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Publicación de la Asociación Toxicológica Argentina

Buenos Aires - Argentina

Volumen 13Nº 2

Diciembre 2005

Acta Toxicológica Argentina es el órgano de difusión científica de la Asociación Toxicológica Argentina.Tiene por objetivo básico la publicación de trabajos originales, comunicaciones breves, actualizaciones

o revisiones, temas de divulgación, comentarios bibliográficos, notas técnicas y cartas al editor.Asimismo, se publicarán noticias relacionadas con los diferentes campos de la Toxicología.

ASOCIACIONTOXICOLOGICAARGENTINA

ActaToxicológica

ArgentinaAsociación civil (Personería Jurídica Nº 331/90)Adherida a la IUTOX

´´

Asociación Toxicológica Argent ina

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Acta Toxicológica Argentina

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Enrique Tourón Argentina

Norma Vallejo Universidad de Bs. As. - Argentina

Eduardo Zerba CIPEIN - CITEFA / CONICET - Argentina

Volumen 13Nº 2Diciembre 2005

ActaToxicológica

Argentina

INDICE

(CONTENTS)

Los resúmenes de los artículos publicados en Acta Toxicológica Argentina se pueden consultar en la base de datos LILACS, en ladirección literatura científica del sitio www.bireme.br

Acta Toxicológica Argentina está indexada en el Chemical Abstracts. La abreviatura establecida por dicha publicación para estarevista es Acta Toxicol. Argent.

Calificada como Publicación Científica Nivel 1 por el Centro Argentino de Información Científica y Tecnológica (CAICYT), en el marcodel Proyecto Latindex

Acta Toxicológica Argentina (ISSN 0327-9286), órgano oficial de la Asociación Toxicológica Argentina (ATA)Se publica bianualmente. Registro de la Propiedad Intelectual Nº 404.297

Alsina 1441 Of. 302 (1088) Buenos Aires - Argentina. Tel/Fax: 54-11 4381-6919

DETERMINAÇÃO DE RESÍDUOS DE INSETICIDAS CARBAMATOS EM ALIMENTOSINFANTIS UTILIZANDO BIOSSENSORES AMPEROMÉTRICOS À BASE DE ENZIMASACETILCOLINESTERASES MUTANTESDETERMINATION OF CARBAMATE INSECTICIDE RESIDUES IN BABY FOOD BY USINGAMPEROMETRIC BIOSENSORS BASED ON MUTANT ACETHYLCHOLINESTERASEENZYMESSilva Nunes G.; Oliveira Marques C. V.; Castillo A.; Badea M.; Marty J. 1

SPHINGANINE/SPHINGOSINE (SA/SO) RATIO AND INTAKE OF FUMONISINCONTAMINATED TORTILLAS IN A MEXICAN POPULATIONRELACIÓN ESFINGANINA/ESFINGOSINA (SA/SO) Y CONSUMO DE TORTILLASCONTAMINADAS CON FUMONISINAS EN UNA POBLACIÓN MEXICANALanderos, P.; Reyes W.; Torres A. M.; Rojo F.; Chulze S. N. 8

JORNADAS INTERDISCIPLINARIAS DE TOXICOLOGÍA ALIMENTARIAResúmenes de Conferencias, Mesas redondas y Comunicaciones libresAbstracts of conferences, Symposia and poster presentations 12

VI CONGRESO LATINOAMERICANO DE MUTAGENESIS, CARCINOGENESISY TERATOGENESIS AMBIENTALXIV CONGRESO ARGENTINO DE TOXICOLOGIAXXIV JORNADAS INTERDISCIPLINARIAS DE TOXICOLOGIA 25

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Acta Toxicol. Argent. (2005) 13 (2): 1-7

DETERMINAÇÃO DE RESÍDUOS DE INSETICIDAS CARBAMATOS EM ALI-MENTOS INFANTIS UTILIZANDO BIOSSENSORES AMPEROMÉTRICOS À

BASE DE ENZIMAS ACETILCOLINESTERASES MUTANTES

Gilvanda Silva Nunes (1)*, Clara Virgínia Vieira Carvalho Oliveira Marques (1),Alicia Castillo (2), Mihaela Badea (3) & Jean-Louis Marty (4)

(1) Núcleo de Análise de Resíduos de Pesticidas, NARP, Departamento de Tecnologia Química, CCET, Universidade Federaldo Maranhão - Av. Portugueses, s/n – Bacanga. 65080-040, São Luís, MA.

(2) Facultad de Ciencias Agrarias, UNNE, Sgto. Cabral, 2131, 3400 – Corrientes, Argentina.(3) Faculty of Medicine – Transilvania University of Brasov – 56, Nicolae Balcescu St., 2200, Brasov, Romenia.

(4) BIOMEM Laboratoire, Centre de Phytopharmacie, Université de Perpignan - 52, Av. Paul Alduy. 66860, Perpignan, Franca* Autor correspondente: [email protected]

ABSTRACT. Silva Nunes G.; Oliveira Marques C. V.; Castillo A.; Badea M.; Marty J. Determination of carbamate insecticideresidues in baby food by using amperometric biosensors based on mutant Acethylcholinesterase enzymes. Acta Toxicol.Argent. (2005) 13 (2): 1-7. N-methylcarbamates (NMCs) are one of the most employed insecticide classes because of their lowpersistence and moderate toxicity for warm-blooded living organisms. However, their presence in food can affect seriously thehuman health, mainly kids whose defense systems are less mature against toxic chemicals. In this work, residues of some NMCswere detected in infant formula by employing a conventional HPLC/UV method and also by using an acethylcholinesterase(AChE)-based biosensor. The biosensor was based on screen-printed electrodes containing the electronic mediator 7,7,8,8-tetra-cyanoquino-dimethane (TCNQ) and the NMC-sensitive genetically modified AChE (from Drosophila melanogaster) immobilizedon a polymeric matrix formed by poly(vinyl alcohol) bearing styrylpyridinium groups (PVA-SbQ). Inhibition constants for the NMCswere also calculated and the relative enzyme inhibition was proportional to the pesticide content in the samples. Residues ofNMCs (carbaryl and aldicarb) were extracted from spiked samples by a miniaturized SPE method, and the resulting extracts wereanalyzed by both methods. For biosensor analysis, the extract was 10-fold concentrated with N2 steam before dilution withphosphate buffer. Recoveries varied from 80 to 85% (RSD: 5-12%) and from 56 to 91% (RSD: 6-26%), for HPLC and AChE-biosensor, respectively. For carbaryl insecticide, a good correlation was observed between HPLC and biosensor methods. Thiswork has demonstrated the interesting potential of AChE-biosensors that may enormously improve the detection limit of anti-cholinesterase pesticides and also be used for toxicological evaluations.

RESUMEN. Silva Nunes G.; Oliveira Marques C. V.; Castillo A.; Badea M.; Marty J. Determinación de residuos de insectici-das carbamatos em alimentos de bebés utilizando biosensores amperométricos basados en enzimas acetilcolinestera-sas mutantes. Acta Toxicol. Argent. (2005) 13 (2): 1-7. Los N-metilcarbamatos (NMCs) son algunos de los insecticidas másempleados debido a su baja persistencia y moderada toxicidad para los organismos de sangre caliente. Sin embargo, su pre-sencia en los alimentos puede afectar seriamente la salud humana, especialmente en los niños, por sus defensas bajas paralos productos tóxicos. En este trabajo, residuos de algunos NMCs han sido detectados en alimentos para bebés usandoHPLC/UV y un biosensor basado en la enzima acetilcolinesterasa (AChE). El biosensor fue del tipo de electrodos serigrafados,conteniendo el mediador electrónico 7,7,8,8-tetracianoquinometano (TCNQ) y la enzima AChE mutante (Drosophila melano-gaster), sensible a los NMCs y inmovilizada sobre una matriz polimérica formada por alcohol polivinílico, unidas a grupos esti-rilpiridínicos (PVA-SbO). Las constantes de inhibición para los NMCs fueron también calculadas, y la inhibición relativa de laenzima fue proporcional al contenido de los pesticidas en las muestras. Los residuos de los NMCs (carbaril y aldicarb) fueronextraídos de las muestras usando un método SPE miniaturizado y los extractos finales, analizados por ambos métodos. Parala determinación con biosensor, el extracto, concentrado 10 veces con N2, fue diluido con tampón fosfato. Las recuperacio-nes variaron del 80 al 85% (RSD: 5-12%) y del 56 al 91% (RSD: 6-26%), para HPLC y AChE-biosensor, respectivamente. Seobservó una buena correlación para carbaril entre ambos métodos. Este trabajo destacó el interesante potencial analítico quetienen los AChE-biosensores, ya que los mismos pueden ampliar enormemente el límite de detección de los pesticidas anti-colinesterasas y también ser usados en evaluaciones toxicológicas.

Keywords: carbamate insecticides; amperometric biosensor; baby food.Palavras-clave: carbamatos; biosensor amperométrico; alimentos de bebés.Palavras-chave: inseticidas carbamatos; biossensor amperométrico; alimentos infantis.

INTRODUÇÃOA principal estratégia no combate e prevenção depragas agrícolas tem sido ainda o intenso uso depesticidas1. Durante a última década, a quantida-de e variedade de pesticidas aplicados em frutase vegetais aumentou verticalmente. Entre os ali-mentos propensos a se encontrarem resíduos depesticidas encontram-se as formulações infantis,nas quais o próprio processo de fabricação con-tribui para a concentração desses resíduos. Como intuito de monitorar eventuais resíduos de pes-ticidas no ambiente e em alimentos, métodos ana-líticos têm sido desenvolvidos, e tais métodos sãobaseados em técnicas cromatográficas, em geral

caras e demoradas.Os carbamatos compreendem uma importanteclasse de pesticidas, notadamente devido à suabaixa persistência no ambiente e baixa toxicidadepara mamíferos. Dentre os carbamatos, a classedos N-metilcarbamatos (NMC’s) têm sido uma dasmais conhecidas e utilizadas2. Similarmente aosinseticidas organofosforados (OP’s), o modo deação dos inseticidas NMC’s baseia-se na inibiçãoda atividade enzimática da enzima acetilcolineste-rase, AChE2-4. Essa capacidade inibidora tem sidoexplorada por nosso grupo de trabalho como prin-cípio de funcionamento de biossensores altamen-te sensíveis, capazes de detectar pequenas quan-tidades desses contaminantes em alimentos5-7 e

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no ambiente8-11.O princípio de detecção doscompostos anticolinesterasescom biossensores é baseado nainativação parcial da enzima, empresença dos inibidores3-11. Otratamento da amostra é mínimo,quando se utiliza o biossensor, econsiste geralmente do ajuste dopH. A medida de inibição podeser feita diretamente mergulhan-do-se o sensor na amostra, casoesta seja líquida ou possa serliquefeita 6,7,10. A inibição relativaé determinada por comparaçãocom curvas de inibição construí-das a partir de soluções padrãodos inseticidas em estudo5-8.Nesse trabalho, foi desenvolvido um biossensorcontendo uma enzima AChE geneticamentemodificada, altamente sensível aos inseticidasNMC’s selecionados (carbaril e carbofuran).Outros resultados de pesquisa já foram publica-dos pelo NARP (Núcleo de Análise de Resíduos dePesticidas, UFMA), utilizando enzimas mutantespara melhorar a sensibilidade dos sensores emrelação a outros pesticidas, como por exemplo, oinseticida OP metamidofós9,11, além de outrosOP’s, como clorpirifós, clorpirifós oxon, clorpirifósmetílico oxon e paraoxon etílico12,13. O objetivoprincipal do presente trabalho foi preparar senso-res o mais sensíveis possível, para detecção deresíduos dos inseticidas selecionados em alimen-tos infantis, e comparar as repostas com ummétodo analítico tradicional. O efeito de matrizsobre o comportamento do biossensor foi estuda-do durante a análise de amostras não-tratadas.

PARTE EXPERIMENTALMATERIAIS, REAGENTES E SOLUÇÕESA enzima AChE comercial, extraída da enguia elé-trica (ee), foi de procedência Sigma. A enzimamutante AChE (dros) B-012 foi obtida por modifi-cação genética, no Laboratório de Genética Apli-cada da Universidade de Toulouse, França, e imo-bilizada no sensor serigrafado de três canais, pre-parado na Universidade de Perpignan, França.Foi utilizado, como substrato enzimático, o clore-to de acetiltiocolina (ATChCl, Merck), tendo asconcentrações das soluções variado de 1 a 5mmol L-1. Durante as reações enzimáticas, o pHdo meio foi controlado com solução-tampão fos-fato, PBS (pH 7,5) (Merck). Para construção dos eletrodos serigrafados, oseguinte material foi usado: pastas de prata(Electrodag PF-410, 423SS, 6037SS, marcaAcheson, Plymouth, Inglaterra) (preparo dos con-tatos elétricos); grafite Timrex T15 (marca Lonza,Basel, Suíça) (preparo dos eletrodos auxiliar e detrabalho); mediador eletroquímico tetracioanoqui-nodimetano (TCNQ, Sigma), misturado ao grafite,em presença de uma solução a 3% (m/v) de hidro-

xietilcelulose (HEC, 30% na pasta de grafite). Oprocedimento de preparo dos eletrodos foi previa-mente descrito9-11 e está esquematizado na Fig. 1. Para imobilização enzimática, foi empregada atécnica de encapsulamento da enzima em um gelde álcool polivinílico contendo grupamentos esti-rilpiridínicos (PVA-SbQ, Tókio, Japão). Foi prepa-rada uma pasta enzimática contendo 30 % (v/v)de PVA-SbQ e 70 % (v/v) da solução da enzimaAChE (preparada em PBS pH 7,5). A atividadeenzimática na solução de trabalho foi previamen-te determinada pelo método espectrofotométricodescrito por Ellman14, modificado por Nunes etal.11. Um volume de 2µL da mistura PVA-SbQ +AChE (dros) foi depositado manualmente nasuperfície do eletrodo de trabalho, sendo que aatividade final da enzima foi de 1mU/eletrodo. Emseguida, os biossensores permaneceram emrepouso durante um período de no mínimo 4 h soblâmpada de neônio, a uma temperatura de 4ºC.Após a fotopolimerização, os eletrodos foram dei-xados em repouso em refrigerador por no mínimo2 dias antes do uso10,11.

EQUIPAMENTOS, ACESSÓRIOS E MEDI-DAS ANALÍTICASPara as medidas espectrofotométricas, foram uti-lizados os seguintes equipamentos: espectrofotô-metro diode-array, Hewlett-Packard, modelo 8451A (Palo Alto, EUA) e espectrofotômetro UV-VisBeckman, modelo DU 520 (Beckman Intruments,Inc., Fullerton, Califórnia, EUA). As medidas ele-troquímicas foram realizadas com um potenciosta-to clássico, Methrohm, modelo 641 VA (MethrohmAG Herisau, Suíça), acoplado a um registradorBD40 (Kipp & Zonen, Delft, Holanda). Para análisecromatográfica, foi utilizado um sistema HPLC com-posto de um detector espectrofotométrico, módu-lo SPD-6� (l variando de 195 a 700 nm), da Shimadzu,acoplado a uma bomba binária, modelo 110A(Beckman Instruments, EUA). A eluição dos com-postos foi efetuada em uma coluna C18 (InertsilODS3, diâmetro de partículas de 5µm, 250 mm decomprimento e 4,6 mm de diâmetro interno). Acorrida cromatográfica foi desenvolvida no modo

Figura 1. Eletrodo a serigrafia de três canais: eletrodo auxiliar (grafite); eletrodo de refer-ência (Ag/AgCl), e eletrodo de trabalho (grafite modificado com TCNQ/HEC). A partecentral circular consiste do eletrodo de trabalho; nesta parte a enzima é imobilizadamanualmente.

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isocrático, com fase móvel CH3CN/H2O (45:55, v/v).

EXTRAÇÃO DOS PESTICIDAS A metodologia foi baseada em um procedimentode extração em fase sólida (SPE) miniaturizado.Amostras de alimentos infantis (creme de cenourae papinha de maçã) foram adquiridas no super-mercado local e analisadas no mesmo dia, semresfriamento. Após pesagem (10g), procedeu-se àextração em presença de 10 mL da mistura meta-nol/acetonitrila (1:1), sob agitação constante (300PM, durante 10 min) em mesa agitadora. O extra-to foi centrifugado e 5 mL do sobrenadante foicoletado e imediatamente submetido a sucessivaspartições líquido-líquido com 10 e 5 mL de diclo-rometano. O extrato orgânico foi evaporado até àsecura em rotaevaporador e retomado com 0,5mL de metanol, sendo então submetido à etapade cleanup em cartucho SPE C18 (500 mg,Bakerbond-Baker, Califórnia, USA). Os eluatosforam evaporados até à secura pela passagem deuma corrente de N2, tendo sido os resíduos sub-metidos a dois tratamentos diferentes: 1) retoma-dos com 1 ml da fase móvel (acetonitrila/água,45:55) e injetados diretamente no sistema HPLC/UV, e 2) retomados com acetonitrila e diluídos dezvezes com PBS pH 7,5, a fim de eliminar o efeitodo solvente, antes da análise com o biossensor.Todos os solventes utilizados nessa etapa foramde grau resíduo de pesticida (Merck, Augusburg,Alemanha).

ENSAIOS DE RECUPERAÇÃOAlgumas amostras foram fortificadas com con-centrações de 0,1 e 0,5 mg Kg-1 dos pesticidascarbaril e carbofuran, tendo sido depois submeti-das ao procedimento de extração. 20 µL dosextratos obtidos foram diretamente injetados nosistema cromatográfico; 500 µL foram diluídoscom PBS, para análise utilizando o biossensor. Obiossensor foi mergulhado no extrato final tampo-nado, e a medida de inibição efetuada conforme oprocedimento esquematizado na Fig. 2. As con-centrações finais dos pesticidas presentes nasamostras e as recuperações foram determinadospara ambos os métodos. As análises comHPLC/UV foram realizadas em duplicata, e as como biossensor, em triplicata.

