YERSINIAYERSINIADIAGNOSTICDIAGNOSTIC

MICROBIOLOGICMICROBIOLOGIC

Caractere generale Caractere generale Nu au spori,Nu au spori, Bacili scurti,G -,se coloreaza bipolar,Bacili scurti,G -,se coloreaza bipolar, Catalazo +,oxidazo -;Catalazo +,oxidazo -; Au gazda naturala animalele;Au gazda naturala animalele; 3 specii importante: 3 specii importante:

Y.pestis,Y.pseudotuberculosis,Y.enterocoY.pestis,Y.pseudotuberculosis,Y.enterocolitica.litica.

YERSINIAYERSINIA

Yersinia pestisYersinia pestis Cocobacil G neg.,colorat Giemsa este Cocobacil G neg.,colorat Giemsa este

bipolar,imobila,prezinta capsula la 37 C , bipolar,imobila,prezinta capsula la 37 C , iar la 28 C nu prezinta capsula,iar la 28 C nu prezinta capsula,

Cultivarea pe geloza sange, Mac Conkey, Cultivarea pe geloza sange, Mac Conkey, bulionbulion

Identificare :dupa caracterele de Identificare :dupa caracterele de cultura,aglutinarea cu ser specific,teste cultura,aglutinarea cu ser specific,teste biochimicebiochimice

Serologie: hemaglutinare titru mai mare Serologie: hemaglutinare titru mai mare de 1/16.de 1/16.

Yersinia enterocoliticaYersinia enterocolitica

conţine 11 specii dintre care doar 3 sunt de interes medical:

Yersinia pestis este cauza ciumei, boală infecto- contagioasă.

Se transmite de la rozatoare la om prin intermediul puricelui de sobolan

Clinic: febră si durere locală cu limfadenită si adenopatie regională satelită. În absenta unui tratament adecvat (tetraciclină) apar forme septicemice cu leziuni parenchimatoase hemoragice generalizate, în diferite tesuturi si organe (splină, ficat, tegumente si mucoase). Mortalitatea este peste 60%- 75%.

Y. pseudotuberculosis este un patogen animal care produce la om infectii de tip enteral cu limfadenită primară, cu prinderea ileonului prececal si al apendicelui si mai rar septicemii. Se transmite prin alimente contaminate.

3. Y. enterocolitica produce o boală diareică, ileită terminală si adenită mezenterică. Este un patogen intestinal .

Patogenie si tratamentPatogenie si tratament

Se cunosc 3 forme clinice de Se cunosc 3 forme clinice de pesta umana:pesta umana:

Bubonica,pulmonara si Bubonica,pulmonara si septicemica.septicemica.

Tratamentul :inceput urgent cu Tratamentul :inceput urgent cu streptomicina si/sau tetraciclina.streptomicina si/sau tetraciclina.

•Bacilii din genul Pseudomonas fac parte din grupul bacteriilor gram-negative non-fermentative, alături de alte genuri înrudite. Principalele specii ale genului care prezintă importanţă medicală sunt:

•Pseudomonas aeruginosa,• Pseudomonas maltophilia, •Acinetobacter baumannii •Moraxella catarrhalis. •Ei fac parte din flora condiţionat patogenă a plantelor, animalelor şi a omului şi sunt deseori agenţi etiologici ai unor infecţii la gazda imunocompromisă.

PSEUDOMONASPSEUDOMONAS

• Bacilii gram negativi, mobili datorită prezentei flagelilor polari, sunt nefermentativi, drepti sau usor încurbati.

Prezenţa citocromoxidazei este factor de diferenţiere faţă de Enterobacteriaceae.(OXIDAZO +)

Sunt microorganisme obligatoriu aerobe. Germenii genului dau naştere unor pigmenţi

diferiţi: piocianina- pigment de culoare verde-albăstruie; pioverdina - pigment galben-verzui; piorubrina- pigment roşu-brun piomelanina-pigment negru Din acest motiv coloniile prezintă reflexe metalice,

sunt fluorescente şi degajă un miros aromatic.

