quantification in synovial fluid fr

7/27/2019 Quantification in Synovial Fluid FR

1/6

C l i n . e x p . I m m u n o l . ( 1 9 8 8 ) 7 1 , 2 8 9 - 2 9 4

I g E r h e u m a t o i d f a c t o r s : q u a n t i f i c a t i o n i n s y n o v i a l f l u i d anda b i l i t y t o i n d u c e s y n o v i a l mast c e l l h i s t a m i n e r e l e a s eB . GRUBER, D . BALLAN, & P . D . GOREVIC D i v i s i o n of A l l e r g y , R h e u m a t o l o g y a n d C l i n i c a l I m m u n o l o g y , H e a l t hS c i e n c e s C e n t r e , S t a t e U n i v e r s i t y o f New Y o r k , S t o n y B r o o k , Ne w Y o r k , USA

( A c c e p t e d f o r p u b l i c a t i o n 6 A u g u s t 1 9 8 7 )

SUMMARYI g E r h eu m a t o id f a c t o r a c t i v i t y was f o u n d t o b e s i g n i f i c a n t l y e l e v a t e d ( P < 0 - 0 1 ) u s i n g a n ELISA a s s a yw h e n p a i r e d s y n o v i a l f l u i d a n d sera f r o m 1 3 p a t i e n t s w i t h a c t i v e RA were c o m p a r e d t o t e n c o n t r o ls a m p l e s . S y n o v i a l f l u i d I g E RF a c t i v i t y was h i g h e r t h a n p r e d i c t e d b y d i f f u s i o n a l o n e i n 7 / 1 1 ( 6 4 % ) o ft h e RA s y n o v i a l f l u i d s s t u d i e d when c o e f f i c e n t s o f d i f f u s i o n we r e d e t e r m i n e d . The s p e c i f i c i t y o f I g ERF a c t i v i t y a s m e a s u r e d b y t h e ELISA was c o n f i r m e d u s i n g i m m u n o a f f i n i t y c h r o m a t o g r a p h y . M a s tc e l l s , o b t a i n e d b y e n z y m a t i c d i s p e r s i o n o f r h e u m a t o i d s y n o v i a l t i s s u e , we r e s e n s i t i z e d w i t h s e r ac o n t a i n i n g e i t h e r I g E a n t i b o d i e s d i r e c t e d a g a i n s t r a g w e e d or I g E w i t h RF a c t i v i t y . H i s t a m i n e wa sr e l e a s e d upon c h a l l e n g e w i t h a n t i - I g E a n t i b o d i e s ( 3 3 - 2 % + 1 1 ) , r a g w e e d a n t i g e n E ( 3 4 - 6 % + 1 1 ) , ora g g r e g a t e d gamma g l o b u l i n ( 4 7 - 6 % + 1 7 9 ) . No h i s t a m i n e r e l e a s e was o b s e r v e d i f a n t i g e n c h a l l e n g eo c c u r r e d i n t h e a b s e n c e o f a p p r o p r i a t e s e n s i t i z a t i o n , w i t h C3 a n a p h y l a t o x i n , or a f t e r i m m u n o a d s o r p -t i o n o f I g E f r o m sera c o n t a i n i n g I g E RF a c t i v i t y .K e y w o r d s I g E r h e u m a t o i d f a c t o r s y n o v i a l mast c e l l s s y n o v i a l f l u i d I g E RF r h e u m a t o i d a r t h r i t i s

INTRODUCTION

M a s t c e l l h y p e r p l a s i a i s a c h a r a c t e r i s t i c f e a t u r e o f r h e u m a t o i ds y n o v i u m ( C r i s p , 1 9 6 4 ; O k a d a , 1 9 7 3 ; A t h r e y a , M o s e r &S c h u m a c h e r , 1 9 7 9 ; S a j v e i y a , 1 9 8 3 ; B r o m l e y , F i s c h e r & W o o l e y ,1 9 8 4 ; C r i s p e t a l . , 1 9 8 4 ; G o d f r e y e t a l . , 1 9 8 4 ; F r e e m o n t &D e n t o n , 1 9 8 5 ; G r u b e r e t a l . , 1 9 8 6 ; M a l o n e , T r a n i & S c h w a r t z ,1 9 8 6 ; M a l o n e e t a l . , 1 9 8 7 ) . M a s t c e l l s may s u b s e r v e a p a t h o g e n i cr o l e i n t h i s c h r o n i c p r o l i f e r a t i v e l e s i o n v i a t h e m o d u l a t i o n o f av a r i e t y o f p r o i n f l a m m a t o r y p r o c e s s e s ( W a s s e r m a n , 1 9 8 4 ) . Ar o l e i n c o n n e c t i v e t i s s u e r e m o d e l l i n g i s s u g g e s t e d b y t h e a b i l i t yo f m a s t c e l l p r o d u c t s t o s t i m u l a t e a n d a c t i v a t e l a t e n t c o l l a g e n a s ei n v i t r o ( H a u s e n , L o b b & T a y l o r , 1 9 7 6 ; D a b b o u s e t a l . , 1 9 8 6 ;D a b b o u s , T i p t o n & H a n e y , 1 9 8 6 ; G r u b e r , M a r c h e s e &S c h w a r t z , 1 9 8 7 ) , a n d b y t h e i r a p p e a r a n c e a t s i t e s o f t i s s u ef i b r o s i s ( W u c h m a n n , 1 9 5 5 ; S e v e r s o n , 1 9 6 9 ; W a t a n a b e e t a l . ,1 9 7 4 ; K a w a n a m i e t a l . , 1 9 7 9 ; L y k k e , S c h o n e l l & S t e w a r t , 1 9 7 9 ;H a w k i n s e t a l . , 1 9 8 5 ) . M a s t c e l l s a c c u m u l a t e i n a n u m b e r o fo t h e r p a t h o l o g i c a l s t a t e s i n w h i c h a n i n f l u x o f m o n o n u c l e a r c e l l si n t o c o n n e c t i v e t i s s u e i s s e e n , s u c h a s a l l o g r a f t r e j e c t i o n , b u l l o u sp e m p h i g o i d , c h r o n i c u r t i c a r i a , c h r o n i c p e r i d o n t i t i s a n d C r o h n ' si l e i t i s ( M c A u l e r y & S o m m e r s , 1 9 6 1 ; C o l v i n & D v o r a k , 1 9 7 4 ;C o r r e s p o n d e n c e : B a r r y G r u b e r MD, D i v i s i o n o f A l l e r g y , R h e u m a -t o l o g y a n d C l i n i c a l I m m u n o l o g y , H e a l t h S c i e n c e s C e n t e r , S t a t e U n i v e r -

s i t y o f Ne w Y o r k a t S t o n y B r o o k , S t o n y B r o o k , Ne w Y o r k 1 1 7 9 4 - 8 1 6 1 ,USA.

D v o r a k e t a l . , 1 9 7 8 ; N a t b o n y e t a l . , 1 9 8 3 ; S h i c h i k a w a , T s u j i -moto & N i s h i o k o , 1 9 8 5 ; D a b b o u s e t a l . , 1 9 8 7 ) .S e v e r a l r e c e n t s t u d i e s h a v e d o c u m e n t e d t h e p r e s e n c e o f I g Ea n t i g l o b u l i n s i n t h e s e r a o f a s i g n i f i c a n t n u m b e r o f p a t i e n t s w i t ha c t i v e r h e u m a t o i d a r t h r i t i s a n d r h e u m a t o i d v a s c u l i t i s ( Z u r a w e ta l . , 1 9 8 1 ; P e r m i n & E g e s k j o l d , 1 9 8 2 ; M e r i t y e t a l . , 1 9 8 4 ; C h a t p a re t a l . , 1 9 8 6 ) . I n t h i s s t u d y , we t e s t t h e h y p o t h e s i s t h a t t h e s e I g Er h e u m a t o i d f a c t o r s ma y s e n s i t i z e s y n o v i a l m a s t c e l l s i n v i t r o a n dp r e s u m a b l y i n v i v o . T h i s p r o v i d e s a m e c h a n i s m w h e r e b yi m m u n e c o m p l e x e s ma y t h e n c a u s e a n t i g e n - s p e c i f i c m a s t c e l la c t i v a t i o n a n d s e c r e t i o n . T h e m e t h o d o l o g y we h a v e e m p l o y e di n v o l v e s e n z y m a t i c d i s p e r s i o n o f r h e u m a t o i d s y n o v i a l t i s s u e t ol i b e r a t e t h e m a s t c e l l s ( G r u b e r e t a l . , 1 9 8 6 ) , p a s s i v e s e n s i t i z a t i o ni n v i t r o w i t h s p e c i f i c I g E a n t i b o d i e s , a n d a s s e s s m e n t o f h i s t a m i n er e l e a s e f o l l o w i n g a n t i g e n i c c h a l l e n g e . U s i n g a n e n z y m e i m m u -n o a s s a y p r e v i o u s l y d e s c r i b e d ( C h a t p a r e t a l . , 1 9 8 6 ) , we t e s t e df o r t h e p r e s e n c e o f I g E r h e u m a t o i d f a c t o r i n s y n o v i a l f l u i d , a n da s s e s s e d t h e a b i l i t y o f h i g h l y r e a c t i v e s e r a a n d e n r i c h e d f r a c t i o n st o s e n s i t i z e s y n o v i a l m a s t c e l l s i n s h o r t - t e r m c u l t u r e , a n d o fa g g r e g a t e d I g G t o c a u s e i m m u n e - s p e c i f i c a c t i v a t i o n o f s y n o v i a lm a s t c e l l s .

