rezumat teza doctorat_popa

Download Rezumat Teza Doctorat_POPA

Post on 03-Aug-2015

61 views

Category:

Documents

1 download

Embed Size (px)

TRANSCRIPT

U IVERSITATEA DI BUCURETI FACULTATEA DE CHIMIE COALA DOCTORAL CHIMIE

DETERMINAREA UNOR ANTIOXIDANI I A CAPACITII ANTIOXIDANTE TOTALE A UNOR PROBE COMPLEXE REZUMATUL TEZEI DE DOCTORAT

Doctorand, Claudia-Valentina POPA Conductor tiinific, Profesor Dr. Andrei Florin DNE

Bucureti -2011-

Cuprins

Cuprins

CUPRI S(numerotarea paginilor este cea din teza de doctorat)LISTA DE ABREVIERI I TRODUCERE OBIECTIVELE TEZEI 1. RADICALI LIBERI. A TIOXIDA I. CAPACITATE A TIOXIDA T TOTAL. STRESUL OXIDATIV 1.1. Radicali liberi 1.2. Antioxidani. Capacitate antioxidant total 1.2.1. Clasificarea antioxidanilor 1.2.2. Antioxidani naturali neenzimatici 1.2.2.1. Antioxidani naturali neenzimatici liposolubili 1.2.2.2. Antioxidani naturali neenzimatici hidrosolubili 1.2.2.3. Compui cu structur fenolic 1.2.3. Antioxidani enzimatici 1.2.4. Antioxidani anorganici 1.3. Stresul oxidativ 2. OBI EREA EXTRACTELOR VEGETALE 2.1. Principii generale ale extraciei 2.2. Procedee de extracie 3. BIOLUMI ESCE . CHEMILUMI ESCE 4. METODE DE DETERMI ARE A A TIOXIDA ILOR I A CAPACITII A TIOXIDA TE A U OR PROBE COMPLEXE 4.1. Clasificarea metodelor de determinare a antioxidanilor i a capacitii antioxidante 4.2. Metode spectrofotometrice 4.3. Metode bazate pe luminescen 4.3.1. Metode bazate pe fluorescen 4.3.2. Metode bazate pe chemiluminescen, electrochemiluminescen i fotochemiluminescen 4.4. Metode electrochimice 4.5. Metode cromatografice 4.6. Metode de analiz prin injectare n flux 4.7. Alte metode de determinare a unor antioxidani i a capacitii antioxidante totale 5. DETERMI AREA U OR A TIOXIDA I I A CAPACITII A TIOXIDA TE TOTALE A U OR PROBE COMPLEXE 5.1. Metod FIA-CL cu injectarea probei ntr-un flux de ap oxigenat 5.1.1. Principiul metodei 5.1.2. Reactivi i materiale 5.1.2.1. Aparatura 7 9 11 13 13 18 21 22 22 32 37 53 56 57 63 63 65 69 73 73 75 85 85 88 98 99 100 108 111 112 112 113 113

5.1.3. Mod de lucru 5.1.4. Mod de calcul 5.1.5. Determinarea acidului L-ascorbic 5.1.6. Concluzii 5.2. Studiul influenei complexrii cu EDTA a ionilor de Co2+ (catalizator) asupra semnalului de chemiluminescen 5.2.1. Principiul metodei 5.2.2. Echilibre implicate n reacia de chemiluminescen bazat pe oxidarea luminolului de ctre radicalii HO. n prezena ionilor de Co2+ drept catalizator 5.2.3. Reactivi i materiale 5.2.3.1. Analiza apei oxigenate 5.2.3.2. Aparatura 5.2.4. Mod de lucru 5.2.5. Mod de calcul 5.2.6. Optimizarea condiiilor de lucru. Influena solvenilor asupra semnalului de chemiluminescen 5.3. Determinarea unor antioxidani folosind montajul de analiz prin injectare ntr-un flux de tampon borat 5.3.1. Mod de lucru 5.3.2. Mod de calcul 5.3.3. Determinarea unor antioxidani 5.3.3.1. Determinarea acidului uric 5.3.3.2. Determinarea acidului L-ascorbic 5.3.3.3. Determinarea acidului cafeic 5.3.3.4. Determinarea acidului galic 5.3.3.5. Determinarea Trolox 5.4. Determinarea capacitii antioxidante totale a unor probe reale 5.4.1. Determinarea capacitii antioxidante totale a unor probe de vin 5.4.2. Determinarea capacitii antioxidante totale a unor ceaiuri 5.4.2.1. Obinerea infuziilor 5.4.2.2. Determinarea capacitii antioxidante totale 5.4.3. Determinarea capacitii antioxidante totale a unor sucuri de fructe i a unor buturi necarbonatate 5.4.3.1. Obinerea probelor de analizat 5.4.3.2. Determinarea capacitii antioxidante totale 5.4.4. Determinarea capacitii antioxidante totale a unor extracte din fructe de Rubus idaeus L. i Vaccinium myrtillus L. 5.4.4.1. Obinerea extractelor 5.4.4.2. Determinarea capacitii antioxidante totale 5.4.5. Determinarea capacitii antioxidante totale a unor extracte din plante

