reacciones quimicas de identificacion de azucares
TRANSCRIPT
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
1/22
Ao de la
Diversificacin
Productiva y Fortalecimiento de la Educacin
REACCIONES QUMICAS DE IDENTIFICACIN DE AZUCARES
Docente:
Curso: Qumica Orgnica III
Ciclo: V
Aula: 1A
Turno: Maana
2015
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
2/22
RESUMEN
Los azcares
constan de un esqueleto carbonado que porta un grupo carbonilo (aldehdo o
cetona) y varios grupos hidroxilo. En esta prctica se entregan cuatro
disoluciones problema de azcares al 5%. Pueden ser cualquiera de los
siguientes: glucosa, galactosa, sacarosa, lactosa o fructosa. La prctica consiste
en identificar de qu azcares se trata. Para ello se utilizan diversas pruebas
DEDICATORIA
AGRADEZCO A DIOS POR HABERME GUIADO,
Y A LA VEZ DEDICO ESTE TRABAJO A MIQUERIDA MADRE, MI TIO Y MIS MAESTROS
POR SUS ENSEANZAS.
KERLY ZACARIAS CHAVEZ
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
3/22
que reconocen determinadas propiedades de los azcares. El que una prueba
sea positiva o negativa nos informar acerca de las propiedades del azcar. Los
disacridos tambin pueden reaccionar pero de forma ms lenta, el grupo
aldehdo perteneciente al monosacridos que se encuentra en forma hemiacetal
se oxida pasando a cido carboxlico; varias sustancias como por ejemplo el
cloruro de sodio que puede interferir en la prueba o a su vez en el tamao
molecular aunque se pueden ver implicados en ciertos factores tales como una
interaccin compleja con los anillos monosacridos.
REACCIONES QUMICAS DE IDENTIFICACIN DEAZUCARES
1.1. MARCO TERICO
El nombre carbohidrato o hidrato de carbono, deriva del hecho que el hidrogeno y el oxgeno
estn en la misma proporcin que en el agua (Hidrato); es decir; hay 2 hidrgenos por casa
oxgeno. El termino carbohidratos; azucares; glcidos o hidratos de carbono se identifica y
designa un grupo de sustancias naturales que cumplen funciones vitales como componentes
de los organismos vivos.
1.2. OBJETIVOS
Descripcin de Monosacridos, disacridos y polisacridos.
Identifcacin de a!cares "ediante di#erentes reacciones $%&"icas.
El o'(eti)o de esta practica es deter"inar si en las "%estras analiadas *aya%cares y, en caso afr"ati)o, $%e tipo de a!car es+ se analiaran "%estrasdi#erentes.
1.3. MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales
Tubos de ensayo
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
4/22
Gradilla
Beaker
gotero de plstico
lentes de proteccin
matraz Erlenmeyer
pipetas
propipeta
Reactivos
Glucosa al 1% cido sulfrico al 2%
Sacarosa al 1% Reactivo de Benedict
Lactosa al 1% Hidrxido de sodio
Almidn al 1% Reactivo de Barfoed
Manitol al 1% Nitrato cobaltoso
Fehling A
Fehling B
1.4. PROCEDIMIENTO
A.-Reaccin general para carbohidratos (Reaccin de Molish)
A cinco tubos de ensayo agregamos 2ml de la solucin estndar (glucosa, sacarosa,
lactosa, almidn, manitol)
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
5/22
Luego adicionara las muestras 10 gotas ( 2mL) de alfa_ naftol.
Agregar 1ml ( 2 gotas) de
cido sulfrico
concentrado (con cuidado por las paredes). No agitar.
Observar los resultados obtenidos con cada solucin y con la muestra.
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
6/22
La reaccin toma un color violeta rojizo, demostrando que es POSITIVOpara
MONOSACARIDOS,adems la reaccin esEXOTERMICApues libera calor despus de
reaccionar.
Al haberse depositado en el fondo del recipiente el cido sulfrico este acta sobre la glucosa
arrancndole una molcula de agua y volviendo la molcula de glucosa un derivado delfurfural, en este caso el hidroximetil en furofural.