MATERIALS AND METHODSH i s t a m i n e d i h y d r o c h l o r i d e , human s e r u m a l b u m i n ( H S A ) ,d i a m i n e o x i d a s e ( p o r c i n e k i d n e y ) , K C 1 , C a C 1 2 , M g C I , NaOH,c h l o r o f o r m , c o l l a g e n a s e t y p e I I ( C l o s t r i d i a h i s t o l y t i c u m )d e o x y r i b o n u c l e a s e , h y a l u r o n i d a s e , t r y p s i n ( b o v i n e p a n c r e a s ) ,

2 8 9


2/6

B . G r u b e r , D . B a l l a n & P . D . G o r e v i cHEPES, a n d a l k a l i n e p h o s p h a t a s e t y p e V I I w er e a l l p u r c h a s e df r o m S i g m a C h e m i c a l C o . ( S t L o u i s , MO). S e p h a r o s e 4 - B( P h a r m a c i a D i v . , P h a r m a c i a F i n e C h e m i c a l s , P i s c a t a w a y , N J )w a s u s e d t o p r e p a r e i m m u n o s o r b e n t c o l u m n s b y CNBr c o v a l e n tc o u p l i n g ( A y e n , P o r a t h & E r n b a c k , 1 9 6 7 ) . C a l c i u m - f r e e T y r -o d e s b u f f e r w a s p r e p a r e d b y a d d i n g NaCl 8 g , KCI 0 - 2 gNaH2PO4 0 0 5 g , g l u c o s e 1 0 g , g e l a t i n 1 0 g , d e o x y r i b o n u c l e a s e1 5 m g , a t pH 7 - 4 i n I l i t r e o f d i s t i l l e d w a t e r a n d f i l t e r s t e r i l i z e d .HEPES b u f f e r c o n t a i n e d N a C l 8 g , KCl 0 3 7 g , C a C 1 2 003 g ,M g C l 2 0 - 0 2 g , HEPES 2 - 4 g , a n d human s e r u m a l b u m i n 0 3 g i n Il i t r e o f d i s t i l l e d w a t e r a t pH 7 - 4 .S e c r e t a g o g u e sT h e s p e c i f i c i t y o f t h e p o l y c l o n a l r a b b i t a n t i I g E a n d m u r i n em o n o c l o n a l F C E - s p e c i f i c a n t i b o d i e s u s e d f o r t h e ELISA a s s a yh a s b e e n p r e v i o u s l y d e s c r i b e d ( C h a t p a r e t a l . , 1 9 8 6 ) . M o n o c l o n -a l a n t i - I g E ( k i n d l y s u p p l i e d b y Dr A n d r e w S a x o n , UCLAS c h o o l o f M e d i c i n e ) w a s c o n j u g a t e d w i t h a l k a l i n e p h o s p h a t a s ef o r t h e ELISA a s s a y u s e d t o p r e p a r e i m m u n o a b s o r b e n t s f o ra f f i n i t y p u r i f i c a t i o n s t u d i e s , a n d t o r e m o v e r e s i d u a l I g E f r o ma g g r e g a t e d I g G u s e d f o r t h e ELISA a s s a y . S e r u m s a m p l e s w i t hh i g h I g E RF a c t i v i t y w e r e u s e d a t 1 : 1 0 d i l u t i o n i n p h o s p h a t eb u f f e r e d s a l i n e ( P B S ) f o r s y n o v i a l m a s t c e l l r e l e a s e s t u d i e s .S e r u m w a s o b t a i n e d f r o m a r a g w e e d a n t i g e n E s e n s i t i v ei n d i v i d u a l a s c o n f i r m e d b y s k i n t e s t s a n d u s e d f o r p a s s i v es e n s i t i z a t i o n e x p e r i m e n t s . A g g r e g a t e d gamma g l o b u l i n w a sp r e p a r e d b y h e a t i n g C o h n f r a c t i o n I I i n PBS a t 6 3 C f o r 3 0 m i n ;r a g w e e d a n t i g e n E w a s o b t a i n e d f r o m N I H , B e t h e s d a , MD. T h ea n t i g e n s f o r m e d i a t o r r e l e a s e s t u d i e s w e r e d i l u t e d i n HEPESb u f f e r b e f o r e u s e . C 3 a a n d C 3 a d e s a r g w e r e k i n d l y s u p p l i e d b yDr A n t h o n y H u g h ( S c r i p p s C l i n i c , L a J o l l a , C A ) .A s s a y s f o r a n t i g l o b u l i n a c t i v i t y a n d s p e c i f i c p r o t e i n sT h e e n z y m e - l i n k e d i m m u n o a b s o r b e n t a s s a y u s e d f o r d e t e c t i o no f I g E r h e u m a t o i d f a c t o r i n s e r u m o r s y n o v i a l f l u i d f r o mp a t i e n t s w i t h s e r o p o s i t i v e RA h a s b e e n d e s c r i b e d ( C h a t p a r e ta l . , 1 9 8 6 ) . S y n o v i a l f l u i d s a m p l e s w e r e t r e a t e d w i t h h y a l u r o n i -d a s e ( I m g / m l f o r 3 0 m i n a t 3 7 0 C ) t o r e d u c e v i s c o s i t y b e f o r ep e r f o r m i n g t h e E L I S A . T h i s t r e a t m e n t h a d n o e f f e c t o n t h eO D 4 0 5 . S a m p l e s w e r e a l s o t e s t e d f o r I g M r h e u m a t o i d a c t i v i t y b yl a t e x f i x a t i o n a n d r a t e n e p h e l o m e t r y ( B e c k m a n I n s t r u m e n t s ,P a l o A l t o , CA) a n d t o t a l I g E b y t h e PRIST a s s a y ( P h a r m a c i a ,P i s c a t a w a y , N J ) . S e r u m a n d s y n o v i a l f l u i d a l b u m i n ( S f a l b ) a n d c 2m a c r o g l o b u l i n l e v e l s ( S f 2 m ) w e r e d e t e r m i n e d b y a n a u t o m a t e dc h e m s t a t i o n ( C o u l t e r - D A C O S A n a l y z e r , H i a l e a h , F L ) a n dr a d i a l i m m u n o d i f f u s i o n ( C a l B i o c h e m D i a g n o s t i c s , S a n D i e g o ,C A ) r e s p e c t i v e l y . T h e l e v e l s o f I g E i n t h e s y n o v i a l f l u i d s w e r ep r e d i c t e d o n t h e b a s i s o f t h e r e l a t i v e l e v e l s o f a l p h a2 - m a c r o g l o b u l i n a n d a l b u m i n i n t h e r e s p e c t i v e s a m p l e s , u s i n gt h e f o r m u l a o f H u n d e r & G l e i c h ( 1 9 7 4 ) ; S p x 1 / 2 ( S f a / S a + SFa - a 2 m / S a - a 2 m ) .P a t i e n t sP a i r e d s e r u m s a m p l e s a n d s y n o v i a l f l u i d a s p i r a t e s c o l l e c t e d f r o mp a t i e n t s f o r d i a g n o s t i c p u r p o s e s w e r e c e n t r i f u g e d a t 3 0 0 g f o r 2 0m i n t o r e m o v e d e b r i s . T h e s u p e r n a t a n t s w e r e s t o r e d a t - 2 0 C .A l l p a t i e n t s i n t h i s s t u d y f u l f i l l e d c r i t e r i a f o r d e f i n i t e r h e u m a t o i da r t h r i t i s ( R A ) ( C o m m i t t e e o f t h e A m e r i c a n R h e u m a t i s mA s s o c i a t i o n ( 1 9 5 8 ) .