RESULTADOS E DISCUSSÃORESPOSTA E CARACTERIZAÇÃOELETROQUÍMICA DOS BIOSSENSORESO sensor eletroquímico continha, como mediador,a espécie eletroativa tetracianoquinodimetano(TCNQ). A interação entre o mediador e o substra-to (acetiltiocolina, ATCh), responsável pela cap-tação dos elétrons gerados durante a reação dehidrólise enzimática, já foi discutido em outros tra-balhos9-12. O uso desse mediador tem sido desuma importância na construção de sensores àbase de enzimas colinesterases, pois nesse caso,o potencial de trabalho, que antes era na faixa de

300-500 mV em presença de outros tipos de ele-trodos quimicamente modificados4-7, passou a sermenor (~100 mV) pela modificação do eletrodo detrabalho (grafite) com o TCNQ9-13; isso tem contri-buído significativamente para a redução das inter-ferências eletroquímicas provocadas por materiaiseletroativos que porventura estejam presentes nasmatrizes analisadas. A redução desse efeito de matrizé muito importante, já que os alimentos infantis àbase de vegetais em geral contém diversassubstâncias (proteínas, carboidratos, lipídios, etc),que poderiam responder eletroquimicamente 9,10. Um dos fatores que contribuem muito para a sen-sibilidade dos sensores amperométricos é a formade fixação da enzima no eletrodo de trabalho. Oprocedimento de fixação da AChE por encapsula-mento em PVA-SbQ tem sido empregado comsucesso por outros grupos de pesquisa15,16, e temlevado à construção de sensores altamente repro-dutíveis, uma vez que a camada biossensível nãotende a se desprender dentro da solução do subs-trato durante as medidas eletroquímicas10.Trabalhos anteriores exploraram a fixação daAChE com glutaraldeído5-7; contudo, sabe-se queesse agente de ligação cruzada, embora tenha acapacidade de produzir biossensores bastanterobustos e estáveis, possui o inconveniente dedes-naturar parcialmente a AChE logo no momen-to do preparo da pasta enzimática, o que obriga aimobilizar uma quantidade bem maior da enzi-ma10,16.

REAÇÃO ENZIMA-SUBSTRATO EREPRODUTIBILIDADE DOS BIOSSENSO-RESInicialmente, foi efetuada a medida cronoampero-métrica, utilizando-se um sensor contendo umaAChE comercial (extraída da enguia elétrica, Sig-ma), em potencial fixo de 100 mV9-11, e sob agi-tação constante, para avaliar o comportamento dacorrente estacionária obtida durante 20 min de

Figura 2. Esquema de inibição enzimática. Os valores decorrente foram registrados durante a reação E-S, em presençade tampão PBS pH 7,5, antes e após inibição. A inibição foiefetuada mediante incubação do biossensor no extrato diluído,contendo resíduos dos inibidores (carbaril e aldicarb).

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reação enzima-substrato (reação E-S). Observou-se que, em tempos acima de 10 min, não houvevariação significativa de corrente e que, após 5min de reação E-S, os valores de corrente forammais reprodutíveis do que os obtidos com osdemais tempos avaliados, com coeficiente de va-riação médio de 6,8 %. Foi escolhido, assim, otempo de 5 min para medida do sinal resultante dareação E-S. Após estabilização das medidas, aintensidade de corrente registrada variou entre150 e 200 nA, sendo essa faixa adequada para osensaios de inibição da AChE (dros).

SENSIBILIDADE E SELETIVIDADE DOSMÉTODOS ANALÍTICOS

A Fig. 3 apresenta as curvasanalíticas obtidas para o inseti-cida carbaril, utilizando as téc-nicas analíticas por HPLC/UV(a) e biossensor amperométrico(b). As curvas apresentaramconformações bem diferentes.Aquela obtida por HPLC/UVmostrou-se linear dentro de umafaixa de trabalho mais ampla.Isto é particularmente interes-sante quando se deseja anali-sar amostras mais concentra-das, como, por exemplo, amos-tras de formulações comerciaisou mesmo de alimentos. Poroutro lado, a curva obtida como biossensor apresentou umatendência logarítmica em con-

centrações acima de 2,5 µg L-1, e umafaixa de trabalho bastante restrita, porémcom limites de detecção (LD, em mg L-1)bem menores, ideais para determinaçõesde resíduos em amostras de água ou ava-liações toxicológicas em amostras biológi-cas (sangue, urina, suor, etc.), onde ape-nas traços do pesticida podem ser encon-trados. Para efeito de comparação, a Tab.1 mostra as faixas lineares de trabalho e ovalores de LD obtidos com soluções diluí-das dos compostos carbaril e aldicarb,preparadas em água deionizada. A técnicacromatográfica apresentou maior sensibili-

dade para o inseticidacarbofuran (LD de 0,4mg L-1), enquanto que,com o biossensor, umLD bem mais elevado(250 mg L-1) foi encon-trado. Isso vem demons-trar que a engenhariagenética, nesse caso,promoveu uma modifi-cação tal na estruturada enzima AChE prove-niente da Drosophilamelanogaster, que a sen-

TécnicaAnalítica

Faixa detrabalho(µg L-1)

Limite dedetecção

(LD, µg L-1)

Procedimentopara cálculo

do LD

HPLC/UV CL: 30,0-15.000CF: 2,5-10.000

CL: 25,0CF: 0,4

Razão sinal/ruídocom valor 3

BiossensorAmperométrico

CL: 0,002-0,2CF: 265-1.250

CL: 0,005CF: 250

10% de InibiçãoRelativa da

enzima AChE(dros) B-012

Tabela 1. Limites de detecção instrumentais para as duas técnicasempregadas na análise de inseticidas NMC’s

Tabela 2. Recuperações médias obtidas após extração dos pesticidas e determinação final medi-ante as duas técnicas analíticas.

* Coeficientes de variação variando de 5 a 12 % (n = 2) para análises empregando HPLC/UVe de 6 a 26 % (n = 3) para análises com biossensor. CL: carbaril; CF: carbofuran.

CL: carbaril; CF: carbofuran

Tipo de AlimentoInfantil

Creme de cenouraCL: 80CF: 84

CL: 81CF: 85

CL: 91CF: 66

CL: 85CF: 69

Papinha de maçã CL: 82CF: 80

CL: 84CF: 83

CL: 88CF: 56

CL: 80CF: 63

Recuperação (%)*Nível de Fortificação (mg Kg-1)

HPLC/UV Biossensor

0,1 0,5 0,1 0,5

Figura 3. Curvas analíticas obtidas com soluções diluídas de carbaril, utilizando-seHPLC/UV (a) e biossensor amperométrico (b). Para o biossensor, a curva analítica foi con-struída a partir da inibição da enzima AChE (dros) B-012. No gráfico à direita, tem-se afaixa linear da curva de inibição.

3A

3B

sibilidade do mutante B-012 em relação ao carba-ril foi intensamente in-crementada, o que não oco-rreu com o carbofuran. Assim, alterações na estru-tura molecular da enzima podem ser realizadas,não só visando ao aumento da sensibilidade dosensor, mas também da sua seletividade.

EFICIÊNCIA DOS MÉTODOS ANALÍTICOSA Fig. 4 mostra um cromatograma obtido a partirda análise por HPLC/UV de um extrato de cremede cenoura fortificado com carbaril. O compostofoi eluído em ~ 9 min. O cabofuran foi eluído emum tempo de ~ 7,5 min, sob mesmas condiçõesanalíticas. Os co-extrativos, quando presentes,estiveram em pequenas quantidades e foram eluí-dos em tempos de retenção inferiores a 3 min, oque indicou que a etapa de purificação dos extra-tos nos cartuchos C18 foi adequada; os cromato-gramas apresentaram-se, portanto, ‘limpos’, oque facilitou a identificação e a quantificação dospicos de interesse. Trabalhos anteriores jádemonstraram a adequada sensibilidade do méto-do por HPLC/UV para análise de resíduos de inse-ticidas NMC’s em alimentos, incluindo os selecio-nados no presente estudo (5-7), muito embora ométodo cromatográfico mais sensível, e, portanto,mais indicado para esse tipo de análise, seja aindaaquele que envolve a derivação dos compostosem pós-coluna e a sua detecção final por fluo-rescência17. Contudo, esse equipamento é extre-mamentecaro, e a análise, laboriosa.A Tab. 2 apresenta os dados médios de recupe-ração, após extração e análise dos pesticidas nasamostras. Nesse caso, foram analisados, porHPLC, os extratos orgânicos, e pelo biossensor,os extratos diluídos em PBS. As recuperaçõesvariaram de 80-85 % (RSD: 5-12 %) e de 56-91% (RSD: 6-26 %) para os métodos empregandoHPLC/UV e biossensor, respectivamente.Menores recuperações foram observadas para ocaso dos extratos analisados com o biossensor,tendo sido as recuperações maiores (80-91 %)para o inseticida carbaril, provavelmente emfunção da maior sensibilidade da enzima mutanteem re-lação a esse composto (Tab. 1). É interes-sante observar que maiores coeficientes devariação foram obtidos com me-didas efetuadascom o biossensor, o que pode ser atribuído aoserros de diluição e ao procedimento de imobili-zação enzimática. Aqui, a enzima foi imobilizadamanualmente, o que pode ocasionar alguma flu-tuação de resposta entre um sensor e outro. Talefeito já foi observado em trabalhos anteriores9,10. Convém mencionar que, no presente trabalho, adetecção dos compostos utilizando o biossensorfoi feita nos extratos diluídos, pois o objetivo eravalidar o sensor por uma técnica convencional deanálise e, neste caso, o procedimento de extraçãoteve de ser igual para ambos os métodos. Porém,o biossensor também demonstrou aplicabilidadequando utilizado diretamente na análise de amos-tras com um mínimo pré-tratamento: ajuste da

acidez com PBS pH 7,5. Para ilustrar o efeito dematriz sobre a resposta do biossensor, a Fig. 5apresenta os gráficos de resposta, obtidos dasanálises efetuadas com o biossensor mergulhadodiretamente em amostras de papinha de maçã, ouutilizando os extratos cromatográficos. Todas asamostras foram fortificadas com concentraçõescrescentes do inseticida carbaril. As inibições rela-tivas foram calculadas e, para ambos os casos,extrapoladas na curva analítica. A simulação dascondições leva ao estabelecimento de umasituação ideal (curva IDEAL), na qual os valores deconcentração encontrados nos extratos analisa-dos coincidem com os valores obtidos apósextração. Na prática, tal situação não é possívelna maioria das vezes, pois perdas durante o pro-cesso de extração podem ocorrer, além dos errosinstrumentais e do próprio analista. Aqui, obser-vou-se que o procedimento de extração levou aperdas, pois o mesmo extrato analisado pela téc-nica HPLC (curva “extração-HPLC”) e pelo bios-sensor (curva “extração-biossensor”) mostrouconcentrações menores que as adicionadas.Contudo, quando a amostra foi fortificada comteores de carbaril abaixo de 0,3 ppm, o métodocromatográfico subestimou ainda mais os resulta-dos. Acima de 0,5 ppm, as recuperações foram

Figura 4. Cromatograma HPLC/UV obtido de extrato decreme de cenoura. Tempo total de eluição: 10 min. Condiçõesoperacionais: coluna C18 (Inertsil ODS3); modo isocrático;fase móvel CH3CN/H2O (45:55, v/v); temperatura ambiente.

Figura 5. Gráfico de resposta dos métodos analíticos, avalia-dos através dos ensaios de recuperação para o inseticida car-baril. Níveis de fortificação: 0,1; 0,3; 0,5 e 1,0 mg Kg-1; amos-tra: papinha de maçã.

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ligeiramente menores nas análises com o biossen-sor, muito provavelmente devido às sucessivasdiluições do extrato. Quando o alimento não foisubmetido a nenhum processo de extração, tendosido diretamente diluído com o tampão PBS pH7,5 (curva “sem extração-biossensor”), um efeitode matriz foi observado, com desvios de resulta-dos para valores mais elevados, sobretudo emmaiores concentrações do inibidor. Como o pH domeio estava dentro da faixa ideal para a atividadeda AChE, pode-se inferir sobre a possibilidade dea amostra conter, além do carbaril adicionado,que é um forte inibidor, alguns componentes natu-rais que poderiam também provocar a inibição daAChE. Tal afirmativa carece, entretanto, de com-provação por comparação com outros tipos dematrizes vegetais. Apesar das medidas de inibição terem sido supe-restimadas pelo biossensor, durante a análise deamostras reais tamponadas, na prática, pode-seobservar que a medida direta é viável. O efeito dematriz, entretanto, é um fator que deve ser levadoem consideração, já que este pode levar a resul-tados falsamente positivos. Efeitos de matrizsobre atividades enzimáticas podem ser observa-dos também quando se empregam métodos imu-noquímicos, como é o caso daqueles baseadosem ELISA1.

CONCLUSÃO O presente trabalho teve como objetivo avaliar aeficiência da utilização de um biossensor ampero-métrico para a detecção de resíduos de insetici-das carbamatos em alimentos infantis. Os resulta-dos apresentados permitem-nos concluir que asensibilidade dos sensores baseados em enzimasacetilcolinesterases mutantes pode ser substan-cialmente aumentada, dependendo do tipo demodificação genética realizada na estrutura damolécula enzimática. Assim, no presente estudo,a modificação da enzima extraída da Drosophilamelanogaster fez melhorar o limite de detecção dosensor em relação ao inseticida carbaril, da ordemde partes por bilhão para partes por trilhão. Ocontrário foi verificado para o inseticida carbofu-ran, pois a enzima modificada mostrou-se poucosensível a esse composto, sendo pouco inibidaaté mesmo em concentrações mais elevadas. Emoutras palavras, em um meio contendo resíduosdesses dois pesticidas, um sensor contendo aenzima mutante AChE (dros, B-012), investigadanesses estudo, poderá enxergar o carbaril e prati-camente ignorar a presença do carbofuran. Este éum exemplo típico de engenharia genética onde aalteração na sensibilidade enzimática podeinfluenciar na seletividade do método.Do ponto de vista de controle de qualidade, o usode técnicas bioanalíticas, como, por exemplo, asque empregam ELISA e biossensores, para detec-tar resíduos de pesticidas em alimentos infantispode resultar em um meio de controle mais rápidoe eficaz, em função da sua elevada sensibilidade

e da relativa seletividade. Neste trabalho, o bios-sensor eletroquímico foi empregado testado naanálise de amostras de alimentos infantis que nãosofreram nenhum tipo de tratamento (extração,purificação, etc.), simplesmente mergulhando-osdiretamente nas papinhas tamponadas, e medin-do a inibição provocada pela presença dos pesti-cidas. O efeito de matriz, com valores de inibiçãoenzimática em alguns casos superestimados,pode levar a resultados falsamente positivos.Contudo, o biossensor se mostrou extremamenteeficiente, na medida em que pode fornecer res-postas rápidas com medidas relativamente sim-ples, sendo adequado, inclusive, para a realizaçãode estudos toxicológicos e ecotoxicológicos.

AGRADECIMENTOSOs autores agradecem ao CNPq, pelo apoio financeiro.Agradecem, ainda, ao Prof. Dr. Didier Fournier (Université PaulSabatier, Toulouse, França), por gentilmente haver cedido aenzima acetilcolinesterase mutante.

BIBLIOGRAFIA CITADA1. Nunes, G. S. (2004) Métodos imunoquimicos para analisede residuos de pesticidas Analytica. 10, 50-59.

2. Hassal, K. A. The Chemistry of Pesticides: TheirMethabolism, Mode of Action and Uses in Crop Protection.MacMillan, New York, NY, 1983. 264 p.

3. Nunes, G. S.; Tanaka, S. M.; Marques, P. B. O.; Lima, F. J.C. (2001). Inseticida organofosforado metamidofós: aspectostoxicológicos e analíticos. Pesticidas Rev. Ecotox M Ambiente.11,17-34.

4. Nunes, G. S. (1996). Determinação de pesticidas utilizandobiossensores à base de enzimas colinesterases: uma revisão.Pesticidas Revista Técnico Científica. 6, 13-30.

5. Nunes, G. S. Skládal, P. Ribeiro, M. L. and Yamanaka, H.(1997). Detection of carbamate pesticides in vegetable sam-ples using cholinesteras-based biosensors. Electroanalysis. 9,1083-1087.

6. Nunes, G. S. Barceló, D. Grabaric, B. S. Díaz-Cruz, J. M.and Ribeiro, M. L. (1999). Evaluation of a highly sensitiveamperometric biosensor with low cholinesterase chargeimmobilized on a chemically modified carbon paste electrodefor trace determination of carbamates in fruit, vegetable andwater samples. Anal. Chim. Acta. 399, 37-49.

7. Nunes, G. S. Skládal, P.Yamanaka, H. and Barceló, D.(1998). Determination of carbamate residues in crop samplesby cholinesterase-based biosensors and chromatographictechniques . Anal. Chim. Acta. 362, 59-68 .

8. Nunes, G. S. Queiroz, M. E. R. Orlanda, J. F. F. and Sousa,H. S. (2002) Análise de pesticidas em amostras ambientais(água e sedimentos) oriundos da Barragem da BoaEsperança, MA-PIPesticidas: Rev. Ecotox. M. Amb. 12, 1-6.

9. Marques, P. R. B. O. Nunes, G. S. Santos, T. C. R.

- 7 -


Andreescu, S. and Marty, J.-L. (2004). Comparative investiga-tion between acetylcholinesterase obtained from commercialsources and genetically modified Drosophila melanogaster:Application in amperometric biosensors for methamidophospesticide detection . Bios. Bioelectron. 20, 825-832.

10. Nunes, G. S. Jeanty, G. and Marty, J.-L. (2004). Enzymeimmobilization procedures on screen-printed electrodes usedfor the detection of anticholinesterase pesticides:Comparative study . Anal.Chim. Acta. 523, 107-115.