Luego de esa reaccin se mezcla con el alfa-naftol en presencia de cido sulfrico atacando
la zona del doble enlace del grupo carbonilo unindose en un compuesto mixto pues
presenta sustituyentes cidos y fenlicos que toma una coloracin rojiza violeta en un anillo
del tubo de ensayo.
B.-Reaccin de identificacin de azucares
reductores (reaccin de benedict)
A 2mL de la solucin estndar(glucosa,
sacarosa, lactosa, almidn, manitol)
De las muestras aadirle 15
gotas del Reactiv de Benedict.
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
7/22
Homogenizar e
inmediatamente poner a bao mara
hasta que cambie de color
Observar los resultados.
Reaccin de Benedict. Esta reaccin es especfica para azucares con grupo reductores libres
(C=O). Todos los monosacridos poseen un grupo reductor libres. Los disacridos maltosa y
lactosa tiene grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee. Ya que se pierden los
grupos reductores de sus componentes cuando esta es formada. Se basa en la capacidad del
carbohidrato de reducir el Cu+2 en un medio alcalino. Este Cu+1 se oxida y precipita en
forma de Cu2O, lo que proporciona la coloracin positiva de la reaccin. La coloracin
depender de la concentracin de xido de cobre y esta a su vez de la reduccin del cobre, va
desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo, dependiendo de la coloracin.
C.- Reaccin de identificacin de aldosas (Reaccin de Pelouze)
A 2ml de la solucin estndar (glucosa, sacarosa, lactosa, almidn, manitol) o de las
muestras aadirle 2ml de hidrxido de sodio 10%.
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
8/22
Calentar en bao mara
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
9/22
Observar coloracin amarilla.
D.- Reaccin de identificacin de monosacridos (Reaccin de Barfoed)
Colocar en un tubo 2ml de solucin de monosacridos (glucosa) y en otro tubo 2ml de
solucin de disacrido (lactosa o sacarosa).
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
10/22
Agregarles 1ml de Reactivo de Barfoed.
Calentar ambos tubos
simultneamente a bao
mara.
El monosacrido debe presentar un precipitado rojo ladrillo antes que el disacrido.
Esta prueba permite diferenciar la diferencia entre un monosacrido y un disacrido se echa
la muestra del problema en el tubo de ensayo luego se adicionan el reactivo de Barfoed y se
coloca a bao mara durante dos minutos observamos.
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
11/22
Cabe resaltar que el Reactivo de Barfoed se prepara disolviendo 13.3 gramos de acetato de
cobre neutro cristalizado en 200 ml de agua destilada si es necesario se filtra y luego se
agrega 5 ml de agua destilada si es necesario luego se agrega 5 mililitros de cido actico.
Como vemos la reaccin procede siempre y cuando se adicione calor proviene del bao mara
en este caso se forma el gluconato de cobre o gluconato cprico que es una sal orgnica,
depositndose en el fondo del recipiente el xido cuproso de color rojizo y la solucin
sobrante es el agua.
E.- Reaccin de identificacin de sacarosa (Reaccin de Herail)
A 2 ml de la solucin estndar o de las muestras(glucosa, sacarosa, lactosa, almidn,
manitol)
Aadirle 2 ml de nitrato cobaltoso y 5 gotas de hidrxido de sodio 50%.
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
12/22
Agregarle 5 gotas de hidrxido
de sodio 50%.
La aparicin de coloracin azul-
violcea es positiva parasacarosa.
En un primer momento al haber echado el reactivo de Fehling y Fehling b al tubo de ensayo
estos mostraban una coloracin azulina para luego de echar el monosacrido y colocar a
bao mara toman un coloracin rojiza en el fondo del recipiente demostrando que la sal
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
13/22
cprica se redujo a una sal cuprosa en este caso el xido cuproso, volvindose a regenerar el
tartrato de sodio, formndose el gluconato de sodio y el hidrxido de sodio.