S y n o v i a l c e l l sS y n o v i a l t i s s u e s a m p l e s w e r e o b t a i n e d f r o m p a t i e n t s a t t h e t i m eo f o p e n o r t h o p a e d i c s u r g i c a l p r o c e d u r e s w i t h i n f o r m e d c o n s e n tu n d e r a p r o t o c o l a p p r o v e d b y o u r I n s t i t u t i o n a l Human S u b j e c t sC o m m i t t e e . T h e t i s s u e w a s i m m e d i a t e l y p l a c e d i n c a l c i u m - f r e eT y r o d e ' s b u f f e r a n d m i n c e d i n t o s m a l l f r a g m e n t s . E n z y m ed i g e s t i o n u s i n g c o l l a g e n a s e t y p e I I ( 1 0 m g / m l ) , t r y p s i n ( 1 0m g / m l ) h y a l u r o n i d a s e ( 1 0 m g / m l ) a n d d e o x y r i b o n u c l e a s e ( 1 0m g / m l ) p r o c e e d e d f o r 4 5 m i n a t 2 2 C , w i t h g e n t l e s t i r r i n g . T h ed i s p e r s e d c e l l s w e r e t h e n p a s s e d o v e r a 2 0 0 y m p o r e n y l o n m e s h( N y t e x , T a r r y t o w n , N Y ) , w a s h e d a n d c e n t r i f u g e d a t 2 0 0 g f o r 1 0m i n . T h e c e l l s w e r e p l a c e d i n RPMI m e d i a ( G i b c o L a b s , G r a n dI s l a n d , NY ) s u p p l e m e n t e d w i t h 1 0 mm g l u t a m i n e , 10% f e t a l c a l fs e r u m a n d 1% a n t i b i o t i c s ( p e n i c i l l i n , f u n g i z o n e a n d s t r e p t o m y -c i n ; G i b c o L a b s , G r a n d I s l a n d , NY ) a n d c u l t u r e d o v e r n i g h t i n5% C 0 2 - h u m i d i f i e d a i r . C y t o s p u n s m e a r s ( S h a n d o n C o r p . ,S e w i c k l e y , P A ) o f t h e f r e s h l y d i g e s t e d c e l l s w e r e p r e p a r e d a n ds t a i n e d w i t h e i t h e r t o l u i d i n e b l u e o r G i e m s a . T h e s e p r e p a r a t i o n sc o n t a i n e d a p p r o x i m a t e l y 10% m a s t c e l l s b y s p e c i f i c s t a i n s , w i t h< 1 % c o n t a m i n a t i n g b a s o p h i l s .H i s t a m i n e r e l e a s e s t u d i e sT h e f o l l o w i n g d a y t h e c e l l s w e r e h a r v e s t e d , w a s h e d t w i c e , a n dp a s s i v e l y s e n s i t i z e d b y i n c u b a t i o n w i t h r e a c t i v e s e r u m a t 1 : 1 0d i l u t i o n i n T y r o d e s b u f f e r a t 3 7 C f o r 2 h . T h e c e l l s w e r e w a s h e da n d d i v i d e d i n t o s a m p l e s o f 2 x 1 0 5 c e l l s / m l i n HEPES b u f f e r .S p e c i f i c a n t i g e n s w e r e a d d e d t o e a c h s a m p l e a n d i n c u b a t e d f o r3 0 m i n a t 3 7 C . T h e c e l l s w e r e t h e n c e n t r i f u g e d ( 2 5 0 g f o r 5 m i n )a n d t h e s u p e r n a t a n t a s s a y e d f o r h i s t a m i n e a n d LDH r e l e a s e( H i t a c h i 7 5 A u t o a n a l y z e r ) . T o t a l h i s t a m i n e c o n t e n t w a s d e t e r -m i n e d b y b o i l i n g t h e c e l l s u s p e n s i o n f o r 2 0 m i n .H i s t a m i n e a s s a yH i s t a m i n e w a s m e a s u r e d b y t h e d o u b l e r a d i o e n z y m a t i c a s s a y a sd e s c r i b e d b y S h a f f & B e a v e n ( 1 9 7 9 ) . H i s t a m i n e - N - m e t h y lt r a n s f e r a s e (HNMT) w a s p r e p a r e d f r o m f r e s h l y o b t a i n e d r a tk i d n e y s . A l l s a m p l e s w e r e d o n e i n d u p l i c a t e a n d s p e c i f i c i t y o f t h ea s s a y w a s c o n f i r m e d f o l l o w i n g d i g e s t i o n w i t h h i s t a m i n a s e( d i a m i n e o x i d a s e , S i g m a ) . T o t a l h i s t a m i n e w a s d e t e r m i n e d b yb o i l i n g t h e c e l l s f o r 1 0 m i n . T h e n e t % h i s t a m i n e r e l e a s e w a sd e t e r m i n e d b y ( h i s t a m i n e r e l e a s e d i n s a m p l e - s p o n t a n e o u sr e l e a s e ) ( t o t a l h i s t a m i n e ) x 1 0 0 % . T h e s e n s i t i v i t y o f t h i s a s s a ya l l o w e d d e t e c t i o n o f > 0 5 n g / m l o f h i s t a m i n e .

RESULTSQ u a n t i f i c a t i o n o f I g E r h e u m a t o i d f a c t o r a c t i v i t y i n p a i r e d s e r aa n d s y n o v i a l f l u i d s f r o m p a t i e n t s w i t h RAT h i r t e e n p a i r e d s p e c i m e n s f r o m p a t i e n t s w i t h a c t i v e RA w e r ec o m p a r e d w i t h m a t c h e d s y n o v i a l f l u i d a n d s e r a f r o m 1 0 p a t i e n t sw i t h m e c h a n i c a l o r t h o p a e d i c d i s o r d e r s o r d e g e n e r a t i v e d i s e a s e .W h e r e a s a l l c o n t r o l s p e c i m e n s h a d n e g l i g i b l e I g E RF a c t i v i t y( O D 4 0 5 < 0 1 a t 6 0 m i n ) , s i g n i f i c a n t l y e l e v a t e d v a l u e s ( P < 0 0 1 )w e r e f o u n d i n b o t h s y n o v i a l f l u i d ( m e a n OD 4 0 5 = 0 3 1 + 0 1 7 )a n d s e r u m ( m e a n OD 4 0 5 = 0 3 7 + 0 2 2 ) o f p a t i e n t s w i t h RAc o m p a r e d t o c o n t r o l s . T h e s e r e s u l t s a r e c o m p a t i b l e w i t h a l a r g e rs t u d y p r e v i o u s l y r e p o r t e d ( C h a t p a r e t a l . , 1 9 8 6 ) . T h e I g E RFa c t i v i t y ( O D 4 5 0 ) a p p e a r e d c o m p a r a b l e i n t h e m a t c h e d s e r a a n ds y n o v i a l f l u i d s a m p l e s ( P > 0 1 ) . I n o r d e r t o f u r t h e r e v a l u a t e t h i so b s e r v a t i o n , 1 1 s y n o v i a l f l u i d s a m p l e s w e r e a n a l y s e d f o rd i f f u s a b l e p r o t e i n s . T h e p r e d i c t e d v a l u e s w e r e s u b t r a c t e d f r o m

2 9 0


3/6

I g E r h e u m a t o i d f a c t o r : q u a n t i f i c a t i o n i n s y n o v i a l f l u i dT a b l e 1 . P a i r e d s a m p l e a n a l y s i s