Diagnostic de laboratorDiagnostic de laborator Caractere morfotinctorialeCaractere morfotinctoriale:: -BGN, scurti, cu capete taiate drept, izolati -BGN, scurti, cu capete taiate drept, izolati

sau in diplo, nesporulati, necapsulati(dar unii sau in diplo, nesporulati, necapsulati(dar unii cu pseudocapsula), mobilicu pseudocapsula), mobili

Caractere de culturaCaractere de cultura:: -are cerinte nutritive minime (medii simple), -are cerinte nutritive minime (medii simple),

bacterie strict aeroba, cultura are miros foarte bacterie strict aeroba, cultura are miros foarte aromataromat

- coloniile de tip S si uneori mucoide, cu luciu - coloniile de tip S si uneori mucoide, cu luciu metalic si pigmentmetalic si pigment

-pe g.sange-colonii gri lucioase cu hemoliza -pe g.sange-colonii gri lucioase cu hemoliza ββ-in mediu lichid formeaza la suprafata o pelicula -in mediu lichid formeaza la suprafata o pelicula

colorata datorita pigmentilorcolorata datorita pigmentilor

Caractere biochimiceCaractere biochimice TSI:TSI: Glucoza negGlucoza neg Lactoza negLactoza neg Zaharoza negZaharoza neg Gaz negGaz neg H2S negH2S neg Oxidaza pozOxidaza poz Prez pigmentPrez pigment Creste la 42°CCreste la 42°C

INFECŢII PRODUSE DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA

Bacteriemia si endocardita Infecţii pulmonare Infecţii otice Infecţii ale arsurilor Alte infecţii

TRATAMENT Terapia antimicrobiană este greu de efectuat

dat fiind faptul că speciile de Pseudomonas sunt rezistente la o gamă largă de antibiotice.

P.aeruginosa este de regulă sensibil la penicilinele anti-Pseudomonas (carbenicilină, piperacilină, ticarcilină, etc.), la cefalosporinele de generaţia a-III-a (ceftazidime, cefotaxim), la fluorochinolone (ciprofloxacin, ofloxacin), imipenem si aminoglicozide (gentamicină, amikacină). Este în mod natural rezistent la aminopeniciline, cefalosporinele I si II.

Dobândeste foarte usor rezistentă la antibiotice, cele mai periculoase tulpini de P.aeruginosa fiind cele de spital (“germeni de temut ai spitalelor”) care prezintă rezistentă la o gamă foarte largă de antibiotice.

Cel mai frecvent mecanism de rezistenţă este cel enzimatic, prin producere de penicilinaze, iar în ceea ce priveste aminoglicozidele si fluoroquinolonele, rezistenta prin fenomene de impermeabilitate.

Un alt mecanism de rezistenţă frecvent întâlnit la Pseudomonas este cel reprezentat de prezenta pseudocapsulei, care împiedică pătrunderea antibioticului la nivelul sediului tintă

Dintre antibioticele antipseudomonas care rămân active chiar si în cazul tulpinilor multirezistente amintim imipenemul si aztreonamul.

Genul Genul PasteurellaPasteurella Speciile genului Speciile genului PasteurellaPasteurella sunt patogene sunt patogene

pentru animale, dar pot produce o varietate pentru animale, dar pot produce o varietate de afecţiuni la om: abcese localizate, de afecţiuni la om: abcese localizate, septicemie sau endocardităsepticemie sau endocardită..

GenulGenul Pasteurella Pasteurella cuprinde 11 specii: cuprinde 11 specii: P. multocidaP. multocida (cu 3 subspecii(cu 3 subspecii:: multocida, septicamultocida, septica şi şi gallicidagallicida), ), P. P. canis, P. stomatis, P. dagmatis, P. gallinarum, P. canis, P. stomatis, P. dagmatis, P. gallinarum, P. volantium, P. avium; P. langaa, P. caballivolantium, P. avium; P. langaa, P. caballi

Majoritatea afecţiunilor umane sunt cauzate de Majoritatea afecţiunilor umane sunt cauzate de P.multocida P.multocida subsp.subsp. multocida multocida şi subsp. şi subsp. septicaseptica, urmate de , urmate de P.canis, P. stomatis, P.canis, P. stomatis, P.dagmatisP.dagmatis