116 116 117 118 119 120

120 123 126 126 128 129 133 137 138 138 138 138 144 145 148 150 151 151 157 157 157 158 158 160 165 165 166 169

3

4

Cuprins

Cuprins/cuvinte-cheie

5.4.5.1. Determinarea capacitii antioxidante totale a unor extracte din plante aparinnd familiei Lamiaceae, obinute prin macerare 5.4.5.1.1. Obinerea extractelor vegetale 5.4.5.1.2. Determinarea capacitii antioxidante totale 5.4.5.2. Determinarea capacitii antioxidante totale a unor extracte de Rosmarinus officinalis L. iradiate cu radiaii 5.4.5.2.1. Obinerea extractelor iradiate de rozmarin 5.4.5.2.2. Determinarea capacitii antioxidante totale 5.4.5.3. Determinarea capacitii antioxidante totale i a coninutului n polifenoli a unor extracte vegetale obinute prin extracie continu i extracie cu ultrasunete 5.4.5.3.1. Obinerea extractelor vegetale 5.4.5.3.2. Determinarea capacitii antioxidante totale, a coninutului n fenoli totali i flavonoide 5.4.5.4. Determinarea capacitii antioxidante i a coninutului n polifenoli a unor legume 5.4.5.4.1. Obinerea extractelor vegetale 5.4.5.4.2. Determinarea capacitii antioxidante i a coninutului n fenoli totali, flavonoide i antociani 5.4.6. Determinarea capacitii antioxidante totale a unor probe de comprimate de Spirulin 500 mg supliment alimentar 5.4.6.1. Obinerea probelor de analizat 5.4.6.2. Determinarea capacitii antioxidante totale 5.4.7. Determinarea capacitii antioxidante totale a unor produse cosmetice 5.4.7.1. Obinerea probelor de analizat 5.4.7.2. Determinarea capacitii antioxidante totale 5.5. Concluzii 6. DETERMI AREA I TRACELULAR A VARIAIILOR CO CE TRAIILOR IO ILOR DE Ca2+ CITOSOLIC CO DIII DE STRES OXIDATIV 6.1. Calciul intracelular, mesager secundar 6.2. Drojdia Saccharomyces cerevisiae i cile de transport ale ionilor de Ca2+ n celul 6.3. Rspunsul mediat de ionii de Ca la condiii de stres 6.4. Metode de determinare a rspunsului mediat de ionii de Ca la condiii de stres 6.4.1. Aequorina, protein bioluminescent 6.5. Determinarea rspunsului mediat de ionii de Ca2+ la condiii de stres oxidativ printr-o metod bazat pe bioluminescen 6.5.1. Principiul metodei 6.5.2. Mecanismul emisiei luminii de ctre aequorin2+ 2+