F.- PRUEBA DE SELIVANOFF (Diferencia Aldosa de Cetosa)
Esta prueba sirve para diferenciar una aldosa de una cetosa
La operacin consiste en echar al tubo de ensayo la muestra del problema(glucosa,
sacarosa, lactosa, almidn, manitol)
Luego el reactivo de selivanoff se coloca a bao mara durante un tiempo de 5 minutos
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
14/22
Cabe resaltar que el reactivo de Selivanoff es resorcina diluida en cido clorhdrico. Despus
del tiempo observamos que la muestra cambio a coloracin en dos fases rojiza en el fondo del
tubo de ensayo y de un color rosadito en la parte superior.
En una primera etapa de reaccin la glucosa reacciona con el cido clorhdrico depositado
primero en las paredes del recipiente este arranca una molcula de agua al monosacrido ylo vuelve un derivado del furfural en este caso el hidroximetilenfurfural la velocidad de
formacin es ms lenta que si hubiera reaccionado con las cetosas.
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
15/22
Ahora al adicionarse el resorcinol ataca el grupo carbonilo del radical formilo y forma un
compuesto de coloracin rojiza con poca presencia de precipitado del mismo color, y
formacin de agua que parece ser una constante en la copulacin de este compuesto.
Los carbohidratos se clasifican como cetosas o aldosas. Vale decir, que las cetosas en el
carbono 2 tienen una funcin cetona, que en presencia de un cido fuerte producen
rpidamente derivados furfuricos que reaccionan con un difenol llamado resorcina que est
contenido en el reactivo de Seliwanoff. La sacarosa (un disacrido formando por glucosa y
fructosa) y la inulina (un polisacrido de la fructosa) dan positiva la reaccin, ya que el HCL
del reactivo provoca en caliente la hidrolisis del compuesto liberando fructosa (responsable
de la reaccin positiva)
RESULTADOS:
Obser!r "#s res$"%!s #b%e'(s )#' )!&! s#"$)(*' + )#' "! $es%r!.
Es%! re!))(*' s(re -!r! e" re)#'#)((e'%# &e %# %(-# &e !/)!res. L#s !/)!res, e' e&(# 0)($er%e se &es2(&r!%!' 1#r!' 1$r1$r!"es. Es%#s 1$r1$r!"es !" re!))(#'!r )#' e" 34'!1%#" #r(5('!')#-"e6#s &e ('%e's# )#"#r.
B.-Reaccin de identificacin de azucares reductores (reaccin de Benedict)
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
16/22
Es%! -r$eb! s(re -!r! e" re)#'#)((e'%# &e !/)!res re&$)%#res.
Re!))(*' &e Be'e&()%. Es%! re!))(*' es es-e)71()! -!r! !$)!res )#' 5r$-# re&$)%#res "(bres 8C9O:.
T#s "#s #'#s!)0r(s -#see' $' 5r$-# re&$)%#r "(bres.
L#s &(s!)0r(s !"%#s! + "!)%#s! %(e'e 5r$-#s re&$)%#res "(bres, -er# "! s!)!r#s! '# "#s -#see. Y!;$e se -(er&e' "#s 5r$-#s re&$)%#res &e s$s )#-#'e'%es )$!' es%! es 1#r!&!.
Se b!s! e' "! )!-!)(&!& &e" )!rb#2(&r!%# &e re&$)(r e" C$. 5r!#s &e !)e%!%# &e )#bre'e$%r# )r(s%!"(! e' = " &e !5$! &es%("!&! s( es 'e)es!r(# se 1("%r! + "$e5# se !5re5! " &e!5$! &es%("!&! s( es 'e)es!r(# "$e5# se !5re5! ("("(%r#s &e 0)( !)%()#.
C## e#s "! re!))(*' -r#)e&e s(e-re + )$!' se !&()(#'e )!"#r -r#(e'e &e" b!@# !r7! e' es%e)!s# se 1#r! e" 5"$)#'!%# &e )#bre # 5"$)#'!%# )/-r()# ;$e es $'! s!" #r50'()!, &e-#s(%0'se e' e"1#' &e" re)(-(e'%e e" *?( )$-r#s# &e )#"#r r#6(# + "! s#"$)(*' s#br!'%e es e" !5$!.