P a t i e n t O D s f ( a c t u a l ) ODs O D s f ( p r e d i c t e d ) D i f f e r e n c eI . A . F . 0 2 6 0 0 3 5 0 0 1 9 2 +00682 . R . L . 0 - 1 4 3 0 - 1 9 5 0 - 1 8 1 -00383 . V . C . 0 - 1 9 3 0 - 2 2 8 0 2 1 6 - 0 0 2 34 . A . V . 0 - 7 5 6 1 - 0 8 0 0 - 3 5 6 +0 4 0 05 . G . B . 0 - 5 8 0 - 2 3 4 0 - 1 1 9 - 0 - 0 6 16 . D . L . 0 3 5 3 0 3 5 2 0 1 2 0 +02337 . B . L . 0 2 9 9 0 3 0 4 0 4 5 6 - 0 - 1 5 78 . R . A . 0 - 3 1 9 0 - 4 2 5 0 - 2 4 2 +0 0 7 79 . R . G . 0 3 7 4 0 - 4 1 0 0 - 2 4 6 + 0 - 1 2 81 0 . E . S . 0 2 8 6 0 2 9 7 0 0 9 5 +0 1 9 11 1 . R . P . 0 4 6 5 0 3 7 6 0 3 1 2 +0 1 5 3

O D 4 5 0 d e t e r m i n e d b y E L I S A f o r I g E RF a c t i v i t y . A c t u a l r e a d i n g s a t 6 0m i n g i v e n f o r s y n o v i a l f l u i d ( s f ) s a m p l e s a n d m a t c h e d s e r a ( s ) . T h i s i sc o m p a r e d t o t h e O D 4 5 0 o f s y n o v i a l f l u i d p r e d i c t e d b y m e a s u r e m e n t s o fd i f f u s a b l e p r o t e i n s ( s e e M a t e r i a l s a n d M e t h o d s ) . T h e l a s t c o l u m n r e p r e s e n t st h e d i f f e r e n c e o f t h e m e a s u r e d O D 4 5 0 f o r s y n o v i a l f l u i d a n d t h e p r e d i c t e dG D 4 5 0 , s u g g e s t i n g l o c a l p r o d u c t i o n i f ( + ) .

t h e a c t u a l m e a s u r e d a c t i v i t i e s i n s y n o v i a l f l u i d a n d t h e d i f f e r e n c ec a l c u l a t e d ( T a b l e 1 ) . S e v e n o f t h e e l e v e n s a m p l e s m e a s u r e d w e r eh i g h e r t h a n p r e d i c t e d b y t h e s e c a l c u l a t i o n s , t h u s s u g g e s t i n gl o c a l p r o d u c t i o n o f I g E - R F . T h e e n z y m e i m m u n o a s s a y u s e dw a s l i n e a r o v e r t h e v a l u e s e x a m i n e d w h e n m y e l o m a I g E w a su s e d a s s u b s t r a t e .S p e c i f i c i t y o f I g E RF a c t i v i t yS e v e r a l m a r k e d l y p o s i t i v e s e r a w e r e s e l e c t e d t o f u r t h e r d e f i n e t h es p e c i f i c i t y o f o u r a s s a y . S a m p l e s o f 1 m l w e r e p a s s e d o v e r am o n o c l o n a l a n t i - I g E i m m u n o a d s o r b e n t S e p h a r o s e 4 - B c o l u m n( 1 0 m l b e d v o l u m e ) a n d e l u t e d w i t h 3 M p o t a s s i u m t h i o c y a n a t e .B o t h t h e c o l u m n w a s h a n d t h e e l u a t e w e r e c o n c e n t r a t e d b yA m i c o n u l t r a f i l t r a t i o n t o t h e o r i g i n a l v o l u m e a n d t h e n t e s t e d f o rI g E RF a c t i v i t y . R e s u l t s o f a r e p r e s e n t a t i v e e x p e r i m e n t a r es h o w n i n F i g . 1 a n d w e r e d u p l i c a t e d w i t h t w o o t h e r s a m p l e s . I g ERF a c t i v i t y w a s r e m o v e d b y p a s s a g e o v e r a n a n t i I g E i m m u -n o a d s o r b e n t o r b y p r e - i n c u b a t i o n o v e r n i g h t a t 4 0 C w i t ha g g r e g a t e d y - g l o b u l i n ( I m g / m l ) . S i m i l a r r e s u l t s w e r e o b t a i n e dw i t h a p o s i t i v e s y n o v i a l f l u i d s a m p l e . B o t h s e r a a n d s y n o v i a lf l u i d I g E RF a c t i v i t y w e r e u n a f f e c t e d b y p a s s a g e o v e r a ni m m u n o a b s o r b e n t s p e c i f i c f o r , h e a v y c h a i n d e t e r m i n a n t s .F u r t h e r m o r e , t o t a l I g E a s s a y e d b y PRIST w a s 2 6 0 n g / m l i n t h ea p p l i e d m a t e r i a l a n d b e c a m e u n d e t e c t a b l e ( < 1 0 n g / m l ) i n t h ee f f l u e n t o f t h e a n t i - I g E c o l u m n . IgM l a t e x a c t i v i t y w a s n o ts i g n i f i c a n t l y d i m i n i s h e d b y t h e I g E a d s o r p t i o n ( F i g . 1 ) .I n s e p a r a t e e x p e r i m e n t s t h e s e r u m c o n t a i n i n g h i g h I g E RFa c t i v i t y w a s s u b j e c t e d t o h e a t i n g a t 6 3 C f o r 1 h t o i n a c t i v a t eI g E . T h e I g E RF a c t i v i t y w a s n o l o n g e r d e t e c t a b l e ( < 0 1 a t 6 0m i n ) b y ELISA ( d a t a n o t s h o w n ) .S y n o v i a l m a s t c e l l p r e p a r a t i o n sH i g h t i t r e a n d c o n t r o l s e r a w e r e t h e n s e l e c t e d f o r p a s s i v es e n s i t i z a t i o n o f s y n o v i a l m a s t c e l l s ( L i c h t e n s t e i n & O s l e r , 1 9 6 4 ) .F i r s t , d i s p e r s e d c e l l s f r o m s e v e n r h e u m a t o i d s y n o v i a w e r ei n c u b a t e d w i t h s e r a w h i c h c o n t a i n e d I g E a n t i b o d i e s s p e c i f i c f o rr a g w e e d a n t i g e n E . S a m p l e s c o n t a i n i n g 1 0 6 c e l l s w e r e c h a l l e n g e dw i t h m o n o s p e c i f i c p o l y c l o n a l a n t i - I g E ( 1 p g / m l ) , r a g w e e d

I m

8 c. zw

0P. afJ L 1

RA s e r u m RA s e r u mf o l l o w i n g I g E w i t h o g g r e g a t di m m u n o o d s o r p i o n y g l o b u l i n( I m g / m i )F i g . 1 . T h e s p e c i f i c i t y o f t h e E L I S A f o r I g E RF a c t i v i t y ( 0 ) i s i n d i c a t e db y i m m u n o a d s o r p t i o n o f a m a r k e d l y p o s i t i v e s e r u m s a m p l e o v e r ana n t i - I g E a b s o r b a n t . T h e l a t e x f i x a t i o n ( L F ) a c t i v i t y ( - ) w a s n o ts i g n i f i c a n t l y c h a n g e d , a s c o m p a r e d t o t h e m a r k e d d e c r e a s e i n I g E RFa c t i v i t y . T h e a c t i v i t y w a s r e c o v e r e d i n t h e e l u a t e . T h e I g E RF a n d LFa c t i v i t y o f t h e same s e r u m wa s i n h i b i t e d b y p r e i n c u b a t i o n o v e r n i g h tw i t h s o l u b l e a g g r e g a t e d g l o b u l i n , a s s h o w n .

a n t i g e n E ( 1 , u g / m l ) , o r w i t h C 3 a ( I 0 - 5 - 1 0 - M ) . A s i n d i c a t e d i nF i g . 2 , s y n o v i a l mast c e l l s f r o m s e v e n RA p a t i e n t s r e l e a s e d am e a n o f 3 3 - 2 % ( 1 1 - 0 ) a n d 3 4 - 6 % ( 1 1 - 0 ) o f t o t a l h i s t a m i n ef o l l o w i n g c h a l l e n g e w i t h a n t i - I g E a n d r a g w e e d a n t i g e n E . T h er e q u i r e m e n t f o r s p e c i f i c I g E was c o n f i r m e d b y s e n s i t i z i n g h a l f o ft h e s y n o v i a l c e l l s w i t h c o n t r o l serum a n d t h e r e m a i n d e r w i t hs e r u m c o n t a i n i n g I g E a n t i b o d i e s a g a i n s t r a g w e e d a n t i g e n E .O n l y t h e c e l l s s e n s i t i z e d w i t h s e r u m f r o m a r a g w e e d - s e n s i t i v ei n d i v i d u a l s u b s e q u e n t l y r e s p o n d e d t o c h a l l e n g e w i t h a n t i g e n E .C e l l s i n c u b a t e d w i t h c o n t r o l serum f o l l o w e d b y r a g w e e dc h a l l e n g e r e l e a s e d l e s s t h a n 5% t o t a l h i s t a m i n e ( F i g . 2 ) . B o t hC 3 a a n d C 3 a D e s A r g f a i l e d t o c a u s e s i g n i f i c a n t h i s t a m i n er e l e a s e , e v e n a t 1 0 - 5 M c o n c e n t r a t i o n ( n = 8 ) , e v e n t h o u g h t h eC 3 a i n d u c e d a n i m m e d i a t e w h e a l a n d f l a r e r e a c t i o n i n v o l u n -

