rezumat - · pdf filelor” am luat valorile indicilor biochimici (colesterolul,...
TRANSCRIPT
Rezumat
Cercetările realizate în cadrul tezei intitulată „Modificările pancreasului şi
dinamica unor indici morfofiziologici în diabetul experimental la şobolanii din linia
Wistar” s-au desfăşurat în perioada 2007-2008 şi au avut ca obiective principale
următoarele:
Actualizarea datelor despre boala diabetică la om și la animale.
Producerea experimentală a diabetului cu Streptozotocină, la
șobolanii din linia Wistar.
Tratarea loturilor formate cu produse fitoterapeutice Eridiarom și
Diavit timp de 7 luni, cu menținerea unui lot martor sănătos și a unui lot îmbolnăvit și
netratat.
Recoltarea probelor de ser, în vederea analizei modificărilor unor
indici biochimici la 3,5 și 7 luni, la toate loturile din experiment.
Recoltarea probelor de sânge, în vederea analizei modificărilor unor
indici hematologici la 3,5 și 7 luni, la toate loturile din experiment.
Prelucrarea statistică a datelor obținute, pentru o mai mare acuratețe
în interpretarea acestora.
Recoltarea probelor de pancreas la 3,5 și 7 luni, în vederea analizei
modificărilor histopatologice, la toate loturile din experiment.
Cercetarea insulinei cu rolul și structura ei, într-o abordare ce pleacă
de la componența aminoacizilor acesteia și funcțiile fiecăruia în organism.
Zincul și sulful, componente indispensabile structurii biochimice a
insulinei, rolul și importanța lor în organism.
Lucrarea redactată cuprinde un număr de 236 de pagini şi este structurată în două
părţi principale:„Partea generală” cuprinde 72 pagini şi partea “Cercetări proprii”
structurată în 9 capitole, cuprinsă pe 164 pagini. În teză se regăsesc 58 de figuri
(imagini foto, grafice, scheme) şi 58 de tabele.
Bibliografia selectată cuprinde 115 titluri din literatura de specialitate, autohtonă
şi străină din ultima perioadă.
În prima parte, intitulată „Partea generală”, am prezentat date actuale din
literatura de specialitate cu privire la anatomia pancreasului, conformaţia şi structura
acestuia, comparativ la diverse specii de animale. Fiziologia pancreasului este descrisă
pe cele două mari categorii de ţesuturi: endocrin şi exocrin, analizând şi histogeneza,
histofiziologia şi conformaţia acestuia, pe specii cu caracteristicile fiecăreia.
Tot în prima parte, am prezentat acţiunile fiziologice, metabolice respectiv
sistemice (de organe) ale celor doi hormoni de natură polipeptidică: insulina şi
glucagonul, nelăsând la o parte nici somatostatina şi “polipeptidul pancreatic”
Teza fiind axată pe efectul produselor naturale originale: Eridiarom şi Diavit
asupra diabetului la animale, am expus în această parte clasificarea OMS din 1998 a
diabetului zaharat pe cele 2 tipuri I şi II precum şi alte tipuri specifice de diabet
(determinate genetic, diverse afecţiuni ale pancreasului exocrin, iatropatii sau cele de
tip imun etc.).
Etiologia diabetului zaharat pleacă de la predispoziţiile genetice de rasă, la câine
în special, până la cauze bazate pe stress în diferitele lui forme, indiferent că este de
natură iatrogenă (ex. administrare în cantităţi mari de glucocorticoizi) sau al mediului
de viaţă, ori al comportamentului specific alimentar.
Am continuat această primă parte cu patogeneza, simptomatologia, tratamentul şi
complicaţiile bolii diabetice cu aspectele lor specifice şi mai puţin specifice, încercând
să le exemplific pe specii. Un subcapitol cuprinde pompa de insulină şi altul
caracteristici ale diabetului la hamsterul pitic.