11. Nunes, G. S.; Montesinos, T.; Marques, P. B. O.; Fournier,D. and Marty, J.-L.(2001) Acetylcholine enzyme sensor fordetermining methamidophos insecticide: Evaluation of somegenetically modified acetylcholinesterases from Drosophilamelanogaster. Anal. Chim. Acta. 434, 1-8 .

12. Fournier, D.; Nunes, G. S.; Marty, J.-L.(2005). Biotoolsbased on engineered-cholinesterases for the detection ofinsecticides. 28ª. Reunião Anual da Sociedade Brasileira deQuímica, Livro de Resumos, Poços de Caldas, MG.

13. Nunes, G.S., Badea, M.; Marty, J.-L. Rapid detection ofpesticides in water samples using amperometriccholinesterase sensors. Brasov EDU Conference, Brasov,Romenia, 2004, pag. 13.

14. Ellman, G. L., Courteny, K. D. A., Andres, V. andFeatherstone, R. M. (1961) A new and rapid colorimetricdetermination of acetylcholinesterase activity. Biochem.Pharmacol.1, 88-90.

15. Andreescu, S. Barthelmebs, L.; Marty, J.-L. (2002).Immobilization of acetylcholinesterase on screen-printed elec-trodes: comparative study between three immobilizationmethods and applications to the detection of organophospho-rus insecticides .Anal. Chim. Acta. 464, 171-180 .

16. Bonnet, C. Andreescu, S. and Marty, J.-L. (2003).Adsorption: an easy and efficient immobilisation of acetyl-cholinesterase on screen-printed electrodes .Anal. Chim.Acta. 481, 209-211.

17. Nunes, G. S. Santos, T. C. R; Barceló, D.; Pimenta, A. S.;Ribeiro, M. L. (2002). Extração por Fluido Supercrítico deAlguns Inseticidas Carbamatos em Amostras de Batata, comDeterminação por HPLC/Fluorescência e Confirmação porHPLC/Espectrometria de Massas. Quim. Nova. 25, 214-220.

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INTRODUCTIONThe impact of mycotoxins on human and animalhealth results in serious economic implications forcrop, livestock, and poultry producers, food andfeed processors, consumers, and for crop tradingbetween different countries affecting their nationaleconomies.Fumonisins are produced mainly by Fusarium ver-ticillioides and F. proliferatum, two pathogens ofmaize, so that these mycotoxins occur largely inmaize and maize based foods and feeds world-wide and populations with high maize consump-tion are exposed to these mycotoxins1,2,3.Maize (Zea mays L) represents 51% of crop pro-duction in Mexico4. The human consumption isapproximately 300 g/day providing 56% of thecalories and 47% of the proteins for the Mexicanpopulation. Around 72% of the maize productionis transformed by a process call nixtamalization inthe manufacture of tortillas. In Mexico, Desjardins et al.5 found F. verticillioidesin 61% of white maize samples intended for

SPHINGANINE/SPHINGOSINE (SA/SO) RATIO AND INTAKE OF FUMONISIN

CONTAMINATED TORTILLAS IN A MEXICAN POPULATION

Patricia Landeros (1), Waldina Reyes (1), Adriana M. Torres (2*), Federico Rojo (2), Sofia N. Chulze (2*).

1. Departamento de Salud Pública, Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias, Universidad de Guadalajara.Km. 15.5 carretera a Nogales, Zapopan, Jalisco, México. Código Postal 44100, [email protected]

[email protected] Telefono y fax: (33) 36 82 05 742.Departamento de Microbiología e Inmunología, Facultad de Ciencias Exactas, Físico-Químicas y Naturales, Universidad

Nacional de Río Cuarto, Ruta 36 Km, 601 (5800) Río Cuarto, Córdoba, Argentina. Código Postal 5800, [email protected]@exa.unrc.edu.ar [email protected]

* Members of the Research Career of Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET)Sofía Chulze. Fax: 54-358-4676231, Email: [email protected]

ABSTRACT. Landeros, P.; Reyes W.; Torres A. M.; Rojo F.; Chulze S. N. Sphinganine/sphingosine (Sa/So) ratio and intakeof fumonisin contaminated tortillas in a Mexican population. Acta Toxicol. Argent. (2005) 13 (2): 8-11. The fumonisins aremycotoxins relevant due to their toxicological effects on animals and humans. Based on the current knowledge of the mecha-nism of action of fumonisins, the sphinganine/sphingosine (Sa/So) ratio is a valid biomarker of exposure in animal studies andcould also be useful in human studies if the ratio correlate with fumonisin intake. The Sa/So ratio was evaluated in a Mexicanpopulation at three stages of maize based food (tortillas) consumption. A Sa/So ratio higher than 1 was found at the A (regularconsumption) and C (re-assumption of the regular consumption) stages, while during the B (stopping of the tortillas consump-tion for two weeks) stage the Sa/So ratio was lower than 1. This report showed that there is an association between the intakeof fumonisin contaminated maize based foods and the elevation of the Sa/So ratio in human samples. Mexican population isexposed with a continuous high consumption of maize based foods commonly contaminated with fumonisins. Palabras claves: Etanol; metanol; jugos; bebidas amargos; GC-FID

RESUMEN. Landeros, P.; Reyes W.; Torres A. M.; Rojo F.; Chulze S. N. Relación esfinganina/esfingosina (Sa/So) y consumode tortillas contaminadas con fumonisinas en una población Mexicana. Acta Toxicol. Argent. (2005) 13 (2): 8-11. Lasfumonisinas son micotoxinas relevantes debido a sus efectos en animales y humanos. Basados en el actual conocimientosobre el mecanismo de acción de las fumonisinas, la relación esfinganina/esfingosina (Sa/So) es considerada un biomarcadorde exposición en estudios de animales y pudiera tambien ser útil en estudios de humanos si es correlacionada con el consumode fumonisinas. La relación Sa/So fue evaluada en una población mexicana en tres etapas de consumo de alimento a base demaíz. Se encontró una relación mayor a 1 en las etapas A (regular consumo de tortillas) y C (una semana posterior al retornode consumo normal de tortillas), mientras que durante la etapa B (sin consumo de tortillas por dos semanas) la relación Sa/Sofue menor a 1. El presente trabajo demostró que existe asociación entre el consumo de alimentos a base de maíz contamina-dos con fumonisinas y la elevación de la relación Sa/So en humanos. La población mexicana esta expuesta a un consumo altoy continuo de alimentos a base de maíz comunmente contaminados con fumonisinas.

Keywords: sphinganine, sphingosine, biomarker, fumonisinsPalabras claves: esfinganina, esfingosina, biomarcadores, fumonisinas

human consumption; the strains isolated pro-duced fumonisins at levels ranging from 10 to9000 ppm. In another study maize samples col-lected from the Jalisco State showed contamina-tion with F. verticillioides in 84% of the samples,and the strains isolated produced levels of fumon-isins ranging from 700 to 2280 ppm6. The nixtamalization process carried out in Mexicofrom naturally contaminated maize, as raw materi-al, was evaluated by Dombrink–Kurtzman andDvorak7. The results showed that fumonisin con-tamination was detected in different productsincluding masa and tortillas. The mean levels forMexican and USA samples were 0.79 ppm and0.16 ppm, respectively. Another study done inMexico showed an FB1 level of 7.2 ppm and FB2

0.14 ppm for maize; FB1 6.3 ppm and FB2 0.06ppm for masa; and FB1 4.4 ppm and FB2 0.05 ppmfor tortillas6.The fumonisins show a remarkable structural sim-ilarity to the sphingoid base sphingosine and have

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been found to inhibit sphingolipid biosynthesis atthe level of sphingosine (sphinganine) N-acyl-transferase8. Based on current knowledge of themechanism of action of fumonisins, the sphinga-nine/sphingosine (Sa/So) ratio is a valid biomarkerof exposure in animal studies9 and could also beuseful in human studies if the ratio correlated withfumonisin intake10. Due to the high incidence offumonisin both in maize and maize based foods inMexico the availability of a biomarker will beessential for determining human exposure tofumonisins, allowing evaluation at an individuallevel, as recommended by WHO11. The aims of this work were: - to categorize a pop-ulation with different maize based foods (tortillas)consumption in Mexico using an alimentary sur-vey, - to determine the Sa/So ratio in the urine inthe different groups under study, - to determinethe levels of fumonisins in the tortillas consumedby the population under study.

MATERIAL AND METHODS A population of 38 volunteers including 23 malesand 15 females was chosen for this study. Groupswere divided according to the consumption ofmaize based food as follows: high consumption (>10 tortillas daily), medium consumption (4-10 tor-tillas daily) and low consumption (< 4 tortillasdaily). Sphinganine and sphingosine analysis. Urinesamples were collected at three stages, A) at thebeginning of the experiment (individual that con-sumed the normal diet with high, medium and lowtortillas consumption), B) after two weeks withoutconsumption of any type of maize based foodsand C) one week after the re-assumption of nor-mal tortillas consumption. Urine samples (10 ml)were analysed within two weeks after collection,keeping the samples at about 4ºC before extrac-tion and analysis. The urine samples wereanalysed to determine sphinganine and sphingo-sine concentrationaccording to methodolo-gy described by Solfrizzoet al.19 and analysed byreversed phase HPLCwith fluorescence detec-tion. The quantitationlimit was 0,02 ng/ml.Fumonisin analysis.Thirty eight samples (20tortillas by sample)donated by each volun-teer were analysed, 10tortillas by sample duringthe A stage and 10 dur-ing the C stage. Thesamples were groundand dried at 40 °C during48 hs. Tortilla sampleswere analyzed to deter-mine the level of fumon-

isin contamination according to the methodologydescribed by Shephard13, modified by Doko etal.14.FB1 daily intake of the population. To estimatethe FB1 intake of the population under study, themean body weight was considered to be 67.3 kg.Also the mean maize intake was calculated foreach group (high, medium and low consumers)considered the g/day of tortillas calculated fromvolunteer interviews, and the mean fumonisin B1level detected in the tortillas. The intake was cal-culated following equation of Qiu and Liu15.Statistical analysis. Data on Sa/So ratio wereanalysed using One way ANOVA to detect if therewas significant differences among tortillas con-sumption (high, medium and low), fumonisin con-tent of the tortillas, and between sex. To detectsignificant differences among the consumptionstages (A, B and C) the data were analysed usingFriedman Repeated Measures Analysis ofVariance on Ranks. When the differences in themean values among the treatment groups weregreater than would expected by chance (P= 0.001)the Tukey´s test was used for comparison amongstages.

RESULTS The FB1 levels found in the tortillas, consumed byvolunteers during the A stage, ranged from 1.21 to3.12 ppm. There were no significant differencesamong the groups (high, medium and low tortillasconsumption) in the estimated mean fumonisinintake and the Sa/So ratio (Table 1). Significant dif-ferences by sex were not found in the Sa/So ratio,being this values for female (n=15) of 1.15 ± 0.21and for male (n=23) of 1.23 ± 0.31. Due to the lackof significant differences in relation to sex andconsumption of fumonisins by the groups, theevaluation on the Sa/So ratio was consideredaccording to the period in which the urine sampleswere collected. In the first stage (A), the population

Tortillasconsumption

Mean ± SDFBs in tor-tillas (ppm)

Mean tortillasintake of vol-unteers g/kgbw per day

Mean fumon-isin intake of

volunteersug/kg bw per day

Sa/So ratio Mean ± SD

High 1.21 ± 0.8 a 4.45 5.3 a 1.14± 0.34a

Medium 1.82 ± 1.3 a 2.97 5.4 a 1.18± 0.22a

Low 3.12 ± 1.2 a 1.48 4.6 a 1.23± 0.31a

Table 1: Fumonisin content of tortillas samples donated per volunteers, mean fumonisin dailyintake and SA/SO ratio of volunteers involved in the study.

A Obtained by multiplying the mean tortillas intake by mean fumonisin content of tortillas. sam-ples. The same letter in a column indicates no significant differences (p< 0.05).

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evaluated consumed tortillas with a FB1 meanlevel of 2.05 ppm, representing a mean fumonisinintake of 6 µg/kg bw per day. In the second stage(B) there was no fumonisin consumption becausethe volunteers were private to eat corn basedfood. At the third stage (C) the FB1 mean level inthe tortillas was 1.75 ppm representing a meanfumonisin intake of 5.1 µg/kg bw per day. TheSa/So ratio was higher than 1 in both A and Cstages, 1.19 and 1.08, respectively. We found sig-nificant differences (p<0.05) in the Sa/So ratiobetween these stages and B stage, which themean ratio was 0.78 (Table 2). These results are relevant since they indicate thata restriction in the consumption causes a reduc-tion in the levels of the sphingoid bases in urine,the ratio Sa/So being lower than 1 at the B stage.In the C stage when the population returns to theconsumption of natural contaminated tortillas dietthe ratio Sa/So was higher than 1.

DISCUSSIONAlthough in the present study the levels of FB1

found in the tortillas consumed by the populationunder study were relatively low compared to a pre-vious survey on the same area (Reyes Velazquez,personal communication), this study showed adirect relation among FB1 intake and changes inthe Sa/So ratio, since it was demonstrated thatchanges in the Sa/So ratio occurred when thepopulation stopped fumonisin intake and this ratiowent up again when the population resumed theintake. Similar results were shown in studies onrats9,16. Due to the levels of consumption of maizebased food, Mexican population are exposed to acontinuous fumonisin intake. This condition couldexplain the high Sa/So ratio detected in the popu-lation under study.Reports of oesophageal cancer in Mexico arescarce but a high incidence of neural tube defects

(NTD) has been shown inpopulations from thenorth of Mexico. Thispathology could be relat-ed to the high levels offumonisin to which thispopulation could beexposed. This is sup-ported by Marasas etal.17 who reported thatthe NTD can be reducedby folate supplementa-tion and explained thepossible contribution offumonisin to this pathol-ogy, mainly in humanpopulations with a con-tinuous fumonisin expo-sure. Data on the dailyconsumption of fumon-isin by the groups indi-cate the toxicological

risk to which the population is exposed, since thelevels of fumonisin consumption are higher than 2µg/kg bw/day, the provisional maximum tolerabledaily intake for fumonisins proposed by WHO1.The increased Sa/So ratio as a biomarker forfumonisin exposure has been largely demonstrat-ed in animal studies and has been proposed as apossible biomarker in human studies10. This bio-marker has been validated in animal studies bydemonstrating in pigs and rats a positive correla-tion between the Sa/So ratio and the dose or timeof exposure to fumonisins through the diet18,20.The minimum level of fumonisins in the diet capa-ble of eliciting the urinary Sa/So ratio increase inrats was about 2 ppm, equivalent to 130 µg/kgbw/day in short term experiments19. Lower levelsof fumonisins in the diet (1 ppm) also increased theurinary Sa/So ratio in rats previously exposed to adiet containing 10 ppm of FB120. The mean level of fumonisins found in the tortillassamples collected in Mexico, corresponding to amean fumonisin intake of 6 µg/kg bw/day, is about24 times lower than the minimum level of fumon-isins that elevated urinary Sa/So ratios in rats.However, it is likely that the population understudy has been previously exposed to higherfumonisin levels. Based on the present investiga-tion it can be concluded that: human urine sam-ples from Mexico showed mean Sa/So ratios high-er compared to control populations from lowmaize consumption regions (0.39, 0.35, 0.11, 0.20)as was reported by Solfrizzo et al.21 and Casteg-naro et al.22. The prolonged ingestion of maizeand maize-based products, presumably contami-nated with fumonisins, may explain these results,but the role of other confounding factors cannotbe ruled out. The fumonisin intake by the population understudy was higher than 2 µg/kg bw/day, the levelestablished by the Joint FAO/WHO Expert

StageMean FBs in

tortillas(ppm)

Mean tor-tillas intake

of volun-teers g/kgbw per day

Mean fumon-isin intake of

volunteer-sug/kw per

dayA

Sa/So ratio Mean ± SD

A 2.05 2.97 6 1.19 ± 0.2 a

B - 0 0 0.78 ± 0.2 b

C 1.75 2.97 5,1 1.08 ± 0.2 a

Table 2: Fumonisin content of tortillas samples donated per volunteers, mean fumonisin dailyintake, and SA/SO ratio of volunteers at different stages of tortillas intake.

Different letters in a column indicate significant differences according to Friedman repeated meas-ures analysis of variance on ranks, Tukey test (p< 0.05).

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Committee on Food Additives (JECFA) 1. Also aTDI of 2 µg/kg/day bw for fumonisins has beenrecently confirmed by the Scientific Committee onFood23, it must be taken into account that we haveincluded only tortillas in the fumonisin intake esti-mation. Although tortillas are the main maizebased food consumed by the population, othermaize based foods could also contribute to theSa/So ratio higher than 1 found among the popu-lation under study. The mean daily fumonisin intakein the population under study was 10 times higherthan the values reported in populations from SouthBrazil and North Argentina21 this can explain whythe authors did not found correlation between theintake of fumonisin and the SA/SO ratio.Based on our results Mexican populations couldbe high exposed to fumonisin. Further studiesneed to be done to validate Sa/So ratio as a bio-marker in populations chronically exposed tofumonisin levels.

AcknowledgementsThis work was supported by a grant from GuadalajaraUniversity, Mexico and CONICET from Argentina. We thanks toDr. Peter Scott for reading the manuscript and his suggestions.

REFERENCES1. World Health Organization (WHO) (2001) Fumonisins. SafetyEvaluation of Certain Mycotoxins in Food. WHO FoodAdditives Series 47, FAO Food and Nutrition Paper 74(Geneva: WHO), 103-279 pp.

2. Marasas WFO (1996) Fumonisins: History, world wideoccurrence and impact. In: Jackson LS, Devries JW,Bullerman LB (eds) Fumonisins in food. Plenum Press NewYork, 1-17 pp.

3. Shephard GS, Thiel PG, Stockenström S, Sydenham EW(1996) Worldwide survey of fumonisin contamination of cornand corn based products. J AOAC Int. 79: 671-687.

4. González, A. V. 1995, El maiz y su conservación. Ed.Trillas, Mexico. 214-251 pp.

5. Desjardins AE, Plattner RD, Nelson PE (1994) Fumonisinproduction and other traits of Fusarium moniliforme frommaize in northeast Mexico. Appl Environ Microbiol. 60:1695-1697.