GenulGenul Pasteurella Pasteurella cuprinde cocobacili gram negativi cuprinde cocobacili gram negativi nesporulaţi, imobili, coloraţi bipolar. nesporulaţi, imobili, coloraţi bipolar.

aerobi, facultativ anaerobi aerobi, facultativ anaerobi cresc pe multe dintre mediile obişnuite prin incubare cresc pe multe dintre mediile obişnuite prin incubare

la 37ºCla 37ºC. I. Izolarea este facilitată de folosirea mediilor zolarea este facilitată de folosirea mediilor îmbogăţite şi de incubarea în atmosferă de dioxid de îmbogăţite şi de incubarea în atmosferă de dioxid de carbon. carbon.

aaproape toate speciile sunt oxidazo-pozitive şi proape toate speciile sunt oxidazo-pozitive şi catalazo-pozitive. catalazo-pozitive.

Pasteurella multocidaPasteurella multocida elaborează endotoxina elaborează endotoxina lipopolizaharidică, posedă activitate neuraminidazică, lipopolizaharidică, posedă activitate neuraminidazică, iar tulpinile virulente sunt încapsulate.iar tulpinile virulente sunt încapsulate.

PenicilinaPenicilina este antibioticul de elecţie. Se mai pot este antibioticul de elecţie. Se mai pot utiliza: ampicilina, amoxicilina+ac. clavulanic, utiliza: ampicilina, amoxicilina+ac. clavulanic, cefuroximul, trimethoprim-sulfametoxazolul, cefuroximul, trimethoprim-sulfametoxazolul, tetraciclina şi ciprofloxacinul.tetraciclina şi ciprofloxacinul.

ACINETOBACTERACINETOBACTER Face parte din grupul bacteriilor gram Face parte din grupul bacteriilor gram

neg nefermentative,neg nefermentative, Cea mai frecventa specie izolata este Cea mai frecventa specie izolata este

Acinetobacter baumaniiAcinetobacter baumanii Caractere morfotinctoriale : bacili Caractere morfotinctoriale : bacili

scurti gram neg,asezati in scurti gram neg,asezati in diplo,imobili , unele tulpini poseda diplo,imobili , unele tulpini poseda capsula(uneori se aseamana cu specia capsula(uneori se aseamana cu specia Neisseria)Neisseria)

Caracterele de cultura Caracterele de cultura si biochimicesi biochimice

Creste pe medii uzuale sub forma de colonii Creste pe medii uzuale sub forma de colonii de 2-3 mm ,de culoare crem sau gri, convexe, de 2-3 mm ,de culoare crem sau gri, convexe, margini regulate, translucide sau opace.margini regulate, translucide sau opace.

Pe geloza sange sunt nehemolitice(unele Pe geloza sange sunt nehemolitice(unele produc hemoliza de tip produc hemoliza de tip ))

este aerob strict creste la 37 Ceste aerob strict creste la 37 C Nu produce oxidaza, glucozo-negativ, Nu produce oxidaza, glucozo-negativ,

catalazo pozitivi, imobili, citrat pozitiv.catalazo pozitivi, imobili, citrat pozitiv.

Patogenitate Patogenitate Infectiile cele mai frecvente sunt de tip Infectiile cele mai frecvente sunt de tip

nosocomialnosocomial Pneumoniile si traheobronsitele, Pneumoniile si traheobronsitele,

bacteriemii ,infectii ale pielii,sunt cele bacteriemii ,infectii ale pielii,sunt cele mai frecvente mai frecvente

Este necesara izolarea si testarea Este necesara izolarea si testarea sensibilitatii la antibiotice a tulpinii sensibilitatii la antibiotice a tulpinii respective de Acinetobacter.respective de Acinetobacter.