Închei prima parte cu un capitol dedicat „Datelor actuale cu privire la studiul
terapeutic al produselor naturale originale: Eridiarom şi Diavit” în care am prezentat
experimente precum cel al colegilor mei de la Clinica de Pediatrie II, Târgu Mureş
care au realizat un studiu orb controlat (placebo) cu Eridiarom pe un lot de 14 copii cu
diabet zaharat de tip I, în 2003, iar un alt studiu s-a efectuat în 2006 ianuarie-iunie
unde s-a testat eficienţa preparatului Diavit asupra echilibrului metabolic la copiii
diabetici de 8-18 ani.
Concluzia este că tratamentul cu suplimentul alimentar Diavit şi Eridiarom,
asociat insulinei, are beneficii semnificative asupra echilibrului metabolic la pacienţii
studiaţi, fără a prezenta efecte nocive, aşadar acest produs îşi merită un loc în arsenalul
fitoterapeutic al diabetului.
Partea a doua cuprinde 9 capitole din care fac parte şi concluziile finale şi
bibliografia.
În cap. 3 „Material şi metodele de lucru” descriem experienţele şi metodologia
folosită.
Am folosit şobolani din rasa Wistar, cu masa medie de 150 g, cărora le-am
administrat câte 4 mg/100 g masă corporală Streptozotocină i.p. După 3 zile de la
inducerea diabetului experimental, am format 4 loturi a câte 7 capete.
Animalele au fost întreţinute şi furajate în condiţii standard. La loturile formate
s-au adugat zilnic în hrană timp de 210 zile următoarele produse:
- lotul I – lotul sănătos martor, furajat normal, format din 7 indivizi
- lotul II – îmbolnăvit experimental cu Streptozotocină, la care se administrează
Eridiarom – 2,7 g/zi (9 tablete), format din 7 indivizi
- lotul III – îmbolnăvit experimental cu Streptozotocină, la care se
administrează Diavit – 3 g/zi (3 tablete), format din 7 indivizi
- lotul 4 – a fost lăsat ca martor îmbolnăvit experimental cu Streptozotocină şi
netratat, format din 7 indivizi
La intervale de 2 luni începând cu luna a-III-a am sacrificat câte 2 indivizi din
fiecare lot. Am recoltat, separat pe fiecare lot şi individ în parte, probe sanguine şi
probe de organe (în cazul de faţă – pancreasul), pentru ca ulterior a fi prelucrate în
laborator din punct de vedere biochimic, hematologic şi histologic.
La 7 luni de la începutul experiențelor, sacrificăm şi ultimii indivizi rămași din
fiecare lot și prelevăm probele biologice.
Pe tot parcursul experimentului am urmărit 5 parametrii serologici şi 5
parametrii hematologici, iar țesutul pancreatic l-am prelucrat histologic colorându-l
prin tehnicile Tricrom Goldner și Hematoxilin-Eozină.
Datele obţinute au fost prelucrate statistic pentru o cât mai bună acuratețe în
interpretarea lor, şi prezentate în continuare.
În cadrul Capitolului 4 „Modificările indicilor bichimici, analiza şi interpretarea
lor” am luat valorile indicilor biochimici (colesterolul, trigliceridele, calciul total,
magneziul şi glucoza) la 3,5 şi 7 luni. ale fiecărui individ în parte, din fiecare lot,
ulterior rezultând indicii statistici ale fiecărui lot în parte. Indicii statistici urmăriţi au
fost: media, eroarea standard, varianţa, deviaţia standard şi coeficientul de
variaţie.