2 9 1


4/6

B . G r u b e r , D . B a l l a n & P . D . G o r e v i c% H i s t a m i n e r e l e a s e

0 1 0 2 0 3 0

2 C o n t r o l s e r u m

3 IgE a n t i - r a g w e e d Ag E



A n t i - I g E / L g / m l

Ragweed AgE p l i g / m l

Ragweed Ag E

-5C 3 a (1 0 M)

F i g . 2 . N e t % h i s t a m i n e r e l e a s e f o l l o w i n g s e n s i t i z a t i o n a n d s t i m u l a t i o n i s i n d i c a t e d . T h e s e d a t a represent s i x separate e x p e r i m e n t s i nw h i c h d i s p e r s e d r h e u m a t o i d s y n o v i o c y t e s were c h a l l e n g e d w i t h s p e c i f i c s e c r e t a g o g u e s . The b a r i s t h e mean+ .e.m. Spontaneous r e l e a s ewas 95% o f t h ec e l l s e x c l u d e d t r y p a n b l u e a f t e r a c t i v a t i o n , a n d n o LDH c o u l db e d e t e c t e d i n t h e c u l t u r e s u p e r n a t a n t s .

DISCUSSIONI n p r e v i o u s s t u d i e s , we n o t e d t h e presence o f s i g n i f i c a n tn u m b e r s o f mast c e l l s i n r h e u m a t o i d s y n o v i u m , a n d d e m o n -

2 9 2S e n s i t i z a t i o n( 6 0 m i n )

N o n e

C h a l l e n g e( 3 0 m i n )

N o n e

4 0 509 I I I I I

i

i

I I I I


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I g E r h e u m a t o i d f a c t o r : q u a n t i f i c a t i o n i n s y n o v i a l f l u i d 2 9 3s t r a t e d r e s p o n s i v e n e s s o f t h e s e c e l l s t o s p e c i f i c s e c r e t a g o g u e sa n d a h i s t a m i n e - r e l e a s i n g c y t o k i n e . I m m u n o f l u o r e s c e n c es t u d i e s d e m o n s t r a t e d b i n d i n g o f m o n o c l o n a l I g E t o t h e s u r f a c eo f t h e s e c e l l s ( G r u b e r e t a l . , 1 9 8 6 ) . I n t h e p r e s e n t r e p o r t , we h a v ep r e s e n t e d d a t a s h o w i n g t h a t t h e s e c e l l s a r e c a p a b l e o f r e l e a s i n gh i s t a m i n e f o l l o w i n g s e n s i t i z a t i o n w i t h s p e c i f i c I g E a n t i b o d i e s ,i n c l u d i n g RA s e r a f o u n d t o h a v e h i g h t i t r e s o f I g E a n t i g l o b u l i n sb y a n ELISA a s s a y .R h e u m a t o i d f a c t o r s o f t h e I g E i s o t y p e h a v e b e e n s h o w n b ys e v e r a l g r o u p s t o b e p r e s e n t i n t h e s e r a o f a s i g n i f i c a n tp e r c e n t a g e o f RA p a t i e n t s b y b o t h ELISA a n d r a d i o i m m u n o a s -s a y s ( Z u r a w e t a l . , 1 9 8 1 ; P e r m i n & E g e s k j o l d , 1 9 8 2 ; M e r i t y e ta l . , 1 9 8 4 ; C h a t p a r e t a l . , 1 9 8 6 ) . T h e s i g n i f i c a n c e o f t h e s ea n t i b o d i e s h a s r e m a i n e d u n c e r t a i n . A l t h o u g h P e r m i n e t a l .( 1 9 7 8 ; 1 9 8 3 ) h a v e r e p o r t e d i m m u n e - s p e c i f i c t r i g g e r i n g o f b a s o -p h i l s i s o l a t e d f r o m p e r i p h e r a l b l o o d o f p a t i e n t s w i t h R A , t h ep e r c e n t r e l e a s e w a s m o d e s t a n d , i n o u r h a n d s , n e g l i g i b l e( u n p u b l i s h e d o b s e r v a t i o n s ) . B y c o n t r a s t , s y n o v i a l m a s t c e l l ss e n s i t i z e d w i t h RA s e r a c o n t a i n i n g I g E RF a c t i v i t y b y ELISAa s s a y r e l e a s e d a mean o f 4 7 - 6 % t o t a l h i s t a m i n e i n r e s p o n s e t oI g G .Q u a n t i f i c a t i o n o f I g E RF r e l a t i v e t o s p e c i f i c p r o t e i n s i ns y n o v i a l f l u i d a n d s e r u m s u g g e s t e d l o c a l p r o d u c t i o n i n 64 %( 7 / 1 1 ) o f p a i r e d s a m p l e s a n a l y s e d . B y c o n t r a s t , n o n e o f 1 0s y n o v i a l f l u i d s a m p l e s f r o m p a t i e n t s w i t h d e g e n e r a t i v e j o i n td i s e a s e o r p o s t r a u m a t i c a r t h r i t i s h a d d e t e c t a b l e I g E RF a c t i v i t y .F u r t h e r u n d e r s t a n d i n g o f t h e c o n t r i b u t i o n o f l o c a l p r o d u c t i o nt o e l e v a t e d t i t r e s i n s y n o v i a l f l u i d w i l l r e q u i r e s t u d y o f s h o r t t e r me x p l a n t s o r c u l t u r e d s y n o v i a l m o n o n u c l e a r c e l l s , a s h a s b e e nd e m o n s t r a t e d f o r r h e u m a t o i d f a c t o r s o f o t h e r i s o t y p e s ( H a n n e s -t a d & M e l l b y e , 1 9 6 7 ; M u n t h e & N a t v i g , 1 9 7 2 ; S m i l e y e t a l . ,1 9 8 5 ) .

I g E RF s e c r e t e d b y s y n o v i a l p l a s m a c e l l s ma y b i n d t o F ce p s i l o n r e c e p t o r s o n n e i g h b o u r i n g m a s t c e l l s . A g g r e g a t i o n o fI g E r e c e p t o r s a n d s u b s e q u e n t m e m b r a n e e v e n t s w h i c h l e a d t od e g r a n u l a t i o n m i g h t t h e n b e i n i t i a t e d f o l l o w i n g e x p o s u r e t o a na n t i g e n c o m p l e x s u c h a s s e l f - a g g r e g a t i n g I g G ( M u n t h e &N a t v i g , 1 9 7 2 ) .C o m p l e m e n t a c t i v a t i o n , w h i c h h a s b e e n w e l l d o c u m e n t e d i nt h e r h e u m a t o i d j o i n t s p a c e ( P e r k i n & Z v a i f l e r , 1 9 6 4 ; M o r l e y &R u d d y , 1 9 8 5 ; M o l l a e s & P a r i s , 1 9 8 6 ) p r o v i d e s a p o t e n t i a l l yi m p o r t a n t a l t e r n a t i v e p a t h w a y t o m a s t c e l l d e g r a n u l a t i o n v i at h e g e n e r a t i o n o f f r a g m e n t s w i t h a n a p h y l a t o x i c a c t i v i t y ( C 3 a ,C 5 a , C 4 a ) . H o w e v e r , C3a a n d C 3 a D e s A r g h a d n o a p p a r e n te f f e c t o n d i s p e r s e d s y n o v i a l m a s t c e l l p r e p a r a t i o n s . We c a n n o te x c l u d e t h e p o s s i b i l i t y t h a t h i g h e r l e v e l s o f C 3 a ( > 1 0 - I M ) ma yb e g e n e r a t e d i n v i v o c o n t i g u o u s t o s y n o v i a l m a s t c e l l s a n d t h u si n d u c e d e g r a n u l a t i o n , o r t h a t C 3 a r e c e p t o r s a r e d e g r a d e dd u r i n g e n z y m a t i c d i g e s t i o n o f o u r s y n o v i a l t i s s u e p r e p a r a t i o n s .N e v e r t h e l e s s , o u r r e s u l t s a r e c o n s i s t e n t w i t h r e p o r t s o f o t h e ri n v e s t i g a t o r s s t u d y i n g m a s t c e l l s d e r i v e d f r o m p u l m o n a r y a n di n t e s t i n a l t i s s u e ( W a r n e r e t a l . , 1 9 8 7 ) . I n f a c t , a t t h e p r e s e n t t i m e ,o n l y human d e r m a l a n d c a r d i a c m a s t c e l l s h a v e b e e n s h o w n t or e s p o n d t o t h e c o m p l e m e n t - d e r i v e d a n a p h y l a t o x i n s ( H u g l i &M u l l e r - E b e r h a r d , 1 9 7 8 ) a n d t h i s may b e m e d i a t e d i n d i r e c t l y( Y a n c e y e t a l . , 1 9 8 7 ) .