6. Reyes WP (2001) Detección del hongo Fusarium verticil-lioides y de fumonisinas en maiz y efecto de la nixtamal-ización sobre la producción de sus hidrolizados. PhD Thesis,Universidad de Guadalajara, Mexico.

7. Dombrink-Kurtzman MA, Dvorak TJ (1999) Fumonisin con-tent in masa and tortillas from Mexico. J Agric Food Chem.41: 1649-1654.

8. Wang E, Norred WP, Bacon CW, Riley RT, Merrill AH Jr(1991) Inhibition of sphingolipid biosynthesis by fumonisins:implications for diseases associated with Fusarium monili-forme. J Biol Chem. 266; 14486-14490.

9. Riley RT, Wang E, Merrill, AH, Jr (1994) Liquid chromato-graphic determination of sphinganine to sphingosine: Use ofthe free sphinganine-to sphingosine ratio as a biomarker forconsumption of fumonisins. J AOAC Int. 77: 533-540.

10. Turner PC, Nikiema P, Wild CP (1999) Fumonisin contami-nation of food: progress in development of biomarkers to better assess human health risks. Mut Res. 443: 81-93.

11. World Health Organization (WHO) Fumonisin B1.Environmental Health Criteria 219. (Geneva: WHO).

12. Solfrizzo M, Avantaggiato G, Visconti A (1997) Rapidmethod to determine sphinganine/sphingosine in human andanimal urine as a biomarker for fumonisin exposure. JChromatography B. 692: 87-93.

13. Shephard GS, Sydenham EW, Thiel PG, Gelderblom WCA(1990) Quantitative determination of fumonisins B1 and B2 byhigh-performance liquid chromatography with fluorescencedetection. JLiquid Chromatography 13: 2077-2080.

14. Doko B, Rapior S, Visconti A, Schjoth J (1995) Incidenceand levels of fumonisins contamination in maize genotypesgrown in Europe and Africa. J Agric Food Chem 43: 429-434.

15. Qiu M, Liu X (2001) Determination of sphinganine, sphin-gosine and Sa/So ratio in urine of humans exposed to dietaryfumonisin B1. Food Add Contam. 18: 263-269.

16. Castegnaro M, Garren L, Galendo D, Gelderblom WCA,Chelule P, Dutton MF, Wild CP (1998) Analytical method forthe determination of sphinganine and sphingosine in serum asa potential biomarker for fumonisin exposure. JChromatography B, 720, 15-24.

17. Marasas WF, Riley RT, Hendricks KA, Stevens VL,Sandler TW, Gelineau-Van Waes J, Missmer SA, Cabrera J,Torres O, Gelderblom WCA, Allegood J, Martinez C, MaddoxJ, Miller JD, Starr L, Sullards MC, Roman AV, Voss KA, WangE, Merrill AH, Jr (2004) Fumonisins disrupt sphingolipidmetabolism, folate transport and neural tube development inembryo culture and in vivo: a potential risk factor for humanneural tube defects among populations consuming fumonisin-contaminated maize. J Nutrition 134: 711-716.

18. Riley RT, An NH, Showker JL, Yoo HS, Norred WP,Chamberlain WJ, Wang E, Merrill AH Jr, Motelin G, BeasleyVR, Haschek WM (1993) Alteration of tissue and serum sphin-ganine to sphingosine ratio: an early biomarker of exposure tofumonisin-containing feeds in pigs. Toxicol Appl Pharmacol.118: 105-112.

19. Solfrizzo M, Avantaggiato G, Visconti A (1997b) In vivovalidation of the sphinganine/sphingosine ratio as a biomarkerto display fumonisin ingestion. Cereal ResearchCommunications 25: 437-442.

20. Wang E, Riley RT, Meredith FI, Merrill AH Jr (1999)Fumonisin B1 consumption by rats causes reversible, dose-dependent increases in urinary sphinganine and sphingosine.J Nutrition 129: 214-220.

21. Solfrizzo M, Chulze SN, Mallmann C, Visconti A, DeGirolamo A, Rojo F, Torres A (2004) Comparison of urinarysphingolipids in human populations with high and low maizeconsumption as a possible biomarker of fumonisin dietaryexposure. Food Add Contam. 21: 1090-1095.

22. Castegnaro M., Garen L, Gaucher I, Wild CP (1996)Development of a new method for the analysis of sphinganineand sphingosine in urine and tissues. Natural Toxins 4:284-290.

23. European Commission: Scientific Committee for Food(2003) Updated opinion of the Scientific Committee on Foodon Fumonisin B1, B2 and B3. Available on line athttp://europa.eu.int/comm/food/fs/sc/scf/out185_en.pdf

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Acta Toxicol. Argent. (2005) 13 (2):12-23

JORNADAS INTERDISCIPLINARIAS DETOXICOLOGÍA ALIMENTARIA

Asociación Toxicológica Argentina (ATA)

Universidad Argentina de la Empresa(UADE)

Asociación Argentina de TecnólogosAlimentarios (AATA)

Lima 717, Ciudad Autónoma de Buenos Aires - 19, 20 y 21 de septiembre de 2005

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COMISION DIRECTIVA

PresidenteOsvaldo H. Curci

VicepresidenteLucrecia Ferrari

SecretarioSandra Demichelis

TesoreroSusana I. García

VocalesMarta A. CarballoTeresa M. FonovichHéctor R. Girolami

Vocales suplentesEduardo BroccaAdriana A. Pérez

Tribunal de HonorMauricio R. PlagerAlfredo SalibianMaría del CarmenVillarruel

ASOCIACION TOXICOLOGICA ARGENTINA

COMISION DIRECTIVA

PresidenteGabriel Durand

VicepresidentePatricia Hartenstein

SecretarioGustavo Locati

ProsecretarioMargarita Olivera

TesoreroCarlos Almada

ProtesoreroCarlos Campi

VocalesOrlando Araujo M. Del CarmenBenavente Ernesto Bertschi

Irene Dasso Roberto Urrere Susana Vidales

ASOCIACIÓN ARGENTINA DETECNÓLOGOS ALIMENTARIOS

Comité CientíficoGerardo D. CastroJuan C. PiolaOtmaro E. RosesEdda Villaamil Eduardo N. Zerba

Órgano deFiscalización

Miembros titularesMaría L. Oneto Otmaro E. Roses

Miembro suplenteRaúl A. Alzogaray

Vocales suplentesStella Alzamora Mariano Czastkiewicz Guillermo Richiello

Revisores de cuentaLia Gerschenson Néstor E. Galibert

Gerente ejecutivoMa. Juliana Simone

AUTORIDADES DE LAS JORNADAS

COMITÉ CIENTÍFICO

Alejandro ARIOSTI

Elda CARGNEL

José Ignacio CARRETTO

Osvaldo COTELLA

Adolfo DE ROODT

Graciela Edith DIAZ

Ana EVANGELISTA DE DUFFARD

Teresa FONOVICH

Diana GONZÁLEZ DE CID

Alba MUSTACCIOLLO

Ana PACIN

Ricardo SOBOL

Dinoraz VELEZ PACIOS

Edda VILLAAMIL

PRESIDENTE:Otmaro ROSES

COMISIÓN ORGANIZADORA

Presidente: Alberto Eduardo ETIENNOT

Vicepresidente: Antonio Horacio FRADE

Secretaria General: Susana I. GARCÍA

Secretaría Técnica: María Juliana SIMONE

Tesorera: Claudia Alejandra SWIECKY

Vocales: Sandra DEMICHELIS; Adriana HAAS

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RESÚMENES

Conferencia: EVALUACIÓN DE RIESGO A LAINTOXICACIÓN POR MICOTOXINAS. DRA. ANA PACIN CIC, CIM-UNLU, FICTBC.La evaluación de riesgos está basada en conoci-mientos científicos: (1) determinación del peligro,(2) caracterización del peligro, (3) evaluación de laexposición, y (4) caracterización del riesgo.Hablando de micotoxinas implica: • La estimaciónde ingesta de alimentos en especial aquellos demayor consumo por la población. • El conoci-miento del nivel de contaminación de materiaprima, alimentos elaborados, y/o efecto de losprocesos • Estimación de la exposición, expresa-da como Ingesta Diaria para determinada/s mico-toxina/s, que se compara con valores de IngestaTolerable o Admisible Diaria (IDA).Para estimar la IDA, se consideran los datos detoxicidad animal relacionados con la toxicidadcrónica o con la dosis que no produce efecto: NELo NOEL; a las cuales se aplican factores de segu-ridad y así se llega a la IDA.Esta evaluación se continúa con la Gestión, quees la selección y aplicación de las posibles medi-das de control; y la Comunicación del riesgo, quees el intercambio de información y opinionessobre los riesgos, entre las personas encargadasdel control y otras partes interesadas.Los objetivos fundamentales para realizar la eva-luación de riesgo a micotoxinas son:1. Disponer de datos para establecer valores lími-tes de seguridad, que eviten o por lo menos dis-minuyan la posibilidad de micotoxicosis2. aportar a la agroindustria un dato fidedigno paraser utilizado en la comercialización.Para llevar a cabo este procedimiento es necesa-rio que cada país o región estime su ingesta de ali-mentos con una determinada frecuencia y conoz-ca los niveles de contaminación, y la frecuencia delos alimentos consumidos por la población.

MESA REDONDA: TOXINAS DE FLORA-CIONES ALGALES. COORDINA: MARÍA ISABEL YEANNES(CONICET- UNMDP)

UNA REVISIÓN DEL ESTADO DEL CONOCI-MIENTO DE LAS FLORACIONES ALGALESTÓXICAS EN EL MAR ARGENTINOCarreto, José I y Montoya, Nora. INIDEP

Durante la primavera de 1980 se produjo el primerevento de intoxicación y muerte de dos marinerosen la zona de Península de Valdés, Argentina. Lapresencia del dinoflagelado Alexandrium tamaren-se, su aislamiento y análisis toxicológico permitie-ron identificarlo como el organismo productor delas mencionadas toxinas. En la actualidad casitodos los ecosistemas costeros de Argentina,Uruguay y Sur de Brasil están afectados por TPM.A fines de verano de 1992, en la costa uruguaya

se registró la primera floración de Gymnodiniumcatenatum, otra especie responsable de TPM.Este parece ser un fenómeno recurrente que pormecanismos de transporte se detecta ocasional-mente hasta la latitud de Mar del Plata. En esemismo verano, otra especie productora de TPM,A. catenella produjo en la región del canal deBeagle un brote de toxicidad de una magnitud noconocida en otras partes del mundo (127 x103 ÌgSTX eq.) Aunque varias especies de diatomeas del géneroPseudonitzschia, potenciales productoras deácido domoico fueron observadas en la región, elprimer brote de TAM fue detectado a mediados dejulio de 2000. Los estudios realizados permitieronconfirmar que las poblaciones naturales dePseudonitzschia australis contenían cantidadessignificativas de ácido domoico (TAM). Tambiénpudo detectarse la presencia de ácido domoico enmejillones (Mytilus edulis) así como en el conteni-do gastrointestinal y el tejido muscular de laanchoíta (Engraulis anchoita) de esta región. En el litoral de Argentina y Uruguay se ha detecta-do la presencia de varias especies de dinoflagela-dos del género Dinophysis potencialmente pro-ductoras de Toxinas Diarreicas de Moluscos(TDM). Además, recientemente se detectó el pri-mer episodio de Intoxicación Diarreica deMoluscos (IDM) por consumo de cholgas colecta-das en Golfo Nuevo y Golfo San José. El organis-mo causal identificado como el dinoflageladoProrocentrum lima, confirmándose la presencia dela toxina dinophysis-3 (DTX-3) En este trabajo se presenta una revisión del esta-do actual de la ocurrencia de estos fenómenos enel Mar Argentino.

TOXINAS MARINAS. FLORACIONES ALGALESNOCIVASKarin Fulco. Centro Nacional Patagónico (CENPAT, CONICET)Bvard. Brown 3700. Puerto Madryn, Chubut. [email protected]

Las floraciones de microalgas nocivas constituyenun problema económico y sanitario que afecta enforma recurrente al litoral marítimo argentino. Lamayoría de las especies productoras de toxinasson dinoflagelados planctónicos, microalgas ca-paces de realizar fotosíntesis que constituyen labase de cadenas alimentarias marinas. Los orga-nismos filtradores (principalmente bivalvos) con-centran estas toxinas y las transmiten a los esla-bones superiores de las cadenas alimentarias(peces, aves y mamíferos marinos, ser humano).En el mar Argentino se han detectado tres gruposde toxinas capaces de afectar al ser humano:- Toxinas paralizantes (VPM o PSP): producidaspor los dinoflagelados Alexandrium spp yGymnodinium catenatum, afectan a prácticamen-te todo el litoral marítimo argentino. Se conocen almenos 26 derivados de la saxitoxina (STX):Neosaxitoxina (NeoSTX), gonyaulatoxinas (GTX,),decarbamoilgonyaulatoxinas (dcGTX) y N-sulfo-carbamoiltoxinas (C). Provocan parálisis muscular

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debido al bloqueo de los canales de sodio volta-je dependientes.- Toxina amnésica (VAM o ASP): es causada pordiatomeas del género Pseudonitzchia. Fue detec-tada en la zona de Mar del Plata, aunque hasta elmomento no se registraron intoxicaciones enseres humanos. Es un aminoácido secundario, elácido domoico (DA), que actúa como agonista delos receptores de glutamato, principalmente en laregión del hipocampo. Causa daño neurológicocon pérdida de la memoria.- Toxinas diarreicas (VDM o DSP): asociado con eldinoflagelado Prorocentrum lima, productor deácido okadaico (OA) y dinophysistoxina (DTX). Seregistraron episodios de intoxicación en la zonanorte de Chubut. Actúa inhibiendo la proteína fos-fatasa, provocando diarreas. También es promotorde tumores.En el Laboratorio de Fitoplancton del CENPAT(CONICET) se realizan estudios para determinarlos mecanismos que conducen a la iniciación, per-sistencia y declinación de las floraciones demicroalgas nocivas.

TOXINAS DE FLORACIONES ALGALES, CIA-NOTOXINASDiana González. Toxicología y Química Legal, UniversidadNacional de San Luis. Chacabuco y Pedernera, San Luis. TE:02652 43789 int. 112. e-mail: [email protected]

La problemática del agua es un tema estratégicopara el bienestar de nuestros pueblos como estra-tégico es el recurso. Está íntimamente vinculada alas necesidades básicas y, junto con la alimenta-ción y la salud, se presenta como uno de los pro-blemas de mayor complejidad e importancia.Dentro de los criterios de calidad del agua, queincluye características bacteriológicas, químicas yradiológicas, se suma hoy el aspecto relacionadoa la formación de “blooms”, floraciones o creci-miento desmedido de cianobacterias con la posi-bilidad de producción de compuestos químicosque alteran la calidad del agua y mas importanteaun la producción de toxinas, dermatotoxinas,neurotoxinas y hepatotoxinas, que representan unserio riesgo para la salud humana y animal. Estascianobacterias conocidas también como algasverde-azuladas son algas microscópicas que cre-cen con suma facilidad en reservorios de agua conaltos contenidos de nutrientes producto de la acti-vidad humana, efluentes industriales y cloacales,residuos domiciliarios, etc., que pueden obser-varse particularmente en las orillas como masasde espuma verdosa.

MESA REDONDA: MICOTOXINASCoordina: Ana María Di Giulio (SENASA)

REGLAMENTACIONES SOBRE NIVELES DEMICOTOXINAS. ESTADO ACTUALFarnochi María Cecilia. Departamento de Microbiología eInmunología. Facultad de Ciencias Exactas Físico-Químicas yNaturales. Univ. Nac. de Río Cuarto-Río Cuarto-CórdobaArgentina. TE: 54-358-4676429 Email [email protected]

La seguridad de los alimentos y el establecimien-to de regulaciones para preservar la inocuidad delos mismos constituyen una actividad compleja yson muchos los factores a considerar al momentode tomar decisiones. Las micotoxinas se encuen-tran presentes en los alimentos como contami-nantes naturales, motivo por el cual la salud públi-ca se enfrenta a un gran problema, en particularpara aquellas micotoxinas carcinogénicas, lascuales deberían excluirse de los alimentos tantocomo sea posible. A partir del descubrimiento delas aflatoxinas, con el objetivo de proteger la saluddel consumidor, han sido implementadas regula-ciones en varios países del mundo para diferentesmicotoxinas tales como: aflatoxinas, tricotecenos,fumonisinas, ocratoxina A, patulina, zearalenonaentre otras. La FAO ha jugado un rol importante enla difusión de información sobre regulacionesinternacionales y se ha podido constatar que elnúmero de países con regulaciones se ha incre-mentado en las últimas décadas de un modo con-siderable: en 1981 era de 31, en 1987 ascendió a56, en 1999 a 77 y en la actualidad 99 paísesposeen regulaciones al menos para algún tipo demicotoxina, además nuevas regulaciones se vanincorporando y se espera que para el año 2010 elnúmero alcance a 120. Esto refleja la toma de con-ciencia por parte de los gobiernos acerca de losefectos potenciales de las micotoxinas sobre lasalud humana y animal como también su impli-cancia sobre el comercio internacional.