În final, indicii statistici, i-am transpus în tabele şi grafice de evoluţii
comparative pe fiecare lot după 3, 5 şi 7 luni de experiment. Valorile obţinute sunt
semnificative, din punct de vedere al influenţei pozitive ale ambelor produse naturale
Eridiarom şi Diavit, în general, pentru toţi indicii statistici urmăriţi. Astfel, de
exemplu la glucoză, rezultatele sunt reprezentate tabelar şi grafic astfel:
Tabelul 20 – Valorile indicilor statistici ale glucozei la indivizii trataţi cu Diavit,
comparativ cu lotul sănătos şi bolnav
GLUC-KIN Media (X)
Mean (X)
Eroarea standard a mediei (Sx)
Standard error of mean value
(Sx)
Deviaţia standard (S)
Standard deviation (S)
Lot sănătos
Healthy batch 79,47857 17,22374 6,50996
Îmb. şi tratat cu Diavit 3 luni
Sickened and treated with Diavit 3
months
147,5429 5,71514 2,16012
Îmb. şi tratat cu Diavit 5 luni
Sickened and treated with Diavit 5
months
140,2571 3,88967 1,47016
Îmb. şi tratat cu Diavit 7 luni
Sickened and treated with Diavit 7
months
125,7386 7,97652 3,01484
Lot bolnav 3 luni
Sick batch 3 months 156,2857 7,97317 3,01357
Lot bolnav 5 luni
Sick batch 5 months 190 12,17922 4,60331
Lot bolnav 7 luni
Sick batch 7 months 203,8571 13,47131 5,09168
50
75
100
125
150
175
200
225 203,85713,471
190,00012,179
156,2867,973
125,7397,977
3,890
147,5435,715
79,47917,224
Glu
c-K
in
Loturi
Bolnav7 luni
Bolnav5 luni
Bolnav3 luni
Sanatos Bolnavtratat cuDiavit7 luni
Bolnavtratat cuDiavit5 luni
Bolnavtratat cuDiavit3 luni
140,257
mg‰
Limita maximă admisă
Fig. 10 – Reprezentarea grafică a dinamicii glucozei şi deviaţiei standard, la loturile
tratate cu Diavit, comparativ cu loturile luate în studiu
În tratamentul cu Diavit tendinţa de scădere a glicemiei este mai accentuată
pornind de la valoarea de 147,54 mg‰ la 3 luni, 140,25 mg‰ la 5 luni şi 125,73
mg‰ la 7 luni de la administrarea Streptozotocinei intrând în valorile normale admise
ale glicemiei.
La lotul bolnav şi netratat se observă aceeaşi tendinţă de creştere în timp a
glicemiei care după 3 luni de boală ajunge la 156,286 mg‰ ±7,973 mg‰, la 5 luni la
190,000 mg‰ ±12,179 mg‰ şi la 203,857 mg‰ ±13,471 mg‰ după 7 luni de boală.
În Capitolul 5 „Modificările indicilor hematologici, analiza şi interpretarea
acestora” am procedat identic şi în cazul parametrilor hematologici (numărul de
leucocite, anemia eritrocitară, hemoglobina, hematocritul, trombocitele) la 3, 5 şi 7
luni de recoltare pe fiecare lot în parte.