I n c r e a s e d n u m b e r s o f m a s t c e l l s h a v e b e e n d o c u m e n t e d i nb o t h RA s y n o v i u m a n d j o i n t f l u i d ( C r i s p , 1 9 6 4 ; O k a d a , 1 9 7 3 ;A t h r e y a , M o s e r & S c h u m a c h e r , 1 9 7 9 ; S a j v e i y a , 1 9 8 3 ; B r o m l e y ,F i s c h e r & W o o l e y , 1 9 8 4 ; C r i s p e t a l . , 1 9 8 4 ; G o d f r e y e t a l . , 1 9 8 4 ;F r e e m o n t & D e n t o n , 1 9 8 5 ; G r u b e r e t a l . , 1 9 8 6 ; M a l o n e e t a l . ,

1 9 8 7 ) . T h e s e c e l l s may i n f l u e n c e t h e l o c a l v a s c u l a t u r e b ye n h a n c i n g p e r m e a b i l i t y , t h u s a l l o w i n g m a c r o m o l e c u l e s a n de f f e c t o r c e l l s t o e n t e r i n t o s y n o v i a l t i s s u e f r o m t h e v a s c u l a rs p a c e . P r o d u c t s r e l e a s e d f r o m m a s t c e l l s ma y l e a d t o a n i n c r e a s ei n f i b r o b l a s t a c t i v i t y a n d ma y s t i m u l a t e e n d o t h e l i a l c e l l m i g r a -t i o n ( W a s s e r m a n , 1 9 8 4 ) . I n a d d i t i o n , m a s t c e l l l y s a t e s h a v e b e e ns h o w n t o i n d u c e s y n o v i a l a d h e r e n t c e l l s t o r e l e a s e c o l l a g e n a s ea n d P G E , a n d a s p e c i f i c m a s t c e l l p r o t e a s e ( t r y p t a s e ) i s c a p a b l eo f a c t i v a t i n g l a t e n t c o l l a g e n a s e ( G r u b e r e t a l . , 1 9 8 7 ) . T h e p r e c i s er o l e o f t h e s e c e l l s i n t h e r e m o d e l l i n g o f c o n n e c t i v e t i s s u e i s u n d e rc u r r e n t i n v e s t i g a t i o n i n o u r l a b o r a t o r y .I f m a s t c e l l s a n d t h e i r p r o d u c t s c o n t r i b u t e t o t h e p a t h o g e n e -s i s o f r h e u m a t o i d s y n o v i t i s , i t i s n e c e s s a r y t o p r o p o s e p a t h w a y sf o r a c t i v a t i o n a n d s e c r e t i o n , a n d d o c u m e n t t h e p r e s e n c e o fa c t i v a t e d m a s t c e l l s i n s i t u . We h a v e p r e s e n t e d d a t a i n t h i s r e p o r tt o s u p p o r t o u r c o n t e n t i o n t h a t s y n o v i a l m a s t c e l l s a r e c a p a b l e o fI g E - m e d i a t e d d e g r a n u l a t i o n i n v i t r o , a n d h a v e p r e v i o u s l yd o c u m e n t e d m a s t c e l l a c t i v a t i o n i n s i t u b y u l t r a s t r u c t u r a la n a l y s i s ( G r u b e r e t a l . , 1 9 8 6 ) . A p p r o x i m a t e l y o n e - t h i r d o fr h e u m a t o i d p a t i e n t s h a v e d e t e c t a b l e c i r c u l a t i n g I g E RF i n t h es e r u m b y o u r a s s a y ( C h a t p a r e t a l . , 1 9 8 6 ) a n d h e r e we s h o wc o m p a r a b l e l e v e l s i n t h e s y n o v i a l f l u i d . A g g r e g a t e d o r c o m -p l e x e d I g G , a t l e v e l s c o m p a r a b l e t o t h a t u s e d i n o u r c h a l l e n g es t u d i e s , may b e g e n e r a t e d l o c a l l y i n t h e r h e u m a t o i d j o i n t s p a c e ,a s h a s b e e n s h o w n f o r I g G a n d Ig M r h e u m a t o i d f a c t o r s( M u n t h e & N a t v i g , 1 9 7 2 ) . A l t e r n a t i v e p a t h w a y s t o m a s t c e l ls e c r e t i o n i n c l u d e b i o l o g i c a l l y a c t i v e s p e c i f i c c y t o k i n e s ( G r u b e r ,H a a k - F r e n d s c h o & K a p l a n , 1 9 8 5 ) o r a u to a n ti b o di es d i r e c t e da g a i n s t I g E ( G r u b e r e t a l . , i n p r e s s ) . I n a d d i t i o n , I g E RF m i g h ts e n s i t i z e c i r c u l a t i n g b a s o p h i l s a n d c o n t r i b u t e t o e x t r a - a r t i c u l a rf e a t u r e s o f RA, a s s u g g e s t e d b y a n i n c r e a s e d i n c i d e n c e o f I g ERF i n r h e u m a t o i d v a s c u l i t i s ( M e r i t y e t a l . 1 9 8 4 ) .

ACKNOWLEDGMENTST h i s s t u d y w a s s u p p o r t e d b y g r a n t s a v a i l a b l e t h r o u g h t h e V e t e r a n sA d m i n i s t r a t i o n a n d NIH AM 2 6 5 8 8 .

REFERENCESA T H R E Y A , B . H . , MOSER G . & S C H U M A C H E R , H . R . ( 1 9 7 9 ) R o l e o fb a s o p h i l s a n d m a s t c e l l s i n j u v e n i l e r h e u m a t o i d a r t h r i t i s . T h e M a s t

C e l l : I t s R o l e i n H e a l t h a n d D i s e a s e . ( e d . b y J . P e p y s & A . M . E d w a r d s )p p . 1 2 7 . L o n d o n , P i t m a n .A Y E N , R . , P o R A T H , J . & E R N B A C K , S . ( 1 9 6 7 ) C h e m i c a l c o u p l i n g o fp e p t i d e s a n d p r o t e i n t o p o l y s a c c h a r i d e s b y c y a n o g e n h a l i d e r . N a t u r e( L o n d o n ) 2 1 4 , 1 3 0 2 .B R O M L E Y , M . , F I S C H E R , W . D . & W O O L E Y , D . E . ( 1 9 8 4 ) M a s t c e l l s a t s i t eo f c a r t i l a g e e r o s i o n i n t h e r h e u m a t o i d j o i n t . A n n . r h e u m . D i s . 4 3 , 7 6 .C H A T P A R , P . C . , M U L L E R , D . , G R U B E R , B . & G o R E v I c , P . D . ( 1 9 8 6 )P r e v a l e n c e o f I g E r h e u m a t o i d f a c t o r ( I g E R F ) i n m i x e d c r y o g l o b u l i -n e m i a a n d r h e u m a t o i d a r t h r i t i s . C l i n . e x p . R h e u m a t o l . 4 , 1 0 6 .C O L V I N , R . B . & D V O R A K , H . F . ( 1 9 7 4 ) B a s o p h i l s a n d m a s t c e l l s i n r e n a la l l o g r a f t r e j e c t i o n . L a n c e t i , 2 1 2 .C O M M I T T E E O F T H E A M E R I C A N R H E U M A T I S M A S S O C I A T I O N ( 1 9 5 8 ) R e v i -s i o n o f d i a g n o s t i c c r i t e r i a f o r r h e u m a t o i d a r t h r i t i s . A r t h . R h e u m . 2 ,1 6 .C R I S P , J . ( 1 9 6 4 ) M a s t c e l l s i n r h e u m a t o i d a r t h r i t i s . J . R o y . S o c . M e d . 7 7 ,4 5 0 .


