PRACTICA N 7RECONOCIMIENTO DE MICROORGANISMOS

NATALIA GARCA GONZLEZCRISTIAN ANDRES GONZLEZ TAPIERO

UNIVERSIDAD DEL QUINDO

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICAE. A. BIOLOGA

RESUMENPALABRAS CLAVES

INTRODUCCION

Un microorganismo, tambin llamado microbio u organismo microscpico, es un ser vivo que slo puede visualizarse con el microscopio. Son organismos dotados de individualidad que presentan, a diferencia de las plantas y los animales, una organizacin biolgica elemental. En su mayora son unicelulares, aunque en algunos casos se trate de organismos centicos compuestos por clulas multinucleadas, o incluso multicelulares. Dentro de los microorganismos se encuentran organismos unicelulares procariotas, como las bacterias que tienen un tamao medio de 10 m; y eucariotas, como los protozoos, una parte de las algas y los hongos, que tienen un tamao medio mayor de 250 m.[footnoteRef:2] [2: INGRAHAM. J. L., INGRAHAM. C. A. Introduccin a la Microbiologa. Reverte S.A., 1998. [Consulta: 03 de mayo 2014] ]

Los microorganismos tienen la capacidad de adaptarse fcilmente a cualquier medio debido a que son muy bsicos y tienen metabolismos muy rpidos y pueden obtener fuentes de alimentacin constantes, ya que pueden alimentarse de sustancias por lo general orgnicas como restos vivos o muertos, plantas o animales. Por ejemplo para las bacterias, las superficies suaves y hmedas son idneas para su supervivencia pudiendo vivir desde horas hasta incluso meses; los hongos encuentran un hbitat propicio en zonas hmedas o sobre vegetales en descomposicin; los protozoos, la mayora crece en colonias, dependiendo el uno del otro para sobrevivir. Son asexuales y se reproducen rpidamente a travs de la fragmentacin o mitosis, se encuentran las algas que como las plantas adquieren los nutrientes a travs de la fotosntesis.[footnoteRef:3] [3: KIMBALL. J. W. "The Protists"; 2011. [Consulta: 03 de mayo 2014] ]

Debido a todo esto los microorganismos fcilmente representan riesgos para la salud de organismos multicelulares como lo son los mamferos, siendo protagonistas de infecciones bacterianas, alergias por las esporas de los hongos, incluso muertes. Es necesario entonces reconocer e identificar estos microorganismos, para saber de qu clase son y cmo tratarlos e incluso como saber aprovechar su actividad; por ello surgen tcnicas, como: 1. la Tincin de Gram, que es una tcnica diferencial empleada en bacteriologa para la visualizacin entre estructuras de las bacteria Gram+ (pared ms gruesa, y una sola capa de peptidoglucano) y de las bacterias Gram- (pared ms delgada y dividida en dos partes), las bacterias Gram- estarn teidas de un color rosceo, y las Gram+ de un color violeta. Y 2. La Tincin de Esporas Wirtz-Conklin, las endosporas se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos txicos, etc.) formndose una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporognesis, la clula vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma vegetativa. Las endosporas, tras la primera tincin, no perdern el colorante en el lavado con agua, y s lo harn las formas vegetativas, que quedarn teidas con el segundo colorante.[footnoteRef:4] [4: VALENCIA, J. C. Bacterias-Protozoos, Hongos, Gua de laboratorio N 6. 2014. [Consulta: 03 de mayo 2014]]

PARTE EXPERIMENTAL

Materiales y Reactivos

Vaso lavador Asa de siembra Microorganismos en medio slido Parrilla Portaobjetos Cubreobjetos Violeta Genciana Safranina Alcohol Acetona Lugol Fuscina Alcohol cido Azul de Metileno Verde malaquita (5%) Safranina (0,5%) Goteros Microscopio Mecheros Pinzas de madera Aceite de inmersin. Muestras de aguas estancadasProcedimiento1. BacteriasSe tomo una muestra de la colonia dentro del campo estril y se ubico en el portaobjetos, luego se tio con azul de metileno, se dejo en reposo durante un minuto y se lavo con agua, para despus teir con Lugol durante un minuto y lavar con alcohol-acetona. A continuacin se tio por ltima vez con safranina por un minuto, se lavo nuevamente con agua y se observo al microscopio.2. HongosSe esparci una muestra de hongos a partir de una fresa en descomposicin, se tio con verde de malaquita y se flameo durante 5 minutos sin dejar secar el colorante, despus se lavo con agua destilada, y luego se tio con safranina durante 1 minuto, se lavo nuevamente con agua destilada y se observo al microscopio.3. ProtozoosSe tomo una muestra de agua en descomposicin, se tio con Lugol y se observo al microscopio.