Şi în acest capitol influenţa Eridiaromului şi Diavitului asupra parametrilor
hematologici a fost în general pozitivă. Prezentăm în continuare dinamica anemiei
eritrocitare care a fost următoarea:
Tabelul 8 – Valorile indicilor statistici ale eritrocitelor la indivizii trataţi cu
Diavit, comparativ cu lotul sănătos şi bolnav
RBC
Media
(X)
Mean (X)
Eroarea standard a mediei (Sx)
Standard error of mean value (Sx)
Deviaţia standard (S)
Standard deviation (S)
Lot sănătos
Healthy batch 8,29286 0,33475 0,12652
Îmb. şi tratat cu Diavit 3 luni
Sickened and treated with Diavit
3 months
8,48143 0,52107 0,19695
Îmb. şi tratat cu Diavit 5 luni
Sickened and treated with Diavit
5 months
9,22286 0,59075 0,22328
Îmb. şi tratat cu Diavit 7 luni
Sickened and treated with Diavit
7 months
9,08714 1,30411 0,49291
Lot bolnav 3 luni
Sick batch 3 months 8,57714 0,58337 0,22049
Lot bolnav 5 luni
Sick batch 5 months 7,79143 0,64331 0,24315
Lot bolnav 7 luni
Sick batch 7 months 7,64571 0,64441 0,24356
6.5
7.0
7.5
8.0
8.5
9.0
9.5
10.0
10.5
11.0
7,6460,644
7,7910,643
8,5770,583
9,0871,304
0,591
8,4810,521
8,2930,335
RBC
Loturi
Bolnav7 luni
Bolnav5 luni
Bolnav3 luni
Sanatos Bolnavtratat cuDiavit7 luni
Bolnavtratat cuDiavit5 luni
Bolnavtratat cuDiavit3 luni
9,223
106/mm3
Limita maximă admisă
Fig. 4 – Reprezentarea grafică a dinamicii eritrocitelor şi deviaţiei standard, la loturile
tratate cu Diavit, comparativ cu loturile luate în studiu
Tendinţa anemiantă la lotul bolnav şi netratat se observă la 3 luni când ajunge
la 8,57x106/mm3, la 5 luni la 7,79x106/mm3, iar la 7 luni la 7,6457x106/mm3,
comparativ cu media lotului martor. Tot aici se observă la media lotului îmbolnăvit şi
tratat cu Diavit, o revenire a numărului de hematii de la 3 luni la valoarea de
8,4857x106/mm3 la o valoare de 9,2257x106/mm3 la 5 luni, iar la 7 luni având o
valoare de 9,0857x106/mm3.
Capitolul 6 prezintă „Modificările histopatologice ale pancreasului în diabetul
experimental”.
Rezultatele lotului tratat cu Eridiarom se prezintă astfel:
Fig. 25 – Foto cu Insula Langerhans Lot 2 tratat cu Eridiarom
5 luni Col. Hematoxilin-Eozină 200x
Aria insulelor Langerhans în raport cu lobulul pancreatic creşte semnificativ.
Se observă dezvoltarea difuză a ariei insulare şi în acelaşi timp o proliferare
semnificativă a celulelor α şi β dispuse atât pseudolobular, cât şi în cordoane separate
prin capilarele sinusoide.
Volumul celulelor este semnificativ crescut pe seama citoplasmei, iar nucleii sunt
veziculoşi cu carioplasmă ce conţine numeroşi corpusculi cromozomiali, sugerând un
proces semnificativ de multiplicare. Nucleii conţin o citoplasmă bine evidenţiată,
bogată.
Raportul nucleu-citoplasmă este pozitiv în favoarea componentei citoplasmatice.
Acinii pancreatici sunt, de asemenea, foarte voluminoşi cu polul secretor al celulelor
bine dezvoltat, demonstrând o acţiune secretorie crescută.
La lotul tratat cu Diavit observăm următoarele:
Fig. 45 – Foto cu Insula Langerhans Lot 3 tratat cu Diavit
7 luni Col. Hematoxilin-Eozină 400x
La 7 luni în urma tratamentului cu Diavit (fig. Xx)se observă un număr de insule
mai mare în aria ţesutului pancreatic, cu 2-3 localizări de proliferare pe aria unui lobul.
Caracter de stimulare şi proliferare a celulelor Langerhans, cu regenerarea sau
înmulţirea celulelor α şi β din structura insulelor Langerhans.
Insulele Langerhans prezintă un fenomen clar de hipertrofie, iar aria insulelor, în
cadrul lobulilor pancreatici, prezintă un fenomen de creştere.
Proporţional cu aria lobulară, aria insulară Langerhans apare mult mărită,
inclusiv numeric, astfel că în loc de o insulă se regăsesc 2-3 insule pe aria lobulară.