6/6

2 9 4 B . G r u b e r , D . B a l l a n & P . D . G o r e v i cC R I s P , A . J . , C H A P M A N , C . M . , K I R H A M , S . E . , S C H I L L E R , A . C . , KRANE

S . M . ( 1 9 8 4 ) A r t i c u l a r m a s t o c y t o s i s i n r h e u m a t o i d a r t h r i t i s . A r t h .R h e u m . 2 7 , 8 4 5 .

D A B B O U S , M . K . , WALKER R . , HANEY L . , C A R T E R , L . M . , N I C O L S O N ,G . L . & W O O L E Y , D . E . ( 1 9 8 6 ) M a s t c e l l s a n d m a t r i x d e g r a d a t i o n a ts i t e s o f tumour i n v a s i o n i n r a t mammary a d e n o c a r c i n o m a . B r . J .C a n c e r . 5 4 , 4 5 9 .

D A B B O U S , M . K . , T I P T O N D . A . & H A N E Y , L . ( 1 9 8 7 ) M a s t c e l l - m e d i a t e ds t i m u l a t i o n o f c o l l a g e n d e g r a d a t i o n b y g i n g i v a l f i b r o b l a s t s . J . d e n t a lR e s e a r c h 6 6 , 2 0 0 5 ( a b s t ) .D V O R A K , A . M . , MONAHAN, R . A . , O S A G E , J . E . & D I C K E R S O N , G . R .( 1 9 7 8 ) M a s t c e l l d e g r a n u l a t i o n i n C r o h n ' s d i s e a s e . L a n c e t , i , 4 9 8 .F R E E M O N T , A . J . & D E N T O N , J . ( 1 9 8 5 ) D i s e a s e d i s t r i b u t i o n o f s y n o v i a lf l u i d mast c e l l s a n d c y t o p h a g o c y t i c m o n o n u c l e a r c e l l s i n i n f l a m m a -t o r y a r t h r i t i s . A n n . r h e u m . D i s . 4 4 , 3 1 2 .G O D F R E Y , H . P . , I LA R DI , L . , E N G B E R , W. & GRAZIANO F . M . ( 1 9 8 4 )Q u a n t i t a t i o n o f human s y n o v i a l mast c e l l s i n r h e u m a t o i d a r t h r i t i s

a n d o t h e r r h e u m a t i c d i s e a s e s . A r t h . R h e u m . 2 7 , 8 5 2 .G R U B E R , B . L . , H A A K - F R E N D S C H O , M. & K A P L A N , A . P . ( 1 9 8 5 ) Mono-

n u c l e a r c e l l f a c t o r i n d u c e s s e c r e t i o n o f s y n o v i a l m as t c e l l s . A r t h .R h e u m . 2 8 , 5 7 0 ( a b s t ) .

G R U B E R , B . , P O Z N A N S K Y , M . , B o s s , E . , P A R T I N , J . , G O R E V I C , P . ,K A P L A N , A . P . ( 1 9 8 6 ) C h a r a c t e r i z a t i o n a n d f u n c t i o n a l s t u d i e s o fr h e u m a t o i d s y n o v i a l mast c e l l s : a c t i v a t i o n b y s e c r e t a g o g u e s , a n t i - I g Ea n d a h i s t a m i n e - r e l e a s i n g l y m p h o k i n e . A r t h . R h e u m . 2 9 , 9 4 4 .

G R U B E R , B . L . , M A R C H E S E , M . J . & S C H W A R T Z , L . B . ( 1 9 8 7 ) R e g u l a t i o no f s y n o v i a l c o l l a g e n a s e a c t i v a t i o n b y mast c e l l p r o t e a s e s . A r t h .R h e u m . 3 0 , S 7 ( a b s t ) .

G R U B E R , B . L . , M A R C H E S E , M . J . , S C H W A R T Z , L . B . , I R A N I , A . M . &R A M A M U R T H Y , N . S . ( 1 9 8 7 ) R e g u l a t i o n o f s y n o v i a l c o l l a g e n a s e a c t i -v a t i o n b y m a s t c e l l p r o t e a s e s . A r t h . R h e u m . 3 0 , 5 3 3 ( a b s t ) .

G R U B E R , B . L . , K A U F M A N , L . D . , M A R C H E S E , M . J . , K A P L A N , A . P . A n t i -I g E a u t o a n t i b o d i e s i n S L E : p r e v a l e n c e a n d b i o l o g i c a c t i v i t y . A r t h .R h e u m . ( i n p r e s s ) .

H A N N E S T A D , K . & M E L L B Y E , O . J . ( 1 9 6 7 ) R h e u m a t o i d f a c t o r i n s y n o v i a le f f u s i o n s : l o c a l p r o d u c t i o n a n d c o n s u m p t i o n . C l i n . E x p . I m m u n o l . 2 ,5 0 1 .H A U S E N , H . B . , L O B B , C . M . & T A Y L O R , R . E . ( 1 9 7 6 ) A c t i v a t i o n o ff i b r o b l a s t p r o c o l l a g e n a s e b y m a s t c e l l p r o t e a s e s . B i o c h e m . B i o p h y s .A c t a . 4 3 8 , 2 7 3 .

H A W K I N S , R . A . , C L A M A N , H . N . , CLARK R . A . & S T E I G E R W A L D , J . C .( 1 9 8 5 ) I n c r e a s e d d e r m a l m a s t c e l l p o p u l a t i o n s i n p r o g r e s s i v e s y s t e m i cs c l e r o s i s : a l i n k i n c h r o n i c f i b r o s i s ? A n n . i n t . M e d . 1 0 2 , 1 8 2 .H U G L I , T . E . & M U L L E R - E B E R H A R D , H . J . ( 1 9 7 8 ) A n a p h y l a t o x i n C 3 a a n d

C 5 a . A d v . I m m u n o l . 2 6 , 1 . i .H U N D E R , G . G . & G L E I C H , G . J . ( 1 9 7 4 ) I m m u n o g l o b u l i n E ( I g E ) l e v e l s i n

s e r u m a n d s y n o v i a l f l u i d i n r h e u m a t o i d a r t h r i t i s . A r t h . R h e u m . 1 7 ,9 5 5 .K A W A N A M I , O . , F E R R A N S , W . J . , F U L M E R , J . D . & C R Y S T A L , R . G . ( 1 9 7 9 )U l t r a s t r u c t u r e o f p u l m o n a r y m a s t c e l l s i n p a t i e n t s w i t h f i b r o t i c l u n gd i s o r d e r s . L a b I n v e s t . 4 0 , 7 1 7 .L I C H T E N S T E I N , L . M . & O S L E R , A . G . ( 1 9 6 4 ) S t u d i e s on t h e m e c h a n i s m so f h y p e r s e n s i t i v i t y p h e n o m e n o n . I X . H i s t a m i n e r e l e a s e f r o m humanl e u k o c y t e s b y r a g w e e d p o l l e n a n t i g e n s . J . e x p . M e d . 1 2 0 , 5 0 7 .

L Y K K E , A . W . J . , S C H O N E L L , M . E . & S T E W A R T , B . W . ( 1 9 7 9 ) A t y p i c a lmast c e l l d e g r a n u l a t i o n a n d l o c a l h y d r o p i c d e g e n e r a t i o n o f v e n u l a re n d o t h e l i u m i n d i f f u s e f i b r o s i n g a l v e o l i t i s . E x p e r i e n t i a 3 5 , 1 4 9 2 .

M A L O N E , D . A . , I R A N I A . M . & S C H W A R T Z , L . B . ( 1 9 8 6 ) M a s t c e l ln u m b e r s a n d h i s t a m i n e l e v e l s i n s y n o v i a l f l u i d s f r o m p a t i e n t s w i t hd i v e r s e a r t h r i t i d e s . A r t h . R h e u m . 2 9 , 9 5 6 .M A L O N E , D . G . , W I L D E R , R . C . , S A A V E D R A - D E L G A D O , A.M. & MET-

C A L F E , D . D . ( 1 9 8 7 ) M a s t c e l l n u m b e r s i n r h e u m a t o i d s y n o v i a l t i s s u e s :c o r r e l a t i o n w i t h q u a n t i t a t i v e measures o f l y m p h o c y t i c i n f i l t r a t i o na n d m o d u l a t i o n b y a n t i - i n f l a m m a t o r y t h e r a p y . A r t h . R h e u m . 3 0 , 1 3 0 .

