recherche et dénombrement d’escherichia coli par la méthode du nombre le plus probable (npp)
TRANSCRIPT
Présenté par : FADI Ayman
Recherche et dénombrement d’Escherichia coli Méthode du Nombre le Plus Probable (NPP)
PLAN
INTRODUCTION
GENERALITES
PRINCIPE DU NPP
REFERENCES NORMATIVES
DOMAINE D’APPLICATION
MODE OPERATOIRE
EXPRESSION DES RESULTATS
CONCLUSION
INTRODUCTION
La présence des microorganismes dans l’eau peut constituer un danger pour le consommateur, il est donc nécessaire de mettre en place des voies et moyens pour détecter les microorganismes présents dans l’eau. Les méthodes de détection sont utilisées soit pour dénombrer, soit pour déceler la présence d’un microorganisme spécifique (E. coli par ex).
INTRODUCTION
Le dénombrement de ces microorganismes se fait soit par la méthode de filtration sur membrane soit par la méthode du nombre le plus probable. Cette dernière se base sur une estimation statistique du nombre des microorganismes supposés distribués dans l’eau d’une manière aléatoire.
GENERALITES
Définitions:Npp : Indice basé sur les lois statistiques qui représente le nombre évalué de micro organismes présents dans 100 ml d'eau (par exemple coliformes)E. coli: c’est une bactérie coliforme, lactose +, oxydase -, en plus, elle produit du gaz à partir du mannitol ainsi que de l’indole à partir du tryptophane.Milieu de culture : C’est une préparation au sein de laquelle des micro-organismes peuvent se multiplier. Il doit donc satisfaire les exigences nutritives du micro-organisme étudié.
PRINCIPE DU NPP
Les prises d’essais de l’échantillon d’eau sont ensemencées dans un milieu de
culture liquide conçu pour permettre la croissance d’un microorganisme ou de
groupe de microorganismes.
La croissance se traduit par l’apparition d’un trouble du milieu et une
production du gaz, éventuellement, une modification visible.
REFERENCES NORMATIVES
Référence normative : NM ISO-9308-2
But : La recherche et le dénombrement des Escherichia Coli et des bactéries
coliformes présentes dans tous les types d’eau. Cette méthode consiste a
calculer le nombre le plus probable des microorganismes par culture dans un
milieu liquide dans une série de tubes.
DOMAINE D’APPLICATION
Cette méthode peut être appliquée à tous les types d’eau, même ceux contenant une quantité appréciable de particules en suspension
MODE OPERATOIRE
Matériel:• Incubateur• Tubes à essais• Pipettes• Autoclave• Vortex• Cloches de Durham
MODE OPERATOIRE
Milieux de culture Bouillon au lauryl-sulfate .
Bouillon EC
L’indole
MODE OPERATOIRE
Réactifs Réactif de KOVACS
Le réactif de KOVACS est destiné à la mise en évidence de la production d’indole à partir du Tryptophane par les bactéries qui possèdent une tryptophanase.
MODE OPERATOIRERéalisation des essais
Réalisation des essais TEST CONFIRMATIF
MODE OPERATOIREColiformes fécaux
EC medium
Dénombrement des tubes positifs trouble + gaz
Indole
44°C+ 0.5 °C/24H
Lecture sur la table de Mac graddyNombre le plus probable (NPP) /100 mL
44°C+ 0.5 °C/24H
Addition de réactif Kovacs
Coloration rose Choix des triplets
EXPRESSION DES RÉSULTATS Exemple :Echantillon sur milieux simple concentration(1ml)………….:3 tubes (+)Dilution au 1/10………………………………………………………………:3 tubes (+)Dilution au 1/100………………………………………………………….…:2 tubes (+)Dilution au 1/1000…………………………………………………………..:1 tube (+)Dilution au 1/10 000………………………………………………..………:0 tube (+)
EXPRESSION DES RÉSULTATS Lire la valeur du NPP dans la table de Mac Grady et en déduire la concentration des bactéries dans l’échantillon :
•choix de la dilution : 10-1
•Détermination du NPP : regroupement choisi = 321 dans la table de Mac Grady le NPP correspondant à 321 est 15.•Calcul :
FdV
NPPNensemencé
mLcoliformesN /10.5,1150101
15 21
CONCLUSION Le mauvais côté de cette méthode est
le temps assez long pour la réalisation des tests aussi que les différents milieux de cultures qui nécessite.
La méthode NPP est l’un des méthodes les plus précises en terme de résultats pour le dénombrement des bactéries.