RESULTADOS Y ANALISIS1. Bacterias. En la tincin de gram, el azul de metileno que se agrego tio las bacterias Gram+ y Gram-, y luego de adicionar el Lugol (compuesto formado por I2yodo) se formo el complejo I2/azul de metileno que fue insoluble en agua, pero soluble en la solucin alcohol-acetona con que se lavo despus y cuya funcin crucial fue realizar la decoloracin, donde las bacterias Gram- se decoloraron y las Gram+ no, es decir, estas ltimas se veran de color azul violeta. Las bacterias Gram- que se decoloraron debieron quedar de un color rosceo pero como se agrego safranina como colorante de contraste activo nicamente para estas, se vieron de un color rojo (Fig. 1) mientras que las Gram+ debieron permanecer violetas (Fig. 2).[footnoteRef:5] Sin embargo no fue posible observarlas. [5: Tincin De Gram, [En lnea]. http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram [Consulta: 03 de mayo 2014]]

Solo se pudo observar las bacterias Gram- que por las caractersticas de su constitucin permitieron una excelente fijacin de la safranina; estas bacterias poseen una pared celular ms delgada y dividida en dos partes con una sola capa de pptidoglucanos sobre la que se dispone una membrana externa constituida por una capa de fosfolpidos y otra de glicolpidos asociados, estos ltimos, a polisacridos que se proyectan hacia el exterior[footnoteRef:6]. [6: VALENCIA, J. C. Bacterias-Protozoos, Hongos, Gua de laboratorio N 6. 2014. [Consulta: 03 de mayo 2014]]

No fue posible observar las bacterias Gram+, las cuales poseen una envoltura celular compuesta por una membrana citoplasmtica y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglucano que confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tincin de Gram. sin embargo el tinte no se retuvo impidiendo la observacin de este tipo de bacterias, lo cual pudo ocurrir por diferentes causas, bien se que el cultivo de muestra estuviera contaminado de alguna manera, que la colora concentracin de los reactivos de tincin no fuera adecuada, que los tiempos de tincin no fueran correctos, o que la muestra se hubiera trabajado inicialmente fuera del campo estril.

Fig 1. Bacterias Gram- vistas en objetivo 10x.

Fig 2. Bacterias Gram+ y Gram- [En lnea]. http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/labv/LabMicro/Diag_directo.html [Consulta: 03 de mayo 2014]

2. Hongos.

En la prctica se observaron los hongos producidos por la fresa en descomposicin por medio de la tincin de esporas de Wirtz-Conklin, en la cual se produjeron endosporas, las cuales se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables, formndose una espora por cada forma vegetativa. Finalizado el proceso de esporognesis, la clula vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma vegetativa.

Laenvuelta de laendosporases ms compleja e impermeable que la envuelta de las clulas vegetativas en las que se forma. Slo se puede teir el contenido de la espora alterando suenvuelta. La impermeabilidad de las cubiertas dificulto que las endosporas se decoloraran una vez teidas. El verde de malaquitaes un colorante dbilmente bsico y por tanto, se une dbilmente a la bacteria. Penetrndose en la clula vegetativa. Adems cuando se calent la preparacin tambin hubo penetracin en las endosporas. Durante el lavado con agua, el verde de malaquita se elimino de las clulas vegetativas, pero no de la endosporas. La safranina, que es el colorante de contraste solo pudo teir a las clulas vegetativas. Ambas; las endosporas, teidas de color verde, y las clulas vegetativas, teidas de un rosceo, se indican en la Fig. 3 y 4. En esta se puede observar la bacteria llamada Bacillus subtilis, la cual es una bacteria Gram+, que posee endosporas capaces de sobrevivir en tiempos de tensin ambiental.[footnoteRef:7] [7: Tincin de esporas. [En lnea]. http://www.pomif.com/pages/practicas/bacteriologia/tinciones/endosporas. [Consulta: 03 de mayo 2014]]

Fig. 3. Bacteria Bacillus subtilis observada en objetivo 10x.

Fig. 4. Bacteria Bacillus subtilis observada en objetivo 40x.

3. Protozoos

La cantidad de microorganismos vistos en el agua fue mnima puesto que la muestra no estaba tan contaminada como para obtener varios microorganismos, sin embargo se pudo identificar un spirostomum (Fig. 5) que es un protozoo ciliado bastante comn en aguas poco oxigenadas y cargadas de materia orgnica. y un alga (Fig. 6), gracias al Lugol, el cual ayuda a detener el movimiento de los protozoos pues mata las formas mviles.

Fig. 5. Spirosfomum observados con objetivo 10x.

Fig. 6. Algas observadas con objetivo 10x.

CONCLUSIONES

En la tincin de esporas se observo la bacteria Bacillus subtilis gracias a los colorantes utilizados, que ayudaron a debilitar los compuestos de los hongos.