M c A U L E Y , R . C . & S O M M E R S , S . C . ( 1 9 6 1 ) M a s t c e l l s i n n o n s p e c i f i cu l c e r a t i v e c o l i t i s . Am. J . d i g . D i s . 6 , 2 3 3 .M E R I T Y , K . , F A L U S , A . , E R H A R D T , C . C . & M A I N E , R . N . ( 1 9 8 4 ) I g E a n d

I g E - r h e u m a t o i d f a c t o r s i n c i r c u l a t i n g immune c o m p l e x e s i n r h e u m a -t o i d a r t h r i t i s . A n n . r he um . D i s . 4 3 , 2 4 6 .M O L L A E S , T . E . & P A R I S , A . ( 1 9 8 6 ) C o m p l e m e n t a c t i v a t i o n i n s y n o v i a lf l u i d a n d t i s s u e f r o m p a t i e n t s w i t h j u v e n i l e r h e u m a t o i d a r t h r i t i s . A r t h .

R h e u m . 2 9 , 1 3 5 9 .M O R L E Y , G . & R U D D Y , S . ( 1 9 8 5 ) E l e v a t e d C3 a n a p h y l a t o x i n l e v e l s i ns y n o v i a l f l u i d s f r o m p a t i e n t s w i t h r h e u m a t o i d a r t h r i t i s . A r t h . R h e u -

m a t i s m . 2 8 , 1 0 8 9 .M U N T H E , E . & N A T V I G , J . B . ( 1 9 7 2 ) I m m u n o g l o b u l i n c l a s s e s , s u b c l a s s e s

a n d c o m p l e x e s o f I g G r h e u m a t o i d f a c t o r i n r h e u m a t o i d p l a s m a c e l l s .C l i n . e x p . I m m u n o l . 1 2 , 5 5 .N A T B O N Y , S . F . , P H I L I P S , M . , E L I A S , J . M . & K A P L A N , A . P . ( 1 9 8 3 )H i s t o l o g i c s t u d i e s o f c h r o n i c i d i o p a t h i c u r t i c a r i a . J . A l l e r g y c l i n .

I m m u n o l . 7 1 , 1 7 7 .O K A D A , J . ( 1 9 7 3 ) T h e m a s t c e l l i n s y n o v i a l m e m b r a n e o f p a t i e n t s w i t hj o i n t d i s e a s e s . J p n . J . o r t h o p . S u r g . 4 7 , 6 5 7 .P E R K I N , I . & Z V A I F L E R , N . J . ( 1 9 6 4 ) H e m o l y t i c c o m p l e m e n t i n s y n o v i a lf l u i d . J . c l i n . I n v e s t . 4 3 , 1 3 7 2 .P E R M I N , H . , S T A H L S K O V , P . , N O R N , S . & J U H L , F . ( 1 9 7 8 ) B a s o p h i l

h i s t a m i n e r e l e a s e b y RNA, DNA a n d a g g r e g a t e d I g G e x a m i n e d i nr h e u m a t o i d a r t h r i t i s a n d s y s t e m i c l u p u s e r y t h e m a t o s u s . A l l e r g y 3 3 ,1 5 .P E R M I N , H . & E G E S K J O L D , E . M . ( 1 9 8 2 ) I g E a n t i - I g G a n t i b o d i e s i np a t i e n t s w i t h j u v e n i l e a n d a d u l t r h e u m a t o i d a r t h r i t i s i n c l u d i n g F e l t y ' s

s y n d r o m e . A l l e r g y 3 7 , 4 2 1 .P E R M I N , H . , S T A H L S K O V , P . & N O R N , S . ( 1 9 8 3 ) B a s o p h i l h i s t a m i n er e l e a s e i n d u c e d b y l e u k o c y t e n u c l e i i n p a t i e n t s w i t h r h e u m a t o i da r t h r i t i s . A l l e r g y 3 8 .S A J V E I Y A K . ( 1 9 8 3 ) S y n o v i a l m a s t c e l l s . I n d i a n J . P a t h o l . M i c r o b i o l . 2 6 ,1 1 1 .S E V E R S O N , A . R . ( 1 9 6 9 ) M a s t c e l l s i n a r e a s o f e x p e r i m e n t a l b o n er e s o r p t i o n a n d r e m o d e l l i n g . B r . J . e x p . P a t h o l . 5 0 , 1 7 .S H A F F , B . E . & B E A V E N , M . A . ( 1 9 7 9 ) I n c r e a s e d s e n s i t i v i t y o f t h e

e n z y m a t i c i s o t o p i c a s s a y o f h i s t a m i n e : m e a s u r e m e n t o f h i s t a m i n e i np l a s m a a n d s e r u m . A n a l . B i o c h e m . 9 4 , 4 2 5 .S H I C H I K A W A , K . , T S U J I M O T O , M. & N I S H I O K A , T . ( 1 9 8 5 ) H i s t o p a t h o l o g y

o f e a r l y s a c r o i l i t i s a n d e n t h e s i t i s i n a n k y l o s i n g s p o n d y l i t i s . I nA d v a n c e s o f I n f l a m m a t i o n R e s e a r c h , V o l . 9 , T h e S p o n d y l o a r t h r o p a t h -i e s ( E d . b y M. Z i f f & S . B . C o h e n ) p p . 1 5 . R a v e n P r e s s , Ne w Y o r k .

S M I L E Y , J . D . , H O F F M A N , W . L . , M O O R E , S . E . & P A R A D I E S , L . H . ( 1 9 8 5 )T h e h u m o r a l i m m u n e r e s p o n s e o f t h e r h e u m a t o i d s y n o v i u m . S e m i n .A r t h r i t i s . R h e u m . 1 4 , 1 5 1 .W A R N E R , J . A . , B A S C O M , R . , K A G E Y - S O B O T K A , A . , L I C H T E N S T E I N , L . M .( 1 9 8 7 ) H e t e r o g e n e i t y o f human m a s t c e l l s . J . a l l e r g y C l i n . I m m u n o l .7 9 , 1 7 9 ( a b s t ) .W A S S E R M A N , S . I . ( 1 9 8 4 ) C u r r e n t C o m m e n t : T h e m a s t c e l l a n d s y n o v i a li n f l a m m a t i o n . O r w h a t ' s a n i c e c e l l l i k e y o u d o i n g i n a j o i n t l i k e t h i s ?A r t h r i t i s R h e u m . 2 7 , 8 4 1 .W A T A N A B E , S . , W A T A N A B E , K . , O I S H I , T . , A I B A , M. & K A G E Y A M A , K .( 1 9 7 4 ) M a s t c e l l s i n t h e r a t a l v e o l a r s e p t a u n d e r g o i n g f i b r o s i s a f t e ri o n i z i n g r a d i a t i o n : u l t r a s t r u c t u r a l a n d h i s t o c h e m i c a l s t u d i e s . L a bi n v e s t . 3 1 , 5 5 5 .W I C H M A N N , B . E . ( 1 9 5 5 ) T h e mast c e l l c o u n t d u r i n g t h e p r o c e s s o fw o u n d h e a l i n g . A c t a . P a t h o l . M i c r o b i o l . S c a n d . ( S u p p l ) . 1 0 8 , 5 .Y A N C E Y , K . B . , B I E L O R Y , L . , W R I G H T , R . , Y O U N G , N . , F R A N K , M.M. &

L A W L E Y , T . J . ( 1 9 8 7 ) P a t i e n t s w i t h b o n e m a r r o w f a i l u r e d e m o n s t r a t ed e c r e a s e d c u t a n e o u s r e a c t i v i t y t o hu m a n C 5 a . J . i n v e s t . D e r m . 8 8 , 3 8 8 .

Z U R A W , B . L . , O ' H A I R , C . H . , V A U G H A N , J . H . , M A T H I S O N , D . A . , C U R D ,J . G . & K A T Z , D . H . ( 1 9 8 1 ) I m m u n o g l o b u l i n E - r h e u m a t o i d f a c t o r i nt h e s e r u m o f p a t i e n t s w i t h r h e u m a t o i d a r t h r i t i s , a s t h m a a n d o t h e rd i s e a s e s . J . c l i n . I n v e s t . 6 8 , 1 6 1 0 .

quantification in synovial fluid fr

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