GENUL VIBRIOGENUL VIBRIO

-bacili Gram negativi încurbai în formă de virgulă, -mobili printr-un flagel polar, nesporulai, necapsulati, -catalazo negativi, oxidazo pozitivi. -se multiplică în mediu alcalin (pH 7-9) fiind organisme acvaticeadaptate la variate salinităti

Specii cu importană medicală Vibrio cholerae▪ agentul etiologic al holerei Vibrio parahaemolyticus▪ determină infecii gastrointestinale, infecii ale plăgilor Vibrio vulnificus▪ determină septicemie, infecii localizate ale plăgi

-bacterii cu formă de bastonase relativ scurte (1,5 - 3 / 0,5μm), -încurbate sau drepte, alteori în formă de S -Gram negative -un flagel la unul dintre capete -nu prezintă spori si nici capsulă

bacterii aerobe cresc pe medii cu pH alcalin pe apă peptonată alcalină vibrionii au o crestere

rapidă ▪ în 6 ore fac un văl fin la suprafată si tulbură

mediul pe mediile solide colonii de tip S pe geloză sânge ▪ variantele neholerigene produc în general colonii hemolitice ▪ dintre tulpinile holerigene biotipul El Tor produce hemoliză beta

Colonii tip S pe geloza sange si MacConkeyColonii tip S pe geloza sange si MacConkey

Vibrio cholerae germen aerob oxidazo-pozitiv catalazo-pozitiv descompune unele zaharuri (glucoză,

manoză, sucroză si galactoză) este indol pozitiv nu produce urează nu produce H2S

antigen flagelar H este comun tuturor vibrionilor un antigen somatic O pe baza lui vibrionii au fost

încadrati în mai multe serogrupe notate O1- O6 si O139

dintre acestea patogene (holerigene) sunt serogropele O1 şi O139

▪ serogrupul O1 prezintă două biotipuri

▪ clasic ▪ El Tor diferentiate pe baza unor

proprietăti fiziologice si a sensibilitătii fată de bacteriofagi

celelalte serogrupuri sunt neholerigene

Imunitatea după vaccinare este partială si durează numai 3-6 luni

izolarea si identificarea vibrionului holeric din materiile fecale

confirmarea diagnosticului se face la laboratoare de referinţă

se recoltează materii fecale emise spontan se insămanţează cat mai

repede vibrionii sunt foarte sensibili la

uscăciune ▪ dacă nu este posibil ▪ se pot utiliza medii de

transport mediul Carry-Blair apa peptonată alcalină

examenul direct macroscopic

▪ aspectul scaunului este caracteristic:

▪ apos ▪ cu conţinut fecaloid

minim granulaţii riziforme, ca

zeama de orez preparatul nativ ▪ examinat la

microscopul cu fond intunecat miscarea vie, de rostogolire

Izolarea iniţial pe apă peptonată alcalină ca mediu de imbogăţire

după o incubare de 6 ore

treceri pe medii selective:

▪ BSA ▪ TCBS ▪ geloză sange

alcalina incubarea se face in aerobioză, la 37oC, 24 de ore

coloniile suspecte se identifică printr-o reacţie de aglutinare

▪ cu ser anti holeric O1 si O139

▪ rezultatul pozitiv se comunică imediat medicului curant

tulpina izolată se trimite pentru confirmarea diagnosticului la laboratorul de referinţă

▪ transportul tulpinilor se face in condiţii bine stabilite pentru a evita contaminarea mediului si a altor persoane

cu toate că V. cholerae este sensibil la multe antibiotice se efectuează antibiograme pentru a urmări instalarea rezistenţei

cea mai importantă măsură terapeutică compensarea rapidă a pierderilor hidroelectrolitice ▪ prin rehidratare intravenoasă ▪ când boala se ameliorează si există tolerantă

gastrică ▪ se poate trece la rehidratarea orală medicatia antimicrobiană se administrează în cure

scurte antibioticul se alege în functie de rezistenta la

antibiotice a tulpinilor circulante în focarul endemic

GENUL CAMPYLOBACTERGENUL CAMPYLOBACTER Denumirea genului provine din limba Denumirea genului provine din limba

greacă (campylogreacă (campylo==încurbat) şi se referă la încurbat) şi se referă la forma bacteriilor.forma bacteriilor.