MICOTOXINASInés SOLÁ. (INTI)

En 2003 se realizó en el JIFSAN, Maryland, unWORKSHOP INTERNACIONAL EN MICOTOXI-NAS “En razón de armonizar el entrenamiento enmicotoxinas mundialmente” con los siguientes ob-jetivos: protección de riesgos para la salud, acce-sibilidad a entrenamiento en métodos de detec-ción, conocimiento de las condiciones que llevana la formación de micotoxinas, regulación y pro-gramas de monitoreo, cumplimiento con estánda-res de comercio internacional, proveer oportuni-dades para las naciones desafiadas económica-mente, entrenamiento de expertos regionales,establecimiento de actividades educacionalescolaborativas, desarrollando un programa mundialde aprendizaje a distancia, preparando materialeseducativosSe aconsejó a los países: desarrollar sistemasintegrados sustentables, de inocuidad alimentariapara la reducción de riesgo para la salud a lo largode toda la cadena alimentaria, desde el productorprimario hasta el consumidor. Idealmente, los pro-gramas de relevamiento y monitoreo deberían serincorporados dentro de sistemas integrados deinocuidad alimentaria. Incrementar la coordina-ción de esfuerzos internacionales para desarrollarprogramas de relevamiento y monitoreo sustenta-bles, capacidad de laboratorios, sistemas de

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Certificación, facilidades de inspección, fortalezaen negociación, armonizar estándares para facili-tar el comercio.Riesgo de salud asociado con contaminación conmicotoxinas: las micotoxinas son metabolitos dehongos, los cuales interactúan con las células yreducen su habilidad para sobrevivir, crecer, o aveces llevar a cabo sus funciones normales. Definición alternativa – metabolitos secundariostóxicos que causan enfermedad si son ingeridosen cantidades suficientemente altas sobre un perí-odo de tiempo suficientemente largo.Se conocen mas de 300 micotoxinas, sin embar-go, el número que posee un riesgo importantepara la salud de humanos y animales es limitado.1.Premisa Central de la toxicología – “la toxicidaddepende de la dosis”. 2. Los estudios en labora-torio no mimetizan los de exposición en el campo.3.La toxicidad potencial y la toxicidad confirmadaen el campo no son iguales. 4.Sin embargo exis-ten grupos de alto riesgo, factores de susceptibi-lidad, etc.Cuáles micotoxinas serán peligrosas: 1.Aquellaspara las cuales la exposición es alta! por ejemplopresencia en alimentos consumidos en grandescantidades. 2. Aquellas que son muy tóxicas! porejemplo tricotecenos macrocíclicos. 3. Aquellasque causan enfermedades en humanos o anima-les, por ejemplo AFB1, FB1, DON. 4. Aquellas quetienen mecanismos que podrían modificar la res-puesta a enfermedades; por ejemplo AFB1, FB1AFLATOXINAS: Causa enfermedades en animalesde granja en todo el mundo y enfermedades enhumanos. En animales de granja la redución de laganancia de peso es uno de los problemas mascomunes. Hepatotóxica en todas las especies tes-teadas. Carcinógeno hepático en roedores, tru-chas, humanos (Grupo 1). Inmunosupresiva enmuchas especies. Su toxicidad se potencia porendotoxinas. La carcinogenicidad hepática enhumanos es agravada por los virus de hepatitis Bo C.ACIDO CICLOPIAZÓNICO: Co-ocurre con aflato-xina en maíz y maní. Agudamente tóxico. Afectael tracto GI, hígado, bazo, riñón, páncreas, glán-dulas salivares, y músculo. Podría haber estadoinvolucrado en la “enfermedad X de los pavos”.Inhibidor específico del transporte de calcio enretículo endoplámico y sarcoplásmico ATPase unposible mecanismo de promoción tumoral.OCRATOXINA A: Causa de nefropatías en porci-nos y aves de corral (JECFA PTWI = 100 ng/kgbw). Carcinógeno renal en ratón (Grupo 2B). Se laencuentra en sangre humana en Europa y Africa.Envuelta en la nefropatía endémica de losBalcanes. Mecanismo= disrupción del metabolis-mo de la fenilalanina.FUMONISINAS: Hepatotóxica en todas las espe-cies testeadas. Nefrotóxica en muchas (JECFAPMTDI 2 ug/kg bw). Toxicidad aguda, para caba-llos (ELEM) y cerdos (PPE). Carcinogénica pararatas y ratón (Grupo 2B). Promueve agudamente

la iniciación del cáncer de hígado cuando co-ocu-rre con AFB1. Sospecha de estar envuelta en cán-cer y NTD (Defectos del Tubo Neural) en humanos.Mecanismo = disrupción del metabolismo de lípi-dosDEOXINIVALENOL: Bajas dosis causan vómitosen cerdos, por eso DON es también conocidocomo vomitoxina. Altas dosis causan rechazo delalimento (JECFA DON PMTDI = 1 ug/kg bw; T-2/HT-2 PMTDI = 60 ng/kg bw)). Causa elevadaIgA, conduciendo a nefropatías IgA. Asociado conbrotes de enfermedades en humanos manifesta-das por problemas GI. Inhibe la síntesis de proteí-nas; supresor del sistema inmune. En ratón, causasuperinducción de citoquinasNefropatía Ig A: Forma mas común de glomerulo-nefritis. 20 a 40% de los pacientes desarrollanestado final de falla renal dentro de 20 años.Podría el DON estar involucrado en la nefropatíahumana IgA?. Alteración de expresión de citoqui-na precede a la inhibición de síntesis de proteínapor DON.ZEARALENONA: Micotoxina Estrogénica que co-ocurre con DON. Como el DON, es asociadacomúnmente con problemas de performance ani-mal, especialmente problemas reproductivos encerdos. Actúa por binding con el receptor deestradiol. Un metabolito (zearalanol) ha estadosiendo usado como un promotor del crecimientoen cerdos y se ha sugerido que estaría involucra-do en brotes de dearrollo precoz en humanos. Esposible la exposición a micotoxinas por otras víaso rutas además de los alimentos. Existe unpotencial de interacción entre micotoxinas y otrastoxinas o agentes infecciosos. El número total demicotoxinas es desconocido.¿Estará subestimado el riesgo por micotoxinaspara la salud humana y animal?

EVALUACIÓN DEL RIESGO DE EXPOSICIÓN AMICOTOXINAS A TRAVÉS DEL USO DE BIO-MARCADORES. PREVENCIÓN DE MICOTOXI-COSIS Chulze, Sofia Noemi. Departamento de Microbiología e Inmunología. Facultad deCiencias Exactas Físico-Químicas y Naturales. UniversidadNacional de Río Cuarto-Río Cuarto-Córdoba Argentina. TE:54-358-4676429 E-mail: [email protected]

Los productos agrícolas y subproductos deriva-dos destinados al consumo humano y animal sonsusceptibles de contaminación con micotoxinas,metabolitos secundarios producidos por especiesfúngicas principalmente pertenecientes a losgéneros Aspergillus, Penicillium, Fusarium yAlternaria.El consumo de productos contaminados conmicotoxinas producen efectos tóxicos en anima-les y en el hombre que varían dependiendo de losniveles consumidos y de las especies afectadas.La disponibilidad de biomarcadores de exposicióna micotoxinas permite realizar estudios para lograr

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una estimación más exacta del riesgo de exposi-ción asociado con el consumo de alimentos con-taminados, evaluar procesos de descontamina-ción y el uso de adsorbentes para disminuir la dis-ponibilidad de las micotoxinas en el tracto diges-tivo.Se han realizado estudios epidemiológicos paradeterminar la exposición a aflatoxinas, midiendo laformación de aductos de aflatoxinas con albumi-nas y DNA. Se ha determinado ocratoxina ensuero humano para estudiar la etiología de lanefropatía endémica de los Balcanes y tumores enel tracto urinario.Las fumonisnas representan un riesgo para lasalud humana y animal, por su toxicidad especie-específica, potencial carcinogenicidad y la inci-dencia en maíz y productos a base de maíz. Larelación esfinganina/esfingosina ha sido propues-to como un biomarcador de exposición a dichasmicotoxinas.Entre los tricotecenos, deoxinivalenol ha sidodetectado en distintos cereales, trigo, avena,cebada, maíz. Se ha propuesto la detección dederivados glucuronidos de DON en orina como unbiomarcador de exposición a deoxinivalenol.

MESA REDONDA: TOXINASBACTERIANASCoordina: Ricardo SOBOL. UADE

AMINAS BIÓGENAS EN ALIMENTOSMaría Isabel YEANNES. Investigador de CONICET. Docente-investigador UNMDP. Preservación y Calidad de Alimentos.Departamento de Química. FCEyN. UNMDP. Funes 3350.7600 Mar del Plata. TE: 54 223 4756167. FAX: 54 223 4753150. E-mail: [email protected]

Las aminas biógenas han sido asociadas con unaamplia variedad de brotes de origen alimentarioalrededor del mundo. Son compuestos biológica-mente y farmacológicamente caracterizados porla presencia de un grupo amino que pueden estarpresentes en los alimentos y que pueden tenerdiferentes efectos sobre la salud del consumidor.Se producen por descarboxilación de los amino-ácidos libres mediado por diferentes microorga-nismos (bacterias, hongos). Es muy conocida laincidencia de la histamina en estos brotes y suimplicancia en los productos pesqueros, pero sedeben considerar otras aminas como la putresci-na, cadaverina, espermina, espermidina que pue-den estar presenten en los alimentos y que actúancomo potenciadores de la histamina, de allí laimportancia de considerar las aminas biógenas yno solamente histamina. Asimismo se considera alos productos pesqueros como los que puedenpresentar este tipo de problemas sanitarios, perolas mismas pueden encontrarse en otros alimen-tos con alta concentración de aminoácidos libres,con microorganismos con actividad descarboxi-lantes y condiciones del medio adecuadas para elcrecimiento de los mismos. Las estadísticas anivel internacional ubican a los productos pesque-

ros como los primeros en importancia, pero sepueden encontrar en productos lácteos, fiambres,vinos, cerveza, etc.Generalmente se asocia la presencia de aminasbiógenas, en especial histamina, con procesos dedeterioro, pero estas se pueden encontrar presen-tes en productos fermentados o madurados en ali-mentos de alto contenido proteico sin estar indi-cando deterioro. Los productos de la pesca fer-mentados o madurados pueden exhibir altas con-centraciones de las mismas, al igual que quesos,chacinados, salsa de soja, etc. En estos casos esimportante el estudio de la flora descarboxilante afin de poder controlar biotecnológicamente el pro-ceso sin llegar a superar los límites sanitarios.

BOTULISMO EN ARGENTINARafael Alfredo Fernández. Cátedra de Microbiología, Facultadde Ciencias Médicas, Universidad Nacional de Cuyo, Casillade Correo 33, Mendoza, Argentina. E-mail:[email protected]

El botulismo es una enfermedad neuroparalíticade alta letalidad producida por la neurotoxinabotulínica (NTBo) elaborada por diferentes espe-cies de clostridios (Clostridium botulinum, C.argentinense, C. baratii, C. butiricum). Hasta hoy,se han identificado 7 serotipos de toxina (A, B, C,D, E, F, G) y 4 subtipos (Af, Ab, Ba, Bf). Se reco-nocen dos formas fisiopatogénicas de la enferme-dad: la intoxicación, que incluye el botulismo poralimentos (BA), el iatrogénico (BIa) y el intencional(BIn); y la toxiinfección, con el botulismo por heri-das (BH), del lactante (BL) y el críptico (BC). Entodos los casos la enfermedad se produce poracción principalmente periférica de la NTBo a nivelde la placa mioneural donde inhibe la liberación deacetilcolina y produce parálisis fláccida simétricadescendente que puede llevar a la muerte porparo respiratorio. El BA, intoxicación clásica,conocido desde hace siglos, se debe a la ingestade toxina botulínica preformada en un alimento,contaminado con esporas de clostridios produc-tores de NTBo (CPTB) y elaborado y conservadode manera inadecuada. En el BH (EE.UU., 1942) yel BL (EE.UU., 1976) la NTBo se produce “in situ”,luego de la colonización de CPTB en una heridainfectada o el intestino de lactantes (menores de 1año de vida, con mayor frecuencia en menores de3 meses). El BC fue definido por el CDC(EE.UU.,1978) en pacientes con síndrome botulíni-co y diagnóstico de laboratorio, que no presenta-ban antecedentes de ingesta de alimento sospe-choso o herida. El BIa (en los ‘90) se deriva de lautilización farmacológica de las NTBo en indivi-duos que padecen distintos tipos de distoníasmusculares y en cosmética.El origen de la contaminación es, quizá en todoslos casos, el suelo, principal reservorio de lasesporas de CPTB. En nuestro país se estudiaron2.009 muestras con 472 (23,5%) positivas paraCPTB con una multiplicidad de serotipos nodetectada en otras partes del mundo (A 56,7%, B

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15,3%, F 3,8%, G 0,4%, Af 3,6%, A+B 3,0%, A+F0,2%, B+F 0,2%, no identificados 16,6%).En Argentina se han producido hasta 2004, 86brotes de BA, con 278 casos y una letalidad de17,1% en los últimos 10 años. Causados 53,6%por alimentos de origen vegetal, 10,5% de origenanimal y 35,9% mixtos; 81,7% de elaboracióncasera y 18,3% industrial.Se han denunciado 4 casos de BH, y 4 casos debotulismo en mayores de 1 año sin antecedentesde ingesta de alimentos tóxicos o heridas (¿crípti-co?).Desde 1982 se han registrado 336 casos de BL(Capital Federal y provincia de Buenos Aires 95,Mendoza 87, Neuquén 35, Río Negro 29, San Luis26, La Pampa 14, Córdoba 13, San Juan 10,Chubut 8, Tucumán 4, Catamarca 3, Salta 3, Jujuy2, Corrientes 1, Entre Ríos 1, La Rioja, Santiagodel Estero 1, Tierra del Fuego 1, Misiones 1, SantaFe 1). Actualmente la NTBo es utilizada con fines tera-péuticos en distintas distonías musculares espas-módicas, entre otras: estrabismo, blefaroespas-mo, espasmo hemifacial, disfonía espasmódica,tortícolis espasmódica, etc. y posteriormente encosmética para tratamiento del envejecimientofacial como alternativa no quirúrgica para trata-miento de las arrugas.Causa preocupación mundial la utilización de laNTBo como arma biológica, 1 g de toxina aeroso-lizada es potencialmente letal para 1,5 millones depersonas, pudiendo diseminarse más del 60% dela dosis a la población blanco utilizando como víatáctica misiles balísticos o spray aeronáutico. Estaes la causa de un relativo desabastecimiento mun-dial de suero terapéutico antibotulínico.

ESCHERICHIA COLI PRODUCTOR DETOXINA SHIGAIsabel CHINEN. Servicio Fisiopatogenia, DepartamentoBacteriología, Instituto de Enfermedades Infecciosas - ANLIS“Dr. Carlos G. Malbrán”. Av. Vélez Sarsfield 563, Buenos Aires(1281). E-mail: [email protected]

Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC)es un patógeno emergente relacionado aEnfermedades Transmitidas por Alimentos, aso-ciado a casos esporádicos y brotes de diarrea cono sin sangre, colitis hemorrágica y síndrome uré-mico hemolítico (SUH). Los principales mecanis-mos de diseminación de STEC son el consumo dealimentos contaminados, el contacto directo conanimales y la transmisión persona-persona. EnArgentina, el SUH es un importante problemaendémico de Salud Pública. La enfermedad cons-tituye la primera causa de insuficiencia renalaguda en la edad pediátrica y la segunda de insu-ficiencia renal crónica y es además responsabledel 20% de los transplantes renales en niños yadolescentes. En el año 2004, la tasa de inciden-cia fue de 12,5 casos por 100,000 niños < 5 deaños. Esta tasa es 10 veces más alta comparadacon la que presentan los países industrializados.

STEC es el principal agente etiológico de SUH enArgentina. La toxina Shiga (Stx) es el principal fac-tor de virulencia en la patogénesis de las enferme-dades asociadas a STEC. Existen descriptos 2tipos de Stx, Stx1 y Stx2, con similar actividadtóxica, pero antigénicamente distintas y conmecanismos de regulación diferentes. Sus genessolo comparten el 58% de la secuencia. El grupode las toxinas Stx1 es relativamente homogéneoaunque recientemente se ha descrito una variante.El grupo de las toxinas Stx2 en cambio presentanumerosas variantes, entre ellas Stx2c (Stx2vh-a yStx2vh-b), Stx2e, Stx2d y Stx2f. Varios sistemasde PCR para la detección de los genes stx hansido diseñados, tanto para diagnóstico como parasubtipificación. Las cepas aisladas en nuestropaís de origen humano, animal y de alimentos sonfundamentalmente productoras de Stx2. La intimi-na y la enterohemolisina constituyen factores devirulencia accesorios involucrados en la patoge-nia. Es fundamental contar con un sistema de vigi-lancia que permita monitorear la situación epide-miológica en nuestro país a fin de promover lasestrategias de prevención y control de este pató-geno.

MESA REDONDA: CONTAMINANTESORGÁNICOS PERSISTENTES Coordina: Graciela Edith DIAZ (UADE)

PCBs EN SÁBALOS DE LA CUENCA DEL RÍODE LA PLATA: TOXICIDAD CAUSADA PORCONGÉNERES ESPECÍFICOSCappelletti, N; Colombo, J. C. Laboratorio de QuímicaAmbiental y Biogeoquímica. FCNyM. UNLP. Av. Calchaquí Km23.5 (1888). Florencio Varela. B. A. Argentina.E-mail: [email protected]

Debido a su hábito detritívoro, el sábalo maximizala ingesta de materia orgánica, incluyendo aportesantrópicos lo cual posibilita la bioacumulación decontaminantes hidrófobos como los PCBs. El aná-lisis de congéneres de PCBs con estructura y toxi-cología similar a las dioxinas (mono y no orto sus-tituidos, “DLPCB”), permitió calcular la toxicidadrelativa (TEQ) presente en los tejidos de estospeces. A partir de la concentración TEQ se esta-bleció el consumo tolerable aplicando las norma-tivas y recomendaciones internacionales (Consu-mo diario recomendado: WHO TDI). A partir deeste esquema, se determinaron concentracionesTEQ en sábalos colectados en diferentes locali-dades sobre el Río de La Plata y Paraná. Los valo-res TEQ registrados en sábalos colectados sobreel Río de La Plata oscilaron entre 0.35-185 pgTEQg-1, observando los valores más elevados en elárea Berazategui-Quilmes (2-185 pgTEQ g-1) locual refleja los aportes de los efluentes como rutacritica de contaminación. En los sábalos prove-nientes del Río Paraná se encontró mayor varia-bilidad de concentraciones, oscilando entre0.008-121 pgTEQ g-1, lo cual muestra que lasmigraciones de estos peces constituyen un meca-

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nismo importante de difusión de estos contami-nantes. Considerando los niveles de WHO TDI de4 pg kg-1 dia-1 los valores hallados indican unconsumo tolerable que puede oscilar entre 0.02 a11 g kg -1dia-1 en el Río de La Plata y de 0.02a 509 g kg -1dia-1 en sábalos colectados en elParaná.

PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS EN ALI-MENTOS INFANTILES Villaamil Lepori, E.C.; Ridolfi, A.; Álvarez, G.; RodríguezGirault, M.E.; Mirson, D.; Ravenna, A.Cátedra de Toxicología y Química Legal. Facultad deFarmacia y Bioquímica. Universidad de Buenos Aires. Junín956- Piso 7º (1113) Buenos Aires- Argentina -Tel/fax: (++54-11) 4964-8283/4 e-mail: [email protected]

Los plaguicidas organoclorados (POC) se utiliza-ron extensivamente en la agricultura, en el áreaforestal y en la salud pública para el control deplagas, sufren una muy escasa y lenta degrada-ción y su consecuencia es la alta persistencia enel medio ambiente y su acumulación en la cadenaalimentaria. Los niños están expuestos a combinaciones deplaguicidas aportados por los alimentos que pre-sentan probables riesgos para la salud a largoplazo. Diversos estudios señalan la presencia enlos alimentos de POC, con significativa frecuencia.Exposiciones prenatales y de niños pequeños, aestas sustancias, se relacionan con una deficien-cia en el desarrollo neurológico y bajo peso cor-poral.En Argentina se hallaron niveles elevados delHeptacloro y su metabolito en productos de ori-gen animal y no se hallaron datos de residuos dePOC en dietas infantiles. El consumo de leche y productos lácteos es ele-vado en lactantes y niños pequeños, y en base alos antecedentes existentes, se estima que puedasuperarse las IDAs recomendadas para algunosde ellos. Por tal razón se decidió investigar la pre-sencia de residuos de POC en alimentos reco-mendados e indicados para lactantes y niñospequeños y calcular la ingesta diaria estimada dePOC en estos alimentos y establecer su correla-ción con la ingesta diaria admisible (IDA)Se analizaron un total de 101 muestras de lechesy productos lácteos recomendados para lactantesde las cuales 50 muestras fueron leches materni-zadas y 51 yogures y postres lácteos obtenidos enel mercado local. Para su extracción se utilizó elmétodo de la FAO/OMS (1994) y para su investi-gación cromatográfica por Cromatografía gaseosacon detector de captura de electrones. La evalua-ción de riesgo se efectuó considerando grupos deplaguicidas de acuerdo a FAO.En las leches maternizadas el plaguicida que sehalló con mayor frecuencia fue el Heptacloro mássu epóxido, 57% de las muestras, le sigue enimportancia la suma de Hexaclorociclohexanos (·-HCH, ‚-HCH y ‰-HCH) el 54%, el DDT (op’DDE,pp’DDE, op’DDT y pp’ DDT) 32% y las Aldrinas

(Aldrin y Dieldrin) 32%. El Lindano fue el plaguicida hallado con mayorconcentración máxima en leche (0,125 µg/ml), lesigue en importancia el grupo del Heptacloro(0,074 µg/ml).Sobrepasan la IDA, teniendo en cuenta las con-centraciones máximas, los lactantes de 3 Kg depeso corporal y una ingesta diaria de 450 ml deleche, los siguientes grupos de POC: Heptacloro111 veces, Aldrinas 3 veces y Endrin 2,3 veces. ElLindano contribuye solo con el 0,2 veces la IDA yel DDT 0,004 veces. Considerándose las concentraciones medias ymedianas de los POC en leches, las ingestas esti-madas decaen por debajo de las IDAs recomen-dadas, no siendo así en el caso del Heptacloro yaque supera la IDA 18 y 13 veces respectivamente.Esto último indica un probable alto riesgo deexposición de los lactantes al Heptacloro y suepóxido.En los productos lácteos los únicos POC queaportan cantidades que superan la IDA fueron elHeptacloro y el Endrin. Considerando la concen-tración máxima hallada, el Heptacloro supera laIDA 6 veces y el Endrin 3 veces. Para las concen-traciones medias y medianas, solo el Heptacloroaporta porcentajes considerables: 81% y 60%respectivamente.

MESA REDONDA: RIESGOTOXICOLÓGICO EN LA PRODUCCIÓN DEALIMENTOSCoordina: Teresa M. FONOVICH. (Escuela de Ciencia yTecnología, UNSAM)

ÁCIDOS GRASOS TRANS Y CLA. EFECTOSOBRE LA SALUD HUMANAClaudio BERNAL. Investigador Adjunto CONICET. ProfesorAsociado Bromatología y Nutrición. Facultad de Bioquímica yCiencias Biológicas. Universidad Nacional del Litoral. CiudadUniversitaria Paraje “El Pozo” s/n. CC 242. (3000) Santa Fe

Durante los últimos años, han sido objeto de granatención los efectos bioquímico-nutricionales delos ácidos grasos (AG) isoméricos (geométricosy/o posicionales). Los isómeros geométricos trans de los AG (AG-t)presentan una conformación espacial lineal quehacen que, en ciertos aspectos químicos y bioló-gicos, estos isómeros se asemejen a los AG satu-rados. Los AG-t son sintetizados por las bacteriasdel rúmen de animales poligástricos, no obstante,los aceites parcialmente hidrogenados son lamayor contribución dietaria de los mismos. El con-tenido de AG-t en los alimentos es muy variadopudiendo llegar a máximos del 50% de los AGtotales en margarinas, shortenings y grasas depanificación. Por otro lado, los Conjugados delÁcido Linoleico (CLA) son AG dienoicos derivadosdel ácido linoleico, que se caracterizan por modi-ficaciones isoméricas posicionales (9,11 ó 10,12) ygeométricas (cis/trans) de sus dobles enlaces. Losmismos son generados por las bacterias del

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rúmen y colónicas, por ello se encuentran natural-mente en la carne de rumiantes, leche y productoslácteos derivados, y también pueden ser forma-dos industrialmente. Existen previsiblemente 8isómeros CLA, pero el c9,t11-CLA y el t10,c12-CLA son los más importantes.El consumo de isómeros de AG puede potencial-mente tener un elevado impacto sobre la salud ysus efectos pueden ser muy diferentes depen-diendo del tipo de isómero que se esté conside-rando. Un alto consumo de AG-t aumenta elcolesterol de las lipoproteínas de baja densidad(LDL-C), reduce el colesterol de las lipoproteínasde alta densidad (HDL-C) y aumenta los niveles deLipoproteína a (Lp-a), incrementando la incidenciade enfermedades cardiovasculares y aterosclero-sis. También los AG-t pueden interferir con algu-nas etapas del metabolismo del Ácido Linoleico yAraquidónico pudiendo conducir a una inhibiciónde la síntesis de PUFAs y de este modo interferiren la formación de eicosanoides y alterar la com-posición y propiedades biológicas de membranas.A nivel experimental, numerosas alteraciones hansido reportadas, entre ellas, en un modelo dietarioexperimental para el estudio específico de losefectos de los AG-t, hemos demostrado hipertri-gliceridemia con acúmulo de triglicéridos en híga-do, alteraciones en la digestibilidad, en la utiliza-ción energética de la grasa dietaria y en el meta-bolismo de la glucosa y lípidos. Mientras numero-sas acciones deletéreas han sido atribuidos a losAG-t, efectos positivos y negativos han sidoreportados sobre los CLA.Los CLA, a nivel experimental, han mostrado efec-tos preventivos sobre la carcinogénesis y accio-nes benéficas sobre el metabolismo glucídico enanimales diabéticos. Además, poseen capacidadpara modular el metabolismo lipídico actuandocomo hipolipemiantes, reduciendo el contenido degrasa corporal e incrementando la masa corporalmagra. Por estos atributos, han sido comercial-mente utilizados para su incorporación en laindustria alimentaria y farmacéutica como suple-mentos dietarios y ayudas ergogénicas. Sinembargo, ha sido demostrado que los CLA pose-en diversos efectos adversos, como apoptosis deladipocito, inducción de resistencia insulínica aso-ciado a hiperinsulinemia, hepatomegalia y estea-tosis. A nivel humano, muy escasos estudios fue-ron reportados sobre los efectos de los CLA.Mayores investigaciones deben ser realizadaspara esclarecer los efectos positivos y/o negativosde los isómeros de AG, no obstante es importan-te limitar su indiscriminado uso a los fines de pre-venir los efectos claramente conocidos sobre lasalud humana.

PROBABLE METABOLISMO NO OXIDATIVODE INDIGOTINA (132) EN UN MODELO ANI-MAL Teresa M. FONOVICH de SCHROEDER. Escuela de Ciencia yTecnología. Universidad Nacional de Gral. San Martín. Avda.

Gral. Paz entre Albarellos y Constituyentes (INTI) edificio 23.(1650) San Martín. Buenos Aires. Email:[email protected] uso de colorantes alimentarios se ha ido res-tringiendo en los últimos años de manera desigualen diferentes países, sobre la base de pocos estu-dios de toxicidad, los que en ocasiones han mos-trado resultados disímiles. Recientemente se hademostrado la conjugación de diferentes sustan-cias (como el etanol y la anilina) con lípidos. Elobjetivo del presente trabajo fue estudiar la proba-ble conjugación del colorante indigotina (132) conlípidos en el hígado de un modelo animal: rataWistar, luego de inyección intravenosa del mismoen solución salina. Diferentes estudios cromato-gráficos y fisicoquímicos de extractos lipídicos dehígado en los que se encontró el colorante y ensa-yos realizados “in vitro” con extractos de hígado,confirman que el mismo sufrió modificaciones ensu solubilidad a su paso por este órgano. Estosresultados nos permiten sugerir su probable con-jugación con fosfolípidos, aunque no podemosdescartar que el colorante pueda también ser sus-trato para otras reacciones enzimáticas que llevenpor ejemplo a la pérdida de grupos sulfonato, yaque ambos tipos de modificaciones conducen aun incremento de su solubilidad en lípidos. Laadministración de una dosis única del colorantepor vía oral demostró que el mismo se incorporarápidamente en el hígado. Los resultados del pre-sente estudio indican la necesidad de continuaresta línea de investigación. El siguiente objetivoserá el estudio del metabolismo de indigotina,cuando se administra por vía oral junto con el ali-mento, durante períodos prolongados y en dosissimilares a las presentes en los alimentos queconsume la población humana.

MIGRACION DE SUSTANCIAS DE LOS ENVA-SES A LOS ALIMENTOSAlejandro ARIOSTI – INTI-Plásticos

La migración de componentes y residuos de losmateriales de envase a los alimentos es un fenó-meno cuya evaluación y control es de la mayorimportancia, ya que produce la incorporación alos mismos de sustancias no deseadas. La migra-ción debe estar acotada, para que no genere cam-bios indeseables de la composición del alimento,así como de sus características sensoriales, ni seaun riesgo para la salud del consumidor. La migra-ción no se produce por el mismo mecanismo entodos los materiales de envase. En los materialespoliméricos, principalmente los plásticos, existeuna transferencia de masa por difusión a través dela matriz polimérica hacia el alimento. El fenóme-no inverso de la migración, la sorción de compo-nentes del alimento en la pared del envase plásti-co, puede traer cambios indeseados en el produc-to envasado, y su estudio es de especial interésen los envases plásticos retornables.La migración, tanto total como específica de algúncomponente, es uno de los aspectos de la eva-luación de la aptitud sanitaria de un envase ali-

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mentario, cualquiera sea el material con que estáfabricado. Sin embargo hay otros factores a teneren cuenta: la inclusión de todos los componentesdel material en listas positivas, el contenido máxi-mo de monómeros y aditivos en la pared del enva-se, la aptitud sanitaria de los pigmentos utilizadosen su coloración, y las posibles variaciones decaracteres sensoriales de los alimentos.

RESÚMENES DE LA SESIÓN DEPÓSTERS

1-STAPHYLOCOCCUS AUREUS: CAPACIDADENTEROTOXIGÉNICA DE CEPAS AISLADASDE ALIMENTOS Y MANOS DE MANIPULADO-RESStaphylococcus aureus: entorotoxigenicity ofstrains isolated from foods and foodservice per-sonnel handsGubbay1 L., Galanternik1 L., Escolar1 M., Cabrera Durango2J., Degrossi3 C.1 Laboratorio Lamyc, 2 INAL-ANMAT, 3 Universidad deBelgrano, Buenos Aires, Argentina – Billinghurst 1237, Bs.As., Argentina. e-mail: [email protected]

Se realizó un estudio prospectivo con el fin deinvestigar la producción de enterotoxinas (ET) encepas de Staphylococcus aureus (SA) aisladas dealimentos listos para consumir y de manos demanipuladores, tomadas de comedores fabriles ylocales de expendio de comidas de ciudad deBuenos Aires y alrededores desde el 1/5/2002 al15/11/2003. Se investigó la presencia de SA en439 alimentos y 336 hisopados de manos (agarBaird Parker, Gram, catalasa, coagulasa, DNAsa yAPI STAPH) y utilizó el sistema miniVIDAS(bioMérieux) para la detección de ET. Se aislaron59 cepas de SA de alimentos y 33 de hisopadosde manos, coagulasa y DNAsa positivas. En 33cepas (de 19 alimentos y 14 hisopados) se estudióla capacidad de producir ET, siendo 20 positivas(60,6 %). De las aisladas de hisopados, 9 (64,3%)fueron enterotoxigénicas, siendo 5 de estos aisla-mientos de manipuladores con lesiones enmanos. Un total de 11/19 cepas de alimentos(57,9%) fueron enterotoxigénicas, con 3 aisla-mientos de mozzarella en envase cerrado. La altaproporción de cepas enterotoxigénicas resalta laimportancia de la capacitación de los manipulado-res en Buenas Prácticas y principalmente hábitosde higiene para prevenir brotes de enfermedadestransmitidas por alimentos por este microorganis-mo

2-ARSÉNICO, PLOMO Y NÍQUEL EN AGUASSUBTERRÁNEAS DE LA REGIÓN CENTRO-OESTE DE LA PROVINCIA DEL CHACOArsenic, lead and nickel in groundwater of the central-westregion of the Province of ChacoBlanes, P. S.; Benítez, M. E.; Giménez, M. C.Facultad de Agroindustrias. UNNE. Cdte. Fernández 755(3700) Pcia. R. S. Peña . Chaco. Argentina. Tel./Fax. (03732)420137. e-mail: [email protected]

En publicaciones previas hemos reportado la pre-sencia de arsénico, en aguas subterráneas deconsumo en el centro-chaqueño, en concentra-ciones que superan el valor guía admitido por elCódigo Alimentario Argentino.En este trabajo se determinan niveles de As, Pb yNi en aguas subterráneas del centro-oeste de laProvincia y se evalúa la posible correlación entredichos metales.El análisis de arsénico se realizó por EAA congeneración de hidruro; plomo y níquel por EAAprevia quelación y extracción con APDC/ MIBK.[APHA, AWWA, WFF, (1992)].El 81.4% de las muestras sobrepasó los 0.01mg.L-1 de As recomendados por la OMS y el32.2% superó los 0.05 mg.L-1 establecidos por elC.A.A. (máx: 0.25 mg.L-1, media: 0.05 mg.L-1; n=59). El contenido de plomo (media: 0.03 mg.L-1;n= 38) fue inferior a 0.05 mg.L-1 (C.A.A.) pero el81.6% excedió los 0.01 mg.L-1 recomendadospor la OMS. El 89% de las muestras exhibe nive-les de níquel inferiores a 0.02 mg.L-1 admitidospor la OMS (media: 0.01 mg.L-1; n= 27).Los valores de correlación fueron muy bajos (Pb-As: r= 0.13; Ni-As: r= 0.28, p-valor > 0.05), por lotanto no se puede afirmar que exista correlaciónsignificativa entre los niveles de As, Pb y Ni en lasmuestras analizadas.

3- ACUMULACION Y DISTRIBUCIONDE CADMIO Y PLOMO EN LA ALMEJAANTARTICA LATERNULA ELLIPTICAAccumulation and distribution of cadmium andlead in the Antarctic clam Laternula ellipticaVodopivez, C.1; Curtosi, A.1; Marrero, J.2; Smichowski, P.2;Piñeiro, A.3;Villaamil Lepori, E.C.31 Instituto Antártico Argentino, Cerrito 1248 (1010) CABA, Tel/Fax: E-mail: [email protected]. 2 Comisión Nacional deEnergía Atómica, San Martín, Bs. As. 3 Cátedra deToxicología y Química Legal – FFyB. UBA

El objetivo de este estudio ha sido evaluar la acu-mulación y distribución de Cd y Pb en la almejaantártica Laternula elliptica, a fin de valorar suposible empleo como futuro recurso alimenticio.Fueron recolectadas 20 muestras compuestas,por cinco ejemplares c/u, durante el verano austral2003/04, en los alrededores de la estación Jubany.Los ejemplares fueron agrupados por tallas, disec-cionados en cuatro tejidos (glándula digestiva(GD), riñón, branquia y músculo) y liofilizados loscuales fueron tratados en horno de micro ondas ycuantificadas por ICP OES. Ambos elementosmostraron concentraciones decrecientes (ug g-1peso seco) en el siguiente orden: riñón (Cd: 129 ±27, Pb: 68 ± 35) > GD (Cd: 11 ± 3, Pb: 1,4 ± 0,6) >branquia (Cd: 2,9 ± 0,8, Pb: 0,7 ± 0,3) > músculo(1,5 ± 1,0, Pb: 0,3 ± 0,05). En todos los casos loscontenidos medios de metales resultaron signifi-cativamente diferentes entre los tejidos examina-dos (P< 0,01). Las regresiones lineales fueron sig-nificativas entre concentración y talla para el Cden músculo, branquia y GD (P< 0,01). Se detecta-

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ron marcadas acumulaciones en riñón y GD. Losvalores medios en músculo (la porción comestible)son similares a los reportados para especies deáreas templadas y comercializados en el mercadointernacional

3-ARSENICO TOTAL E INORGANICO ENALGAS ANTARTICASTotal and inorganic As in Antarctic algaeVodopivez, C.1; Curtosi, A.1; Dinoraz Vélez2, Rosa Montoro2, Silvia Farías3, Patricia Smichowski31 Instituto Antártico Argentino, Cerrito 1248 (C1010AAZ)CABA [email protected] 2 Instituto de Agroquímica yTecnología de Alimentos. Laboratorio de ContaminaciónMetálica. Apartado de Correos 73 46100 Burjassot, España. 3Comisión Nacional de Energía Atómica, Av. Gral. Paz 1499(B1650KNA) Bs. As.