S( "! -r$eb! es -#s(%(! !-!re)e $' )#"#r !$" #s)$r# $+ ('%e's#.
E.- Reaccin de identificacin de sacarosa (Reaccin de Herail)
E' $' -r(er #e'%# !" 2!ber e)2! e" re!)%(# &e e2"('5 + e2"('5 b !" %$b# &e e's!+# es%#s#s%r!b!' $'! )#"#r!)(*' !$"('! -!r! "$e5# &e e)2!r e" #'#s!)0r( + )#"#)!r ! b!@# !r7! %#!'$' )#"#r!)(*' r#6(! e' e" 1#' &e" re)(-(e'%e &e#s%r!' ;$e "! s!" )/-r()! se re&$6# ! $'! s!")$-r#s! e' es%e )!s# e" *?( )$-r#s#, #"('se ! re5e'er!r e" %!r%r!%# &e s#&(#, 1#r0'se e"5"$)#'!%# &e s#&(# + e" 2(&r*?( &e s#&(#.
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
17/22
F.- PRUEBA DE E!"#A$%FF (Diferencia Aldosa de &etosa)
Es%! -r$eb! s(re -!r! &(1ere')(!r $'! !"s! &e $'! )e%#s!
Obser!#s )!be res!"%!r ;$e e" re!)%(# &e Se"(!'#11 es res#r)('! &("$(&! e' 0)( )"#r27&r()#.Des-$s &e" %(e-# #bser!#s ;$e "! $es%r! )!b(# ! )#"#r!)(*' e' s 1!ses r#6(! e' e" 1#'&e" %$b# &e e's!+# + &e $' )#"#r r#s!&(%# e' "! -!r%e s$-er(#r.
L! !-!r()(*' &e $' )#"#r r#6# # $' -re)(-(%! r#6# es ('&()!%(! &e "! -rese')(! &e )e%#s!s )## '#2!+ )#"#r!)(*' '# 2!+ re!))(*'
Es%! -r$eb! es es-e)71()! -!r! "!s )e%#s!s. L!s )e%#s!s se &es2(&r!%!' 0s r0-(&!e'%e ;$e "!s!"s!s, &!' 1$r1$r!"es. Es%#s se )#'&e's!' )#' e" res#r)('#" -r#&$)(e' $' )#-"e6# )#"#re!.S( e" %(e-# &e eb$""()(*' se -r#"#'5!, -$e&e &!r %!b(' -#s(%(# -!r! #%r#s !/)!res.
CUESTIONARIO1. Qu drogas ricas en carbohidratos existen y cules son sus aplicaciones en la
industria farmacutica, alimentaria y/o cosmtica?
Leche de vaca
Pasta blanca
Productos de panadera, como pasteles y galletas
Procesado de cereales refinados, como arroz blanco
Pudines, natillas y otros dulces
Refrescos carbonatados con azcar (gaseosas)
Jalea y confituras
Golosinas
Alimentos procesados, como patatas fritas
Alcohol
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
18/22
Aplicacin de Carbohidratos
Industria farmacutica:
es un sector dedicado a la fabricacin y preparacin de productos qumicos medicinales para
la prevencin o tratamiento de las enfermedades. Estos se preparan mediante varios
procesos y formas como los son en frmacos dosificados, como pastillas, cpsulas o sobres.
Alginatos: espesante, estabilizante, gelificantes
Almidon: como excipiente para pldoras, frelleno de pldoras tabletas.
El agar agar: laxante, estabilizador.
La Fructuosa: como azcar para diabticos
Edulcorantes de sucralosa
Alimentaria:
Utilizan carbohidratos para la elaboracin de diversos alimentos, productos de panaderas,
cereales, pastas, tortillas.
Elaboracin de mermeladas y confituras, azucares para cocteles.
La lactosa ingrediente para sopas y productos deshidratados.
Almidn para dar consistencia a los alimentos espesantes, productos horneados.