În prezent, se consideră un număr de 18 În prezent, se consideră un număr de 18 specii, mai importante în patologia umană specii, mai importante în patologia umană fiind fiind

C. jejuniC. jejuni cu subspeciile cu subspeciile jejunijejuni şi şi doyleidoylei, ,

C. Coli C. Coli şişi C. fetus C. fetus

bgnbgn, nesporulaţi, de formă spiralată, încurbată sau , nesporulaţi, de formă spiralată, încurbată sau asemănătoare literei “S”. asemănătoare literei “S”.

pprevăzuţi cu un singur flagel polar, la unul sau ambele revăzuţi cu un singur flagel polar, la unul sau ambele extremităţi, ceea ce le conferă o mobilitate extremităţi, ceea ce le conferă o mobilitate caracteristică. caracteristică.

microaerofile, unele specii putând creşte şi în condiţii microaerofile, unele specii putând creşte şi în condiţii de anaerobiozăde anaerobioză

oxidazo-pozitive, oxidazo-pozitive, CatalazaCatalaza pozitiv pozitiv, producerea de H, producerea de H22SOSO44, reducerea , reducerea

nitratului, hidroliza hipuratului, sensibilitatea la acidul nitratului, hidroliza hipuratului, sensibilitatea la acidul nalidixic şi cefalotin sunt utilizate ca teste de nalidixic şi cefalotin sunt utilizate ca teste de diferenţiere între diferitele specii.diferenţiere între diferitele specii.

În culturi mai vechi de 48 de ore, pe medii solide şi În culturi mai vechi de 48 de ore, pe medii solide şi lichide, sau după pasaje repetate, se pot observa lichide, sau după pasaje repetate, se pot observa forme rotunjite de 0,5µm sau mai mari, denumite forme rotunjite de 0,5µm sau mai mari, denumite “corpi cocoizi”. Aceste forme reprezintă un stadiu “corpi cocoizi”. Aceste forme reprezintă un stadiu “degenerativ” al bacteriilor sub influenţa condiţiilor de “degenerativ” al bacteriilor sub influenţa condiţiilor de de mediu. de mediu.

C. fetusC. fetus creşte la 25 creşte la 25C, iar C, iar C. jejuniC. jejuni la 42 la 42C.C.

Diagnosticul de laboratorDiagnosticul de laborator BBacteriologic acteriologic Se izolează cel mai frevent din materiile fecaleSe izolează cel mai frevent din materiile fecale Examen microscopic: pe frotiurile colorate Gram sau GiemsaExamen microscopic: pe frotiurile colorate Gram sau Giemsa Bacilii dispuşi in diplo sunt asemănaţi cu nişte „Bacilii dispuşi in diplo sunt asemănaţi cu nişte „aripi de pescăruşiaripi de pescăruşi”.”.

Sunt microorganisme cu exigenţe deosebite de Sunt microorganisme cu exigenţe deosebite de cultivare şi necesită utilizarea unor procedee speciale: cultivare şi necesită utilizarea unor procedee speciale: o atmosferă de incubare optimă (microaerofilie), medii o atmosferă de incubare optimă (microaerofilie), medii de cultură înalt selective (cu conţinut de de cultură înalt selective (cu conţinut de cefalosporine),o temperatură optimă de incubare: cefalosporine),o temperatură optimă de incubare: 42ºC-43ºC (cu excepţia lui 42ºC-43ºC (cu excepţia lui C.fetusC.fetus care nu este care nu este termophil), o incubare prelungită de 48-72 ore, sau termophil), o incubare prelungită de 48-72 ore, sau mai mult.mai mult.

Identificarea Identificarea -- pe baza caracterelor morfologice şi pe baza caracterelor morfologice şi culturale. Catalaza şi oxidaza sunt pozitive.culturale. Catalaza şi oxidaza sunt pozitive.

SSerologicerologic:: constă în evidenţierea AC anti constă în evidenţierea AC anti C. coliC. coli şi şi C.jejuniC.jejuni prin metoda prin metoda Elisa şi RFCElisa şi RFC..