Concluzia finală este fenomenul dominant pentru insulele Langerhans în
urma tratamentului cu Diavit: hiperplazie, hipertrofie, proliferare celulară (cel. β şi
α) şi proliferare vasculară.
Fig. nr. 54 – Insula Langerhans Lot 4 Diabet
7 luni Col. Tricromic Goldner 400x În aproape toate secțiunile lotului bolnav se constată hipoplazie regresivă a
celulelor din insulele Langerhans în ansamblu. Pe fondul de hipoplazie generalizată a celulelor Langerhans se observă o reducere substanţială a capilarelor sinusoide din aria insulară. Citoplasma este redusă cu un deficit de capacitate secretorie.
În capirolul 7 de Discuţii, am prezentat aspecte legate de structura insulinei şi a
aminoacizilor care o compun; sulful şi zincul ca elemente esenţiale în formarea
insulinei şi prevenirea diabetului; legăturile biochimice între aceşti aminoacozi şi rolul
lor în metabolismul general.
În capitolul 8 „Concluzii finale ale rezultatelor, biochimice, hematologice şi
histopatologice” concentrez toate ideile şi rezultatele acestei teze de doctorat:
Rezultatele parametrilor biochimici
Asupra parametrilor metabolismului lipidic efectele suplimentelor nutritive
naturale Eridiarom şi Diavit sunt superioare, apropiind după 3 luni de tratament,
valoarea colesterolemiei şi trigliceridelor de cele normale.
Hipocalcemia se instalează de timpuriu la animalele din lotul netratat ajungând
la limita de 5,46 mg/dl, observându-se efectul de reglare a metabolismului calciului la
animalele ce sunt tratate cu Eridiarom şi Diavit, cu menţinereea în limitele normal
admise 9-9,5 mg/dl. Astfel că în urma tratamentului cu Eridiarom şi Diavit calciul total
se menţine peste limita minimă admisă în toată perioada experimentală cu excepţia
lotului tratat cu Diavit la cinci luni, ceea ce ne arată rolul de stabilizator al calcemiei în
urma folosirii ambelor produse.
Magneziul are un rol important în sistemul cardio-circulator al organismului,
lipsa lui putând produce de la ,,banalele” aritmii, până la infarct şi ateroscleroză. Din
studiile noastre rezultă o menţinere a limitelor normale (3-4,5 mg/dl) la loturile tratate
cu Eridiarom şi Diavit, şi o gravă tulburare a valorilor magneziului seric la animalele
netratate şi îmbolnăvite, ajungând şi la 2,28 mg/dl în luna a 5-a. Ambele produse au un
rol important în dinamica magneziemiei care este ascendentă ajungând peste limita
minimă admisă, cu excepţia lotului tratat cu Diavit la trei luni. Rolul în reglarea
magneziului a celor două produse este evidentă pe toată perioada administrării lor.
Se poate observa din rezultatele obţinute de noi că Eridiaromul şi Diavitul au o
acţiune hipoglicemiantă superioară, şi în comparaţie cu lotul bolnav, evoluţia
indivizilor din loturile tratate decurge spre revenirea constantelor biochimice şi
hematologice normale.
Rezultatele parametrilor hematologici
La loturile tratate cu Eridiarom şi Diavit dinamica leucocitelor este ascendentă
de la 3 la 7 luni, ajungând la 7 luni la valoarea lotului martor sănătos. La lotul bolnav
netratat aceste valori sunt mari, peste nivelul lotului sănătos.
Eritocitele sunt cunoscute la lotul tratat cu Eridiarom şi Diavit că se menţin în
apropierea valorilor lotului sănătos. La lotul tratat cu Diavit la 7 luni depăşeşte limita
maximă admisă. La lotul bolnav şi netratat valoarea hemoglobinei este la limita
minimă admisă sau chiar sub valoarea mediei ei, pe când la loturile tratate cu Diavit la
7 luni depăşeşte limita maximă admisă.