Cosmtica:
La miel de abeja, que contiene carbohidratos lo utilizan para champun, cremas exfoliantes
mascarillas. Lociones para el cuerpo y manos.
El cido hialuronico constituido x cadenas de carbohidratos complejos se emplea para
hidratacin de la epidermis, capacidad de retener agua, tambin para prevenir arrugas.
Los primeros productos elaborados con algas son jabones, cremas de afeitar, champs,
tintes, lpices de labios, tnicos, maquillaje, espumas y diversos productos de bao. En poco
tiempo, el uso de las algas en productos cosmticos tuvo una gran demanda por su alto
contenido en oligoelementos, sales minerales, vitaminas y aminocidos que sirven para
mantener el buen aspecto externo de la piel, ya que son directamente asimilable por las
clulas cutneas.
Las formas de aplicacin ms comn son geles, mascarillas, emulsiones, champs, lociones
y cremas, y entre sus mltiples usos se destaca los tratamientos tonificantes, hidratantes,
rejuvenecedores y anticelulticos.
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
19/22
2.- Investigar otras formas de determinacin de carbohidratos que existen?
-Determinacin de azucares por refractometra.
Se basa en la propiedad que tienen las soluciones de varias el ndice de refraccin con la
concentracin de azcar. Esta tcnica permite determinar la concentracin de azucares en
solucin pura y con suficiente aproximacin cuando tienen impurezas en pequea
proporcin.El instrumento de medicin es un refractmetro tipo Abbe o de inmersin (seguro que en
Internet encontrs algo), que permite leer directamente en una escala la concentracin
porcentual de azucares en funcin del ndice de refraccin. Si se usa la escala azucarina se
expresa en grados Brix (Bx) que corresponde al porcentaje de sacarosa (en general de
cualquier HC) de la solucin, o lo que es lo mismo, peso del HC cada 100 g de solucin.
-Determinacin de azcares por polarimetra.
Se basa en la propiedad que poseen los carbones asimtricos de las molculas de azcar de
desviar la luz polarizada. A estas sustancias se las denomina pticamente activas. Como
cada HC tiene una determinada capacidad de rotacin de la luz polarizada, se puede
emplear esta tcnica para diferenciarlos entre si para resolver ecuaciones en caso de
mezclas.
Se determina con un polarmetro, aparato nunca bien ponderado y grande entre los de su
especie.
3.- Describir los fundamentos de cada una de las reacciones?
Reaccin de molish
es una reaccin que tie cualquiercarbohidratopresente en una disolucin; es llamada asen honor del botnico austracoHans Molisch.Mide la presencia de glcidos en una
muestra.
Se basa en la deshidratacin de los carbohidratos por la presencia de cido sulfrico o cido
clorhdrico para producir un aldehdo, que se condensa con 2 molculas de -naftol
resultando en la coloracin rosa/morada caracterstica. Todos los carbohidratos deberan
dar una reaccin positiva, y los cidos nucleicos y glicoprotenas tambin dan una reaccin
positiva, ya que todos ellos son hidrolizados por los cidos fuertes.
Es una reaccin cualitativa, por lo que no permite saber la cantidad deglcidosen la
solucin original.
https://es.wikipedia.org/wiki/Carbohidratohttps://es.wikipedia.org/wiki/Hans_Molischhttps://es.wikipedia.org/wiki/Gl%C3%BAcidoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Hans_Molischhttps://es.wikipedia.org/wiki/Gl%C3%BAcidoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Carbohidrato -
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
20/22
Reaccin de benedict
En la qumica, la reaccin o prueba de benedict identifica azucares reductores. El
fundamento de esta reaccin radica en que en un medio alcalino, el ion cprico (otorgado
por el sulfato cuprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo aldehdo del azcar (CHO) a
su forma de Cu+. Este ion se observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al
oxido cuproso (Cu2O). El medio alcalino facilita que el azcar este de forma lineal, puesto que
el azcar en solucin forma un anillo de piranosico o furanosico. Una vez que el azcar esta
lineal, su grupo aldehdo puede reaccionar con el ion cprico en solucin.