169 169 169 171 172 172

176 177 177 185 185 185 193 193 193 195 195 196 197

6.2.1. Reactivi i materiale 6.2.1.1. Linii celulare i condiii de cretere 6.2.2. Mod de lucru 6.2.2.1. Studiul creterii liniilor celulare 6.2.2.2. Monitorizarea in vivo a pulsurilor ionilor de Ca2+ induse de stresul oxidativ 6.2.3. Mod de calcul 6.3. Rspunsul mediat de ionii de Ca2+ al celulelor supuse stresului oxidativ 6.3.1. Rspunsul mediat de ionii de Ca2+ al celulelor expuse la H2O2 6.3.2. Mobilizarea ionilor de Ca2+ sub aciunea stresului oxidativ indus de H2O2 6.3.3. Adaptarea celulelor la stresul oxidativ 6.3.4. Mobilizarea ionilor de Ca2+ n celulele expuse la concentraii letale de de H2O2 6.3.5. Rspunsul mediat de ionii de Ca2+ al celulelor expuse la alchilhidroperoxizi 6.4. Influena unor antioxidani i a unor extracte vegetale asupra rspunsului mediat de ionii de Ca2+ n condiii de stres oxidativ Influena vitaminei C asupra rspunsului mediat de ionii de Ca2+ n condiii de stres oxidativ 6.4.2. Rspunsul mediat de ionii de Ca2+ n condiii de stres oxidativ n prezena unor extracte vegetale 6.4.2.1. Obinerea extractului 6.4.2.2. Determinarea coninutului n fenoli totali i flavonoide 6.4.2.3. Monitorizarea rspunsului mediat de ionii de Ca2+ n condiii de stres oxidativ n prezena extractului 6.5. Discuii i concluzii CO CLUZII GE ERALE LUCRRI PUBLICATE DOME IUL TEZEI DE DOCTORAT CO TRACTE DE CERCETARE BIBLIOGRAFIE 6.4.1.

214 215 216 216 216 218 218 218 219 222 225 226

231 231 233 233 234 235 237 241 245 247 249

201 201 204 206 208 209 210 211 212

umerotarea tabelelor, figurilor i a indicaiilor bibliografice este cea din teza de doctorat

Cuvinte-cheieAntioxidani, polifenoli, flavonoide, antociani, acid ascorbic, acid uric, acid cafeic, acid galic, Trolox, capacitate antioxidant total, activitate antioxidant, metod de analiz prin injectare n flux, (chemi)luminescen, luminol, ioni de Co(II), metode spectrofotometrice, capacitatea de ndeprtare a radicalului DPPH., extracie continu, extracie cu ultrasunete, stres oxidativ, calciu citosolic, aequorin, Saccharomyces cerevisiae.

5

6

Lista de abrevieri

Lista de abrevieri

LISTA DE ABREVIERIAA AAPH ABTS ADA ADNc AEQ AGN/AGS AH AO AP AU BAPTA BL B-PE BR c CE CAT CD cit cit c CL CoQ CoQ10 CoQ10H2 CP Cys DAD DCPIP DO DPPH dw ECL EDTA EGTA ELISA acid L-ascorbic (vitamina C) 2,2'-azobis(2-amidinopropan), azo-iniiator R2N2 acid 2,2'-azino-bis(3-etilbenztiazolin-6-sulfonic) acid dehidro-L-ascorbic acid deoxiribonucleic complementar aequorin acizi grai nesaturai / acizi grai saturai donor(i) de hidrogen antioxidant/antioxidani 3-aminoftalat acid uric acid 1,2-bis(o-aminofenoxi)etan-N, N, N`, N`-tetracetic) bioluminescen B-ficoeritrina, o protein fluorescent roie, ce are legat covalent de partea proteic cromoforul ficobilin bilirubina concentraie extracie continu catalaza relaxare vibraional (vibrational relaxation, a collisional deactivation process) citosolic citocrom c chemiluminescen coenzima Q coenzima Q 10 (forma oxidat) coenzima Q 10h2 (forma redus) ceruloplasmina cistein diode array detector 2,6-diclorfenolindofenol densitate optic (optical density) radical 2,2-difenil-1-picril hidrazil sau metoda de analiz bazat pe capacitatea de ndeprtare a acestui radical (2,2-Diphenyl-1-Picryl Hydrazyl Radical Scavenging) extract sau produs vegetal uscat (dry weight) chemiluminescen generat electrochimic, electrochemiluminescen acid etilen-diaminotetracetic acid glicol-bis(2-aminoetileter)etan-N, N, N`, N`-tetracetic enzyme-linked immuno-sorbent, tehnic de determinare enzimatic a sngelui ce permite detectarea imunoglobulinelor ndreptate mpotriva unui agent bacterian sau viral

EMMA ET sau SET F FCM FCR FIA FNR (sau Fpr) FRAP

FRASC FTIR fw GC GPx G-SH / G-S-S-G HAT HPLC HPR IC IOU IR ISC L L, LH2 LC LDL LH MPC n NAD+ NADP+ ORAC P PAD

Electrophoretically Mediated Microanalysis (microanaliz mediat electroforetic) transfer de electron (Single Electron Transfer) fluorescen metoda Folin-Cioclteu reactiv Folin-Cioclteu metod de anal