El continente antártico presenta una ampliavariedad de algas marinas las cuales cum-plen un rol crítico en la cadena alimenticiade los ecosistemas costeros. Si bien dife-rentes estudios han reportado niveles deelementos traza en especies de macroalgasantárticas, la información disponible para Ases limitada. En el presente trabajo se deter-minó la concentración de As total e inorgá-nicos hallados en nueve especies de macroalgasantárticas (6 feóofitas y 3 rodofitas), recolectadasdurante el verano austral 2002/03 en las cercaníasde la estación Jubany, isla 25 de Mayo, islasSethland del Sur, Antártida. Las muestras fueronsecadas a 80°C hasta peso constante, molidas ydigeridas con una mezcla ácida en horno demicroondas. El As total fue cuantificado por ICPOES. Para la determinación de As inorgánico serealizó una digestión ácida de la muestra, y tras laextracción del arsénico inorgánico con solventesorgánicos, (retroextracción en medio ácido) seprocedió a la cuantificación mediante FI-HG-AAS.Los niveles de As total variaron en un ampliorango con valores mínimos de 5.8 ug g-1 pesoseco (ps) en Myriogramme sp., y máximos de151.8 ug g-1 (ps) en Himantothallus grandifolius,pero mostrando una clara tendencia dominantedonde: As total en feofitas > As total en rodófitas.Los niveles de As inorgánico mostraron menoresvariaciones detectándose los valores mínimos enMyrriogramme sp (0.12 ug g-1 ps) y los máximosen Phaeurus antarcticus (0.84 ug g-1 ps). Los altosniveles de As total, hallados en algunas especies,parecen estar asociados a las características geo-químicas locales, mientras que los relativamentebajos niveles de As inorgánicos sugieren la exis-tencia de eficientes mecanismos metabólicos parala síntesis de compuestos organoarsenicales.

5- TOXINAS CIANOBACTERIANAS: EXPE-RIENCIAS EN LA PROVINCIA DE SAN LUISGonzález, D. M.1, Silva, P. G.1, Echenique, R. O.2 y SilvaH.J.1 1.- Universidad Nacional de San Luis, [email protected],2.- Universidad Nacional de La Plata.

En este trabajo se presenta una síntesis de estu-dios realizados con Cyanophyta o algas verde-azuladas considerando la capacidad que poseende formar blooms o floraciones con producción demetabolitos volátiles, entre ellos Geosmina, quealteran los caracteres organolépticos del agua yfundamentalmente por la capacidad de producirmetabolitos de gran importancia toxicológica en elmedio ambiente como hepatotoxinas y/o neuroto-xinas, de altísimo riesgo para la salud humana yanimal.Se realizaron cultivos y aislamientos en medio Z8,CG/ EM para el análisis de compuestos volátiles yensayos de toxicidad aguda en ratones.1.- Resultados obtenidos con muestras ambienta-les

Los ensayos de toxicidad aguda en ratones conmuestras liofilizadas procedentes de las floracio-nes fueron negativos.2.- En experiencias realizadas con Nostoc sp yTolypothrix sp, dos géneros con aplicaciones bio-tecnológicas, mediante inyección intraperitonealde biomasa algal suspendida en solución fisiológi-ca se observaron signos compatibles con apopto-sis en hígado.

COMUNICACIONES LIBRES

BEBIDAS ENERGIZANTES ¿UN RIESGO PARALA SALUD?Edda C. Villaamil LeporiCátedra de Toxicología y Química Legal. Facultad deFarmacia y Bioquímica. Universidad de Buenos Aires. Junín956- Piso 7º (1113) Buenos Aires- Argentina -Tel/fax: (54-11)4964-8283/4 e-mail: [email protected]

Son así llamadas las bebidas mezclas embotella-das o enlatadas que contienen extractos de plan-tas, azúcar y otras sustancias. Los ingredientesprincipales de la mayoría de estas bebidas son:taurina, cafeína, guaraná, ginseng, glucuronolac-tona y vitaminas. Algunas poseen minerales, ino-sitol y carnitina, entre otras sustancias.Suelen consumirlas mayoritariamente los jóvenes,solas o combinadas con alcohol, en discoteca.También está muy extendido su consumo, entrelos estudiantes en época de exámenes, para con-centrarse mejor y por deportistas.En Argentina se comercializan más de 10 marcasde estas bebidas, importadas y de elaboraciónnacional. Están autorizadas por ANMAT(Administración Nacional de Medicamentos

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Alimentos y Tecnología Médica) como suplemen-tos dietarios y son de venta libre en la mayor partedel país.En otros países se las considera refrescos cafei-nados, otros incluyen la leyenda con alto conteni-do de cafeína o los definen como suplementosdietarios. La OMS sugiere que se las considerebebidas estimulantes.Ciertos países han restringido la venta de estasbebidas o han implementado campañas disuasi-vas para los usuarios que las combinan con alco-hol. Varios municipios y/o provincias de laArgentina han limitado el expendio de estas bebi-das y otras pretenden hacerlo.Mediante la Disposición 3634 /2005 de ANMATdel 8 de julio de 2005 en Argentina la cantidad decafeína permitida pasó de 35 mg a 20 mg porcada 100 mL.Un estudio realizado en atletas, a los cuales se lesadministró bebidas energizantes que conteníantaurina, se observó durante el ejercicio una mayorresistencia.El consumo de las bebidas energizantes aumentael riesgo de infarto y de trastornos cardiológicos,especialmente cuando se asocia al etanol, ya quepueden causar hipertensión y provocar muertesúbita. La mezcla de cafeína y alcohol provocacuadros de deshidratación con el consiguienteriesgo cardíaco y renal. Según diferentes informes técnicos estiman queno se generarían efectos estimulantes sobre elSNC por la interacción entre cafeína y taurina. Lainteracción más importante es en la acción diuré-tica entre la cafeína y taurina la cual puede estaraumentada por ingesta de etanol. Expertos en salud consideran a las bebidas ener-géticas no seguras. ¿Debemos preocuparnos?Las bebidas energizantes aportan ingestas de tau-rina tales, que cuando contiene la máxima con-centración, corresponde a ingestas comprendidasentre 2,5 y 30 veces la máxima aportada por losalimentos (400 mg/día).Respecto a la glucuronolactona los consumidoresregulares (1 envase/día) de bebidas energizantes,ingieren tal cantidad (625 mg) que excede laingesta normal (1,2 mg/día) en más de 500 veces. ¿Cual es la razón de la adición de tales cantidadesde taurina y glucuronolactona a las bebidas ener-gizantes? Según opinión de expertos internacionales esposible una interacción de los constituyentes delas bebidas energizantes, las cuales no han sidobien estudiadas.

EFECTOS DE LOS XENOBIÓTICOS SOBRE LASECRECIÓN Y COMPOSICIÓN DE LA LECHE.ESTUDIOS REALIZADOS CON EL 2,4-D ENRATASStürtz N., Evangelista de Duffard A.M., Duffard R. Laboratorio de Toxicología Experimental (LATOEX). Facultadde Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. UniversidadNacional de Rosario. Suipacha 570. 2000 Rosario. Argentina.

Los xenobióticos pueden tener el efecto potencialde actuar sobre alguno de los procesos que inter-vienen en la producción, secreción y constituciónde la leche -un sistema altamente regulado en elque intervienen hormonas, neurotransmisores yestímulos de la cría y de la madre- ejerciendomodificaciones que redundan en la calidad o can-tidad de la leche producida. Para evaluar el efectodel herbicida ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) durante la lactancia, se trataron ratas madresen el día postparto 1, con distintas dosis del her-bicida a través de diferentes vías de administra-ción. No se observaron efectos tóxicos aparentessobre las madres tratadas aunque si, disminucio-nes en la ganancia de peso corporal de las crías(hasta el 50 % en algunos casos) y retardo en eldía de apertura de los ojos. Se determinó una rela-ción constante entre la concentración de 2,4-D enel suero de la madre / concentración de 2,4-D enla leche. 2,4-D también produjo disminución delcontenido de lípidos totales, así como variación enel perfil de ácidos grasos poliinsaturados (funda-mentalmente araquidónico y docosahexanoico) dela leche materna, alteraciones que podrían sercausales de los efectos adversos observados enlas crías de madres expuestas al 2,4-D a través dela leche.

EVALUACIÓN DE LA CONTAMINACIÓN CONMETALES EN ALGAS Y MARISCOS DELGOLFO SAN JORGE (ARGENTINA)Pérez, Adriana1; Farias Silvia S2.; Perez Laura1; StroblAnalia1; Adriana Piñeiro3; Clara Magdalena López3; FajardoMaría Angélica1.1-CRIDECIT, Fac. Ciencias Naturales, Universidad Nacionalde la Patagonia San Juan Bosco. Comodoro Rivadavia.Chubut. 2- Comisión Nacional de Energía Atómica, Unidad deActividad Química, Centro Atómico Constituyente.- Av. GralPaz 1499, 1650/San Martín. 3- Cátedra de Toxicología yQuímica Legal. Facultad de Farmacia y Bioquímica.Universidad de Buenos Aires. E-mail de contacto: [email protected].

En la costa patagónica Argentina existe una granvariedad de moluscos bivalvos, que son recolec-tados como recurso alimentario y distintas espe-cies de algas reconocidas por su valor nutritivo. El objetivo fue cuantificar los niveles de Pb, Cr yCd en los Aulacomya ater (cholga) y Mytilus edulisplatensis (mejillón) bivalvos y en Porphyra colum-bina (alga roja), determinar las concentraciones demacroelementos (Ca, Mg y P), microelementos(Fe, Zn, Cu, Cr, Mo, Mn y Se), elementos ultratra-za (Ni, As, V, B y Co) y elementos no esenciales(Cd y Pb) a fin de establecer la máxima cantidadde bivalvos y algas que se podrían consumir yque no representen un riesgo para la salud en fun-ción de la Ingesta Semanal ProvisonalmenteTolerable (ISTP).Las muestras fueron digeridas por vía húmeda.Los analitos de interés se cuantificaron medianteun espectrómetro de plasma inductivo de argónaxial, multielemental simultáneo, provisto dedetector de estado sólido y automuestreador. Cd,

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Pb, y Cr se cuantificaron por espectrofotometríade absorción atómica con horno de grafito. Los sitios de muestreo fueron, Bahía Solano,Punta Maqueda, zonas alejadas de la actividadantropogénica y la desembocadura del Arroyo LaMata, la cual recibe efluentes de la actividadpetrolera. Las máximas concentraciones de elementos sehan encontrado en la desembocadura del ArroyoLa Mata, lugar considerado mas contaminado.Los valores de cadmio y plomo hallados no supe-ran los 10 µg/g ps propuestos como límites máxi-mos por SENASA. Sin embargo se han observadovalores cercanos a la ISTP para el cadmio si seconsumen los bivalvos o las algas. Si se ingieren tres cucharadas de alga seca y moli-da, no se supera a la ISTP para el Cd y sí cubrenla ingesta diaria recomendad de Vitamina C y unporcentaje importante de algunos de los elemen-tos esenciales para una mujer joven adulta.

COLORANTES Y EDULCORANTES EN ALI-MENTOS QUE CONSUME PREFERENTEMEN-TE LA POBLACIÓN INFANTILMarcela IljutkoEscuela de Ciencia y Tecnología. Universidad Nacional deGral. San Martín. Avda. Gral. Paz entre Albarellos yConstituyentes (INTI) edificio 23. (1650) San Martín. BuenosAires. Email: [email protected]

El uso de aditivos alimentarios se ha incrementa-do notablemente en los últimos años, debido prin-

cipalmente a la necesidad de conservar los ali-mentos de producción industrial. Diferentes aditi-vos se usan para dar color o reforzar el color dealgún ingrediente (colorantes), o como sustituyen-te del azúcar (edulcorantes). El objetivo del pre-sente trabajo fue evaluar a través del rótulo, elcontenido de colorantes (cualitativamente) y edul-corantes (cuali y cuantitativamente) en golosinas,jugos y polvos para preparar jugos, gelatinas, mer-meladas y gaseosas, disponibles para la venta enmercados y supermercados de los partidos deVicente López y San Martín en el período2004/2005. Entre los colorantes más utilizados enmermeladas y gelatinas se encuentran algunos delgrupo de los azoicos que se encuentran prohibi-dos en otros países (ejemplo: amaranto (123) enEstados Unidos). En el caso de los edulcorantesno nutritivos se utilizan ampliamente sacarina(954), ciclamato (952), aspartame (951) y acesulfa-me K (950). Las bebidas gaseosas, los jugos y lospolvos para preparar jugos, contienen en sumayoría estos aditivos, independientemente deque se trate de productos rotulados como “light”o no.Nuestros resultados sugieren que de esta manerala mayor parte de la población y en particular lapoblación infantil, que consume preferentementeestos alimentos, se expone diariamente a estosaditivos alimentarios sin saberlo, y sin tener cono-cimiento alguno acerca de posibles efectos adver-sos que los mismos puedan causarles.

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Miércoles, 2 de noviembre / Wednesday, 2nd11:30 – 12:30

CONFERENCIA / LECTURESALA / HALL: MAGNA

El siguiente resumen corresponde a la presenta-ción que reemplazó a la de Rene Sotomayor /The following abstract corresponds to a presenta-tion that was in place of that of Rene Sotomayor

EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR EN CÁNCERGÁSTRICOMolecular epidemiology in gastric cancerHelena Groot de Restrepo y María Mercedes Torres. Laboratorio de Genética Humana. Universidad de los Andes

La genética toxicológica estudia los agentes quí-micos físicos o biológicos que interfieren con elADN o con los procesos celulares normales, y lospuede clasificar como agentes genotóxicos. Lacélula que ha sido agredida por estos agentes,puede seguir alguno de estos caminos: si hayreparación normal del daño en el ADN, la célulavuelve a su estado normal, si hay demasiado dañola célula muere, y si hay reparación defectuosa oinsuficiente, aparecen las mutaciones. Estasmutaciones pueden originarse tanto en las célulasgerminales como en las somáticas. Si ocurren enlas células germinales, no afectan a la persona endónde aparece la mutación, pero ésta sí es trans-mitida a su descendencia y a generaciones futu-ras. En células somáticas, se afecta la persona enquien ocurre la mutación, no se transmite a sudescendencia, y puede constituir uno de lospasos en la aparición de un cáncer. Los estudiossobre poblaciones humanas expuestas a sustan-cias genotóxicas deben hacerse bajo el conceptode epidemiología molecular, en dónde además deevaluarse el aspecto epidemiológico tradicional,debe incluirse el uso de marcadores biológicos obiomarcadores que indiquen algunos pasos inter-medios del proceso que lleva a la aparición de uncáncer antes de que ello ocurra. El cáncer Gástrico (CG), una de las principalescausas de mortalidad por cáncer en Colombia, esuna enfermedad de etiología compleja, que invo-lucra factores ambientales y de susceptibilidadgenética como polimorfismos en enzimas encar-gadas de la desintoxicación de xenobióticos(Glutationes, Citocromo p450), enzimas involu-cradas en la reparación de ADN (XRCC1), y facto-

res inmunogenéticos (IL1B y FNT). Su incidenciamundial es variable lo que puede ser atribuido a ladistribución diferencial de estos polimorfismos enlas poblaciones. En el presente estudio se evaluóla asociación de factores ambientales y genéticoscon CG en dos poblaciones étnicamente diferen-tes, Bogotá (I) y Cauca (II). La deleción homoci-gótica de las enzimas Glutation S-transferasas M1(GSTM1) y T1 (GSTT1) fueron determinadas porPCR y por RFLP-PCR las variantes genéticas delas enzimas CYP2E1 y XRCC1. En la población 1se analizaron 111 donantes y 68 pacientes conCG, y en la población II, 96 donantes y 46 pacien-tes con CG. La asociación entre los polimorfismosy los factores ambientales fueron evaluadasmediante análisis de regresión logística. En lapoblación I, se observó asociación entre lasvariantes del gen XRCC1 (Arg/Arg 194 ) y CG(OR:4.15; CI 95% [1.33 -12.9]), asimismo, el hábi-to de fumar y el consumo de comidas ahumadasestuvo asociado con CG (OR:3.96; CI 95% [1.61-2.81]) y OR:2.75; CI 95% [1.29- 5.87], respectiva-mente). En la población II, el polimorfismo de dele-ción de la enzima GSTM1 fue asociado con CG(OR:5.45; CI 95% [1.72- 17.20]). Factores comofumar, consumo de alcohol e infección con H.pylori mostraron asociación (OR: 6.70; CI 95%[2.20-2.30]) (OR:3.27; CI 95% [1.14-9.4]) (OR:5.58;CI 95% 1.81-17.19]). La diversidad étnica enestas poblaciones podría ser la causa de la varia-ción en las frecuencias génicas de estos marca-dores de susceptibilidad a cáncer, y explicar par-cialmente los resultados encontrados en estasdos poblaciones. Los resultados confirmaron alhábito de fumar como un importante factor deriesgo a cáncer gástrico.