Reaccin de Pelouze
Es una prueba qumica que se usa para distinguir entre aldosas y cetosas.. Esta prueba est
basada en el hecho de que, al calentarlas, las cetosas son deshidratadas ms rpido que lasaldosas.
Lafructosada positiva a esta prueba. Lasacarosada negativa a esta prueba ya que la
molcula, si bien est constituida por glucosa y fructosa, en la unin alfa se anulan las
propiedades reductoras de la glucosa y la fructosa, por lo que no da positiva, la sacarosa da
positiva cuando se le realiza una hidrolisis cida, lo que la convierte en un azcar invertido o
invertasa, donde se rompe el enlace alfa y permite que la reaccin con esta prueba d
positivo.
Reaccin de Barfoed
Es unensayo qumicoutilizado para detectarmonosacridos. Se basa en la reduccin de
cobre(II) (En forma de acetato) a cobre (I) (En forma de xido), el cual forma un precipitado
color rojo ladrillo.
RCOH + 2Cu
+2
+ 2H2O RCOOH + Cu2O + 4H
+
Losdisacridostambin pueden reaccionar, pero en forma ms lenta. El grupoaldehdodel
monosacrido que se encuentra en forma de hemiacetal se oxida a su cido carboxlico
correspondiente. Muchas sustancias, entre ellas el cloruro de sodio,3pueden interferir en la
prueba.
https://es.wikipedia.org/wiki/Fructosahttps://es.wikipedia.org/wiki/Sacarosahttps://es.wikipedia.org/wiki/Ensayo_qu%C3%ADmicohttps://es.wikipedia.org/wiki/Monosac%C3%A1ridohttps://es.wikipedia.org/wiki/Cobrehttps://es.wikipedia.org/wiki/Disac%C3%A1ridohttps://es.wikipedia.org/wiki/Aldeh%C3%ADdohttps://es.wikipedia.org/wiki/Prueba_de_Barfoed#cite_note-3https://es.wikipedia.org/wiki/Fructosahttps://es.wikipedia.org/wiki/Sacarosahttps://es.wikipedia.org/wiki/Ensayo_qu%C3%ADmicohttps://es.wikipedia.org/wiki/Monosac%C3%A1ridohttps://es.wikipedia.org/wiki/Cobrehttps://es.wikipedia.org/wiki/Disac%C3%A1ridohttps://es.wikipedia.org/wiki/Aldeh%C3%ADdohttps://es.wikipedia.org/wiki/Prueba_de_Barfoed#cite_note-3 -
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
21/22
CONCLUSIONES
Con la reaccin del Lugol podemos identificar de modo general
polisacridos, pero de modo especfico entre uno de ellos se encuentra el
almidn que lo identificamos en la prctica.
El almidn al ponerse en contacto con el lugol presenta una coloracin
violeta, esto se debe a que cuando el lugol reacciona con las dos
estructuras que forman el almidn con la amilosa proporciona un color
azul y cuando reacciona la amilopectina con lugol proporciona un color
rojo y la combinacin de estos dos colores nos proporciona el color violeta
caracterstico del almidn.
En la muestra del agua al reaccionar con el lugol, nos dio una reaccin
negativa, y como resultado una coloracin amarillenta, esto se debe a que
el agua no es un polisacrido.
-
7/24/2019 reacciones quimicas de identificacion de azucares
22/22
En el agua, no se produce una reaccin con la experiencia de yodo, esto
debido a que el agua no es un azcar, y la coloracin que se present en
nuestro tubo, fue la del color del reactivo de lugol (amarillento).
RECOMENDACIONES
4 No entrar en contacto con el fenol, prepararlo en un tubo de ensayo.4 Solucin patrn de glucosa/sacarosa 1 mg/ml: disolver 100 mg en 100
ml de agua, utilizar un matraz Erlenmeyer de 100 250 ml. -Solucin
problema, muestra lquida con azcares (proporcionada por los alumnos,
o bien jugos de frutas comerciales). Aparte de la muestra realizar dos
diluciones, 1/10 y 1/100.