Hematocritul la lotul tratat cu Eridiarom pe toată perioada experimentală este
peste limita minimă admisă, la fel observându-se şi la lotul exprimat cu Diavit. La
lotul bolnav netratat hematocritul este sub limita minimă admisă, ajungând la 7 luni
puţin peste valoarea acestei limite.
Trombocitele, dacă la lotul sănătos valoarea acestora este de
855,707x103/mm3, ajunge la lotul bolnav netratat la valori mari chiar duble faţă de
lotul martor sănătos. La loturile tratate cu Eridiarom şi Diavit aceste valori sunt
ascendente de la 3 luni la 7 luni depăşind puţin valoric media lotului sănătos.
Tratamentul cu Eridiarom şi Diavit efectuat pe şobolani cu diabet experimental,
indus de Streptozotocină, accelerează procesul de revenire la valori normale a
parametrilor studiaţi (colesterol, trigliceride, calciu, glucoză, leucocite, eritrocite,
hemoglobină, hematocrit şi trombocite) şi de înlăturare a disfuncţiilor metabolice
produse.
Tratamentul cu Eridiarom şi Diavit restabilesc valorile principalilor indici
biochimici şi hematologici începând cu primele luni de tratament, astfel că după 7 luni
să-i aducă la nivelul animalelor sănătoase neîmbolnăvite.
Rezultatele examenului histopatologic
Lotul netratat diabetic evidenţiază o hipoplazie regresivă în ansamblu de la 3
luni la 7 luni. Capilarele sinusoide se reduc din aria insulară iar citoplasma are un
deficit secretoriu. Celulele α şi β nu se mai diferenţiază, iar nucleii devin corpusculari,
compacţi iar aria citoplasmatică este considerabil redusă.
În urma tratamentului cu Eridiarom insulele Langerhans prezintă un
fenomen de hipertrofie, cu mărirea numărului lor pe aria lobulară pancreatică.
Hipertrofia funcţională celulară este însoţită uneori de balonizare nucleară.
La lotul tratat cu Diavit celulele Langherhans sunt mărite în volum cu o
citoplasmă bogată şi fenomen de secreţie dezvoltat. Prezenţa corpusculilor
cromozomiali la nivelul citoplasmei sugerează un proces crescut de multiplicare
celulară. Apare o dezvoltare de tip „conopidoform” al celulelor Langerhans, cu
proliferarea celulelor α şi β. Apare o proliferare vasculară vizibilă. Fenomenul
dominant al insulelor Langerhans la lotul tratat cu Diavit după 7 luni este de:
hipertrofie, hiperplazie, proliferare celulară (α și β ) şi proliferare vasculară.
Afinul este cunoscut de mult timp ca ,,insulina vegetală” (frunzele) aceleaşi
proprietăţi le au şi fructele proaspete prelucrate după procedee originale şi care se
găsesc în Eridiarom şi Diavit.
În condiţii de hrană şi îngrijire corespunzătoare, dupa 2 săptămâni de la
inducerea diabetului, animalele care au supravieţuit dau semn de revenire la
normalitate, ca urmare a refacerii ţesutului pancreatic şi a secreţiei de insulină.
Metabolismul glicemiei este controlat de mai multe grupe de hormoni (hormonii
pancreatici, hormonul de creştere, hormonii tiroidieni şi corticosuprarenali) astfel că
organismul are mai multe posibilităţi de reglare metabolică.
Sper cu toată convingerea, că datele aduse de către această lucrare de doctorat
să aducă speranţa în această boală, care la momentul de faţă se rezumă la un pronostic
rezervat şi se măsoară în speranţa de viaţă. Sper cu convingere că această boală poate
fi privită cu optimism şi încredere, că angiopatia generalizată din diabet se poate
rezolva şi organele afectate de această boală să fie repuse în slujba funcţionalităţii
generale a organismului ca un tot unitar.