Viernes, 4 de noviembre / Friday, 4th09:00 – 11:00

MESA REDONDA 14 / SYMPOSIUM 14SALA / HALL: PLUMERILLO

INESTABILIDAD DE SISTEMAS GENETICOSNO MENDELIANOS EN TUMORES HUMANOS/ NO MENDELIAN GENETIC SYSTEMS INSTA-BILITY IN HUMAN TUMOURSCoordinador: NÉSTOR BIANCHI. Laboratorio de Genética Molecular Poblacional, Instituto Multidisciplinario de BiologíaCelular (IMBICE). Argentina.

El siguiente resumen corresponde a la presenta-

VI CONGRESO LATINOAMERICANO DE MUTAGENESIS, CARCINOGENESIS YTERATOGENESIS AMBIENTAL

XIV CONGRESO ARGENTINO DE TOXICOLOGIAXXIV JORNADAS INTERDISCIPLINARIAS DE TOXICOLOGIA

Ciudad de Mendoza, 1 al 4 de noviembre de 2005

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ción que reemplazó a la de Alberto Solari / Thefollowing abstract corresponds to a presentationthat was in place of that of Alberto Solari

ESTUDIO DE TASAS MUTACIONALES DEMICROSATÉLITES DE CROMOSOMA YA study on mutation rates of Y chromosomemicrosatellitesCatanesi, C.I. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular (IMBICE)Laboratorio de Genética Molecular, C.C.403 (1900) La Plata,[email protected]

El cromosoma Y presenta dos regiones pseudo-autosómicas y una región específica masculina(MSY). La región MSY carece de homología con elcromosoma X y no sufre recombinación con él,por lo cual las mutaciones constituyen la únicafuente de variación en dicha región. Los microsa-télites localizados en la región MSY son utilizadosen una amplia variedad de estudios y aplicacionescomo genética forense, estudios de inestabilidadgenética y estudios de filogenia. El modelo demutación por pasos, aceptado como mecanismode mutación de los microsatélites autosómicos,también se aplica a los de la región MSY. Segúneste modelo, los cambios ocurren por el agregadoo sustracción de una unidad de repetición a unalelo original, siendo la probabilidad de gananciamayor que la probabilidad de pérdida de una repe-tición, mientras que la ocurrencia de cambios dedos o más repeticiones es mucho menos frecuen-te. El estudio de las tasas de mutación de losmicrosatélites de la región MSY es de gran impor-tancia para una correcta aplicación de estos mar-cadores en estudios genómicos y poblacionales.En un estudio colaborativo realizado por el GrupoEspañol Portugués de la International Society ofForensic Genetics (GEP-ISFG), se estimaron lastasas de mutación de 16 microsatélites de laregión MSY (DYS19, DYS385, DYS389I y II,DYS390, DYS391, DYS392, DYS393, DYS437,DYS438, DYS439, DYS460, DYS461, DYS635,GATA H4 y GATA A10) mediante el análisis detransferencias alélicas en pares padre-hijo. Seobtuvo una tasa de mutación de 1,998 x 10-3 paratodos los loci (95% Int. de Confianza 1.501 10-3 -2.606 10-3), mientras que las tasas específicas delocus variaron entre 0,824x10-3 (DYS438) y6,873x10-3 (DYS439). La frecuencia de gananciade repeticiones representó el doble que la fre-cuencia de pérdida. Además, se observó una ten-dencia a una mayor mutabilidad en los alelos conmayor número de repeticiones (>11), y un aumen-to de la tasa de mutación con la edad paterna.Esta estrategia de análisis de la descendenciamasculina ha demostrado ser de gran utilidad enla estimación de tasas de mutación específicas demicrosatélites de MSY.

El siguiente trabajo fue presentado en la Sesiónde Pósters, sección Analítica, el día jueves 3 de

noviembre. El correspondiente resumen que sepresenta a continuación, fue omitido por error enel Suplemento (Noviembre 2005) de ActaToxicológica Argentina dedicado e este congreso.

CUANTIFICACIÓN DE ARSENICOINORGÁNICO (III Y V) Y METABOLITOS METI-LADOS, ÁCIDOS MONOMETILARSÓNICO(MMA) Y DIMETILARSÍNICO (DMA), EN ORINAUTILIZANDO GENERACIÓN DE HIDRUROS-ESPECTROMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICAINYECCIÓN EN FLUJOQuantification of inorganic arsenic (III y V) andmethylated metabolites; monomethylarsonicacid (MMA) and dimethylarsinic acid (DMA) inurine using flow injection hydride generationatomic absorption spectrometry Navoni J.A., Olivera N.M.; Lenzken S.C.; Villaamil Lepori E.C.; López C.M.Cátedra de Toxicología y Química Legal, Facultad deFarmacia y Bioquímica-Universidad de Buenos Aires. Junín956, (1113) Buenos Aires. E-mail: [email protected]

El arsénico (As) es un contaminante natural queafecta una amplia zona de nuestro país. En losúltimos años, gracias a los estudios de especia-ción se ha logrado un gran avance en el conoci-miento sobre la toxicidad de las especies arseni-cales. La concentración de (As) total urinario es un índi-ce utilizado para evaluar exposición reciente aeste tóxico.El objetivo del presente trabajo fue optimizar yvalidar un método rápido para valorar el contenidode arsénico total (Arsénico inorgánico: III y V) y susmetabolitos, los ácidos monometilarsónico (MMA)y dimetilarsínico (DMA)), responsables de laacción tóxica.La metodología aplicada incluyó la derivatizaciónde las especies arsenicales (As III, As V, MMA yDMA) utilizando una solución ácida de L-Cisteínaal 4% y posterior valoración mediante un sistemade inyección manual REODYNE 7125 acoplado aun generador de hidruros VARIAN VGA77, conposterior cuantificación, utilizando un equipo deespectrometría de absorción atómica VARIAN AA-475 atomización por llama. El coeficiente de variación intra e inter-ensayo fuede 11,00% y 14,15% respectivamente. El límite dedetección obtenido fue de 1,81 µg/l y el de cuan-tificación de 6,03 µg/l Si bien existen diversas metodologías para lacuantificación del arsénico total, el resultado obte-nido requiere una adecuada interpretación debidoa la posibilidad de sobreestimar el contenido porespecies Arsenicales no tóxicas en las mismas. La metodología propuesta es útil para evaluar laexposición al arsénico sin necesidad de utilizarprolongados pretratamientos, de forma mas eco-nómica y rápida, evitando la sobreestimación pormedición de especies del arsénico orgánicas notóxicas.

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Los siguientes resúmenes reemplazan a los queaparecen en Acta Toxicológica Argentina volumen13, Suplemento (Noviembre 2005), página 44, yque contienen errores de impresión.

EFECTOS DEL PARAQUAT Y DEL PLOMO ENLA ACTIVIDAD DE COLINESTERASAS EN DOSESPECIES DE INVERTEBRADOS ACUÁTICOSEffects of paraquat and lead on cholinesteraseactivity in two species of freshwater inverte-bratesKristoff, G., Cochón, A. , San Martín de Viale, L.C., Verrengia Guerrero, N. R.Departamento de Química Biológica, FCEN, UBA. 4° piso,Pabellón II, Ciudad Universitaria, 1428. Tel/Fax: 4576 3342. E-mail: [email protected].

La inhibición de colinesterasas (ChE) ha sido utili-zada por décadas para monitorear el grado deexposición a organofosforados y carbamatos. Sinembargo, en los últimos años, se ha reportadoque otras sustancias también pueden produciruna inhibición apreciable de ChE. El mecanismode la inhibición involucraría al sitio aniónico de laenzima. En este grupo, se incluyen algunos meta-les: Cd(II), Cu(II), Hg(II), Pb(II); detergentes y el her-bicida paraquat, entre otros. Dado que, en inver-tebrados no se ha estudiado el efecto del para-quat sobre la actividad de ChE, nuestro objetivoconsistió en evaluar dicho efecto en dos inverte-brados de agua dulce: Biomphalaria glabrata yLumbriculus variegatus, ambos recomendadospara estudios de toxicidad de aguas. La actividadde ChE se midió según el método de Ellman utili-zando ioduro de acetiltiocolina como sustrato. Losbioensayos realizados a un nivel de exposición de2,5 mg de principio activo/L mostraron, en B. gla-brata, un aumento en la inhibición de ChE con eltiempo de exposición, desde un 29% a las 24 hshasta un 46% a las 96 hs con fitoquat (formuladocomercial) y de un 16% a un 53% con paraquatdroga pura. Luego de transferir los caracoles a unmedio libre de herbicida por 48 hs, no se observórecuperación de la actividad enzimática. EnLumbriculus variegatus, en cambio, la inhibiciónenzimática resultó transitoria. Se observó un 10 %de inhibición a las 24 hs que aumentó hasta el30% a las 72 hs, pero a las 96 hs la actividad enzi-mática retornó a los valores controles. Al exponerpor 48 hs a ambos invertebrados a 0,5 mg Pb(II)/L,se observó un 25 % de inhibición en B. glabrata yun 20 % en L. variegatus. Ante la exposición con-junta a plomo y paraquat se obtuvo un aumentoen la inhibición enzimática llegando a un 50% enB. glabrata y a un 44% en L. variegatus. Estosresultados muestran que al igual que en vertebra-dos, paraquat y Pb(II) inhiben inespecíficamente alas colinesterasas de estos invertebrados.Considerando el efecto inhibitorio sobre ChE, losejemplares de B. glabrata resultaron ser más sus-ceptibles al paraquat que los oligoquetos.

INHIBICIÓN DE LA ACTIVIDAD DE COLINES-TERASAS EN LUMBRICULUS VARIEGATUS YBIOMPHALARIA GLABRATA POR METILAZIN-FOSInhibition of cholinesterase activity by azin-phos methyl in Lumbriculus variegatus andBiomphalaria glabrataKristoff, G., Verrengia Guerrero, N., Pechén de D´Angelo, A., Cochón, A.Departamento de Química Biológica, FCEN, UBA. 4º piso,Pabellón II, Ciudad Universitaria, 1428. Tel/Fax: 4576 3342. E-mail: [email protected]

El metilazinfos es un insecticida organofosforadoque actúa como un inhibidor de las colinesterasas(ChE). El presente trabajo tiene como objetivocomparar el efecto del metilazinfos en la actividadde ChE en dos especies de invertebrados acuáti-cos:Lumbriculus variegatus y Biomphalaria glabrata.La actividad de ChE se midió según el método deEllman utilizando ioduro de acetiltiocolina comosustrato. Al exponer por 48 hs a L. variegatus adistintas concentraciones de metilazinfos, seobtuvo una dosis de no efecto de 0,001 mg/L yuna concentración inhibitoria 50 (CI50) de 0,006mg/L. A dosis mayores a 0,05 mg/L la inhibiciónresultó del 90% llegando a un 99% de inhibicióncon 0,25 mg/L. La inhibición enzimática, depen-diente de la dosis, se vió acompañada por unaumento de rigidez y de inmovilidad. Sin embargo,no se observó mortalidad. Al exponer a B. glabra-ta por 48 hs a distintas concentraciones de meti-lazinfos se obtuvo una dosis de no efecto de 0,5mg/L y una C I50 de 5,86 mg/L. Con una concen-tración de 15 mg/L se observó una inhibición deChE del 66%. Al evaluar cómo afectaba el tiempode exposición en la inhibición enzimática, seobservó en ambos invertebrados una disminuciónde la actividad a las 24 hs, haciéndose máxima alas 48 hs y permaneciendo constante durante eltiempo ensayado (7 días). Los bioensayos derecuperación, luego de exponer por 48 hs al insec-ticida, mostraron en L. variegatus una recupera-ción de la actividad de ChE a los 21 días si la con-centración utilizada era la CI50, en cambio, si laconcentración utilizada era 0,1 mg/L sólo se recu-peró un 10% de la actividad. En B. glabrata luegode estar expuesto por 48 hs a la CI50 se observóun 25 % de recuperación a los 21 días. Los resul-tados obtenidos muestran que ejemplares de L.variegatus son más susceptibles a la inhibición deChE por metilazinfos que los del gastrópodo. LaCI50 es 1000 veces menor y la dosis de no efecto500 veces menor en L. variegatus que en B. gla-brata. La actividad de ChE de L. variegatus podríaser utilizada como biomarcador de exposición ametilazinfos, en aguas contaminadas aún a dosismuy bajas del insecticida.

El siguiente resumen reemplaza al que aparece enActa Toxicológica Arg. vol. 13, Supl. (Nov. 2005),página 48, y que contiene errores de impresión.

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NIVELES DE BIFENILOS POLICLORADOS(PCBS) EN PLASMA EN LA POBLACIÓNGENERAL DEL ÁREA METROPOLITANA DEBUENOS AIRESPolychlorinated biphenyls (PCBs) levels inblood plasma in general people from BuenosAires areaRidolfi A.; Villaamil Lepori E.C. ; Rodríguez Girault M. E. Álva-rez G. ; Mirson, D.; Bardoni, Natalia: López, C.M.; *Sosa; G.Cátedra de Toxicología-Facultad de Farmacia y Bioquímica-UBA-Junín 956 (113) Buenos Aires-Te/Fax: 54-11-4964-8283/8284. Email: [email protected]* Dirección de Salud y Asistencia Social- UBA

Los PCBs son un grupo de congéneres muy esta-bles, poco biodegradables los cuales se acumulanen la cadena alimentaria y responsables de conta-minaciones y los consecuentes efectos sobre lasalud humana por su utilización en múltiplesindustrias. Los niveles de PCBs en plasma o suero humanohan sido propuestos como indicadores de exposi-ción tanto en el control de personas expuestas enel ámbito laboral como a fin de estimar la conta-minación ambiental en la población general.Es escasa la información en nuestro país sobrelos niveles de PCBs en medios biológicos huma-nos. En este trabajo se presentan las concentra-ciones halladas en muestras de plasma de 55 indi-viduos de ambos sexos con edades comprendi-das entre 18 y 56 años.Se empleó para el análisis de PCBs la técnica deJanak, K y col. (1999) modificada, medianteextracción en fase sólida con descomposición delípidos on-column. Para la investigación y cuantifi-cación se empleó un GC/ECD, utilizando doscolumnas (HP-PAS 5 y HP-PAS 1701), comoestándar interno decaclorobifenilo y como testi-gos una mezcla de los congéneres 28, 52, 101,138, 153 y 180.El valor medio de la sumas de congéneres investi-gados en la población estudiada fue 1,4 ± 1,2 ppb(ng/ml), con un rango de concentraciones com-prendido entre no detectable (ND) y 6,0 ppb.El 98% de las muestras contenían al menos unode los congéneres analizados. Los congéneresque aparecieron con mayor frecuencia fueron el 28y el 52 (87,3% respectivamente), siguiéndole el180 (24%), 153 (20%), y el 138 y 101 (7,3% cadauno). El mayor rango de concentraciones de loscongéneres individuales fue el congéner 28 elcual estuvo comprendido entre ND a 5,0 ppb. Lesigue en importancia el 52 con un valor máximo de2,6 ppbEl nivel medio de la sumas de congéneres dePCBs hallado en este estudio se considera dentrode los reportados para la población general en labibliografía consultada.

El siguiente resumen reemplaza al que apareceen Acta Toxicológica Argentina volumen 13,Suplemento (Noviembre 2005), página 62, y quecontiene errores de impresión.

ESTUDIO COMPARATIVO ENTRE LAPOBLACIÓN GENERAL Y LABORAL DE SEISCONGÉNERES DE BIFENILOS POLICLORA-DOS (PCBS) EN PLASMA HUMANOComparative study between general and wor-king people of six polychlorinated biphenyls(PCBs) congeners in human plasma Villaamil Lepori E.C. ; Ridolfi A.; Rodríguez Girault M. E.; Álvarez G. ; Mirson, D. El Kassisse, Y.Cátedra de Toxicología-Facultad de Farmacia y Bioquímica-UBA-Junín 956 (113) Buenos Aires-Te/Fax: 54-11-4964-8283/8284. Email: [email protected]

Los PCBs son un grupo de mas de 200 congéne-res muy estables, liposolubles y poco biodegrada-bles los cuales se acumulan en la cadena alimen-taria. Los niveles de PCBs en plasma o suero humanohan sido propuestos como indicadores de exposi-ción tanto en el control de personas expuestas enel ámbito laboral como a fin de estimar la conta-minación ambiental en la población general.Es difícil la interpretación de los resultados de losniveles de los diferentes congéneres de PCBs enplasma a fin de estimar un mayor o menor riesgode intoxicación. Con el objeto de implementar unaherramienta que ayude a la interpretación de losresultados analíticos es que se presenta este tra-bajo.Se comparan los resultados obtenidos del estudiode dos poblaciones: población general y pobla-ción laboral. En ambas poblaciones de empleópara el análisis de los congéneres de PCBs la téc-nica de Janak, K y col. (1999) modificada, median-te extracción en fase sólida con descomposiciónde lípidos on-column. Para la investigación ycuantificación se empleó un GC/ECD, utilizandodos columnas (HP-PAS 5 y HP-PAS 1701), comoestándar interno decaclorobifenilo y como testi-gos una mezcla de los congéneres 28, 52, 101,138, 153 y 180.Aún cuando en ambas poblaciones la suma decongéneres presenta casi iguales frecuencias,98% de las muestras de la población no expuestay 96% de la expuesta, los congéneres individualespresentan diferencias importantes. En la pobla-ción general los mas frecuente son los congéneres28 y 52, mientras que en la expuesta cobranimportancia los congéneres más pesados 138,153 y 180 (50, 43 y 56% respectivamente)Si comparamos las concentraciones medias deambas poblaciones encontramos diferencias sig-nificativas (p<0,005) en el caso de los congéneres52, 101, 138, 153 y 180 y no en el congéner 28,siendo notablemente superiores los nivelesmedios en el caso de la población laboral. Comparando ambos parámetros, frecuencia yvalores medios sería posible diferenciar si lapoblación estudiada pertenece a una u otra cate-goría. Proyecto UBACyT 075

publicación de la asociación toxicológica argentina buenos ... · ação dos inseticidas nmc’s...

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