescenza indiretta“gold standard”

Soglia di positività

• 1:40 Ehrlichie• 1:64 Rickettsie

SIERO

• VANTAGGI:

Vetrini IFI per E.canis

A. phagocytophila

N. risticii

R. conorii

R. rickettsii

R. typhi

R. prowazekii• SVANTAGGI:

Attrezzatura

Lettura

Dip. Patologia Animale, Profilassi e Igiene degli Alimenti - Pisa

ALTRI TEST SIEROLOGICI

KIT COMMERCIALI

Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)

ANTIGENI

• whole cell• Proteine ricombinanti (p30 p30-1)• Proteina ricombinante (rMAP2)

E. canis

SENSIBILITA’KIT

Ridotta con titoli anticorpali 1:40 – 1:80

CANI CON EHRLICHIOSI IN FASE NON ACUTA HANNO TITOLI ANTICORPALI BASSI

PROBLEMA CROSS-REAZIONI

NON CONFONDERE LE CROSS-REAZIONI CON LE CO-INFEZIONI

Frequenti le co-infezioni legate allo stesso vettore

E. canis / R. conoriiA. phagocytophila / R. rickettsii

DIAGNOSI DIRETTADIAGNOSI DIRETTA

EhrlichiosiEhrlichiosi

• STRISCIO buffy coat

sangue da vasi capillari

aspirato tissutale da milza , polmone, linfonodi (E. canis)

ISOLAMENTO

• difficoltà di esecuzione

• linee cellulari diverse

• laboratorio di classe 3 (eccetto E. canis)

Su stipite isolato sono possibili studi spr di ordine epidemiologico

DIAGNOSI MOLECOLAREDIAGNOSI MOLECOLARE

Sangue in EDTA buffy coat

Tessuti

• Estrazione DNA

• Polymerase chain reaction

(PCR)

Utilizzo di primer diversi a seconda dell’agente eziologico ricercato

E. canis

E. chaffeensis

A. phagocytophila

N. risticii

Rickettsia spp.

sequenziamento

Presso Dip. Patologia Animale, Profilassi e Igiene degli Alimenti, Università di Pisa

CONCLUSIONICONCLUSIONI

• Diversi agenti responsabili di ehrlichiosi e rickettsiosi nel CANE

• Sierologia mediante IFI

• Ausilio offerto da metodiche molecolari