TratamentTratament

Tulpinile izolate de la gazde umaneTulpinile izolate de la gazde umane, spre , spre deosebire de cele izolate la alte mamifere şi păsări deosebire de cele izolate la alte mamifere şi păsări sunt sunt sensibile la: eritromicină, tetraciclină, sensibile la: eritromicină, tetraciclină, cloramfenicol, nitrofurantoin, aminoglicozide, cloramfenicol, nitrofurantoin, aminoglicozide, clindamicinăclindamicină

Majoritatea tulpinilor izolate sunt Majoritatea tulpinilor izolate sunt rezistente la rezistente la peniciline, cefalosporine şi sulfamidepeniciline, cefalosporine şi sulfamide. . Antibioticul de elecţie în gastro-enterite este Antibioticul de elecţie în gastro-enterite este eritromicina, iar în cazul septicemiilor se eritromicina, iar în cazul septicemiilor se folosesc aminoglicozidelefolosesc aminoglicozidele..

HELICOBACTER PYLORIHELICOBACTER PYLORI Diagnosticul de laboratorDiagnosticul de laborator

pp-pp- reprezentate de reprezentate de fragmentele de mucosă gastrică fragmentele de mucosă gastrică obţinute endoscopic, fragmente de periaj şi aspirat obţinute endoscopic, fragmente de periaj şi aspirat gastricgastric (i (izolarea din hemoculturi este doar în stadiu de zolarea din hemoculturi este doar în stadiu de experimentexperiment))..

examenul microscopic directexamenul microscopic direct:: pentru examinarea de rutină a pentru examinarea de rutină a preparatelor bioptice, se recomandă preparatelor bioptice, se recomandă coloraţia Giemsacoloraţia Giemsa. Se mai . Se mai utilizează coloraţia cu utilizează coloraţia cu hematoxilină-eozinăhematoxilină-eozină..

Izolarea se poate face pe Izolarea se poate face pe medii selectivemedii selective (cu (cu adaosuri de antibiotice), sau neselective adaosuri de antibiotice), sau neselective suplimentate cu sânge 1suplimentate cu sânge 10%0% (uman, de cal sau de (uman, de cal sau de berbec)berbec), în atmosferă de CO, în atmosferă de CO22..

Identificarea ia în considerare: caracterele Identificarea ia în considerare: caracterele morfologice şi culturale, morfologice şi culturale, oxidaza şi ureaza oxidaza şi ureaza pozitive (testul ureazei este cel mai rapid şi pozitive (testul ureazei este cel mai rapid şi uşor de efectuat). uşor de efectuat).

SSerologicerologic:: constă în titrări de AC anti constă în titrări de AC anti H.pyloriH.pylori prin reacţia ELISA prin reacţia ELISA (n(nu este utilizată în mod curent u este utilizată în mod curent -- titrul titrul ACAC persistă timp îndelungat, persistă timp îndelungat, testele neputând diferenţia o infecţie veche de una recentătestele neputând diferenţia o infecţie veche de una recentă; t; titrul itrul anticorpilor nu poate fi corelat cu severitatea bolii, sau răspunsul la anticorpilor nu poate fi corelat cu severitatea bolii, sau răspunsul la terapieterapie))

Tratament,Tratament,

Helicobacter pyloriHelicobacter pylori este este sensibil la o gamă largă de sensibil la o gamă largă de antibiotice: eritomicină, tetraciclină, penicilina G, antibiotice: eritomicină, tetraciclină, penicilina G, gentamicină, cefalotin, clindamicină, gentamicină, cefalotin, clindamicină, ciprofoxacin, nitrofurantoin, rifampicină.ciprofoxacin, nitrofurantoin, rifampicină.

Este în mod natural rezistent la: cefsulodin, ac. Este în mod natural rezistent la: cefsulodin, ac. nalidixic, sulfonamide, trimetoprim, vancomicină. nalidixic, sulfonamide, trimetoprim, vancomicină.

În practica curentă se foloseşte În practica curentă se foloseşte tripla terapie a tripla terapie a acestor infecţii cuacestor infecţii cu:: bismut+metronidazol+amoxicilinăbismut+metronidazol+amoxicilină