CUESTIONARIO

1. Que otros grupos de animales diferentes a protozoos podramos encontrar en una muestra de agua estancada?

En el agua estancada por lo general se pueden encontrar microorganismos del tipo bacterias y protistas. Estos ltimos se clasifican por una parte en el grupo de las algas como clorofceas, rodofceas, feofceas, y crisofceas; y por otra parte se clasifican en protozoarios como los sarcodinos, ciliados, sporozoarios y mastigoforos.[footnoteRef:8] [8: Reino protista. [En lnea]. http://cmapspublic2.ihmc.us/rid=1349629945521_914198533_46482/REINO%20PROTISTA.cmap [Consulta: 03 de mayo 2014]]

2. Porque son importantes los foraminferos?Los Foraminiferossuelen considerarse como la ms importante de los grupos de microfsiles marinos debido a que son organismos muy abundantes en los sedimentos marinos y presentan una gran diversidad de especies, y su gran utilidad en los estudios de tipo bioestratigrfico,paleoecolgico, paleoceanogrficoetc.[footnoteRef:9] [9: Molina, E. (2002, 2004).Micropaleontologa. Prensas Universitarias de Zaragoza, Coleccin Textos Docentes, 93. 634 pp.ISBN 84-7733-619-9 [Consulta: 03 de mayo 2014]]

3. Que enfermedades producen en el hombre los hemoparasitos vistos en el laboratorio? Cuales en nuestro pas?

Los hemoparasitos pueden causar patologas como miocarditis, vsceromegalias, insuficiencia cardiaca congestiva, hipertrofia ventricular izquierda con aneurisma apical, bloqueo auriculoventricular, sndrome de Stokes-Adams, alteraciones electrocardiogrficas, bloqueo de rama derecha, arritmias; enfermedad de Chagas, sndrome de Romaa. La enfermedad de Chagas es una de las causadas por hemoparasitos en Colombia la causa el tripanosoma cruzi, que adems es predominante en zonas tropicales.[footnoteRef:10] [10: Dra. Diez Albares T. Hemoparcitos, [En lnea]. http://www.slideshare.net/tatiana_10/hemoparsitos [Consulta: 03 de mayo 2014]]

4. En que otros grupos de protozoos encontramos parsitos en el hombre? Tenia o Solitaria Duela del Hgado Anisakis Ascaris Trhichinella Spiralis Garrapatas Piojos Ladillas Pulgas Plasmodium Trypanosoma

5. Algunos protozoos de vida libre, como el paramecio, poseen vacuolas contrctiles. Cul es la funcin de ellas? Qu les sucedera a estos microorganismos si las vacuolas contrctiles dejaran de funcionar?Las Vacuolas CONTRCTILES o Pulstiles cumplen la funcin de acumular agua en los seres unicelulares como los protozoos que acumulan el agua excesiva en una o varias Vacuolas Pulstiles, las que se encargan de expulsarla conservando constante la concentracin del medio intracelular.En las vacuolas pulstiles o contrctiles se observan pequeos conductos. Los conductos formados en el interior del protoplasma, extraen lquidos, y el que se abre en la superficie de la ameba, los expulsa cuando la vacuola se contrae. La ameba incorpora alimentos por el proceso de fagocitosis, es decir incorpora a travs de sus pseudpodos, partculas slidas que encuentra al desplazarse.

Los pseudpodos de la ameba engloban a las partculas hasta que quedan dentro de la masa protoplasmtica, rodeados por una gota de agua, lo que da origen a una vacuola alimenticia. Esta vacuola se desplaza dentro de la ameba impulsada por los movimientos internos del protoplasma.

Mientras la vacuola se traslada, el alimento que contiene es digerido mediante los jugos segregados por el protoplasma, una vez que ha sido asimilada la parte nutritiva, queda dentro de la vacuola lo que no se digiere, o sea, el excremento. la vacuola toma entonces el nombre de vacuola excretora, que se acerca a la periferia y cuando expulsa su contenido al exterior recibe el nombre de vacuola contrctil.6. Por qu las algas son importantes? Cite tres razones para ello.Las algas son hogares naturales para muchas especies marinas en sus primeros estadiosson fuente de alimento primario para los queloniosevitan la erosin de los ocanosson fuente de alimento para el ser humanose utilizan como frmacos en el tratamiento del cnceretc.

7. Qu diferencias encuentran entre las algas y los protozoarios que estn observando? (Apyese en revisin bibliogrfica)Algas

Protozoos

Microorganismos procariotas que contienen clorofila que llevan a cabo la fotosntesis oxignicaMicroorganismos eucariotas que carecen de pared celular

AuttrofasHetertrofos

Tienen al menos un cloroplasto

Se clasifican de acuerdo a su tipo de movilidad

Se parecen a las plantasSe parecen a los animales

Unicelulares

Carecen de clorofila

[footnoteRef:11] [11: LEGGETT, R. Diferencias entre protozoos y algas. [En lnea]. http://www.ehowenespanol.com/diferencias-protozoos-algas-info_176868/ [Consulta: 03 de mayo 2014] ]