pruebas bioquímicas para enterobacterias

Eduardo Bermudez Chavez 1

Pruebas Bioquímicas Para Enterobacterias

Fundamentos


IMVIC

• INDOL

• ROJO DE METILO

• VOGES PROSKAUER

• CITRATO DE SIMMONS


Medio SIM

• INDOL

• ACIDO SULFIDRICO

• MOVILIDAD


SIM INDOL

• Para identificar el Indol, el medio tiene peptonas, y el aminoácido triptófano el cual si las bacterias tienen la enzima triptofanasa hace que se libere el indol (grupo funcional del triptofano).

• Si se libera el indol, éste reacciona con Paradimetil Benzaldeido (Kovac)

• Color Rojo positivo • Color Amarillo Negativo (no se liberó indol

porque la bacteria no tiene triptofanasa)


SIMACIDO SULFHIDRICO H2S

• El medio tiene tiosulfato, el cual libera ácido sulfhídrico que es un gas. Éste reacciona con la Sal de Hierro y forma un precipitado negro que es sulfuro ferroso.

• Color Negro Positivo (debido al precipitado)

• Sin precipitado Negro Negativo.


SIMMOVILIDAD

• Movilidad Negativa: Si la cepa crece solo en la picadura es inmóvil.

• Movilidad Positiva: Si crece en todo el medio, es móvil.


MR - VP

• Es un caldo glucosado

• PRUEBAS QUE SE REALIZAN:

• ROJO DE METILO

• VOGES PROSKAUER


MR - VP ROJO DE METILO

• Algunas bacterias obtienen energía de la glucosa del medio. Se forma piruvato (ácido piruvico) y toma diferentes vías:

• algunas bacterias fermentan (se usan en productos lácteos)

• otras forman alcoholes (levaduras)• Otras utilizan el ciclo de krebs.• En otras hay vías que producen ácidos

mixtos.


• Las que producen ácidos mixtos, acidifican el medio (bajan el pH)

• Estas bacterias son rojo de metilo positivas.

• POSITIVO Color Rojo

• NEGATIVO Color Amarillo

MR - VP

ROJO DE METILO


MR - VP VOGES PROSKAUER

• Esta prueba se utiliza para ver la producción de Acetoína (Acetil Metil Carbinol)

• Se le agregan 6 gotas de Alfa Naftol que es un catalizador.

• Al agregar 3 gotas de sosa o potasa reacciona con la Acetoìna y forma un precipitado:

• POSITIVO Color ROJO• NEGATIVO Amarillo, café, oscuro.

(dependiendo la antigüedad del reactivo)


AGAR CITRATO (CIT)

• Este medio no tiene carbohidratos• Tiene Azul de Bromotimol como Indicador• La prueba es para ver si la bacteria utiliza como

fuente de carbonos al citrato, el cual se encuentra en el ciclo de krebs.

• El medio tiene Citrato de Sodio y Sal de Amonio. • Si utiliza el citrato Ver resultados en el bisel

(porque es en el ciclo de krebs, oxidativo):• POSITIVO Color Azul• NEGATIVO Color Verde (original)


CIT

• También puede cambiar de color i utiliza la sal de amonio (NH4), porque se alcaliniza el medio:

• Color Azul Cit POSITOVO (pH Acalíno)• Color Verde Cit NEGATIVO (Neutro)• Color Amarillo Cit NEGATIVO (ácido)

• Puede no cambiar de color, pero si hay crecimiento es positivo, ver otras pruebas.


TSI

• Tiene Glucosa, lactosa, sacarosa, azufre, y sal de hierro.

• Se realizan las pruebas:• Fermentación de glucosa• Fermentación de lactosa• Ácido sulfhídrico• Gas de Glucosa


TSI

• Color original sin sembrar: Rojo (Naranja)

• Gas de Glucosa positivo Formacion de burbuja pequeña o botado del medio.

• H2S positivo Precipitado Negro.


TSI

• FERMENTACION DE CARBOHIDRATOS• Fondo Amarillo Glucosa +• Bisel Rojo Lactosa - , Sacarosa –

• Bisel Amarillo y Fondo Amarillo GLuc + Lac + y Sac+.

• El medio tiene 1 g de glucosa, 10 gramos de lactosa y 10 gramos de sacarosa, por litro.


LIA

• Este medio, tiene peptonas y aminoácidos (lisina).

• Se realiza la prueba:• H2S (mismo fundamento)• Descarboxilación de Lisina. (o desaminación)• La prueba consiste en buscar la enzima lisina

descarboxilasa de ciertas bacterias la cual descarboxila a la Lisina (aminoacido).


LIA(Descarboxilación de Lisina)

• Al descarboxilar queda solo la amina (putresina o cadaverina). La cual da al medio un pH alcalino.

• POSITIVO Color Morado (alcalino)

• NEGATIVO Color Amarillo (ácido).

• Cuando hay mucho ácido el bisel también es amarillo.


LIA(Desaminación de Lisina)

• proteus no descarboxila, solo desamina y se forma:

• Un ácido débil que reacciona con la sal de hierro y forma complejo naranja.

• Y un amonio que alcaliniza el medio y da un color morado.

• En conjunto se forma un color púrpura o rojo en el bisel.

• (solo en proteus que es lisina -)


MIOEl Medio tiene:• Color Original Morado (ligeramente Alcalino)

o Blanco (muy alcalino)• Glucosa (original pH >7, cuando se utiliza la

glucosa el pH vuelve a 6.5) • Tiene púrpura de Bromocresol como indicador.

PARA VER• Movilidad (mismo fundamento)• Indol (mismo fundamento)• Descarboxilacion de Ornitina (ODC)


MIODescarboxilacion de Ornitina

• La ornitina descarboxilasa es una enzima que actúa a pH 6.5

• Si la bacteria tiene ésta enzima descarboxila al aminoacido ornitina y también se desamina al mismo tiempo.

• Los productos son CO2 + H2O + AMINA (putresina o cadaverina) los cuales son compuestos alcalinos.


MIO Descarboxilación de Ornitina

• Debido a los productos alcalinos se alcaliniza el medio y los resultados son:

• Positivo Color Morado (Alcalino)

• Negativo Amarillo (ácido)


CALDO MALONATO (MAL)Malonato

• El fundamento es igual al citrato.

• Para ver si utiliza al malonato como fuente de carbonos.


CALDO UREA

• Caldo Original Color Amarillo• TIENE• Rojo fenol como indicador• Peptonas• Carbohidratos como fuente de C.• UREA

• FUNDAMENTO: Ver la hidrólisis de la urea.


UREA

• Ver si la bacteria tiene la enzima Ureasa que hidroliza la urea y produce amoniaco.

• Si se produce Amoniaco es Positivo.

• Positivo Rojo o Rosa Mex (Alcalino).

• Negativo Color Amarillo(Acido).


AGAR FENILALANINA FAD

• Ver la desaminación de la Fenilalanina (aminoácido).

• Algunas bacterias tienen la enzima fenilalanina desaminasa, que actua sobre la fenilalanina.

• Se produce acido fenil pirúvico. • Este reacciona con el cloruro férrico. Y da

coloración verde. • Positivo Color Verde• Negativo Color Amarillo (original).


FOTOS DE RESULTADOS

pruebas bioquímicas para enterobacterias

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